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将中国药典测定胰岛素的方法转换为使用 Agilent Poroshell 120 色谱柱的方法
2018/07/24 11:11
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方案摘要：
产品配置单：
Agilent 1260 Infinity II 液相色谱系统
型号： 1260 Infinity II
产地： 德国
品牌： 安捷伦
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方案详情：
摘要
中国药典(Ch. P)规定的检验胰岛素的方法需使用传统的 4.6 × 150 mm 或 4.6 × 250 mm，5 µm 的 C18 液相色谱柱。这两种柱长的传统 5 µm 填料色谱柱的胰岛素峰柱效都很低。本应用报告采用 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱或 Agilent Poroshell 120 SB-C18 色谱柱取代传统的色谱柱进行胰岛素分析。采用 Poroshell 120 色谱柱后调整的方法显著提高了柱效和分离度，并且仍满足 Ch. P 或美国药典(USP)规定方法的要求。
引言
胰岛素是由51 个氨基酸组成的一种肽类激素，分子量为5808 道尔顿。它产生于胰腺中的朗格汉斯岛（胰岛）。不同动物之间胰岛素的结构略有差异。由于碳水化合物代谢控制作用不同，导致动物胰岛素的“效力”与人类胰岛素不同。牛胰岛素与人胰岛素只有三个氨基酸残基不同，猪胰岛素与人胰岛素最接近。胰岛素已广泛用于1 型和某些2 型糖尿病的治疗。Ch. P 和USP 规定了长耗时的等度洗脱方法进行胰岛素的含量测定及长耗时的梯度洗脱方法进行胰岛素的有关物质检查。这两种方法的含量测定采用了相同的HPLC 条件，但用于有关物质分析的梯度洗脱方法略有不同。
本应用报告首先按照Ch. P 规定的HPLC 方法条件，采用Agilent ZORBAX SB-C18，4.6 × 150 mm，5 μm 色谱柱或Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18，4.6 × 150，5 μm 色谱柱测定胰岛素的含量和有关物质。然后将方法转移至表面多孔颗粒的Agilent Poroshell 120 色谱柱上，该色谱柱可达到与用于快速分离的亚2 μm 色谱柱相似的柱效。
结论
胰岛素分析方法从传统的5 μm 色谱柱上成功转换到表面多孔的 Agilent Poroshell 120 色谱柱上，分析性能得到显著提升。粒径为 2.7 μm，孔径为120 Å 的Poroshell 填料色谱柱能高效地分析小分子蛋白，如胰岛素，且容易满足Ch. P 胰岛素分析的系统适用性实验要求。采用Poroshell 120 色谱柱的新方法非常适合用于胰岛素的质量控制分析。
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