牛骨骼肌中氨苯砜检测方案(液相色谱仪)

使用 Bond Elut QuEChERS 试剂盒和LC/MS/MS测定牛骨骼肌中的氨苯砜 应用简报 食品检测和农业 作者 前言 Yu Yang 本文使用针对兽药的 Agilent Bond Elut QuEChERS 试剂盒， 采用 QuEChERS 方法对牛骨骼肌进行前处理，然后采用 Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离，并采用Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统对样品中亚 ppb 级浓度水平的氨苯砜进行高灵敏度检测。 第二军医大学 上海 材料与方法 样品前处理 针对兽药的 Agilent Bond Elut QuEChERS 萃取盐包(部件号 G7750-10001) 针对兽药的 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散固相萃取， 15mL 萃取管(部件号5982-4980) HPLC 条件 色谱柱： Agilent Poroshell 120 SB-C18， 2.1×100 mm， 2.7 pm(部件号685775-902) 洗脱液：A)0.1%甲酸水溶液；B)乙腈进样量：10pL流速：0.3 mL/min梯度：%B， 在8分钟内线性升至80% B温度：室温样品瓶：安捷伦认证样品瓶(部件号5183-2072)系统：Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪 质谱条件 电离模式： ESI+安捷伦喷射离子流聚焦 气体温度： 325°C 气体流速： 10L/min 雾化器压力： 50 psi 鞘气温度： 400°C 鞘气流速： 12 L/min 毛细管电压： 4500V(ESI+) 喷嘴电压： 0V(ESI+) 系统： Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统 本研究中分析氨苯砜优化的 MRM 离子对、碎裂电压和碰撞能量见表1。 表1.氨苯砜 MRM 离子对及其他分析条件 化合物 母离子 子离子 碎裂电压 碰撞能量 极性 氨苯砜 249.1 125 24 249.1 20 样品前处理 样品粉粹 将牛骨骼肌切成小块，置于洁净的塑料袋中，并在-20℃ 下冷冻过夜。第二天只取需用量的冷冻骨骼肌，并充分混匀。将样品彻底粉碎，制得均质样品。确保所得的最终样品中无明显可见的肉块。 萃取/分离 取5g(±0.1g)均质样品于50mL离心管中。采用 20pL QC 加标溶液制备 QC 样品。向除了对照空白外的其他所有样品中加入内标加标溶液(100pL)。盖上离心管，涡旋振荡1 min。用分液器向每个离心管中加入10 mL水。盖上离离管，涡旋振荡1 min。然后用分液器向每个离心管中加入15mL乙腈。向每个离心管中直接加入针对兽药的 Agilent Bond Elut QuEChERS 萃取盐包。盖紧离心管，手动剧烈振摇20s， 确保溶剂与所有样品充分混合，结晶聚集物完全打碎。将样品离心管以4000 rpm 的转速离心5 min。 分散固相萃取的净化 从离心管中吸取8 mL乙腈上清液， 移至15 mL Agilent Bond ElutQuEChERS 兽药分散 SPE 管。将离心管盖紧，涡旋振荡1 min。然后用标准离心机将离心管以 4000 rpm 的转速离心5 min。取5mL萃取液，转移至试管中，并在低于40℃的温度下于氮气环境中干燥。最终残留物用乙用：水 (1：9)溶解并定容至1mL。然后将残留物通过0.2um滤膜(部件号5190-5106)过滤并用LC/MS/MS分析。 结果与讨论 线性和检测限 将混合工作溶液加标至空白基质中，制得用于创建外标校准曲线的溶液(0.25、0.5、1、2和5 pg/kg)。对牛骨骼肌执行整个前处理步骤(包括预处理和 SPE步骤)得到空白基质。将化合物信噪比 (S/N) 高于3：1时农浓度作为检测限(LOD)。校准曲线和LOD的结果见表2。 表2.牛骨骼肌中氨苯砜的线性和检测限 化合物 回归方程 (ug/kg) 氨苯砜 Y=477.34x-28.94 0.999 0.02 回收率与重现性 测定高低两种浓度氨苯砜的回收率(表3)。通过比较 SPE 提取前加标样品的 MRM 峰面积和 QuEChERS 提取后的加标样品(后加标样品)的 MRM 峰面积计算回收率。图1为向骨骼肌空白样品加标低浓度氨苯砜分析所得的色谱图。图2为空白样品。 表3.牛骨骼肌中氨苯砜的QuEChERS 萃取回收率 回收率(RSD) 回收率 (RSD) 回收率 (RSD) 化合物 n=6， 0.5 pg/kg n=6，1 pg/kg n=6，2 pg/kg 氨苯砜 78.3(7.6) 77.5(4.7) 82.2(5.9) 图1.牛骨骼肌中氨苯砜的色谱图，加标水平1pg/kg 图2.牛骨骼肌空白样品中氨苯砜的色谱图 结论 使用 Agilent Bond Elut QuEChERS分析牛骨骼肌中的氨苯砜获得了良好的回收率和重现性。Bond Elut QuEChERS 联用LC/MS/MS分析，可实现肉类样品中亚 ppb 浓度氨苯砜的高灵敏度定量分析。 更多信息 这些数据代表典型结果。有关我们的产品与服务的详细信息，请访问我们的网站 www.agilent.com/chem/cn www.agilent.com/chem/cn 安捷伦不对本文可能存在的错误或由于提供、展示或使用本文所造成的间接损失承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 C安捷伦科技(中国)有限公司，2014 2014年6月5日，中国印刷 5991-4791CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies 前言本文使用针对兽药的Agilent Bond Elut QuEChERS 试剂盒，采用QuEChERS 方法对牛骨骼肌进行前处理，然后采用Agilent Poroshell 120 液相色谱柱进行高效分离，并采用Agilent 6460 三重四极杆液质联用系统对样品中亚ppb 级浓度水平的氨苯砜进行高灵敏度检测。结论使用Agilent Bond Elut QuEChERS 分析牛骨骼肌中的氨苯砜获得了良好的回收率和重现性。Bond Elut QuEChERS 联用 LC/MS/MS 分析，可实现肉类样品中亚ppb 浓度氨苯砜的高灵敏度定量分析。