使用日立CT15ERE分离核酸

天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD. 天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD.E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 用日立 CT15E/15RE 高速台式离心机及Qiagen 试剂盒分离植物的染色体 DNA 及 RNA 日立 CT15E/15RE 是一款高性能，极低噪声(≤50dBA)的高速台式离心机。配有三种可高温灭菌转头，适用于 0.2ml ( PCR 排管)0.5ml、1.5ml 及 2ml eppendorf管的常规生物学实验，特别适用于与各种生物大分子试剂盒配合应用于 DNA、RNA及各种蛋白的快速分离和纯化。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 一)植物染色体 DNA的离心分离： 1)用CT15E或15RE 高速台式离心机， T15A61或T15A62转头， 1.5ml或 2ml 微管 ； QiagenDNeasy Plant Mini Kit；样品为植物组织粉末。 2植物组织用液氮冷冻后研磨成细粉；34 将粉末放入2ml微管； 微管中加入缓冲液 API 400pl 及 100mg/ml 的 RNase A 4pl，置于涡旋仪上混匀； 5) 65℃培养10分钟，培养后翻倒混匀2至3次； 加入130ml缓冲液AP2并混匀；刀8 冰浴中放置5分钟； 室温中离心：14， 500rpm (约20，000xg)5分钟； 9) 将 Qiagen 的 "QIA sherdder Mini spin column”放入另一个新的2ml微管并剪去管盖，将(8)离心后上清液倒入 column ； 10) 室温下离心14， 500rpm (约2分钟)； 11) 将已过滤的液体透过 "column"倒入另一个新的2ml微管； 12) 加入1.5倍或稍多缓冲液AP3/E，混匀； 13) 将Qiagen的"DNeasy Mini spin column 放入另一个新的2ml 微管，剪去管盖，并将(12)混合液650ul 倒入 "column"； 14) 室温下离心：8，000rpm(约6，000xg)1分钟； 15)倒出滤液； 16) 在"column"内加入缓冲液 AW 500ul 17)室温下离心：8，000rpm(约 6，000xg)1分钟； 18)倒出滤液； 19) 在"column" 内加入500ul缓冲液 AW； 20)室温下离心：14，500rpm(约 20，000xg)2分钟； 21)将"column" 移入另一个1.5ml微观并加入100ul 缓冲液 AE； 22)室温下放置5分钟； 23)室温下离心：8，000rpm，1分钟； 24)从离心管折去“DNeasy Mini spin column” 将经过离心淘洗的染色体 DAN 置于-70℃保存。 二)植物组织的RNA分离； .)同(一)(1)； )同同(一)(2)； 加入450pl缓冲液 RLT 并在涡旋仪上充分混匀； 56℃培养2分钟(±1分钟)； 将 Qiagen"QIA sherdder Mini spin column 放入一个新的2ml微管剪去管盖，将以上混匀物倒入"column"； 6)室温下离心：15，000rpm ( 21 ，500xg)2分钟； 天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 将滤液倒入另一个新的2ml微管； 加入0.5倍容量(或稍多)的96%以上纯度的乙醇，混匀； 刀89)将RNeasy Mini spin column 放入一个新的2ml微管剪去管盖并倒入650pl混匀液； 10) 室温下离心：9，200rpm(约8，000xg ) 15秒； 11)倒出滤液； 12) 在"column"内加入 700pl缓冲液 RW1； 13)室温下离心：9， 200rpm (约8， 000xg) 15秒； 14)倒出滤液； 15))"column"内加入500pl 的 RPE 缓冲液 ； 16)室温下离心：9，200rpm(约8， 000xg)15秒； 17) 倒出滤液； 18) 再在"column"内加入500pl的RPE缓冲液； 19)室温下离心：9，200rpm(约8，000xg)2分钟； 20)将以上"column"放入一个新的1.5ml微管； 21)在"column"上加 30-50pl无菌纯水； 22)室温下离心：9，200rpm (约8， 000xg)1分钟； 23)从微管中取出"column"，将已淘洗分离的 RNA 溶液在-70℃储存。 www.techcomp.cn