坚果类食品中八种苯甲酰脲类农药检测方案(GPC)

PCLYTECH普立泰科 通过 GPC-UPLC-LC-MS/MS 测定高脂食品样品里的八种苯甲酰脲类农药 摘要： 如何从含较高的脂肪样品中的提取疏水性农药，并保证其回收率和低水平的检出限，具有一定的挑战性。本文介绍了一种简单、快速的测定坚果类样品中的八种苯甲酰脲类农药的方法，通过凝胶渗透色谱 (GPC)净化，加上高效液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS)分析检测。这种方法没有观察到明显的基质效应。八种物质的校准曲线在 10~500ugkg范围内线性良好，相关系数超过 0.9990。同时，对于实际样品：核桃、巴旦木和甜杏仁，采用 GPC 净化，回收率均在82.8和113.2%，相对标准偏差小于11%。定量限为1.8~9.7ugkg-1。实践证明，该方法可以用于脂肪含量高的食品样品中八种苯甲酰脲类农药同时测定。 EC 泰科 关键词： 苯甲酰脲类农药、高脂肪食品样品、凝胶渗透色谱-高效液相色谱-串联质谱 试剂： 色谱纯级的：：甲醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、环己烷、甲酸、乙酸、正己烷； 分析纯级的：无水硫酸镁和氯化钠 SPE 柱： PSA 和C18 ( 地址：北京市海淀区温泉镇高里掌路中关村翠湖科技园15号楼1单元1层邮编：100095 电话： 8610-82735800 传真：86 1 0-82735809 网址： www.pltk.com.cn ) 八种苯甲酰脲类农药混标(氟铃脲，氟啶脲，除虫脲，氟虫脲，氟苯脲，，杀杀铃脲，灭幼脲，敌草胺， 100ug/ml) 标液配置： 母液：取1ml混标，用甲醇稀释至100ml. 标准曲线：：用乙腈配置，浓度梯度为：l：10.0， 20.0，50.0，)，1100.0，200.0，和 500.0ug/L 实验方法 1、样品前处理： 1.1萃取IYTEC 称取2.00g样品置于 50ml 带盖离心管中，加入10ml丙酮-正己烷(1：9)，在涡旋混合器上充分混合，在振荡器中振荡 20min。振荡完成后放置于离心机内，以8000rpm 离心5min。上清液过 0.22um滤膜，取2.5ml过滤后的上清液与试管中，用氮吹浓缩仪浓缩至干。 1.2 GPC 净化 GPC净化设备采用 J2 Scientific AccuPrep MPS GPC Cleanup System，GPC 填料为 Bio-BeadsS-X3 Express column， 流动相是乙酸乙酯：环己烷(1：1，v/v)，流速为 5ml/min。样品用 10ml 乙酸乙酯：环己烷复溶，进样量为5ml，收集时间为 9.0~25.0min， 液集液用旋转蒸发仪蒸干，加入500ul乙腈，用涡旋混合器充分复溶，之后进入 LC-MS/MS 进行检测。 2、检测方法 液相条件： 采用 ekspertTM ultraLC 110 series 的超高效液相色谱系统 色谱柱 Waters ACOUITY HSS T3(1.8um 2.1×100mm) 流动相 水(A)和乙腈(含有0.02%甲酸(B) 柱温 35℃ 进样量 5uL 流速 0.25ml/min 流动相梯度条件 时间min 流动相比例 0-1.0 min 90%A 1.0-7.0 min 90-5%A 地址：北京市海淀区温泉镇高里掌路中关村翠湖科技园15号楼1单元1层邮编：100095电话：8610-82735800 传真：8610-82735809 网址： www.pltk.com.cn 7.0-12.0 min 5%A 12.0-12.1min 5-90%A 12.1-15.0 min 90%A 质谱条件： OTRAP 6500三重四极杆-线性离子阱复合质谱系统 离子源 ESI 离子喷雾电压 5.5kV 离子源温度 550℃ 气帘压力 25psi； 辅助气压力 55psi 雾化器压力 55psi 目标物 保留时间 Q1mass(m/z) Q3 mass(m/z) DP(V) CE(V) 氟铃脲(Hexaflumuron) 8.78 461.0 158.0，141.0 80，80 25，59 除虫脲(Diflubenzuron) 8.03 311.0 