高效液相色谱法同时检测番茄中的五种交链孢毒素

同时检测番茄中五种交链孢毒素解决方案

关键字：

番茄；交链孢毒素；固相净化柱；高效液相色谱法

前言：

提起真菌毒素，大家首先想到的是强致癌物黄曲霉毒素。但毒素种类繁多，菌属不同产生的毒素不同。有研究表明，交链孢霉分布广泛，其有毒代谢产物——交链孢毒素污染农作物的情况相当普遍。虽然食用含痕量毒素的食品不会引起急性中毒，但是长期食用可能引起慢性中毒，严重威胁人和动物健康安全，已经引起了国际范围的高度关注。

欧盟已经就食品与饲料中交链孢毒素对人畜的健康风险发布了科学意见，我国《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》2020版也专门对谷物及其制品（小麦粉、挂面、饼干、面包、馒头等）、番茄及其制品（番茄酱、番茄沙司等）、樱桃、车厘子和植物油中交链孢霉毒素测定的标准操作程序进行了指导性公示。本解决方案参考此方法进行前处理，采用固相净化柱净化，高效液相色谱检测，实现了果蔬（番茄）中五种交链孢毒素同时检测。

1. 概述

样品经提取液振荡提取，高速离心，上清液过Pribolab^®固相净化柱净化，净化液氮气吹干后复溶，上高效液相色谱测定。

2. 实验过程

2.1. 试剂和材料

2.1.1. 除特别注明外，本实验所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

2.1.2. 乙腈（CH3CN）：色谱纯。

2.1.3. 柠檬酸（C3H8O7）

2.1.4. 氯化钠（NaCl）

2.1.5. 标准品（Pribolab）

l 10 µg/mL交链孢毒素(Altertoxin)/乙腈；

l 100 µg/mL交链孢酚(Alternariol)/甲醇；

l 100 µg/mL交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl Ether)/甲醇；

l 100 µg/mL腾毒素(Tentoxin)/甲醇；

l 100 µg/mL交链孢霉烯(Altenuene)/甲醇。

2.1.6. 固相净化柱：Pribolab^® MFC331固相净化柱-3 mL (适用于交链孢酚类毒素）

2.2. 仪器和设备

2.2.1. 岛津高效液相色谱仪-DAD检测器；

2.2.2. 梅特勒电子天平：感量0.001 g和0.0001 g；

2.2.3. Pribolab^®高速均质器/MP 2000全自动多样品均质器；

2.2.4. Pribolab^®多管漩涡混匀器；

2.2.5. Pribolab^®真菌毒素浓缩仪；

2.2.6. 湖南湘仪离心机；

2.3. 样品制备

果蔬（番茄）：用高速均质机/全自动多样品均质器均质样品，取200g作为试样，置于-20℃以下避光保存。

2.4. 样品提取和净化

2.4.1. 番茄（匀浆）样品前处理

称取5 g番茄（匀浆）试样（精确至0.001 g）于50 mL刻度离心管中。样品加入分别加入20 mL乙腈，2.5 mL纯水，2.5 mL 100mM柠檬酸，盖紧盖子，于多管漩涡混匀器上常温振荡提取30min，加入2g NaCl，涡旋1 min，离心10000r/min，5 min，取上清液过交链孢毒素净化柱并收集4 mL 过柱提取液，氮吹至近干，加入1 mL 30%乙腈水溶液复溶，过0.22μm滤膜，待上机。

2.5.  仪器条件

2.5.1. 液相条件：

l 色谱柱：C₁₈ 250*4.5mm 5μm（Pribolab）

l 柱  温：35℃

l 进样量：20μL

l 波  长：DAD检测器或紫外检测器256nm

l 流  速：1mL/min

2.5.2. 流动相梯度：

2.6. 试样溶液的测定

将试样溶液注入高效液相色谱仪，得到5种交链孢霉毒素及样品的色谱图和峰面积。

2.7. 空白试验

除不加样品外，采用完全相同的测定步骤进行操作。

2.8. 附录

图1  5种交链孢霉毒素标准色谱图

1)：ALT，2)：ATX，3)：TEN，4)：AOH，5)：AME

图2  样品加标色谱图

3. 小结

4.   该方法采用固相净化柱净化样品，效率高、净化效果好，可实现五种交联孢毒素同步检测。适用于果蔬中多种交联孢毒素的同步检测。

本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知！