电化学发光检测

近日，中科院长春应用化学研究所徐国宝等科研人员的一项发明专利“环境友好的高灵敏电化学发光检测方法”获得了国家知识产权局的授权(专利号：200510016848.4)。　　联吡啶钌电化学发光标记分析是继放射分析、酶联分析、荧光分析和化学发光分析之后的新一代标记分析技术。它是基于高浓度的三丙胺与低浓度的联吡啶钌标记物发生电化学发光反应来进行生物分析，该技术由于具有灵敏度高、线性范围宽、抗干扰能力强、试剂稳定、重现性好等优点，被广泛应用于临床分析和科学研究。但联吡啶钌/三丙胺体系需要很高浓度的三丙胺才能实现高灵敏检测 且在不同工作电极上发光强度差别较大，铂电极上的发光强度仅约为金电极上的十分之一。因此十几年来人们一直在寻找替代三丙胺的新型共反应物，但一直没有找到发光效率高于三丙胺的共反应物。　　该研究小组针对标记分析的特定条件，调研了一系列含有不同链长和基团如羟基、羧基和氨基等的共反应物的发光情况，找到一种高效的新型共反应物二丁基乙醇胺。在浓度为20 mM时，它在金电极和铂电极上的发光强度分别约是目前效率最好的三丙胺的十倍和一百倍。与一般采用外加增敏剂提高发光效率不同，二丁基乙醇胺是通过自身的羟乙基的催化来显著提高发光效率。由于羟乙基是一个吸电子基，因此该研究表明不是所有吸电子基团都是抑制电化学发光的，为寻找更加优良的试剂提供了新途径。二丁基乙醇胺具有优良的分析性能，在浓度只有三丙胺的五分之一时检测联吡啶钌比三丙胺的检测限好一个数量级。该研究对联吡啶钌电化学发光标记分析具有重要意义。

p　　日前，在“2017中国医师协会检验医师年会暨第十二届全国检验与临床学术会议”上，四川大学华西医院实验医学科陶传敏教授分享了国际权威梅毒管理指南及国内外大型研究对于梅毒实验室检测方法和标准检测流程的临床应用评估及推荐，就梅毒感染的实验室检测策略及不同流程的应用进行了深入分析与探讨。/ppstrong梅毒感染实验室检测/strong/ppstrong首选特异性检测方法/strong/pp　　梅毒实验室检测方法主要分成三大类：病原体检测、核酸检测和血清学检测。病原体检测主要是用暗视野显微镜和镀银染色，方法繁琐不适合实验室常规检测；核酸方法和病原体检测都受病原体在局部的影响，容易发生漏检。因此，血清学检测是实验室诊断梅毒的主要手段。/pp　　血清学检测包括非梅毒螺旋体抗原试验（NTT）和梅毒螺旋体抗原试验（TT）。前者属于非特异性抗体检测，这可能会在自身免疫性疾病患者或孕妇中呈假阳性以及在晚期患者中呈假阴性。后者属于特异性检测，这类方法检测的是梅毒螺旋体特异性抗体，特异性及敏感度均较高。/pp　　梅毒实验室检测流程主要包括传统检测流程和反向检测流程，两者的区别在于采用哪一种方法作为初筛的检测手段。传统检测流程是先进行NTT，结果阳性的患者再进行TT，结果阳性确认新感染或曾经治疗过；反向检测流程反之，对于TT结果阳性的患者进行NTT，若结果阴性再进行第二种TT检测，结果阳性则表示近期再次感染或曾经治疗过。现在还有一种是欧洲疾病预防控制中心（ECDC）流程，这是一个更简化的反向流程，先进行TT，结果阳性的患者直接再进行第二种TT检测。/pp　　目前，对于梅毒的实验室筛查与诊断流程，越来越多地倾向于用反向检测流程。美国疾病控制中心发布的《2015性传播疾病治疗指南》提出反向流程对患者诊断更为全面，能够检测出既往治疗过、未治疗或不完全治疗的梅毒患者，以及低感染率人群的假阳性情况。《2014欧洲梅毒管理指南》推荐TT作为单独的初筛方法，并应采用全自动EIA/CIA，NTT只能检测到现症梅毒，相比TT会漏检早期的梅毒感染。《2015英国梅毒管理指南》也推荐EIA/CLIA作为初筛方法，同时检测免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG），并特别提到初筛阳性后再用另一种TT方法进行确认。/pp　　陶传敏教授指出：“我国现在绝大部分实验室和血站主要是用反向检测流程，用特异性抗体首先开始进行筛查，对于筛查阳性的患者建议做非特异性检测，同时结合临床表现和流行病学史进行诊断。对性病门诊患者没有必要区分反向流程和传统流程，应该建议患者同时做这两类不同的实验室检测，这样可以节约时间。”/ppstrong电化学发光检测方法/strong/ppstrong有效提高梅毒检测质量/strong/pp　　梅毒螺旋体抗原极不稳定，试剂性能的优异取决于更高的设计标准。对于免疫试剂的设计，抗原的筛选和制备工艺需要非常考究。罗氏诊断对抗原组合进行严格筛选和评估，最终选取了最有优势的抗原成分进行重组；同时优化了抗原序列，以实现试剂的稳定性和特异性，并采用了易大规模生产的高可溶性抗原，配合罗氏专有的解决方案，即抗原伴侣的应用，与天然抗原极度接近的表位的表达，实现只与抗原伴侣结合，不和特异性抗体结合，从而降低假阳性率。罗氏诊断ElecsysR Syphilis梅毒螺旋体抗原特异性抗体电化学发光检测试剂盒于 2014 年 8 月正式在中国获批上市。该技术使用双抗原夹心法（DAGS）检测梅毒螺旋体总抗体，血清样本仅需10μL，在18分钟时间内即可完成整个检测过程，是目前可靠、高效的梅毒特异性检测方法。/pp　　2015年，Clinical and Vaccine Immunology杂志发表了一项由全球6个国家8家研究中心参与的梅毒检测国际多中心研究结果，四川大学华西医院是8家研究中心之一，且国内只有此中心提供相应数据，参加了欧洲同步的性能评估。结果显示：与其它方法学梅毒检测试剂相比，罗氏诊断ElecsysR Syphilis梅毒螺旋体抗体检测在灵敏度、特异性、临床样本敏感性等综合性能表现最佳，并且可100%检测出不同分期梅毒感染样本。/pp　　2016年，微生物学领域经典期刊Journal of Clinical Microbiology杂志发表了一项对六种自动化梅毒螺旋体抗体检测方法的比较研究结果，对比其它方法学梅毒检测试剂，ElecsysRSyphilis梅毒螺旋体抗体检测的敏感性、特异性和一致性表现优异，其中，敏感性达到99.4%，特异性达到100%，一致性是99.8%，无一例假阳性结果和漏检情况发生。/pp　　陶教授指出：“临床上有一些潜在因素，如合并其它传染病、自身免疫性疾病、肿瘤、妊娠等，可能会干扰到梅毒的实验室检测结果，因此，选择抗干扰能力强的检测方法对于检测结果的准确性至关重要。”ElecsysR Syphilis梅毒螺旋体抗体检测采用抗干扰模式，可有效避免交叉反应，针对干扰样本的评估研究显示，具有很好的特异性与灵敏度，对人类免疫缺陷病毒感染、EB病毒（EBV）感染和莱姆病（Lyme）的特异性均达到100%。/pp　　为提供更具参考性的中国证据及使用经验，四川大学华西医院联合全国其它14家医院共同开展了“罗氏诊断新一代ElecsysR Syphilis梅毒螺旋体抗体检测试剂性能比对多中心研究”，旨在自然条件下比较ElecsysR Syphilis检测试剂与已在国内上市的其它四种梅毒检测试剂的灵敏性与特异性。共纳入13,767例常规随机样本，是全球样本最多的试验之一。该研究结果表明，ElecsysR Syphilis在所有比对组常规随机样本中的敏感度均达到100%，特异性也更优异；ElecsysR Syphilis在所有比对组“临界”样本中的假阳性和假阴性结果更少。/p

