中药材中88种多农残测定检测方案(气质联用仪)

thermoscientific thermoscientific热线800 8105118电话4006505118www.thermofisher.com所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 气相色谱三重四极杆质谱联用仪用于中药材中88种多农残测定 邓武剑彭倩 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词： 中药材，多农残测定，QuEChERS， TG-5SilMS， TSQ 9000 为了应对《中国药典》2020版的实施，根据2341通则第四法的要求，本文建立了一种运用三重四重杆气质联用仪(GC-MS/MS)检测中药材中88种农药残留量的分析方法。样品经过QuEChERS方法前处理，采用TG-5SilMS色谱柱，GC-MS/MS测定，用内标法定量计算。农药组分在5.0~200.0pg/L浓度范围内线性关系良好，线性相关系数均大于0.99。按照IUPAC(国际理论(化学)与应用化学联合会)方法规定计算各组分检出限，各组分检出限在0.02-2.15pg/kg之间。对加标浓度为10.0pg/kg的样品连续进样8针，RSD(%)在0.37%-6.87%之间。加标浓度为100.0pg/kg的样品，各化合物的回收率在69.6%~118.8%之间。结果表明，赛默飞世尔科技TSQ 9000完全可以应对2020版《中国药典》关于GC-MS/MS检药药材、饮片及制剂中农药残留量的检测要求。 随着对药材农药残留的报道日益增多，人们对农药残留危害的认识也越来越深入，药典对其制定检测方法也越来越全面，越来越科学。以下是中国药典对农药残留检测法的变革： 《中国药典》2000年版首次规定了9种有机氯农药残留的检测方法。2005年版，除甘草、黄芪等药材外，对其余药材均未提出限量要求。我国最近的第2010版《中国药典》中不仅规定了9种有机氯农药残留的检测方法，而且规定了12种有机磷类的检测方法，还规定了3种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法，然而在限量标准方面仅规定了甘草和黄芪两种药物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量标准，其它中药材尚未涉及。2015版《中国药典》首次规定了用GC-MS/MS和LC-MS/MS等技术用于药材中多农残检测。2020版《中国药典》再次扩大了农药残留检测范围。历版《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化如表1所示： 出版年份 限定与变化 2000 提出了9种有机氯农药残留的检测方法 2005 没变化 9种有机氯农药残留的检测方法 2010 12种有机磷农药残留的检测方法 3种拟除虫菊酯的检测方法 2015 第四法农药多残留量测定法-质谱法(其中 GC-MS/MS 76种， LC-MS/MS 153种) 第四法农药多残留量测定法-质谱法(其中 GC-MS/MS 91种， LC-MS/MS 526种)新增 第五法33种禁用农药清单的检测方法 2020 本文根据2341通则第四法，建立了中药材中88种农药残留量的测定方法。 2.1仪器和式剂 Thermo ScientifcTM Al 1310自动进样器； Thermo ScientifcTM Tra-ce1310-TSQ9000三重四极杆质谱仪；乙腈(色谱纯，美国ThermoFisher公司)、实验用水为Milli-Q去离子水。 2.2仪器方法 ( 气相方法： ) ( 色谱柱： TG-5Sil MS， 30m*0.25mm， 0.25um(PN： 26096-1420) ) ( 进样口： 不 分流进样，不分流时间：1.5min；进样口温度：240 ℃；载气：高纯氦气，恒压(146Kpa)； ) ( 程序升温：初始温度70℃，保持2分钟，先以每分钟25℃升温至150℃，再以每分钟3℃升温至200℃，最后以每分钟8℃升温至 ) 280℃，保持10分钟。 传输线：280℃ 质谱方法：离子源温度为300℃， 采用Time-SRM方式扫描，具体检测离子对参数如表2所示： 表2：化合物SRM参数 注：1.化合物12，19，40为内标物，其他88项为目标化合物；2.定量计算时，推荐以司代倍硫磷为内标进行计算。 