158.0，141.0 40，40 20，39 氟虫脲 (Flufenoxuron) 6.77 489.0 158.0，141.0 100，100 25，62 氟啶脉 (Chlorfluazuron) 10.2 540.0 383.0，158.0 90，90 35.24 敌草胺 (Novaluron) 8.98 493.0 158.0，141.0 100，100 24，33 杀铃脲 (Triflumuron) 8.40 359.0 156.0，139.0 70，60 22，47 灭幼脲(Chlorbenzuron ) 3.47 307.0 126.0.154.0 -75.-80 43.17 氟苯脲 (Teflubenzuron) 4.00 379.0 339.0，359.0 -45.-75 15，10 表1采集方法参数 实验结果及讨论 泰 1、回收率比对(相比于SPE方法) 目标物 回收率/% SPE d-SPE GPC 氟铃脲 (Hexaflumuron) 38.0 59.4 90.9 除虫脲(Diflubenzuron) 55.3 47.1 96.3 氟虫脲(Flufenoxuron) 34.6 43.2 86.7 氟啶脲 (Chlorfluazuron) 42.1 57.9 92.5 舌草胺 (Novaluron) 55.9 43.3 93.5 杀铃脲(Triflumuron) 45.5 49.4 112.1 灭幼脲 (Chlorbenzuron) 69.9 69.3 93.1 氟苯脲(Teflubenzuron) 32.1 52.8 90.0 表2不同净化方式的回收率(n=3) 通过都不同净化方式的对比可以看出，采用 SPE 方法的回收率均小于70%，但是使用GPC净化，回收率均在86%以上，所以针对含较高脂肪样品的净化方式，优选 GPC净化。 2、(GPC 净化下，不同浓度的回收率 ( 地址：北京市海淀区温泉镇高里掌路中关村翠湖科技园15号楼1单元1层邮编：100095电话： ) 目标物 坚果，回收率 巴旦木，回收率 甜杏仁，回收率 10ugkg 50ugkg 100ugkg 10pgkg 50pgkg 100pgkg 10pgkg 50pgkg 100pgkg 氟铃脲 Hexaflumuron) 93.1(9.1) 90.9(7.6) 97.3(5.0) 113.2(5.0) 97.5(4.3) 89.2(5.8) 108.5(5.9) 91.5(6.8) 99.3(6.2) 除虫脲(Diflubenzuron) 86.6(10.8) 96.3(7.3) 103.7(4.4) 91.1 (3.8) 96.6(7.2) 99.8(4.5) 91.8(5.3) 94.5(7.5) 93.2(5.3) 氟虫脲(Flufenoxuron) 92.6(7.5) 86.7(3.5) 93.2(6.9) 95.7(4.2) 94.2(6.9) 98.1 (7.9) 101.6(8.0) 91.2(5.9) 104.1(2.9) 氟啶脲 (Chlorfluazuron) 87.0 (2.9) 92.5 (1.4) 83.7(2.1) 85.5 (5.7) 86.8 (5.6) 95.3 (3.8) 85.2(7.1) 101.3(4.3) 92.5 (7.2) 敌草胺(Novaluron ) 95.7(9.0) 93.5(5.6) 96.8(5.4) 93.7(8.6) 97.2(3.7) 90.9(8.1) 92.6(9.3) 82.8(6.3) 98.3(6.3) 杀铃脲 (Triflumuron) 91.4(6.7) 112.1(4.8) 100.3(2.6) 98.3(6.8) 98.4(7.1) 104.4(3.3) 97.1 (5.2) 101.2(7.4) 94.7(6.5) 灭幼脲 ( Chlorbenzuron) 89.8 (4.3) 93.1 (3.7) 90.8 (2.5) 109.2 (4.8) 84.3 (5.1) 88.7 (6.1) 89.4 (3.4) 98.7(3.0) 97.2 (7.0) 氟苯脲Teflubenzuron ) 92.4(9.5) 90.0(5.6) 93.6(6.8) 93.7(7.3) 88.9 92.9 (4.6) 85.2(5.1) 90.2(4.3) 