食品中纤维素含量检测方案(摇床)

天津市恒奥科技 高效液相色谱-串联质朴法测定保健食品中的纤维素A、D、E 维生素A、维生素D和维生素E是机体维持正常代谢和机能必须的脂溶性维生素。维生素A又称为视黄醇，主要用来提高视力并且增强免疫系统功能，同时还具有维持上皮细胞的正常结构、保证骨骼正常生长发育、改善铁吸收和转运、促进糖蛋白合成、增强机体免疫力等十分重要的作用。维生素D主要包括维生素D2（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化醇），其能促进小肠对钙和磷的吸收，提高人体血浆钙和磷的浓度。维生素E又称为生育酚，其结构复杂，异构体种类多，生物活性也千差万别，主要包括α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚，其中α-生育酚的生物活性最高。生育酚具有促进生育、延缓衰老、辅助抑制肿瘤的作用，并对糖尿病并发症、动脉粥样硬化起到预防作用，但增补过量时会出现头痛、疲劳和视力异常等现象。 测定脂溶性维生素的方法有很多种，其中常见的方法有：层析法、分光光度法、气相色谱法、液相色谱法，在众多的方法中，液相色谱法为测定脂溶性维生素的首选方法。以往对脂溶性维生素的检测多采用高效液相色谱（HPLC）分离后与多波长吸收或联合吸收或荧光吸收相结合的检测方法，存在分析时间长、灵敏度不高、定性定量不够准确的问题。而液质联用技术结合了高效液相色谱的高效分离能力和质谱的高分辨率和高灵敏度等优势，待测样品无需经过衍生化即可上机分析。因此，本实验拟建立一种快速、灵敏、准确的高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中的维生素A、D和E，使得样品处理简单易行，分析总周期能够缩短。 1 样品前处理 1.1 前处理过程 选择市售的保健样品，在恒温避光条件下，准确称取0.2-1.0 g样品于50 ml棕色三角瓶中（片状样品需在避光条件下研磨均匀），加入0.5 g抗坏血酸和15ml乙醇，充分摇匀待抗坏血酸完全溶解后加入5ml 20%的KOH水浴振荡器中反应60min，冷却后将反应液转入分液漏斗中，加入20ml正己烷，振荡10min，静置分层，取上层有机相，水相再用20ml正己烷萃取两次，合并有机相，水系至中性，使用预先烘干的无水硫酸钠干燥。40℃下旋转蒸发至近干，用少量的甲醇超声振荡溶解，定容至一定体积，用0.22um滤膜过滤，待测。 1.2 前处理使用仪器 1.2.1 恒温水浴摇床 天津恒奥公司生产的HWT-10C和HWT-20C恒温水浴摇床加热容量为10L和20L，选用优质抗腐蚀不锈钢材料制成，使用寿命长；采用单片机、微电脑程序PID自动控温，温控精度高，PTC加热元件，加热均匀；高触摸式调节按键，温度调节方便自如。振荡和加热采用分体设计，不需要振荡时可取出移动架，作为恒温水浴箱，一物两用。 本实验要求水浴振荡器中振荡反应60min，该款恒温水浴摇床可以满足实验需求。 1.2.2 垂直振荡器 HVS-6 实验要求反应液冷却后，需要用正己烷萃取有效成分，并将有机相水洗至中性。传统方法均是进行手动萃取，在此次实验中单次萃取时间就长达10min，这无疑会耗费大量体力，同时不能保证各实验样品间萃取条件的一致性。 天津恒奥HVS-6垂直振荡器选用优质电机及科学实用的机械震荡机构，代替人工手动振荡，频率可调，数显定时，缓启动更能，适用多种规格分液漏斗，同时能保证不同样品间的平行性及重复性，是本实验更加准确、高效。 1.2.3 平行浓缩蒸发仪 HPE-12A 实验中将有效成分萃取后，需要对萃取液进行减压浓缩。常规方法均是采用旋转蒸发仪，其能满足一般的实验需求。但是当样品量较多时，单个一次浓缩势必会耗费大量的时间、人力、物力，同时不能保证实验样品间条件的一致性。针对这些不足，我公司推出了平行浓缩蒸发仪系列产品，HPE-12A此款产品的最大优势就是可以单次处理12位样品（另有6位与24位仪器），梯度温度控制系统无需操作人员看管，大大提高了实验效率。 1.2.4 超声波清洗器 实验的最后一步需要对浓缩液进行超声振荡溶解，我公司有多款型号超声波振荡器，满足不同的实验需求。 2 标准溶液的配置 在恒温避光条件下，准确称取标准维生素A、维生素D2、维生素D3、α-维生素E、β-维生素E、γ-维生素E、和δ-维生素E至棕色容量瓶中，以乙醇（含1g/L抗坏血酸）为溶剂配置成1 mg/ml的单标储备液。临用前，量取适量维生素单标储备液配置成维生素A、D、E混合标准使用液，维生素A、维生素D2、维生素D3、α-维生素E、β-维生素E、γ-维生素E、和δ-维生素E的标准使用液浓度分别为10、1、1、20、2、2、2 μg/ml。所有标准使用液现配现用，尽量减少因标准品不稳定对本实验带来的影响。 3 仪器条件 色谱：Hypersil GOLD C18色谱柱（50mm×2.1mm，1.9 μm）；进样量10 Μl；柱温25℃；流动相：A为甲醇，B为5 mmol乙酸铵（含0.1%甲酸），梯度洗脱条件见表1。 质谱：电力方式为电喷雾电离源（ESI），正离子模式；选择反应监测（SRM）扫描模式，喷雾电压4500V，离子传输管温度350℃，氮气作为鞘气和辅助气，其中鞘气241KPa，辅助气1.7L/min，氩气作为碰撞气，碰撞压力200mPa，SRM离子对见表2。 4 小结 本实验建立了高效液相色谱-串联质谱法同时测定保健食品中维生素A、D、E质量浓度的检测方法，样品中的维生素经皂化反应后，通过高效液相色谱-串联质朴技术，可分别对保健食品中的维生素A、维生素D2、维生素D3、α-维生素E、β-维生素E、γ-维生素E、和δ-维生素E 7种脂溶性维生素进行定性和定量分析，实验的精密度和回收率能满足实际检测要求，检出限低，可用于本系统对保健食品等食品中维生素A、D、E含量的日常监测。