中药中乐果残留检测方案(快速溶剂萃取)

2 样品净化优化 车金水又邓桂凤梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 中药为我国的传统中医特有药物，为我国的民族文化瑰宝。据统计，我国用于饮片和中成药的药材有1000-1200余种，其中约有20%的中药材来自人工栽培“。随着人工栽培过程中农药的使用，使得中药材极可能受到农药的污染，中药材中农药残留的存在直接危害着人类的健康。 《中国药典(2010版)》中提供了有机氯、有机磷和拟除虫菊酯三类农药残留的检测方法。但《中国药典(2010版)》中提供的方法前处理繁琐，三类农药残留分别采用了不同的前处理方式，不同的检测方法，且该方法非常耗时。随着人们安全意识的提高，对农药残留分析检测项目日益增多，且限量要求日益严格，需要检测方法灵敏度高，进行多组分同时检测，且方法需简单快速。 加速溶剂萃取技术 (Accelerated Solvent Extraction， ASE)是在较高的温度(40℃-200℃)和高压(1500 psi) 下用溶剂萃取固体或半固体样品的样品前处理方法。ASE 具有萃取效率高，速度快、溶剂用量少等优点。目前， ASE 广泛应用于环境、食品、药物、天然产物和中药中的活性成分等领域。本文建立了加速溶剂萃取-固相萃取-气质联用法对中药中49种有机氯、有机磷及拟除虫菊酯农药残留同时检测，结果表明该方法灵敏度好，回收率高，线性范围好。 仪器 TRACE 1310 GC -ISQ MS 气质联用仪，配El 源； TriPlus RSH 自动进样器； ASE 350。 ASE 条件 中药材样品采用粉碎机粉碎，过30目筛。精确称取样品2g，加入硅藻土适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中，按表1加速溶剂萃取条件萃取。萃取 完成后萃取液氮吹浓缩至近干，加3mL乙腈/乙酸乙酯(3/1)复溶，待净化。 表1.ASE萃取条件 条件 参数 溶剂 丙酮：正己烷=1：1 温度 80℃ 加热时间 5min 静态萃取时间 5min 循环次数 2 吹扫体积 60% 吹扫时间 60s 总萃取时间 20 min 总萃取液体积 20 mL 于 Carb/NH， SPE 小柱上层添加1cm高无水Na，SO4；先用8mL乙腈/乙酸乙酯(3/1)淋洗层析柱，再将萃取浓缩液转移至 SPE 柱内，取适量乙腈/乙酸乙酯(3/1)清洗浓缩瓶，转入 SPE 柱内，然后用20mL乙腈/乙酸乙酯(3/1)洗脱，洗脱液氮吹浓缩近干，精确量取1mL丙酮复溶， 供 GC/MS分析。 色谱条件 色谱柱： TG-5MS (30mx0.25 mm×0.25 pm) 柱温：80℃(1min)， 20℃ /min 到 180℃(0min)，5℃ /min 到 300℃ (0 min)， 最后20℃/min 至320℃(5 min) 进样方式：不分流进样，分流时间为 1min 进样口温度：250℃ 载气：氦气(99.999%)，恒流模式，1 mL/min进样量：1pL ( 质谱条件 ) El离子源，离子源温度：250℃ 传输线温度：280℃；选择离子扫描 (SIM)模式(见表2)。 表2.49种农药残留保留时间及特征离子 本实验参考 NY/T 761-2008 和 GB/T 23376-2009，分别比较了乙腈、乙腈/二氯甲烷(1：1)和丙酮/正己烷(1：1)三种溶剂作为 ASE 的萃取溶剂4.5。实验结果表明，采用乙腈、乙腈/二氯甲烷 (1：1)和丙酮/正己烷(1：1)对农残萃取率 没有明显差异，但乙腈、乙腈/二氯甲烷(1：1)对色素提取较多，对后续净化要求更高，且乙腈在浓缩过程耗时较丙酮/正己烷(1：1)长。所以本实验选择丙酮/正己烷(1：1)作为后续的萃取溶剂。其他 ASE 条件为：萃取温度80℃，静态萃取时间5min， 循环2次，冲洗体积60%，吹扫时间90s。 本实验采用固相萃取的方法对样品进行净化，分别比较了 Carb 柱、Florsil 柱和 Carb/NH，柱三种 SPE 小柱。实验结果表明， Carb/NH，柱净化最佳，且各农药组分的回收率均在70-120%之间。Carb 柱、Florsil 柱均不同程度干扰农药残留组分的测定，且回收率低于 Carb/NH，柱。所以本实验选择 Carb/NH，柱为最终的净化 SPE 柱。 标准品色谱图及样品加标色谱图 49种有机氯、有机磷和拟除虫菊酯类农药标准品选择离子扫描色谱图见图1。为减小基质效应带来的误差，本实验采用空白样品加标法定量，甘草样品加标农药标准品选择离子扫描色谱图见图2。 STD100pp 图1.100 pg/L 混合标准溶液总离子流图 图2.加标样品总离子流图(加标量100 pg/L) 线性、检出限及 RSD 采用空白基质配制49种农药组份的混合标准溶液，各浓度分别为：10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、400.0pg/L， 采用上述方法分别进样分析，考察各组分在 10.0-400 ug/L 浓度范围内的线性。