93.3(3.1) (3.2) 表2-不同样品、不同加标浓度下的加标回收率及相对标准偏差 3、检测方法性能判定 目标物 线性相关系数(r) 线性范围(ugkg LOD(ugkg LOQ (gkg) 氟铃脲(Hexaflumuron) 0.9995 10.0~500.0 2.8 8.4 除虫脲 (Diflubenzuron) 0.9996 10.0~500.0 1.0 3.1 氟虫脲 (Flufenoxuron ) 0.9996 10.0~500.0 2.2 6.7 氟啶脲(Chlorfluazuron) 0.9993 10.0~500.0 2.0 6.2 敌草胺(Novaluron) 0.9990 10.0~500.0 2.1 6.5 杀铃脲( Triflumuron) 0.9998 10.0~500.0 3.0 9.7 灭幼脲 (Chlorbenzuron ) 0.9993 10.0~500.0 0.6 1.8 氟苯脲 ( Teflubenzuron) 0.9996 10.0~500.0 2.4 6.9 表4八种苯甲酰脲类农药的线性范围，检出限及定量限 该检测方法，在浓度区间为 10.0~500.0ug kg-1表现出良好的线性关系，定量限范围在地址：北京市海淀区温泉镇高里掌路中关村翠湖科技园15号楼1单元1层邮编：100095电话：8610-82735800 传真：8610-82735809 网址： www.pltk.com.cn 1.8~9.7pgkg。 注：本文翻译自 Food Anal. Methods 期刊中的《Determination of Eight BenzoylureaInsecticides in High-FatFoodstuff Samples by Gel Permeation Chromatography FollowedbyHigh-Performance Liquid Chromatography-TandemMass Spectrometry》 由于编者能力有限，如果有错误敬请大家批评指正。 美国 J2 Scientific 公司是一家有40多年有机分析前处理行业经验的公司，公司坐落于 GPC 净化色谱的发源地美国密苏里州哥伦比亚。20世纪60年代， David Stalling 博士发明了凝胶渗透色谱净化技术，并将首次凝胶渗透色谱净化使用在农残样品中。随后从而Dr.Stalling 和其他人共同成立了 ABC 实验室，专注于 GPC 及样品前处理仪器的生产和研 发。在1995年之初， ABC 实验室的 Jeff Wiseman 和 Dr. Stalling 将公司改名J2Scientific 公司，力争在前处理净化领域做到最专业。从早期的 AccuPrep(模块式 GPC 系统) 到 AccuPrepMPS(整体式 GPC系统)，再到 Accu VapTM (全自动凝胶净化在线浓缩系统)和 PrepLinc 样品前处理平台(GPC、SPE、定量浓缩系统)，美国 J2 Scientific公司一直引领着样品前处理仪器的发展，美国 J2 Scientific 公司和美国 EPA 合作开发了 EPA 3640方法(参考EPA 3640方法)。自从2000年初，北京普立泰科仪器有限公司将美国J2 Scientific 公司前处理引进中国，众多国家级重点实验室均采用 J2 Scientific 公司前处理仪器，并推出了中国国家标准和行业标准50多项。 ( 地址：北京市海淀区温泉镇高里掌路中关村翠湖科技园15号楼1单元1层邮编：100095电话： ) 传真： 网址： www.pltk.com.cn 如何从含较高的脂肪样品中的提取疏水性农药，并保证其回收率和低水平的检出限，具有一定的挑战性。本文介绍了一种简单、快速的测定坚果类样品中的八种苯甲酰脲类农药的方法，通过凝胶渗透色谱（GPC）净化，加上高效液相色谱-串联质谱（LC–MS/MS）分析检测。这种方法没有观察到明显的基质效应。八种物质的校准曲线在10~500μg kg−1范围内线性良好，相关系数超过0.9990。同时，对于实际样品：核桃、巴旦木和甜杏仁，采用GPC净化，回收率均在82.8和113.2%，相对标准偏差小于11%。定量限为1.8～9.7μg kg−1。实践证明，该方法可以用于脂肪含量高的食品样品中八种苯甲酰脲类农药同时测定。