雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺（NDMA）检测方案

DiKMAA reliable partner for your lab 雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测 UPLC-MS/MS法 2019年9月13日，美国FDA发布公告称，多个品牌生产的雷尼替丁中含有低浓度的可能致癌物 N-亚硝基二甲胺(NDMA)，该物质一般存在于水和食物中，在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，具有致癌、致突变的特点。NDMA分子量小，亲水性强，，对检测方法要求更加严格。 雷尼替丁，强效组胺 H2受体拮抗剂，主要用于胃酸过多、烧心等的治疗，也是目前比较主流的治疗溃疡病的药品。在雷尼替丁中检测出 NDMA 可能会对用药安全性产生较大威胁，因此在药物中准确监测 NDMA 非常重要。 针对此次“雷尼替丁”事件，迪马科技结合中国食品药品检定研究院发布的《关于开展雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺检验工作的通知》及 FDA 10/17/2019公布最新检测方案，建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱一盐酸雷尼替丁中 NDMA的检测方法，本方法用于测定雷尼替丁药物产品和原料药中 NDMA的含量，可供广大分析工作者参考。 以下为详细解决方案，敬请参考! 1、适用范围 本方案适用于盐酸雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测。 2、标准品配制 (1)N-亚基基二甲安(NDMA)储备液 1.0 pg/mL：准确称取适量标准品，用甲醇配制成1.0 pg/mL 的储备液； (2)对照品溶液2.0 ng/mL：吸取适量储备液，用水配制成2.0 ng/mL 对照品溶液； (3)灵敏度溶液1.0 ng/mL：吸取适量储备液，用水配制成 1.0 ng/mL 灵敏度溶液。 3、样品制备 (1)盐酸雷尼替丁供试品溶液制备 取供试品约300 mg， 精密称量于10mL容量瓶中，用水定容至10 mL。 (2)盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备 取本品内容物适量(约相当于雷尼替丁 300 mg)于15mL离心管中，准确加入10 mL水， 北京：400-608-7719 上海：021-61263966 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 成都：028-86612625沈阳：024-22943513济南：0531-83681355石家庄：0311-66686220 重庆：023-62568657 青岛：131.5685.9195 哈尔滨：180.4537.3042 振荡 40 min， 6000 rpm 离心2 min， 取上清液过微孔滤膜后上机分析。 (3)盐酸雷尼替丁片供试品溶液制备 取本品5片，精密称量，研细，准确称取细粉适量(约相当于雷尼替丁 300 mg)于15mL离心管中，加入10 mL 水， 振荡40 min， 6000 rpm 离心2 min， 取上清液过微孔滤膜后上机分析。 4、、分析条件 UPLC 条件 色谱柱： Spursil C18， 100 x3.0 mm， 3.0 um (Cat#：82022) 流 速：0.7mL/min 进样量：：10pL 柱 温：：30℃ 流动相：A：0.1%甲酸水 B：0.1%甲酸甲醇 梯度设置 时间/Min. 0 1 3 3.5 7.5 A(%) 95 95 43 95 95 B(%) 5 5 57 5 5 质谱条件 离子源： APCI源，正离子模式 检测方式：多反应监测NC 电流： 3uA雾化气压力：50 psi离子源温度：500℃气帘气压力：20 psi碰撞气 CAD： 8 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 药物名称 定性离子对(m/z) (母离子/子离子) 定量离子对(m/z) (母离子/子离子) 碰撞气能量/eV 去簇电压/V N-亚硝基二甲胺 75.0/43.0 75.0/58.0 22 50 75.0/58.0 18 5、实验结果 (1)重复性实验结果 对照品溶液 2.0 ng/mL 重复进样6次结果如下 对照品溶液重现性数据总结 数据名称 峰面积 average stdev RSD 2.0 ng/mL-1 6590 6388.3 309.6 4.8% 2.0 ng/mL-2 6860 2.0 ng/mL-3 6330 2.0 ng/mL-4 6250 2.0 ng/mL-5 6350 2.0 ng/mL-6 5950 6针NDMA 2.0 ng/mL 的 XIC对比图 ( 广州：020-85593520石家庄：0311-66686220哈尔滨：180.4537.3042 ) (2)灵敏度实验 系统适用性灵敏度溶液 1.0 ng/mLNDMA 主峰信噪比>3。 XIC of +MRM (2pairs)： 75.000/58.000 amu Expected RT： 1.5 ID： NDMA2 fro... Max. 4236.0 cps. NDMA 1.0 ng/mLXIC图 (3)标准曲线 用纯水逐级稀释 NDMA 储备液，配制成1.0 ng/mL， 2.0 ng/mL， 5.0 ng/mL， 10.0 ng/mL，50.0 ng/mL， 100.0 ng/mL， 500.0 ng/mL 标准溶液。