注射用磷霉素钠中无菌检查检测方案(集菌仪)

黑龙江医药 Heilongjiang Medicine Journal Vol.20 No.4 2007·310 · 注射用磷霉素钠的无菌检查法方法验证试验 李晓冰 哈药集团三精制药股份有限公司 摘要 目的：确认所采用的方法适合于该药品的无菌检查。方法：薄膜过滤法。结果：经试验各实验菌能够正常生长。结论：经过验证，该方法能够有效地完成注射用磷霉素钠的无菌检查，适合该药品的无菌检查。 关键词 注射用磷霉素钠；无菌检查法；方法验证 中图分类号：TQ460.6+3 文献标识码：A 文章编号：1006-2882(2007)04-310-02 Certification Tests of Sodium for Infection Asepsis Check Mean Li Xiaobing . Sanjing Pharmaceutical Shareholding Co.，Ltd.，Harbin Pharm. Group Abstract Objective： Confirm that this mean adopted is fit for fosfomycin sodium for injection asepsis checkMethods：Film filtration mean. Results： After tests， each experimental fungus can normally grow up.Conclusion： Afterconfirmation， the certification tests of fosomycin sodium for injection asepsis check can be completed with film filtrationmean，so the mean is fit for fosfomycin asepsis check. Key words Fosfomycin sodium for infection；Asepsis check；Means certification ( [5] 王一，周继红，许立军，马志中，刘杰间接视神经损伤动物模型的研制[J〕.中华创伤杂志，1999，15(4)：287-289 ) ( 徐丽，夏德昭，李富君.复明中药对牵拉性视神经损伤后视神经及血中SOD，MDA水平的影响[J〕.中国实用眼科杂志，1998，16 (12)：721-723 ) ( [7] Mineko M u rakarru， Chizuka ld e ， et al. Regeneration in the ratopticnerve afte r cold injury(J]. Neurosurg， 1989，71：254- 2 65 ) ( [8 丁汉明，黄才国，姜华等.视神经损伤大鼠模型的建立[J〕.第二 军医大学学报，2001，22(4)：394-395 ) ( [9] Jonas J B， Hayreh SS. Optic disk morphology in e x perimental centralretinal artery o cclusion inrhesus monkeys{J] . Amj ophthalmol，1999，127：523-530 ) ( [10〕 McFadzean RM，Graham DI，Lee WR，et al.Ocular b l ood flow inunilateralc carotid stenosis and hypotension{J]. Inuest Opthaomol Vis Sci，1989，30(3)；487-490 ) ( [11〕 K im SH，Kim SD ， Kim SY， et al Mye l o optic neuropathy ca u sed by aconitin e in rabbit modelfJ].JpnJ Ophthalmol，1991，35：417-427 ) ( [12] 王平宝，黄佩刚，蒋幼芹等.兔急性高眼压模型视网膜N-甲基-D-天门冬氨酸受体RlmRNA的表达[J〕.中华眼底病杂志， 2001，17(1)：50 ) ( [13] 刘森，陈庆魁，王蔼青.高眼压状态对兔角膜内皮细胞形态及 功能的影响[J〕.中华眼科杂志，1989，25(2)；104 ) ( [14] Krupin T.Increased i n traocular p ressure a nd h ypothermia f o llowing i njection of calcium i nto t he r abbit t hird v entricle[J]. E xp Eye Res，1978，27；129 ) ( [15] 刘艳艳，周令娴.针刺对氯丙嗪实验性高眼压的影响[J〕.中国 中医眼科杂志，1994，4(1)：24-25 ) ( 〔 1 6〕 Liu JHK， Bartels SP， Neufel d AH， Effecti v e of L- an d D-timolol on cyclic AMP s y nthesis and intraocular p ressure in water- I loaded， albino and pigmented rabbits{ J Inues t Ophthalmo l Vis Sci，1983，24；1276- 1 282 ) ( [17] 钱韶红，褚仁远，孙兴怀，郭文毅，孟樊荣.房角金环植入术治疗家兔眼压模型，2000，(4) ) ( 〔18] 王秀青，贺翔鸽，冯刚，白继.兔眼慢性高眼压模型视网膜损害 相关基因的克隆及筛选CJ〕.中华眼科杂志2005，41(5)：454- 458 ) ( 〔19〕 徐岩，陈祖基，宋洁贞.