pstrong仪器信息网讯 /strong2017年12月15日，罗氏诊断产品（上海）有限公司对电化学发光全自动免疫分析仪（注册证号：国食药监械（进）字2014第3404503号、国食药监械（进）字2006第3400500号）主动召回。 br//pp　　据悉，罗氏诊断在评估调查产品投诉时发现，电化学发光全自动免疫分析仪（cobas e 411和Eleysys 2010）在极少数情况下，样本& 控制数据文件中可能发生软件（SW)故障，有可能导致数据不匹配。截止至目前，罗氏诊断全球共收到4例客户投诉，未发生不良事件。/pp　　经调查，引起上述召回事件的根本原因是软件故障，并且只有在同时满足以下条件时（极少的情况下）才会发生：/pp　　strongcobas e 411:/strong 1、没有按照操作手册指示每天运行“样本数据清除“功能；2、样本& 控制数据文件中的存储记录 2000条时。/pp　　strongElecsys 2010： /strong1、没有按照操作手册指示每天运行“样本数据清除“功能；2、样本& 控制数据文件中的存储记录超过600条时。/pp　　该软件故障已经确认。对于电化学发光全自动免疫分析仪（cobas e 411)将会在新版本的软件中修复这个故障；对于电化学发光全自动免疫分析仪（Elecsys 2010），由于产品已于2014年底退市，将不再发布新版本软件。/pp　　针对上述情况，罗氏诊断采取以下纠正措施：/pp　　1.向所有使用受影响产品电化学发光全自动免疫分析仪（cobas e 411和Elecsys 2010）的客户发告知信，告知其相关信息及需要采取的措施。/pp　　2.对使用受影响产品电化学发光全自动免疫分析仪（cobas e 411）的客户，在收到制造商发布的更新软件后，将为其安装升级软件。/pp　　（无需停用相关检测仪器，受影响产品无需从客户处撤回）/pp　　这次召回级别为二级。涉及产品的型号、规格及批次等详细信息见《医疗器械召回事件报告表》。/pp　　附件：医疗器械召回事件报告表/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/328260be-7c8f-43e9-a23e-2cb25625dfcf.jpg" style="width: 600px height: 845px " title="1.jpg" width="600" vspace="0" hspace="0" height="845" border="0"//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/e8199f78-9ee0-4f4f-bdcd-f2419e3fcb1e.jpg" style="width: 600px height: 845px " title="2.jpg" width="600" vspace="0" hspace="0" height="845" border="0"//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201801/insimg/ed750b28-5b65-486d-b198-d421335e14f2.jpg" style="" title="3.jpg"//ppbr//p