卡拉洛尔分析标准品

各有关单位、各位专家： 　　《食品添加剂 卡拉胶》（ZHENGHE-2014-061）等14项标准被列入2014年食品安全国家标准整合项目（项目名称及编号见附表1），中国食品发酵工业研究院和中国食品添加剂和配料协会作为此批项目承担单位，负责组织该批标准的修订整合工作。 　　按照食品安全国家标准的制标程序，该标准起草工作组在研究了相关标准技术资料、行业调研、样品检测、数据分析等工作的基础上，提出了标准征求意见稿。为使标准更加科学、合理、适用，现将标准征求意见稿发送给各相关单位及有关专家，广发听取意见。请贵单位在认真研究的基础上，提出修改意见及建议并填写“标准征求意见反馈表”（见附表2），并请于2015年5月4日前将对标准的意见及建议以电子邮件或传真发至中国食品发酵工业研究院（全国食品发酵标准化中心），标准起草工作组将根据所收集的合理建议对标准进行修改。 　　联系人：刘捷（13811300593）、李惠宜（13661091883） 　　电话：010-53218288转6652，010-53218330 　　传真：010-53218325 　　电子邮箱：crucifix228@aliyun.com; foodstan@sohu.com 　　中国食品发酵工业研究院 中国食品添加剂和配料协会 　　2015年4月15日

[font=宋体]卡拉洛尔的危害及检测目的[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]卡拉洛尔又名咔唑心安，化学名[/font]4- (3-[font=宋体]异丙胺基[/font][font=Times New Roman]-2-[/font][font=宋体]羟丙氧基[/font][font=Times New Roman]) [/font][font=宋体]咔唑，属β肾上腺受体阻断剂，在兽医临床中常用于消除动物紧张，特别是在运输过程中防止因应激导致的动物死亡。β肾上腺受体阻断剂目前已成为临床上常见的七类兽药残留之一，其代表性药物卡拉洛尔常在动物屠宰前数小时内注射使用，因此相对其他兽药可能对消费者造成的健康风险更高。因此我国农业农村部和国家市场监督管理总局[/font][font=Times New Roman]2019[/font][font=宋体]年发布的[/font][font=Times New Roman]GB 31650-2019[/font][font=宋体]《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》中明确规定了卡拉洛尔在猪靶组织中的残留限量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]本文阐述了如何将卡拉洛尔从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]可以检测的形式。以提取、净化为重点，依据行标[/font]SN/T 4144-2015[font=宋体]，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]检测项目：卡拉洛尔[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]应用范围：猪肉、鱼肉、虾肉、肝脏、肾脏、脂肪、奶、鸡蛋和蜂蜜[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]高效液相色谱[/font]-[font=宋体]质谱[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]质谱法[/font][/font][font=宋体][font=宋体]方法原理：试样中的卡拉洛尔用甲醇（脂肪用乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]正己烷溶解提取）提取，提取液经[/font][font=Times New Roman]MCX[/font][font=宋体]柱净化（脂肪用[/font][font=Times New Roman]GPC[/font][font=宋体]净化）后，供液相色谱[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]质谱[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]质谱仪测定，外标法峰面积定量。[/font][/font][font=宋体]前处理仪器：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凝胶净化色谱仪；电子天平（感量[/font]0.01 g [font=宋体]和[/font][font=Times New Roman]0.1 mg[/font][font=宋体]）；组织捣碎机；涡旋混匀器；氮吹仪；均质机（[/font][font=Times New Roman]10000 r/min[/font][font=宋体]）；离心机（[/font][font=Times New Roman]6000 r/min[/font][font=宋体]）；具塞塑料离心管（[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检测仪器：[/font][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS+ESI[font=宋体]源[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]样品的制备与保存[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]1.[font=宋体]肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、脂肪和水产品（鱼肉、虾肉）：取代表性样品约[/font][font=Times New Roman]500 g[/font][font=宋体]，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识，于零下[/font][font=Times New Roman]18 [/font][font=宋体]℃下保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]2.[font=宋体]奶、蜂蜜、鸡蛋：取代表性样品约[/font][font=Times New Roman]500 g[/font][font=宋体]，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识，于[/font][font=Times New Roman]4 [/font][font=宋体]℃下保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]前处理方法[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]1.[font=宋体]提取[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、鱼肉、虾肉[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]称取[/font]5 g[font=宋体]试样（精确至[/font][font=Times New Roman]0.01 g[/font][font=宋体]）于[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]具塞离心管中，加入[/font][font=Times New Roman]15 mL[/font][font=宋体]甲醇，涡旋提取[/font][font=Times New Roman]2 min[/font][font=宋体]，用均质器（[/font][font=Times New Roman]10000 r/min[/font][font=宋体]）均质[/font][font=Times New Roman]2 min[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]5500 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]，将有机相转移至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]容量瓶中，残渣再用[/font][font=Times New Roman]15 mL[/font][font=宋体]甲醇均质提取一次。离心合并有机相，用水定容至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]，待净化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]奶、蜂蜜、鸡蛋[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]称取[/font]5 g[font=宋体]试样（精确至[/font][font=Times New Roman]0.01 g[/font][font=宋体]）于[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]具塞离心管中，加入[/font][font=Times New Roman]15 mL[/font][font=宋体]甲醇，涡旋提取[/font][font=Times New Roman]2 min[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman]5500 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]，将有机相转移至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]容量瓶中，残渣再用[/font][font=Times New Roman]15 mL[/font][font=宋体]甲醇涡旋提取一次。