复方卡波姆诱发的兔高眼压模型与其 他兔高眼压模型的比较研究[J〕.中华眼科杂志，2002，(3). ) ( [20] Benozzi J， et al. Inuest Ophthalmo l Vis Sci，2002，43；2196 ) ( [21] 蔡丰英，孙文驷.透明质酸酶对类固醇性高眼压作用的探讨 [J〕.眼科新进展，1991，11(3)B10-13 ) ( [22] 原慧萍，褚利群，王莉娜，王雅.兔实验性高眼压视网膜神经节细胞的凋亡J〕.眼科研究，2004-02 ) ( [23] Chauhan BC， et al.Inues t Ophthalmo l Vi s Sci，2002，43：2969 ) ( [24] Lam TT， et al. Inuest Ophthalmol Vis S ci，2003，44；638. ) ( [25 孙刚，王诤华等.慢性高眼压大鼠外侧膝状体神经元的损伤 [J〕.眼科新进展，2005，25(6)：522-524 ) ( [26] 吕红彬，李燕，袁援生，罗清礼.制作慢性高眼压动物模型的一种新方法-水下电凝巩膜表面静脉法J〕.华西医学，2005，20 (4)：699-700 ) ( 收稿日期：200704一02 ) 当建立药品的无菌检查法时，应进行检查方法的验证。若药品的组分或原检验条件发生改变时，应重新进行验证。本文对注射用磷霉素钠的无菌检查方法进行验证试验，确认无菌检查所采用的方法适合于该药品的无菌检查。 1 仪器与试药 1.1 样品：注射用磷霉素钠：规格：1.0g，批号：0508032；生产单位：哈药集团三精制药股份有限公司。 1.2 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、玫瑰红钠培养基等(均由中国药品生物制品检定所提供)。 1.3 验证试验用菌种： 金黄色葡萄球菌；铜绿假单胞菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉 1.4 仪器：HTY-2000A集菌仪，全封闭无菌试验过滤培养器等 2方法 中国药典2005年版无菌检查的验证试验。 3 试验过程 3.1 菌液制备： 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30-35℃培养18-24小时； 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23-28℃培养24-48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu(菌落形成单位)的菌悬液； 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23-28℃培养5-7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管)至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。 3.2 菌液计数： 分别取上述4种细菌菌液1ml加入培养皿，每中菌液做平行2皿。注入营养琼脂约15ml，30-35℃培养(生包梭菌置厌氧培养箱中培养)。分别取上述2种真菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。注入玫瑰红钠培养基约15ml。23-28℃培养。计数结果见表1 3.3 供试液制备： 取供试品20支，注入0.9%无菌氯化钠溶液适量，使溶解。备用。 3.4 薄膜过滤： 将规定量的的试品按薄膜过滤法过滤，用500ml 0.1%蛋白胨溶液冲洗，每次100ml，在最后一次的冲洗液中逐一加入各试验菌10-100CFU。按规定将100ml培养基直接加至滤筒 内。每天观察并记录结果。结果见表2 3.5 阳性对照：另取六个滤筒，不过滤供试品，其它操作同上，作为阳性对照，将含培养基的容器按规定温度培养3~5天。各试验菌及相应的培养基逐一进行验证。 3.6 阴性对照：另取两个滤简内各过滤稀释剂和冲洗液，然后分别加入硫乙醇酸盐培养基和真菌培养基各100ml，不加对照菌液，分别于30-35℃及23-28℃培养. 4 结果 4.1 表1 活菌计数 菌种 传代次数-一 各稀释级菌落数(CFU) 10~4 10 10 10 金黄色葡萄球菌 第3代 70 铜绿假单菌 第3代 42 枯草芽孢杆菌 第3代 42 生孢梭菌 第3代 55 白色念珠菌 第3代 53 黑曲霉 第3代 46 4.2 表2试验结果 培养时间(天) 培养基 菌种 1 2 3 4 5 样对样对样对样对样对 金黄色葡萄球菌++++++++++ 硫乙醇酸盐 铜绿假单胞菌 + + + + + 流体培养基 枯草芽孢杆菌 + + 十 生孢梭菌 + ++++ + + + + + 阴性对照 一 改良马丁. 白色念珠菌 + + ++++++ 培养基 黑曲霉 + + + + + + ++++ 阴性对照 - - 一 5 结论 根据试验结果，确定注射用磷霉素钠无菌检查法：检验量约9g(取供试品20支，每支样品接入每管培养基的最少样品量为0.15g，三筒过滤器所用供试品约为9g)，采用薄膜过滤法过滤，冲洗液为0.1%蛋白胨溶液，冲洗量500ml。经过验证，各试验菌均生长良好，则供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，可以照此检查法和检查条件进行注射用磷霉素钠的无菌检查。 ( 参考文献 ) ( 中国药典，2005年版CS〕 ) ( 中国药品检验标准操作规范[S〕.2005年版 ) ( 马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册〔M〕.北京：科学技术 出版社.2000.9 ) ( 收稿日期：2007-01-24 )