将标准溶液分别进样，以峰面积对浓度做标准曲线，在线性范围内线性良好，相关系数0.9998. 20191106-bq.rdb(NDMA2)："Linear" Regression ("No" weighting)：y=3.25e+003x+-5.65e+003 (r=0.9998) NDMA标准曲线图 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513济南：0531-83681355石家庄：0311-66686220重庆：023-62568657青岛：131.5685.9195西安：158.0293.5126哈尔滨：180.4537.3042 (4)加标回收实验 取适量胶囊样品(约相当于雷尼替丁300 mg)，加入适量 NDMA 标准溶液，按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。 盐酸雷尼替丁胶囊中 NDMA 检测的添加回收结果(%) 添加水平 目标物 添加水平0.17 ug/g(上机浓度 5.0 ng/mL) 添加水平 1.7 pg/g(上机浓度 50.0ng/mL) 加标量： NDMA储备液1.0 ug/mL， 加50 uL 加标量： NDMA 储备液1.0 pg/mL， 加500 pL NDMA 102.2 105.7 (5) 阳性样品实验 取适量样品(约相当于雷尼替丁300 mg)，按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。空白实验是样品不取，直接加入水振荡提取，然后上机。 盐酸雷尼替丁胶囊中 NDMA检测结果 样品名称 批号 检出浓度(ng/mL) 含量 (ppm) 盐酸雷尼替丁胶囊 6417013 10.1 0.34 盐酸雷尼替丁胶囊 6419003 64.5 2.15 ao5000三 0 1.3 1.6 Time， min 盐酸雷尼替丁胶囊中 NDMA 检测 XIC 图 (6) NDMA 和雷尼替丁分离度验证实验 由于雷尼替丁保留较差，普通色谱柱上容易和 NDMA共洗脱，把含有 NDMA 和雷尼替丁的混合标准溶液直接上机，本方法可将两个化合物完全分离。 北京：400-608-7719上海：021-61263966天津：400-633-6606广州：020-85593520成都：028-86612625沈阳：024-22943513济南：0531-83681355石家庄：0311-66686220重庆：023-62568657青岛：131.5685.9195西安：158.0293.5126哈尔滨：180.4537.3042 NDMA 和雷尼替丁混标TIC图 (RT1.51NDMA， RT2.86 雷尼替丁) NDMA XIC图 雷尼替丁 XIC 图 雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测相关产品信息： 货号 名称 规格 标准品 47747 N-亚硝基二甲胺(NDMA)[62-75-9] 1000 ug/mL 溶于甲醇 1mL 色谱柱及保护柱 82022 Spursil C18极性改性反相色谱柱 100 x3.0 mm， 3.0 um HPLC溶剂•缓冲盐 50102 甲醇HPLC级 4 L 50144 甲酸 HPLC级 50 mL 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色 50 孔 52401A 瓶架/白色 50孔 30039 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.22 pm 100/pk 30040 FitMax 针头式过滤器 Nylon 13 mm， 0.45 um 100/pk 1034 样品瓶(棕色/螺纹) 2mL， 100/pk 1035 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk H80465 HPLC 进样针 25 uL 西安： 北京： 上海： 天津：都： 沈阳： 济南：庆： 青岛：安：        雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺（NDMA）的检测 UPLC-MS/MS法        2019年9月13日，美国FDA发布公告称，多个品牌生产的雷尼替丁中含有低浓度的可能致癌物 N-亚硝基二甲胺(NDMA)，该物质一般存在于水和食物中，在很低浓度时即可造成人体遗传物质的损伤，具有致癌、致突变的特点。NDMA分子量小，亲水性强，对检测方法要求更加严格。        雷尼替丁，强效组胺H2受体拮抗剂，主要用于胃酸过多、烧心等的治疗，也是目前比较主流的治疗溃疡病的药品。在雷尼替丁中检测出NDMA可能会对用药安全性产生较大威胁，因此在药物中准确监测NDMA非常重要。        针对此次“雷尼替丁”事件，迪马科技结合中国食品药品检定研究院发布的《关于开展雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺检验工作的通知》及FDA 10/17/2019公布最新检测方案，建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱—盐酸雷尼替丁中NDMA的检测方法，本方法用于测定雷尼替丁药物产品和原料药中NDMA的含量，可供广大分析工作者参考。        