2.3样品前处理 取金银花供试品粉末(过三号筛)3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml与内标溶液100pl，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)5分钟，加入6g MgSO4，1.5g NaOAC (PN： 60105-335-B)，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(每分钟4000转)5分钟，取上清液9ml，置含有300mg PSA/ 300 mg C18 /90 mg Carb / 900mg MgSO / 300 mg Silica 的15mL离心管 中(PN：60105- 509-B)，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)5分钟使净化完全，离心(每分钟4000转)5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml，加乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，用Titan3 17mm*0.2um，亲水PTFE过滤器(PN：42213-NPL)过滤，取滤液，即得。 2.4样品基质溶液： 按照2.3的程序处理药材样品，得到空白样品的基质溶液 2.5标准溶液的配置 2.5.1混合标准中间液：移取适量的高浓度标准储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0mg/mL。中间标准储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。 2.5.2内标溶液的配置：移取适量的高浓度内标物，用乙腈稀释。中间内标储备液的浓度为10.0mg/mL， 置于-20℃冰箱中保存。 2.5.3工作标准溶液：取适量的混合标准中间液于进样小瓶中，用氮气吹干，以样品基质液(2.4)定容至1.0mL，加入10.0pL内标溶液(2.5.2)，依次配制成目标化合物浓度为5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、200.0pg/L工作标准溶液，工作标准溶液现用现配。 2.6空白样品加标分析 加标样品测测：取空白样品，添加适量标准溶液，经过前处理(2.3)后，所得溶液，加入10.0uL内标溶液(2.5.2)，待上机分析。 3.实验结果分析 3.1色谱分离结果 在2.2的仪器条件下，基于变色龙软件，运行100.0pg/L的混合标准溶液TIC图(见图1)。标准曲线10.0pg/L浓度的部分化合物色谱峰见图2，部分化合物的标准曲线见图3。 图1：标准溶液定量色谱图(100.0pg/L) 图2：10.0pg/L部分化合物的色普图 图3.部分化合物标准曲线图 3.2标准曲线线性、检出限及精密度 采用上述仪器方法(2.2)进样分析，考察各组分的线性。实验结果表明88种农药组分在5.0~200.0ug/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.99，对加标浓度为100.0ug/kg的样品连续进样8针， RSD (%)在0.37%-6.87%之间，重复性良好，加标浓度为10.0ug/kg的样品进行回收率计算，各化合物的回收率在69.6%~118.8%之间。按照IUPAC 方法规去计算各组分检出限，检出限范围在0.02-2.15 ug/kg之间，根据本应用方法的前处理，其检出限都满足最新药典对于农残分析检出限的要求(见表3)。 表3药材中88种化合物的线性方程、检出限及回收率等 序号 中文名 英文名 线性方程 相关系数 标准检出限 (ug//kg) 检出限 (ug/kg) RSD(%) n=8 回收率(%) 10pg/kg 1 氟丙菊酯 Acrinathrin Y=1.2473*X+380.5399 0.9953 5.00 0.73 1.97 101.1 2 艾氏剂 Aldrin Y=0.1941*X+-0.5783 0.9994 10.00 0.21 4.91 80.5 3 α-六六六 BHC，Alpha Y=0.5478*X+-1.1101 0.9995 5.00 0.12 2.46 104.5 4 β-六六六 BHC， Beta Y=0.8024*X+-2.0651 0.9996 5.00 0.31 4.01 103.9 5 8-六六六 BHC， delta Y=0.2599*X+-0.4943 0.9996 5.00 0.6 2.94 83.6 6 Y-六六六 BHC， gamma Y=0.3356*X+-0.6635 0.9998 5.00 0.09 1.06 