增强型脂质去除产品 EMR-Lipid 通过 LC/MS/MS 对婴儿配方奶进行黄曲霉毒素分析

    摘要

    黄曲霉毒素 M1 是牛奶中最主要的一种黄曲霉毒素。欧盟委员会 (EC) 规定欧洲婴儿配方奶中该物质的最大浓度为 0.025 μg/kg。在美国，食品和药品监督管理局 (FDA) 规定牛奶中黄曲霉毒素的干预浓度为 0.5 μg/kg。本应用简报介绍了采用 Agilent Bond Elut增强型脂质去除产品 EMR-Lipid 通过 LC/MS/MS 对婴儿配方奶中的黄曲霉毒素 M1、G2、G1、B2 和 B1 进行测定。本研究首先采用 QuEChERS 萃取，然后采用 EMR-Lipid 分散式固相萃取 (dSPE) 进行净化。该方法可使所有浓度的所有黄曲霉毒素实现出色的回收率 (88%-113%) 与精密度 (RSD = 1.3%-13.6%)。由于充分的基质去除，其定量限 (LOQ)要远远低于美国和欧洲的法规限值。这一简单而稳定的方法仅需极少设备和专业技术，因此可在食品实验室中实现轻松应用。

    前言

    真菌毒素是真菌的次生代谢产物，是全球食品和饲料供应中最常见的污染物之一。联合国粮食及农业组织 (FAO) 估计世界上有多达 25% 的农产品受到了真菌毒素的污染。这种污染会造成灾难性的经济损失，对粮食产业而言更是如此 [1]。黄曲霉毒素（表 1）是由多种真菌（特别是黄曲霉和寄生曲霉）产生的一类真菌毒素 [2]。黄曲霉毒素 M1 是牛奶中最常见的真菌毒素，奶牛食用了受黄曲霉毒素 B1 污染的饲料并对其进行代谢后即可产生黄曲霉毒素 M1 [3]。美国食品和药品监督管理局 (FDA) 以及欧盟委员会 (EC) 均已对多种食品中的黄曲霉毒素限值进行了规定 [4,5]。表 2 总结了美国和欧洲的 FDA 和 EC 黄曲霉毒素限值。

    黄曲霉毒素的法规限值极低，在婴儿食用的乳制品基质和配方奶中更是如此。为去除基质干扰以增强低浓度下的分析物信号，样品前处理必不可少。通常使用免疫亲和柱分析多种包括黄曲霉毒素在内的真菌毒素 [6-9]。但这类色谱柱价格昂贵，并需要采用对食品实验室来说并不方便的独特的多种工作流程。快速、简便、经济、高效、耐用和安全的 QuEChERS 方法针对样品采用简单的三步流程（萃取、净化和分析）。因此，该方法在谷物和乳制品中包括黄曲霉毒素在内的多种不同分析物和基质的前处理方面极具前景 [3,10,11]。但通过 C18 或 PSA 进行的 QuEChERS 净化在分析肉类和牛奶等含有大量脂质的样品时有一定限制。这种限制来自于与目标分析物的非选择性相互作用以及几乎无法去除的主要脂类物质。所有残留的脂质均会聚集于分析流路中，从而导致维护次数增加、色谱图异常，并大大降低数据准确度和精密度。

    结论

    本文开发了一个简单高效的婴儿配方奶中黄曲霉毒素的 LC/MS/MS分析方法。通过 QuEChERS 流程、Agilent Bond Elut EMR-LipiddSPE 净化以及采用 MgSO4 的增强的样品（净化）后处理（步骤）对样品进行萃取。该方法在较宽的线性范围内实现了高回收率（平均 101%）和高精密度（平均 RSD < 5.0%）。经过浓缩步骤后 LOQ 可降至法规限值以下，且不存在不必要的基质效应。

    该方法证明使用 EMR-Lipid 可有效去除基质且不会造成分析物的意外损失。出色的仪器洁净度可改善色谱性能并减少维护和故障排除，可同时节省时间与成本。该解决方案仅需极少专业技能与设备，可在食品实验室中实现轻松应用。虽然该应用仅对其中一类真菌毒素进行了重点研究，但 EMR-Lipid 的设计可用于多残留应用。因此，EMR-Lipid 不同于免疫亲和柱，可轻松应用于多类真菌毒素分析。下一步工作将继续研究 EMR-Lipid 净化在其他复杂的高脂肪含量样品中的应用。