以下为详细解决方案，敬请参考！1、适用范围        本方案适用于盐酸雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺（NDMA）的检测。2、标准品配制(1) N-亚硝基二甲胺（NDMA）储备液1.0 μg/mL：准确称取适量标准品，用甲醇配制成1.0 μg/mL的储备液；(2) 对照品溶液2.0 ng/mL：吸取适量储备液，用水配制成2.0 ng/mL对照品溶液；(3) 灵敏度溶液1.0 ng/mL：吸取适量储备液，用水配制成1.0 ng/mL灵敏度溶液。3、样品制备(1) 盐酸雷尼替丁供试品溶液制备    取供试品约300 mg，精密称量于10 mL容量瓶中，用水定容至10 mL。(2) 盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备    取本品内容物适量（约相当于雷尼替丁300 mg）于15 mL离心管中，准确加入10 mL水，振荡40 min，6000 rpm离心2 min，取上清液过微孔滤后上机分析。(3) 盐酸雷尼替丁片供试品溶液制备    取本品5片，精密称量，研细，准确称取细粉适量（约相当于雷尼替丁300 mg）于15 mL离心管中，加入10 mL水，振荡40 min，6000 rpm离心2 min，取上清液过微孔滤膜后上机分析。4、分析条件UPLC 条件   色谱柱：Spursil C18, 100 x 3.0 mm, 3.0 μm (Cat#：82022)   流  速：0.7 mL/min      进样量：10 μL     柱  温：30 ℃   流动相：A: 0.1%甲酸水    B: 0.1%甲酸甲醇   梯度设置时间/Min.0133.57.5A (%)9595439595B (%)555755质谱条件离子源：APCI源，正离子模式检测方式：多反应监测NC电流：3 μA雾化气压力：50 psi离子源温度：500 ℃气帘气压力：20 psi碰撞气CAD：8定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表药物名称定性离子对(m/z)(母离子/子离子)定量离子对(m/z)(母离子/子离子)碰撞气能量/eV去簇电压/VN-亚硝基二甲胺75.0/43.075.0/58.0225075.0/58.0185、实验结果(1) 重复性实验结果对照品溶液2.0 ng/mL重复进样6次结果如下对照品溶液重现性数据总结数据名称峰面积averagestdevRSD2.0 ng/mL-165906388.3309.64.8%2.0 ng/mL-268602.0 ng/mL-363302.0 ng/mL-462502.0 ng/mL-563502.0 ng/mL-659506针NDMA 2.0 ng/mL的XIC对比图(2) 灵敏度实验系统适用性灵敏度溶液1.0 ng/mL NDMA主峰信噪比＞3。NDMA 1.0 ng/mL XIC图(3) 标准曲线用纯水逐级稀释NDMA储备液，配制成1.0 ng/mL，2.0 ng/mL，5.0 ng/mL，10.0 ng/mL，50.0 ng/mL，100.0 ng/mL，500.0 ng/mL标准溶液。将标准溶液分别进样，以峰面积对浓度做标准曲线，在线性范围内线性良好，相关系数0.9998。NDMA标准曲线图(4) 加标回收实验取适量胶囊样品（约相当于雷尼替丁300 mg），加入适量NDMA标准溶液，按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测的添加回收结果（%）(5) 阳性样品实验取适量样品（约相当于雷尼替丁300 mg），按照盐酸雷尼替丁胶囊供试品溶液制备方法进行实验。空白实验是样品不取，直接加入水振荡提取，然后上机。盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测结果样品名称批号检出浓度（ng/mL）含量（ppm）盐酸雷尼替丁胶囊641701310.10.34盐酸雷尼替丁胶囊641900364.52.15           盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA检测XIC图(6) NDMA和雷尼替丁分离度验证实验由于雷尼替丁保留较差，普通色谱柱上容易和NDMA共洗脱，把含有NDMA和雷尼替丁的混合标准溶液直接上机，本方法可将两个化合物完全分离。NDMA和雷尼替丁混标TIC图（RT1.51  NDMA ，RT2.86  雷尼替丁）NDMA XIC图雷尼替丁 XIC图雷尼替丁中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的检测 相关产品信息：货号名称规格标准品47747N-亚硝基二甲胺(NDMA) [62-75-9]1000 μg/mL 溶于甲醇 1 mL色谱柱及保护柱82022Spursil C18 极性改性反相色谱柱100 x 3.0 mm, 3.0 μmHPLC溶剂·缓冲盐50102甲醇 HPLC级4 L50144甲酸 HPLC级50 mL通用色谱产品52401B瓶架/蓝色50孔52401A瓶架/白色50孔30039FitMax针头式过滤器 Nylon13 mm, 0.22 μm 100/pk30040FitMax针头式过滤器 Nylon13 mm, 0.45 μm 100/pk1034样品瓶（棕色/螺纹）2 mL, 100/pk1035样品瓶盖/含垫（已经组装）100/pkH80465HPLC 进样针25 μL红色货号产品火热促销中