Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案

避免基质效应 ― 提高检测灵敏度

高分辨率采样二维液相色谱

采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案

摘要 本应用简报展示将 Agilent InfinityLab 二维液相色谱解决方案与 Agilent 6495 三重四极杆液质联用系统结合使用，分析药代动力学研究中的药物及其代谢物。二维液相色谱可避免出现共洗脱，因此能够减少信号抑制以及交叉干扰风险，这些问题可能存在于复杂样品的一维分析中。通过以更适合的洗脱方式将分析物引入质谱离子源，2D-LC/MS/MS 分析方法的第二维可用于提高质谱检测的信号强度。

分析与活性药物成分 (API) 有关的低浓度杂质对原料药的质量控制来说至关重要。当杂质与 API 的化学结构相似且浓度差异较大时，色谱分离与检测将变得困难。 Agilent 1290 Infinity II 二维液相色谱解决方案可实现全二维液相色谱(LC × LC)、多中心切割二维液相色谱 (MHC) 以及高分辨率采样二维液相色谱 (HiRes 2D-LC) 之间的轻松切换。在本应用简报中，使用高分辨率采样二维液相色谱实现两种紧邻洗脱的化合物的分离，其中一种化合物浓度极低且隐藏在其他高浓度化合物峰下。以氯二氟苯甲酸和脱酰胺胰岛素分别作为标准物质和实际样品进行分析。

在药物和精细化学品的开发和生产过程中，杂质分析非常重要。本应用简报表明多中心切割二维液相色谱非常适用于药物和精细化学品杂质分析的方法开发。使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案，经第一维分离后 所检测到的每一个峰都被中心切割并转移到具有不同选择性的第二维进行进一步分离。此方法能发现可能存在的共洗脱化合物。此外，通过向样品添加疑似杂质还可确证对杂质的鉴别。

治疗性多肽和蛋白质的表征及杂质分析需要联合使用色谱分离和质量选择检测。然而，多肽和蛋白质的色谱分离方法通常使用 MS 不兼容的流动相。本应用简报采用多中心切割 (MHC) 二维液相色谱 (2D-LC) 作为质量选择检测的自动脱盐工具。在第一维中，使用 MS 不兼容的流动相根据 USP 39 分析多肽胰高血糖素。然后在第二维中进行自动脱盐和质量选择检测。

由亚磷酰胺化学法合成的寡核苷酸通常使用离子对反相液相色谱 (IP-RPLC) 和阴离子交换色谱进行分析和纯化。在 IP-RPLC 分析中，阴离子交换纯化馏分的高含盐量会削弱寡核苷酸参与离子配对的能力。这就需要在 IP-RPLC 分析之前对样品进行脱盐，这一步骤通常使用离心过滤器手动完成。 本应用简报展示了高盐浓度溶液中寡核苷酸的直接二维液相色谱分析：在第一维( 1 D) 中进行在线脱盐，随后在第二维 ( 2 D) 中进行 IP-RPLC 分析。在该设置中，二维 液相色谱的使用提高了工作流程速度，同时避免了手动的样品前处理过程。

本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行，而体积排阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这项技术能够在一次分析中完成整个表征，无需进行馏分收集和多次进样。

在液相色谱方法的开发中，常会用到一些添加剂以提高色谱行为表现，但是这些添加剂经常无法兼容质谱检测，而在某些分析中，如杂质分析、代谢分析等，经常需要对某些新产生的杂质或代谢产物进行质谱鉴定，同时又不希望改变方法选择性以便通过保留时间对未知物进行定性。但是如果将原有方法中不能兼容质谱条件的添加剂改变的话，很可能造成选择性变化，从而无法定位欲分析的未知化合物的位置。针对此类问题，安捷伦开发了一个基于阀切换的 2D-LC 方法，保证了在各个色谱峰的保留行为不发生变化的情况下（即原始色谱条件不变），通过二维液相的方式将原始条件中的质谱不兼容流动相变为兼容流动相，从而实现用液质联用方法对未知杂质进行定量分析的目的。

全新的 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案让您可以根据样品的复杂程度选择合适的分离性能。只需轻轻转下旋钮，即可在一维超高效液相色谱 (UHPLC) 和具有超高色谱性能的二维液相色谱之间进行选择。此外，安捷伦的解决方案也将二维液相色谱的易操作性提升至新的高度，帮助您通过中心切割、多中心切割或全二维分析快速获取正交数据。

前言 有关维生素 A、D、E 的新国家标准[1] 方法从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质，用于检测其中所含的维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 和四种维生素 E (VE) 异构体的含量。其中，V D 由于本身含量低、基质干扰严重，该国家标准方法采用液质联用或半制备正相净化的方式对其进行分离检测。但液质联用方法复杂，维护成本相对较高；而正相净化方法易受流动相等条件影响，从而造成结果不准确。

有关食品中维生素 A、D、E 分析的新国家标准方法[1] 从 2017 年 6 月 23 日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质。但是该标准方法中规定的样品前处理过程极其复杂、测定方法多样（同一成分有不同的检测方法）、检测周期长、目标化合物回收率低且重复性差，极大降低了分析效率。为解决该国标方法所存在的难点和不足，需要开发一种同时测定维生素 A、D、E 的稳定高效的二维液相色谱方法。

