食品中4-甲基咪唑和 2-甲基咪唑检测方案(液相色谱仪)

应用简报 Agilent食品检测Trusted Answers 使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120HILIC-OH5 色谱柱分析4-甲基咪唑 Rongjie Fu 和 Zhicong Wang 安捷伦科技(上海)有限公司 4-甲基咪唑(4-MEI) 是一种不可直接添加到食品中的化合物，但它是某些食品和饮料在正常烹饪过程中形成的副产物。在某些类型焦糖色素 (用于给可乐型饮料和其他食品着色)的生产过程中，也会形成痕量4-甲基咪唑杂质。亲水相互作用色谱(HILIC) 是一种分离该极性分子及其同分异构体2-甲基咪唑快速便捷的方法。 4-甲基咪唑和2-甲基咪唑都属于极性化合物。反相液相色谱不能很好地保留这些化合物，而 HILIC 模式是对其更加有效的保留与分离方法。本应用简报介绍了使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120HILIC-OH5， 2.7 pm 色谱柱分离可乐型样品中4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的方法。InfinityLab Poroshell 120 HILIC-0H5 和InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 均可用于这两种化合物的分离筛查。Agilent6460三重四极杆液质联用系统用于样品的痕量检测。 图1.4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的结构 试剂与化学品 所有试剂均为 HPLC 级或更高等级。 HPLC级乙腈购自J.T. Baker (Center Valley， PA，U.S.A.)。水经由 ELGA PURELAB Chorus 系统 (High Wycombe， UK)纯化。乙酸铵购自北京百灵威科技有限公司。4-甲基咪唑和2-甲基咪唑均购自上海安谱科学仪器有限公司。 仪器与材料 Agilent InfinityLab 接头 ( 色谱柱入口：Agilent InfinityLab QuickConnect 快速连接接 头 (部件号 5067-5965) ) 色谱柱出口： Agilent InfinityLab QuickTurn接头(部件号5067-5966) ( Agilent Captiva 经济型过滤器， PTFE 膜， 直 径13 mm， 孔径0.2 um (部 件号5190-5265) ) ( 安捷伦样品瓶，螺口，棕色，带书写 签，已认证， 2mL，100/包(部件号 5182-0716) ) ( 安捷伦固定螺口盖，带PTFE/红色硅胶隔垫(部件号5190-7024) ) ( Agilent InfinityLab溶剂瓶，棕色，1000 mL (部件号9301-6526) ) Agilent InfinityLab Stay Safe 溶剂瓶安全盖， GL45，3口，1个放空阀(部件号5043-1219) Eppendorf 移液器和连续分液器 超声仪(VWR， Radnor， PA， USA) ( Agilent 1290 Infinity ll高速泵 (G7120A) ) ( Agilent 1290 Infinity I l Multisampler (G7167B) ) ( Agilent 1290 Infinity II 高木量柱温箱 (G7116B) ) ( Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统 ) ( Agilent MassHunter 工作站LC/MS 数 据采集软件，版本 B08.00 ) ( Agilent MassHunter 工作站定性分析 软件，版本B07.00 ) 样品前处理 量取 3.0 mL 可乐于5mL容量瓶中，并用 0.1 mL 氢氧化铵将 pH 调节为7.0左右。之后加水至刻度线，并用超声混合。后量取1.0 mL该混合溶液和8mL乙腈于 10 mL 容量瓶中，用超声混合，再加乙腈至刻度线。最后，取上层乙腈清液，并使用 Agilent Captiva 经济型过滤器PTFE 膜将其滤至样品瓶中。 加标样品的配制方法是在处理前向可乐样品中添加标样，随后执行相同方案。 流动相配制 精确称取一定量的乙酸铵并用水稀释至浓度为10 mM。一次配置1L缓冲液，定期更换以防降解或微生物生长。 HPLC 条牛 色谱柱 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z， 2.1×100mm (部件号685775-924) 流动相 A 10%10mM乙酸铵 流动相B 90%乙青 流速 0.30 mL/min 柱温 30°C 进样量 5pL 质谱条件 离子模式 ESI/喷射流ESI， 正离子模式 干燥气温度 210°C 干燥气流速 13L/min 雾化器压力 35 psi 鞘气温度 400℃ 鞘气流速 12L/min 毛细管电压(+) 2500V 喷嘴电压(+) 0V MRM条件 AEMV， 500V 图2.使用相同流动相时，4-甲基咪唑和2-甲基咪唑在 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 和 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-0H5 色谱柱上的保留对比 图3. 1 ppb 和10 ppb标样加标样品在 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 色谱柱上的分离色谱图 ( 使用 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-0H5色谱柱能够更好地保留4-甲基咪唑和2-甲基咪唑并将它们成功分离。对于加标样品， 信 噪比(S/N)为3时检测限(LOD) 低于1 ppb。该方法具有足够高的灵敏度， 可检测出可乐型饮料中的两种化合物。 ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 摘要4-甲基咪唑 (4-MEI) 是一种不可直接添加到食品中的化合物，但它是某些食品和饮料在正常烹饪过程中形成的副产物。在某些类型焦糖色素（用于给可乐型饮料和其他食品着色）的生产过程中，也会形成痕量 4-甲基咪唑杂质。亲水相互作用色谱 (HILIC) 是一种分离该极性分子及其同分异构体 2-甲基咪唑快速便捷的方法。前言4-甲基咪唑和 2-甲基咪唑都属于极性化合物。反相液相色谱不能很好地保留这些化合物，而 HILIC 模式是对其更加有效的保留与分离方法。本应用简报介绍了使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5, 2.7 μm 色谱柱分离可乐型样品中 4-甲基咪唑和 2-甲基咪唑的方法。InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 和 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 均可用于这两种化合物的分离筛查。Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统用于样品的痕量检测结论使用 InfinityLab Poroshell 120 HILIC-OH5 色谱柱能够更好地保留 4-甲基咪唑和 2-甲基咪唑并将它们成功分离。对于加标样品，信噪比 (S/N) 为 3 时检测限 (LOD) 低于 1 ppb。该方法具有足够高的灵敏度，可检测出可乐型饮料中的两种化合物。