实验结果表明49种组分在 10-400 pg/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.99(见表3)。 对甘草样品添加混合标准溶液(加标浓度为50、100、200 pg/L)，考察49种农残的加标回收情况。实验结果表明各组分的加标回收率均在70-120%之间(其中甲胺磷、乙酰甲胺磷和氧乐果除外，可能由于萃取过程热降解导致)，符合日常分析检测的要求。对 100 ug/L 加标水平平行测定3次， RSD 值在0.7-8.1%，符合稳定性要求。同时以三倍信噪比计算各组分检出限，各组分检出限在 0.3-2.0 pg/L之间(见表3)。 表3.线性、检出限及 RSD 数据(n=3) 参照《中国药典(2010年版)》一部附录IQ农药残留量测定方法的中前处理方式对甘草样品进行加标实验。采用浸泡-超声波提取法对有机氯进行提取，加浓硫酸磺化法对有机氯进行净化。采用超声波提取法对有机磷和拟除虫菊酯进行提取，有机磷采用 Carb 柱进行净化，拟除虫菊酯采用中性氧化铝 /Florsil 柱进行净化。实验结果表明，各组分加标回收率处于40-140%之间。与本方法相比，参照药典方法回收率略低，且只能单独检测一类农药残留。药典方法中有机氯、有机磷和拟除虫菊酯提取耗分别13小时、1小时和1小时，而本方法中采用加速溶剂萃取，每个样品的萃取时间仅为 20min，且方法简单，无需人员全程操作。 利用建立的分析方法，对甘草，黄芪，人参和金银花样品进行农药残留分析。实验结果表明：4个样品中均不同程度的检测出了农药残留。其中敌敌畏、六氯苯、五氯硝基苯、三唑磷含量偏高，含量为 5-40 pg/kg。 采用赛默飞世尔加速溶剂萃取和全新一代单四级杆气相色谱质谱联用仪，样品前处理时间极大缩短了，每个样品的提取时间在20min 左右；35min 内能够分析检测49种农药残留，使得实验室能够应付大批量样品的分析检测。 ( [1]万益群，鄢爱平，谢明勇等.中草药中有机氯农药和 拟除虫菊酯农药残留的测定.分析化 学 ，2005，33(5)：614-618. ) ( [2] ChP(中国药典).2010.Voll(一部)：附录57. ) ( [3]牟世芬.加速溶剂萃取的原理及应用[J].环境化学， 2001，20(3)： 2 99-300. ) ( [4] NYT 761-2008，蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S]. ) ( [5] GBT 23376-2009，茶叶中农药多残留测定气相色谱/质 谱法[S]. ) www.thermoScientific.com C2013 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. ISO is a trademark of the International StandardsOrganization. All other trademarks are the property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries. Thisinformation is presented as an example of the capabilities of Thermo Fisher Scientific Inc. products. It is notintended to encourage use of these products in any manners that might infringe the intellectual property rightsof others. Specifications， terms and pricing are subject to change. Not all products are available in all countries.Please consult your local sales representative for details. CE Thermo FisherScientific， Austin， TXUSA is ISO 9001：2008 Certified. 服务热线8008105118400 6505118 ThermoFisherSCIENTIFIC 随着人们安全意识的提高，对农药残留分析检测项目日益增多，且限量要求日益严格, 需要检测方法灵敏度高，进行多组分同时检测, 且方法需简单快速。加速溶剂萃取技术(Accelerated Solvent Extraction，ASE) 是在较高的温度(40℃ - 200℃ ) 和高压(1500 psi) 下用溶剂萃取固体或半固体样品的样品前处理方法。ASE 具有萃取效率高，速度快、溶剂用量少等优点。目前，ASE 广泛应用于环境、食品、药物、天然产物和中药中的活性成分等领域[3]。本文建立了加速溶剂萃取- 固相萃取- 气质联用法对中药中49 种有机氯、有机磷及拟除虫菊酯农药残留同时检测，结果表明该方法灵敏度好，回收率高，线性范围好。