猪肉中激素检测方案(液相色谱仪)

采用 Bond Elut Plexa 样品前处理柱和LC/MS/MS法测定猪肉中激素 应用简报 食品检测与农业 作者 前言 Chen-Hao (Andy) Zhai安捷伦科技(上海)有限公司 由于许多添加在食品中的化学物质会对人类健康产生潜在威胁，所以食品安全日益成为全世界人民重点关注的问题。激素是一类常见的食品添加剂。长期摄入糖皮质激素会导致高血糖症、骨质疏松症、出生缺陷和免疫功能下降。而雌激素、雄激素和黄体酮等其他激素则具有致癌性，可导致乳腺癌、卵巢癌和细胞癌等。许多国家的法规明确规定了这些化合物在食品中的残留限量。各国对这些化合物最大残留限量的要求各有不同，但基本上都在很低的 ppb 浓度范围。而由于此类样品较为复杂，所以肉类产品中此浓度下的激素分析往往非常困难。 本文使用简单易用的 Agilent Bond Elut Plexa 聚合物固相萃取柱进行萃取，然后采用Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离，同时采用 Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统进行高灵敏度检测，对猪肉样品进行前处理并对 ppb 级浓度水平下的激素进行分析。 Agilent Technologies 材料与方法 液相色谱条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18， 2.1 ×50 mm， 2.7 pm(部件号699775-902) 洗脱液： A： 水；B：乙腈 进样量： 10 pL 流速： 0.4 mL/min 梯度： 初始 20%B， 5 min 内线性升至 40%B， 再于3 min 内线性升至90%B， 保持10 min 柱温： 室温 样品瓶： 安捷伦认证样品瓶(部件号5183-2072) 系统： Agilent 1260 Infinity 液相色谱系统 质谱条件 电离模式： ESI+安捷伦喷射流 干燥气温度： 325°C 干燥气流量： 10 L/min 雾化器压力： 50 psi 鞘气温度： 400°C 鞘气流量： 12 L/min 毛细管电压： 4500V(ESI+)， 3500V (ESI-) 喷嘴电压： 1500V(ESI+)， 1500V(ESI-) 系统： Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统 本研究中分析激素优化的 MRM 离子对、碎裂电压和碰撞能量见表1。 表 1.MRM 离子对和其他激素分析条件 化合物名称 母离子 子离子 碎裂电压 曲安奈德 435.4 415.2 100 2 435.4 397.2 5 苯丙酸 407.4 257.2 诺龙 407.4 105.1 地塞米松 393.3 373.2 393.3 355.1 2 甲基泼尼松 375.4 357.2 2 375.4 161.2 15 氢化可的松 363.4 327.2 8 363.4 121.1 20 泼尼松龙 361.4 343.2 361.4 147.2 泼尼松 359.3 341.2 359.3 147.1 甲睾酮 303.4 109.1 303.4 97.2 雌三醇 287.3 171.2 287.3 145.3 群勃龙 271.4 253.2 15 271.4 199.1 20 己烷雌酚 269.3 134.1 4 269.3 119 己烯雌酚 267.3 251.2 267.3 237.2 样品前处理 称取5g猪肉糜置于50mL离心管中，然后加入5 mL 甲醇和20mL水用以预处理样品。将离心管强力涡旋1 min。然后， 在4℃下将离心管以5000 rpm 的转速离心5 min， 并将所有上清液移至另一个试管中用于 SPE 净化。 样品提取流程见图1。先后采用3mL甲醇和3mL水预处理Agilent Bond Elut Plexa 小柱(60mg， 3mL，部件号12109603)。提取物(相当于5g样品)以 1 mL/min 的速度通过小柱。当样品全部通过小柱后，用3mL 35%甲醇水溶液淋洗小柱，弃去所有流出物。小柱在负压(低于2.0kPa)下干燥5 min。使用5mL甲醇洗脱样品。收集洗脱液并在40°℃以下的氮气吹干。用20%甲醇水溶液 (v/v)溶解样品残渣并定容到1.0mL， 经0.2 pm 滤膜(Agilent Captiva Polyethersulfone， 部件号5190-5096)过滤，然后采用 LC/MS/MS 进行分析。 图1.猪肉样品的SPE 程序 结果与讨论 测定高低两种浓度各激素的回收率(表2)。通过比较 SPE提取前加标样品的 MRM峰面积和 SPE 提取后的加标样品(后加)MRM 峰面积计算回收率。图2所示为加标低浓度激素于空白猪肉样品分析所得的色谱图。图3为空白猪肉样品。 采集时间 (min) 图2.加标低浓度激素的猪肉样品的色谱图 图3.猪肉空白样品中激素的色谱图 结论 更多信息 采用 Agilent Bond Elut Plexa SPE 提取猪肉基质中的激素，大多数激素可以获得良好的回收率和重现性。然而，对于己烷雌酚和己烯雌酚，结果会受到基质效应的影响，因此，应使用同位素内标对这两种化合物进行分析，以获得更高的回收率。 这些数据代表典型结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com/chem/cn Bond Elut Plexa SPE 联用 LC/MS/MS分析，可实现肉类样品中低 ppb 激素浓度的高灵敏度定量分析。 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本资料中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2013 2013年11月21日，中国印刷 5991-3660CHCN Agilent Technologies 前言由于许多添加在食品中的化学物质会对人类健康产生潜在威胁，所以食品安全日益成为全世界人民重点关注的问题。激素是一类常见的食品添加剂。长期摄入糖皮质激素会导致高血糖症、骨质疏松症、出生缺陷和免疫功能下降。而雌激素、雄激素和黄体酮等其他激素则具有致癌性，可导致乳腺癌、卵巢癌和细胞癌等。许多国家的法规明确规定了这些化合物在食品中的残留限量。各国对这些化合物最大残留限量的要求各有不同，但基本上都在很低的ppb 浓度范围。而由于此类样品较为复杂，所以肉类产品中此浓度下的激素分析往往非常困难。本文使用简单易用的Agilent Bond Elut Plexa 聚合物固相萃取柱进行萃取，然后采用 Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离，同时采用Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统进行高灵敏度检测，对猪肉样品进行前处理并对ppb 级浓度水平下的激素进行分析。结论采用Agilent Bond Elut Plexa SPE 提取猪肉基质中的激素，大多数激素可以获得良好的回收率和重现性。然而，对于己烷雌酚和己烯雌酚，结果会受到基质效应的影响，因此，应使用同位素内标对这两种化合物进行分析，以获得更高的回收率。Bond Elut Plexa SPE 联用LC/MS/MS 分析，可实现肉类样品中低ppb 激素浓度的高灵敏度定量分析。