106.3 7 联苯菊酯 Bifenthrin Y=0.2427*X+28.3593 0.9958 5.00 0.07 4.31 117.0 8 乙基溴硫磷 Bromophos-ethyl Y=0.2495*X+1.7023 0.9985 5.00 1.28 2.25 95.0 9 溴硫磷 Bromophos-methyl (Bromophos) Y=0.4442*X+-1.0688 0.9992 5.00 0.16 1.08 88.1 10 溴螨酯 Bromopropylate Y=0.1213*X+-0.1547 0.9987 5.00 0.22 4.15 99.7 11 仲丁灵 Butralin Y=0.4259*X+-1.7675 0.9993 50.00 0.62 3.01 111.1 12 顺式氯丹 Chlordane -cis Y=0.3293*X+-0.4942 0.9995 5.00 0.43 3.59 87.8 13 反式氯丹 Chlordane -trans Y=0.4675*X+-0.9244 0.9994 5.00 0.28 3.82 89.1 14 氧化氯丹 Chlordane-oxy Y=0.1979*X+-0.3488 0.9996 5.00 0.61 1.59 97.9 15 杀虫脒 Chlordimeform Y=0.4176*X+-1.1812 0.9995 25.00 0.36 3.41 99.5 16 溴虫腈 Chlorfenapyr Y=0.1136*X+19.4263 0.9957 10.00 1.02 4.22 92.1 17 百菌清 Chlorothalonil Y=0.4142*X+-0.9199 0.9992 25.00 1.22 3.08 79.4 18 毒死蜱 Chlorpyrifos-ethyl Y=0.2131*X+3.1579 0.9993 5.00 0.61 3.98 89.5 19 甲基毒死蜱 Chlorpyrifos-methyl_ Y=0.3940*X+-1.1850 0.9996 5.00 0.58 3.94 104.3 20 氯酞酸二甲酯 Chlorthal-dimethyl Y=0.3645*X+-0.7531 0.9994 5.00 0.66 0.37 81.8 21 氟氯氰菊酯 Cyfluthrin Y=-0.0186*X+30.7480 0.9994 25.00 0.62 3.91 105.9 22 氯氟氰菊酯 Cyhalothrin 1 &ll Y=0.0004*X+20.1260 0.9948 5.00 0.96 3.36 83.9 23 氯氰菊酯 Cypermethrin Y=0.1678*X+34.8423 1.0000 25.00 1.02 3.83 93.1 24 o，p'-滴滴滴 DDD o，p Y=3.5152*X+-3.3973 0.9992 5.00 1.52 4.76 99.7 25 p，p'-滴滴滴 DDD p，p Y=3.6299*X+-8.6696 0.9996 5.00 0.88 1.38 100.8 26 o，p'-滴滴伊 DDE o，p Y=2.6260*X+-5.6370 0.9996 5.00 0.52 0.82 84.9 27 p，p'-滴滴伊 DDE p， p Y=2.2131*X+-3.8582 0.9996 5.00 0.47 1.58 56 反式环氧七氯 Heptachlor endo- epoxide Y=0.0000*X+0.0047 0.9976 5.00 0.28 1.16 95.5 57 顺式环氧七氯 Heptachlor exo- epoxide Y=0.0000*X+0.0087 0.9966 5.00 0.26 2.65 90.4 58 六氯苯 Hexachlorobenzene Y=0.6251*X+-1.8712 0.9996 5.00 0.6 0.46 69.6 59 氯唑磷 Isazophos Y=0.1692*X+-2.1900 0.9958 5.00 1.25 3.77 118.6 60 水胺硫磷 Isocarbophos Y=0.4319*X+1.1897 0.9988 10.00 0.56 3.16 102.8 61 甲氧滴滴涕 Methoxychlor Y=1.5199*X+-5.1306 0.9994 5.00 0.81 3.97 92.5 62 甲基五氯苯 硫磷 Methyl-pentachloro- phenyl sulfide Y=0.2865*X+-0.5124 0.9992 5.00 1.42 4.56 70.1 63 灭蚁灵 