利用 SEC 和水相流动相进行 mAb 和 ADC 聚集体的定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å, 2.7 μm 色谱柱

摘要

体积排阻色谱(SEC) 是监测生物治疗蛋白质样品（包括单克隆抗体及其衍生物）中单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的重要工具。由于聚集体被视为一项关键质量属性，因此需要对其进行定量分析。

本应用简报介绍了一种利用Agilent AdvanceBio SEC 300Å, 7.8 × 300 mm, 2.7 μm 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱对生物治疗mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 中的聚集体进行定量分析的简单而灵敏的方法。该方法采用相同的水相流动相，无需添加有机改性剂即可对mAb 和疏水性更强的ADC 进行分析。优化方法还可监测经 pH/温度处理形成的聚集体和降解物。该方法操作简单且具有良好重现性，与仪器的抗腐蚀性相结合后极其适用于生物制药行业中mAb 和ADC 的常规QA/QC 分析。

前言

治疗性蛋白质容易在开发过程的表达、再折叠、下游处理、制剂、灭菌和储存等各个阶段发生聚集和降解。此外，为形成ADC 而连接的疏水性有效载荷也会提高由疏水性造成的聚集现象的发生。尽管聚集体/降解物的含量较低，但它们仍可对生物药物产生严重影响，如导致活性丧失、降低溶解度以及增加免疫原性。体积排阻色谱是用于表征蛋白质聚集体的标准方法。本文展示了使用 Agilent AdvanceBio SEC 300Å，7.8 × 300 mm，2.7 μm 色谱柱分离、定量分析和监测治疗性mAb 和ADC 完整性所具备的优势。AdvanceBio SEC 色谱柱是SEC 分析领域的一项突破性技术。这款由安捷伦设计并生产的色谱柱采用创新型硅胶填料和特有的键合技术，可使各种样品均获得出色的分离度和体积分离，且无需向流动相中添加有机改性剂。单克隆抗体和疏水性更强的ADC 可采用相同的水相流动相进行分析。

结论

我们展示了几款用于监测治疗性mAb 曲妥单抗/ADC T-DM1 纯度和稳定性以及方法开发的强大工具。我们首先采用Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱开发出了一种简单、高分离度的mAb 分离方法。特别值得一提的是，AdvanceBio SEC 色谱柱可为疏水性ADC 提供出色的分离度，而无需在流动相中添加有机改性剂。此方法可获得优异的峰面积与保留时间精密度，表明方法的可靠性较高。浓度范围为15 - 2000 μg/mL 的8 个mAb 和ADC 标准浓度的线性曲线显示出极佳的线性相关系数值，表明该方法可以实现准确定量。mAb 和ADC 的LOD 和LOQ 分别为15 μg/mL 和 25 μg/mL，表明该方法的灵敏度很高。此外，mAb 和ADC 的应激研究还表明，AdvanceBio SEC 色谱柱可根据峰面积百分比对聚集体和降解物进行分离、检测和定量分析。该方法操作简单且具有良好重现性，与Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱的生物惰性和抗腐蚀性结合后非常适用于生物制药行业中单克隆抗体/ADC 的QA/QC 分析。