离心合并有机相，用水定容至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]，待净化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]脂肪[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]称取[/font]2 g[font=宋体]试样（精确至[/font][font=Times New Roman]0.01 g[/font][font=宋体]）于[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]具塞离心管中，加入[/font][font=Times New Roman]20 mL[/font][font=宋体]乙酸乙酯[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）溶解并混匀，[/font][font=Times New Roman]5500 r/min[/font][font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]，将有机相转移至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]容量瓶中，残渣再用[/font][font=Times New Roman]20 mL[/font][font=宋体]乙酸乙酯[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）溶解提取一次。离心合并有机相，用乙酸乙酯[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）定容至[/font][font=Times New Roman]50 mL[/font][font=宋体]，待净化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]2.[font=宋体]净化[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]肌肉（猪肉）、内脏（肝脏、肾脏）、鱼肉、虾肉、奶、蜂蜜、鸡蛋[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]MCX[font=宋体]柱（[/font][font=Times New Roman]60 mg/3 mL[/font][font=宋体]）依次用甲醇[/font][font=Times New Roman]3 mL[/font][font=宋体]和水[/font][font=Times New Roman]3 mL[/font][font=宋体]活化，加入[/font][font=Times New Roman]5.0 mL[/font][font=宋体]待净化液，用[/font][font=Times New Roman]3 mL[/font][font=宋体]水淋洗，用抽空[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]。用[/font][font=Times New Roman]5 mL 5 %[/font][font=宋体]三乙胺[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]甲醇洗脱，收集洗脱液，于[/font][font=Times New Roman]40 [/font][font=宋体]℃氮气浓缩吹干，残渣用[/font][font=Times New Roman]50 %[/font][font=宋体]乙腈水溶液[/font][font=Times New Roman]1.0 mL[/font][font=宋体]溶解后，加[/font][font=Times New Roman]2 mL[/font][font=宋体]乙腈饱和正己烷脱脂，下层清液过[/font][font=Times New Roman]0.45 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]m[/font][font=宋体]滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]脂肪[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶渗透色谱条件[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凝胶色谱净化系统：[/font]Accuprep[font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]J2[/font][font=宋体]）；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]凝胶净化柱：[/font]Bio-Beads S-X3[font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]38 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]m[/font][font=宋体]～[/font][font=Times New Roman]75 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]m[/font][font=宋体]），[/font][font=Times New Roman]400 mm[/font][font=宋体]×[/font][font=Times New Roman]25 mm[/font][font=宋体]（内径）；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流动相：乙酸乙酯[/font]-[font=宋体]环己烷（[/font][font=Times New Roman]1+1[/font][font=宋体]）；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流速：[/font]5 mL/min[font=宋体]；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集时间：[/font]7 min~17 min[font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]净化过程：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]取[/font]10 mL[font=宋体]待净化液于[/font][font=Times New Roman]GPC[/font][font=宋体]样品管中，用[/font][font=Times New Roman]GPC[/font][font=宋体]柱净化，收集洗脱液，于[/font][font=Times New Roman]40 [/font][font=宋体]℃旋转蒸发至干，残渣用[/font][font=Times New Roman]50 %[/font][font=宋体]乙腈水溶液[/font][font=Times New Roman]1.0 mL[/font][font=宋体]溶解后，加[/font][font=Times New Roman]2 mL[/font][font=宋体]乙腈饱和正己烷脱脂，下层清液过[/font][font=Times New Roman]0.45 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]m[/font][font=宋体]滤膜，供[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]国标解读及注意事项[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]1.[font=宋体]卡拉洛尔标准物质用乙腈配成[/font][font=Times New Roman]100 [/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]g/mL[/font][font=宋体]的标准储备液，在[/font][font=Times New Roman]0 [/font][font=宋体]℃～[/font][font=Times New Roman]4 [/font][font=宋体]℃ 避光保存。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]2.[font=宋体]本方法使用甲醇提取两次目标化合物，阳离子交换柱富集净化，相当于[/font][font=Times New Roman]0.5 g[/font][font=宋体]试料进行上机检测（其中脂肪样品用乙酸乙酯[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]正己烷提取两次，再用[/font][font=Times New Roman]GPC[/font][font=宋体]柱净化，相当于[/font][font=Times New Roman]0.4 g[/font][font=宋体]试料进行上机检测）。[/font][/font][font=宋体]3.MCX[font=宋体]固相萃取过程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保证离子交换的效果。[/font][/font][font=宋体]洗脱过程中洗脱溶剂少量多次加入，可以增加洗脱率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]4.[font=宋体]在[/font][font=Times New Roman]GPC[/font][font=宋体]净化过程中配合紫外检测器使用，可以准确监测目标化合物及杂质的流出情况。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]参考文献[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]SN/T 4144-2015 [font=宋体]出口动物源性食品中卡拉洛尔残留量的测定 液相色谱[/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]质谱[/font][font=Times New Roman]/[/font][font=宋体]质谱法，由南京滴纯生物科技有限公司发表，欢迎垂询！[/font][/font]