2018/07/15 21:45
阅读:348
分享:方案摘要:
产品配置单:
Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统
型号: 1290 Infinity II
产地: 德国
品牌: 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
Agilent 1290 Infinity II Multisampler
型号: 1290 Infinity II Multisampler
产地: 德国
品牌: 安捷伦
面议
参考报价
联系电话
方案详情:
摘要
在缺少动态信息的情况下,代谢组学数据的解读通常十分复杂,这是因为在相应代谢物丰度未发生改变时,某个通路的代谢流可能已经发生显著变化。稳定同位素示踪( 定性代谢流分析)的巨大潜力有助于解决这些状况,以便更深入地了解生物系统。在定性代谢流分析中,将稳定同位素示踪剂(通常含有 13C、15N 或 2H)引入生物系统,导致下游代谢物的同位素模式(同位素异数体分布)发生改变。该方法尤其适用于易于引入稳定同位素示踪剂的细胞模型,对产生的标记模式及示踪剂掺入动力学的分析将提供对酶功能、途径依赖、基因表达和蛋白功能变化效应的洞察。
Agilent MassHunter VistaFlux 软件旨在设计一套完整的工作流程,帮助科学家进行定性代谢流分析,助于高分辨率准确质量数 TOF 和 Q-TOF LC/MS 数据的处理和可视化。软件提供的工具可进行特征提取、同位素掺入分析、同位素异数体丰度分析、天然丰度校正、统计学分析以及数据在通路中的可视化。
本应用简报展示了使用 13C5 - 谷氨酰胺(U-13C-Gln) 作为示踪剂,对软骨肉瘤细胞系进行定性代谢流分析的研究示例。采用安捷伦 LC/TOF 系统进行数据采集,并使用 MassHunter VistaFlux 进行数据分析和解析。研究证明了异柠檬酸脱氢酶 2 (IDH2)的突变对三羧酸循环代谢产生的影响,特别是突变的 IDH2 异构体将致使谷氨酰胺转化生成 2-羟基戊二酸 (2-HG)。
前言
近期,多种实体瘤和血液肿瘤中均发现了体细胞 IDH 突变,其中包括胶质瘤、急性髓性白血病和软骨肉瘤。异柠檬酸脱氢酶(IDH1/2) 的突变发生在酶的活性位点上,形成的功能获得性表型导致代谢物 2-羟戊二酸 (2-HG) 的生成能力提高。近期研究表明,IDH 突变细胞中 2-HG 的高水平累积与清除途径的饱和相关,因此 2-HG 成为了 DNA 脱甲基酶 TET 家族、组氨酸脱甲基酶 Jumonji C 家族、mRNA 脱甲基酶 FTO 和 ALKBH5 以及调节缺氧诱导因子 (HIF) 的脯氨酰羟化酶 (PHD) 等各种 α-酮戊二酸 (α-KG)依赖型加双氧酶的竞争性抑制剂。这些变化促进了抑制性染色质环境的形成,这种环境可将细胞锁定在未分化状态下。
软骨肉瘤是由软骨细胞沉积软骨引起的一种肉瘤,具有较高的 IDH 突变发生率。软骨肉瘤肿瘤来源细胞系的易得性使其成为了解 IDH 突变后果的实用模型系统。其中一项重要研究是使用定性代谢流分析来说明突变酶产生的 2-HG 来自 α-KG 和三羧酸循环中的谷氨酰胺。
结论
采用 Agilent MassHunter VistaFlux 工作流程,在 CS-1 软骨肉瘤细胞中以 U-13C-Gln 作为代谢示踪剂进行定性代谢流分析。该分析明确证实了 IDH2 突变异构体对谷氨酰胺衍生的 α-KG 到 2-HG 的转化活性。8 小时后,IDH 突变细胞中大部分 2-HG 组均被标记为 M+5 同位素异数体。IDH2 R172S 突变酶的新生变形活性超过了内源性 2-HG 脱氢酶,因此 2-HG 的生成量有所增加,从而使 2-HG 的累积浓度升高。因此,2-HG 成为了 DNA 脱甲基酶 TET 家族和组氨酸脱甲基酶 Jumonji C 家族等多种 α-KG 依赖型加双氧酶的竞争抑制剂,造成了包括 DNA 超甲基化在内的表观遗传学变化,促进了未分化染色质环境的产生。分析还展示了 U-13C-Gln 示踪剂进入经典三羧酸循环通路中的结果。与手动数据挖掘相比,VistaFlux 工作流程为稳定同位素示踪数据处理提供了全面、自动化且快捷的框架,其中包括同位素异数体提取和定性代谢流文件数据的通路可视化。
下载本篇解决方案:
更多
采用 Agilent 5 μm MIXED-E 柱以及 RI 和 ELS 检测器 GPC/SEC 法分析聚硅氧烷
引言 聚硅氧烷是一类重要的商品化聚合物,可用作润滑油、消泡剂和密封剂。聚硅氧烷类材料的凝胶渗透色谱法 (GPC) 分析是其加工及质量控制程序中的一个重要环节。虽然聚硅氧烷溶于四氢呋喃 (THF),但它与该溶剂的折光率相同。因此,使用THF做溶剂时不能采用示差折光检测器
材料
2024/04/10
采用 GPC/SEC 分析聚合物 能源与化工领域中应用
安捷伦作为您值得信赖的全方位合作伙伴,将为您提供: • 35 年来采用 GPC/SEC 鉴定和分离聚合物的行业领先解 决方案 • 业内领先的色谱柱和校正标准品的完整套装 • 全系列的仪器和软件,实现准确的聚合物分析 • 每周 7 天,每天 24 小时的不间断全球技术支持 • 无可比拟的全球物流系统,确保重要备件准时交货
石油/化工
2024/04/10
使用 Agilent GPC/SEC 软件计算中国药 典中所述肝素钠和右旋糖酐的分子量
摘要 本文建立了肝素钠和右旋糖酐药物的分子量测定方法,分别使用 Agilent Bio SEC 和 Aquagel-OH色谱柱进行分离,以水相流动相进行洗脱,选用示差检测器进行检测,采用 Agilent GPC/SEC 软件进行计算 。 本文使用宽分布标样校正方法建立校正曲线,用于肝素钠分子量计算,并得到分子量大于 24000、分子量 16000 - 24000、分子量 8000 - 16000 范围内级分的百分含量;使用窄分布标样校正方法建立校正曲线,用于右旋糖酐分子量计算,得到 10% 大/小分子部分重均分子量 。Agilent GPC/SEC 软件使得计算过程简单、快捷 。 本文所述方法满足中国药典中对分子量计算的所有要求 。
制药/生物制药
2024/04/10