饲料中烟酸叶酸检测方案(液相色谱仪)

天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA)LTD. 天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD.E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn HPLC 法检测饲料中的烟酸叶酸 烟酸属于B族维生素，又称尼克酸或维生素B5， 具有促进细胞新陈代谢，扩张血管的作用，也有缓解末梢血管痉挛的效果。烟酸作为微量营养素对动物脂肪代谢、生产性能、疾病预防、预防奶牛酮血症有积极的作用；肌体缺乏烟酸时会引起新陈代谢障碍。 叶酸是一种广泛存在于绿色蔬菜中的B族维生素，通过对一碳基团的传递参与嘌吟、嘧啶的合成以及氨基酸的代谢，从而影响核酸的合成和蛋白质的代谢，对正常血细胞的形成有促进作用，并能促进免疫球蛋白的生成。动物缺乏叶酸会引起贫血、红细胞减少、生长停止等病症。 对于烟酸和叶酸的分析，经典的方法有微生物法和分光光度法，近年来普遍采用高效液相色谱法。本次实验根据 GB/T 17813.7-1999《复合预混料中烟酸、叶酸的测定高效液相色谱法》，采用日立高效液相色谱仪 Primaide 配紫外检测器对烟酸和叶酸进行检测，重现性良好。 ● 仪器 1)四元梯度泵PM1110 )自动进样器 PM1210 柱温箱PM1310 4)紫外检测器PM1410 5)P1SM色谱工作站。 色谱条件 色谱柱： Hitachi LaChrom C18(5um) 4.6mmI.D.x250mmL 柱：温：30℃流波 速：1.0mL/min 长：275 nm 进样量：20pL 流动相：取500mL去离子水，加10mL冰乙酸， 1.3mL三乙胺 ， 20mL己烷磺酸钠(0.005mol/L)，用去离子水定容至1L，调pH=3.2，过滤；取上述溶液850mL与 150mL甲醇混合，脱气。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 溶液制备 烟酸贮备液：准确称取约25mg烟酸置 25mL容量瓶中，用流动相溶解并定容； 叶酸贮备液：准确确取约25mg叶酸置25mL容量瓶中，用0.1mol/L碳酸钠溶液溶解并定容； 分别移取一定量烟酸和叶酸贮备液，用流动相稀释成浓度为 10ug/mL的混合标准品溶液，用0.45um 滤膜过滤，进样测定。 ● 实验结果 1、标样测定 根据 GB/T 17813.7-1999 的色谱条件进行实验，烟酸出峰时间为 3.84min， 叶酸出峰时间为30.86min，图1为混合标样的色谱图。 图1混合标样色谱图 2、重复性实验 对混合标准品溶液重复进样，烟酸6次进样峰面积的 RSD 为 0.22%，叶酸6次进样峰面积的 RSD 为 0.11%，重现性良好，结果见下表： 表1烟酸峰面积的重现性结果 Rep-1 Rep-2 Rep-3 Rep-4 Rep-5 Rep-6 Average SD RSD(%) Area 123933 123800 123797 123688 124160 123343 123786 271 0.22 表2叶酸峰面积的重现性结果 Rep-1 Rep-2 Rep-3 Rep-4 Rep-5 Rep-6 Average SD RSD(%) Area 596254 597331 596120 595945 596852 597521 596670 662 0.11 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 3、饲料样品检测 某品牌维生素预混饲料经前处理后测定，检测结果见图2。 儉疵晒限(min) 图2预混饲料样品色谱图 ● 结论 采用日立高效液相色谱仪 Primaide 四元梯度系统配紫外检测器，在上述色谱条件下，烟酸和叶酸峰面积的重现性良好；并可以对饲料实际样品中的烟酸和叶酸进行定性和定量，紫外检测器灵敏度高，适用于常规定量测定。