药材及饮片中33种禁用农药测定检测方案(气质联用仪)

thermoscientific 热线 800 8105118电话4006505118www.thermofisher.com仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎2020 Thermo Fisher Scientific Inc.保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 气相色谱三重四极杆质谱联用仪用于中药材中33种禁用农药测定 邓武剑彭倩 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词： 药材及饮片，多农残测定， QuEChERS， Retain PEP，TG-17MS，TSQ 9000 为了应对《中国药典》2020版的实施，根据《中国药典》2020版2341通则第五法的要求，本文建立了一种运用三重四极杆气质联用仪(GC-MS/MS)检测中药材中33种禁用农药的分析方法。样品经过QuEChERS方法前处理，或Retain PEP小柱通过式净化，采用TG-17MS色谱柱， GC-MS/MS测定，用内标法定量计算。农药组分在5.0~200.0ug/L浓度范围内线性关系良好，线性相关系数均大于0.995。按照IUPAC(国际理论(化学)与应用化学联合会)方法规定计算各组分检出限，各组分定量限在0.008-~0.806pg/kg之间。对加标浓度为10.0ug/kg的样品连续进样8针， RSD(%)在1.81%~9.66%之间。加标浓度为10.0pg/kg的样品，各化合物的回收率在符合药典的要求。结果表明，赛默飞世尔科技TSQ 9000完全可以应对2020版《中国药典》关于GC-MS/MS检测药材、饮片及制剂中农药残留量的检测要求。 1.前言 随着对药材农药残留的报道日益增多，人们对农药残留危害的认识也越来越深入，药典对其制定检测方法也越来越全面，越来越科学。以下是中国药典对农药残留检测法的变革： 《中国药典》2000年版首次规定了9种有机氯农药残留的检测方法。2005年版，除甘草、黄芪等药材外，对其余药材均未提出限量要求。我国最近的第2010版《中国药典》中不仅规定了9种有机氯农药残留的检测方法，而且规定了12种有机磷类的检测方法，还规定了3种拟除虫菊酯农药残留量的检测方法，然而在限量标准方面仅规定了甘草和黄芪两种药物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量标准，其它中药材尚未涉及。2015版《中国药典》首次规定了用GC-MS/MS和LC-MS/MS等技术用于药材中多农残检测。2020版《中国药典》再次扩大了农药残留检测范围。历版《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化如表1所示： 表1：历版《中国药典》对药材农药残留量部分主要变化 出版年份 限定与变化 2000 提出了9种有机氯农药残留的检测方法 2005 没变化 9种有机氯农药残留的检测方法 2010 12种有机磷农药残留的检测方法 3种拟除虫菊酯的检测方法 2015 第四法农药多残留量测定法-质谱法 (其中GC-MS/MS 76种， LC-MS/MS 153种) 第四法农药多残留量测定法-质谱法 (其中GC-MS/MS 91种， LC-MS/MS 526种) 新增第五法33种农药禁用清单 2020 本文根据2341通则第五法，测定了中药材中33种禁用农药。 2.1仪器和试剂 Thermo ScientifcTM AI 1310自动进样器； Thermo ScientifcTM Tra-ce1310-TSQ 9000三重四极杆质谱仪；乙腈(色谱纯，美国ThermoFisher公司)、实验用水为Milli-Q去离子水。 2.2仪器方法 ( 气相方法： ) ( 色谱柱： TG-17MS， 30m x0.25mm x0.25um(PN： 26089-1420) ) ( 进样口：不分流进样，不分流时间：1.5min；进样口温度：250 °C；载气：高纯氦气(99.999%)，恒压模式：柱前压力 146Kpa； ) 柱温箱：60℃保持1min， 以10℃/min升至160℃， 再以2℃/min升至230℃，最后以15℃/min升温至300℃，保持6min. 传输线：280℃ 质谱方法：离子源温度为300℃，采用Time-SRM方法扫描，具体检测离子对参数如表2所示： 表2：化合物SRM参数 注：化合物33为内标物，其余均为目标化合物 2.3.1快速样品处理法(QuEChERS)法 取金银花供试品粉末(过三号筛)3g，精密称定，置50ml聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15ml，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15ml，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)5分钟，加入6g MgSO4， 1.5g NaOAC (PN： 60105-335-B)，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(每分钟4000转)5分钟，取上清液9ml， 置含有300mg PSA/300mg C18/90mg Carb / 900mg MgSO4 / 300mg Silica 的15mL离心管中(PN：60105-509-B)，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡(每分钟500次)5分钟使净化完全，离心(每分每4000转)5分钟，精密吸取上清液5ml，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4ml， 加乙腈稀释至1.0ml，涡旋混匀，滤过，取续滤液，即得。 2.3.2 Retain PEP 固相萃取法 取金银花供试品粉末(过三号筛)5g，精密称定，加NaCI 1g， 立即摇散，再加入乙腈50ml，匀浆处理2分钟(转速不低于每分钟12000转)，离心(每分钟4000转)，分取上清液，沉淀再加乙腈50ml，匀浆处理1分钟，离心，合并两次提取的上清液，减压浓缩至约3~5ml，放冷，用乙腈稀释至10.0ml，摇匀，得待净化液。量取待净化溶液3~5ml，通过亲水亲油平衡材料固相萃取柱HyperSep RetainPEP， 200mg， 6ml (PN： 60107-212)净化，收集全部净化液，混匀，即得。 2.4样品基质溶液： 按照2.3的程序处理空白金银花样品，得到样品的基质溶液 2.5标准溶液的配置 2.5.1混合标准中间液：移取适量的高浓度标准储备液，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0mg/mL。中间标准储备液在-20℃冰箱中冷冻保存。 2.5.2内标溶液的配置：称取适量的高浓度内标物，用乙腈稀释。中间标准储备液的浓度为10.0mg/mL。 2.5.3工作标准溶液：取适量的混合标准中间液于进样小瓶中，用氮气吹干，以样品基质液(2.4)定容至1.0mL， 加入10.0uL内标溶液(2.5.2)，依次配制成目标化合物浓度为5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、200.0 pg /L工作标准溶液。 2.6空白样品加标分析 加标样品测试：取空白样品，添加适量标准溶液，加入10.0pL内标溶液(2.5.2)，经过前处理(2.3)后，所得溶液，待上机分析。 3.实验结果分析 3.1色谱分离结果 在2.2的仪器条件下，基于变色龙软件，运行100.0pg/L的混合标准溶液色谱图(见图1)，10.0pg/L标液的部分化合物色谱峰见图2，部分化合物的标准曲线见图3。 图1：标准溶液定量色谱图(100.0ug/L) 图2：10.0pg/L标液部分农残的定量离子流图 图3.部分化合物的标准曲线 3.2标准曲线线性、检出限及精密度 采用上述仪器方法(2.2)进样分析，考察各组分的线性。实验结果表明33种农药组分在5.0~200.0pg/L线性关系良好，线性相关系数均大于0.995，对加标浓度为10.0pg/kg的样品连续进样8针， RSD(%)在1.81%-9.66%之间，重复性良好；加标浓度为10.0ug/kg的样品进行回收率计算，按2.3.1的前处理方法，各化合物的回收率在73.6%~113.6%之间，按2.3.2的前处理方法，各化合物的回收率在71.26%~108.01%之间。计算各组分定量限(信噪比为10)，定量限范围在0.008-0.459ug/kg之间，根据本应用方法的前处理，其检出检都满足最新药典对于农残分析定量限的要求(详见表3)。 4.结论 本文参考《中国药典》第五法前处理方法，用内标法定量，建立了气相色谱三重四极杆质谱法(GC-MS/MS)测定金银花中的33种禁用农残。该方法在5~200pg/L浓度范围内，线性相关系数均大于0.995，检出限范围在0.008-0.459pg/kg之间。通过空白基质加标测试， QuEChERS法和Retain PEP SPE法两种前处理方法取得了优异的稳定性和良好的加标回收率。可满足医药生产商对于中药材及饮片中农药管控的定量要求，也能满足监管单位对药材进行风险监测的要求。 随着对药材农药残留的报道日益增多，人们对农药残留危害的认 识也越来越深入，药典对其制定检测方法也越来越全面，越来 越科学。以下是中国药典对农药残留检测法的变革：《中国药 典》2000年版首次规定了9种有机氯农药残留的检测方法。2005 年版，除甘草、黄芪等药材外，对其余药材均未提出限量要求。我 国最近的第2010版《中国药典》中不仅规定了9种有机氯农药残留 的检测方法，而且规定了12种有机磷类的检测方法，还规定了3种 拟除虫菊酯农药残留量的检测方法，然而在限量标准方面仅规定了 甘草和黄芪两种药物的六六六、滴滴涕、五氯硝基苯的限量标准， 其它中药材尚未涉及。2015版《中国药典》首次规定了用GC-MS/ MS和LC-MS/MS等技术用于药材中多农残检测。2020版《中国药 典》再次扩大了农药残留检测范围。历版《中国药典》对药材农药 残留量部分主要变化