果汁饮料中维生素检测方案

天美Marketing天美(中国)科学仪器有限公司TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 维生素的检测方案—HPLC法 天美(中国)科学仪器有限公司甄蕊 维生素是维持生物体正常机能的必不可少的一大类有机物质，虽然机体对这类物质的需求量很小，但却十分重要。维生素是个庞大的家族，目前所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。维生素常被作为营养强化食品的添加因子，广泛存在于谷类、果蔬、肉禽和蛋类等加工食品中，因此，维生素的检测对食品、饲料和医药领域都有非常重要的意义。 1、脂溶性维生素检测方案 脂溶性维生素包括维生素A、维生素D和维生素E，由于这几种维生素在外界环境中不稳定，很容易受光、氧等影响而维生素被氧化破坏，影响因素较多，因此维生素A、D和E的同时测定目前是检验技术的难点。 采用日立高效液相色谱仪配二极管二列(DAD)检测器，根据GB/T5009.82-2003和GB/T5413.9-1997 测定了食品中的维生素A、维生素D以及α、β、y、8四种维生素E的衍生物。选择日立的 DAD 检测，7种混标可以同时检测，根据标准要求提取不同波长下的色谱图，且日立的 DAD 检测器的灵敏度可以和 UV 检测器达到一个数量级别，保证了维生素的痕量检测。 1.1色谱条件 柱： Hitachi LaChrom C18(5um) 4.6mmI.D.x250mm 柱温：30℃ 流速：1.5 mL/min 检测波长：200-350nm， 300nm， 265nm 进样量 ： 20pL 流动相：CH3OH：H2O=98：2 1.2样品前处理 >皂化 准确称取5g样品于皂化瓶中，加入30mL无水乙醇，充分混匀后加50mL氢氧化 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 钾溶液，在蒸汽浴上连续回流30min 后，立刻冷却到室温。 >提取 将皂化液转入 500mL分液漏斗中，用100mL水分几次冲洗皂化瓶，洗涤液并入分液漏斗中。加入100mL石油醚，盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇 1min。在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，弃去水层。 >洗涤 重复上述萃取过程二次，合并醚液到第一个分液漏斗中。用蒸馏水洗该醚液至中性。 >浓缩 通过无水硫酸钠过滤干燥，在40℃和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至近干(绝不允许蒸干)后，除去石油醚，加入乙醇转移至10mL容量瓶中，用乙醇定容。 1.3实验结果 VA=25pg/mL， VD2=0.2785ug/mL，VD3=0.2666ug/mL，a-VE=25pg/mL，β-VE=25pg/mL，y-VE=25pg/mL， 8-VE= 25pg/mL 图1VA标样色谱图(DAD ，325nm) 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 图2VE标样色谱图(DAD， 294nm) 图3VD标样色谱图(DAD ， 264nm) 2、水溶性维生素检测方案 水溶性维生素与人体的生长发育和健康密切相关，尤以维生素C和B族维生素为重，其测定方法主要包括微生物法、荧光法和高效液相色谱法等。其中微生物法实验周期长，荧光法也费时，且不能同时测定多种维生素。高效液相色谱法样品前处理简单，样品用量少，分离速度快，可同时测定多种水溶性维生素。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 2.1色谱条件 色谱柱： ZORBAX SB-Aq 柱(5um，250×4.6mm)； 流速：1.4mL/min； 柱温：40℃； 进样量：20pL； 流动相：A：乙腈，B：1%的三氟乙酸溶液 Time (min) A(%) B(%) 0 0 100 6 3 97 8 15 85 15 20 80 15.1 0 100 30 0 100 2.2实验结果与讨论 检测波长的选择 根据维生素标准在200~400nm 吸收光谱的扫描结果，选择 VC的测定波长为242nm， VB1、VB2为267nm，VB6为290nm，烟酰胺为 261nm。 > 流动相的选择 本研究采用乙腈/三氟乙酸溶液体系，在此基础上，试验了辛烷磺酸钠等离子对试剂的分离效果，但不理想，离子对试剂价格较高，对色谱柱的柱效和泵损害较大，且平衡时间和冲洗时间较长。故综合考虑采用流动相梯度洗脱。 中国北京朝阳区天畅园7号楼1、3层 TEL：010-64010651 FAX：010-64060202 E-MAIL：techcomp@techcomp.cn 图4维生素标准品的色谱图(242nm) 图5维生素标准品的色谱图(267nm) 1—VC， 2-VB1，3一烟酰胺， 4—VB6，5—VB2