Mirex Y=0.2242*X+-0.3601 0.9994 5.00 0.41 3.52 93.1 64 除草醚 Nitrofen Y=0.4991*X+-1.7875 0.9993 10.00 0.52 4.27 101.1 65 八氯二丙醚 Octachlorodipropyl ether Y=0.1626*X+-0.7827 0.9995 5.00 0.43 3.95 109.7 66 对硫磷 Parathion (ethy) Y=0.4912*X+13.2790 0.9978 10.00 0.02 0.69 113.8 67 甲基对硫磷 Parathion-methyl Y=0.5446*X+-1.4805 0.9995 10.00 0.52 2.88 104.6 68 二甲戊灵 Pendimethalin Y=0.2429*X+-0.9069 0.9994 10.00 0.42 3.75 109.3 69 五氯苯胺 Pentachloroaniline Y=0.3363*X+-0.4428 0.9996 5.00 0.96 1.41 82.7 70 五氯甲氧基苯 Pentachloroanisole Y=0.0012*X+0.0372 0.9929 5.00 0.14 4.12 88.8 71 氯菊酯 Permethrin Y=0.6440*X+0.1748 0.9988 5.00 0.37 4.11 96.7 72 苯醚菊酯 Phenothrin Y=0.1326*X+12.4269 0.9965 5.00 0.48 2.15 92.3 73 甲拌磷 Phorate Y=0.5701*X+-1.8661 0.9996 5.00 0.31 3.08 111.1 74 氧甲拌磷砜 Phorate oxon sulfone Y=-0.0051*X+1.8197 0.9962 10.00 0.91 5.78 78.1 75 甲拌磷砜 Phorate sulfone Y=1.2878*X+121.4576 0.9924 10.00 1.56 4.31 106.3 76 甲拌磷亚砜 Phorate sulfoxide Y=0.1810*X+-0.4499 0.9997 10.00 1.88 6.01 101.4 77 腐霉利 Procymidone Y=0.4012*X+0.5458 0.9995 10.00 2.15 3.76 100.1 78 五氯硝基苯 Quintozene Y=0.1961*X+-0.5515 0.9995 5.00 0.45 2.06 93.8 79 喹禾灵 Quizalofop-ethyl Y=0.2948*X+0.9031 0.9951 10.00 1.18 4.79 83.9 80 四氯硝基苯 Tecnazene (TCNB) Y=0.1389*X+-0.4058 0.9995 5.00 0.15 1.85 98.8 81 七氟菊酯 Tefluthrin Y=2.6690*X+-9.0207 0.9993 5.00 0.36 4.91 102.9 82 特丁硫磷 Terbufos Y=1.3007*X+-4.9015 0.9994 5.00 0.08 3.75 100.0 83 特丁硫磷砜 Terbufos sulfone Y=1.6408*X+-1.4042 0.9996 10.00 2.01 6.48 4.结论 本文参考《中国药典》前处理方法，用内标法定量，建立了气相色谱三重四极杆质谱法(GC-MS/MS)测定药材中的多种农残。该方法在5~200pg/L浓度范围内，线性相关系数均大于0.99，检出限范围在0.02-2.15pg/kg之间。通过空白基质加标测试，取得了优异的稳定性和良好的加标回收率。基于变色龙强大的合规性及流程化的操作方便性，可满足医药生产商对于农药管控的定量要求，也能满足监管单位对药材进行风险监测的要求。 ( 仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎2020Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有 权 利。 ) 本文参考《中国药典》前处理方法，用内标法定量，建立了气相色谱三重四极杆质谱法（GC-MS/MS）测定药材中的多种农残。该方法在5~200μg/L浓度范围内，线性相关系数均大于0.99，检出限范围在0.02-2.15μg/kg之间。通过空白基质加标测试，取得了优异的稳定性和良好的加标回收率。基于变色龙强大的合规性及流程化的操作方便性，可满足医药生产商对于农药管控的定量要求，也能满足监管单位对药材进行风险监测的要求。