特殊医学用途配方食品（特医食品）属于特殊膳食用食品的一种，是为了满足 进食受限、消化障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需 要，专门加工配置而成的配方食品。特医食品可以作为一种营养补充途径，起 到营养支持作用。 国家对于特医食品行业施行高门槛严管理的政策，以保障行业的良性发展。《特 殊医学用途配方食品注册管理办法》中要求企业需要具有研发、生产、检测（可 委外）能力。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》要求按照相关标准规定 的全部项目对特医食品逐批检验，故而特医食品检测面临检测项目多、检测任 务重的问题。特医食品检测亟需高效、自动化的检测方法，来提高检测效率、 节省人力和时间成本。 特医食品检测项目包括：糖类、维生素、氨基酸、牛磺酸、核苷酸等营养成分， 真菌毒素，食品添加剂，营养强化剂，均需使用到液相色谱方法。安捷伦液相 色谱的中心切割二维液相色谱方案、自动衍生方案、多方法应用系统，使得检 测工作更高效、更简便，是特医食品检测的最佳选择

特殊医学用途配方食品（特医食品）属于特殊膳食用食品的一种，是为了满足进食受限、消化障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需要，专门加工配置而成的配方食品。特医食品可以作为一种营养补充途径，起到营养支持作用。 国家对于特医食品行业施行高门槛严管理的政策，以保障行业的良性发展。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》中要求企业需要具有研发、生产、检测（可委外）能力。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》要求按照相关标准规定的全部项目对特医食品逐批检验，故而特医食品检测面临检测项目多、检测任务重的问题。特医食品检测亟需高效、自动化的检测方法，来提高检测效率、节省人力和时间成本。 特医食品检测项目包括：糖类、维生素、氨基酸、牛磺酸、核苷酸等营养成分，真菌毒素，食品添加剂，营养强化剂，均需使用到液相色谱方法。安捷伦液相色谱的中心切割二维液相色谱方案、自动衍生方案、多方法应用系统，使得检测工作更高效、更简便，是特医食品检测的最佳选择。

特殊医学用途配方食品（特医食品）属于特殊膳食用食品的一种，是为了满足进食受限、消化障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需要，专门加工配置而成的配方食品。特医食品可以作为一种营养补充途径，起到营养支持作用。 国家对于特医食品行业施行高门槛严管理的政策，以保障行业的良性发展。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》中要求企业需要具有研发、生产、检测（可委外）能力。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》要求按照相关标准规定的全部项目对特医食品逐批检验，故而特医食品检测面临检测项目多、检测任务重的问题。特医食品检测亟需高效、自动化的检测方法，来提高检测效率、节省人力和时间成本。 特医食品检测项目包括：糖类、维生素、氨基酸、牛磺酸、核苷酸等营养成分，真菌毒素，食品添加剂，营养强化剂，均需使用到液相色谱方法。安捷伦液相色谱的中心切割二维液相色谱方案、自动衍生方案、多方法应用系统，使得检测工作更高效、更简便，是特医食品检测的最佳选择。

特殊医学用途配方食品（特医食品）属于特殊膳食用食品的一种，是为了满足进食受限、消化障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需要，专门加工配置而成的配方食品。特医食品可以作为一种营养补充途径，起到营养支持作用。 国家对于特医食品行业施行高门槛严管理的政策，以保障行业的良性发展。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》中要求企业需要具有研发、生产、检测（可委外）能力。《特殊医学用途配方食品注册管理办法》要求按照相关标准规定的全部项目对特医食品逐批检验，故而特医食品检测面临检测项目多、检测任务重的问题。特医食品检测亟需高效、自动化的检测方法，来提高检测效率、节省人力和时间成本。 特医食品检测项目包括：糖类、维生素、氨基酸、牛磺酸、核苷酸等营养成分，真菌毒素，食品添加剂，营养强化剂，均需使用到液相色谱方法。安捷伦液相色谱的中心切割二维液相色谱方案、自动衍生方案、多方法应用系统，使得检测工作更高效、更简便，是特医食品检测的最佳选择。

由美国药物滥用和精神健康服务管理局（SAMHSA）颁布，于 2010 年 10 月生效的新准则，允许在政府认证的药物检测实验室采用 LC/MS/MS 法确认初步药物测试结果。由于 LC/MS/MS 法不需要衍生操作，因此它远比以前使用的 GC/MS 法要简便得多。我们提出了一种满足最新 SAMHSA 准则要求的苯环利啶的分析方法，并对其线性、检测限 （LOD）、准确度和精密度进行论证，还对该方法的基质效应、萃取回收率和总处理效率进行了考察。这是涵盖所有 SAMHSA 监控药物类别的一系列六种简便检测方法之一，该方法主要使用安捷伦产品进行分析，包括 Agilent Bond Elut Plexa PCX 混合模式聚合物 SPE 吸附剂，Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 µm 表面多孔 LC 色谱柱，Agilent 1200 Infinity LC 系统以及应用安捷伦喷射流技术（AJST）增强电喷雾离子源的 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系统。

由美国药物滥用和精神健康服务管理局（SAMHSA）颁布，于 2010 年 10 月起生效的新准则，允许在政府认证的药物检测实验室使用 LC/MS/MS 法对初步药物检测结果进行确认。由于 LC/MS/MS 法不需要衍生步骤，因此比先前使用的 GC/MS 法简便得多。我们提出了一种满足最新 SAMHSA 准则要求的 6-乙酰吗啡的分析方法，并对其线性、检测限（LOD）、准确度和精密度进行论证，还对该方法的基质效应、萃取回收率和总处理效率进行了考察。这是涵盖所有 SAMHSA 监控药物类别的一系列六种简便检测方法之一，该方法主要使用安捷伦产品进行分析，包括 Agilent Bond Elut Plexa PCX 混合模式聚合物 SPE 吸附剂、Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 µm 表面多孔 LC 色谱柱、Agilent 1200 Infinity LC 系统以及应用安捷伦喷射流技术（AJST）增强电喷雾离子源的 Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS 系统。