《化妆品安全技术规范》32种染发剂的同时检测

《化妆品安全技术规范》32种染发剂的同时检测

国家药品监督管理局修订了染发剂检测方法中 对苯二胺 等32种染发剂的检测方法，由于该项目分析组分较多，且分离难度较大，我们从多款色谱柱中筛选，并且优化了检测方法，最终得到了稳定可靠的分析方法供客户参考。

方法优化后分析结果

色谱柱：

DAISOPAK SP-100-5-ODS-P；4.6mm i.d.×250mm

第一组谱图：

物质名称（按出峰顺序）

HPLC Conditions ：

色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6mm i.d.×250 mm

流   速：1.0 mL / min

柱   温：25°C

检   测：280 nm

进样量：2 μL

样   品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2 g/L亚硫酸氢钠稀释至约0.25 mg/mL

流动相：A :20 mM 磷酸氢二钾 (磷酸调pH 7.5)    B :甲醇        C :乙腈  梯度如下表所示：

第二组谱图：

物质名称（按出峰顺序）

HPLC Conditions ：

色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6mm i.d.×250 mm

流   速：1.0 mL / min

柱   温：25°C

检   测：280 nm

进样量：2 μL

样   品：混合对照品按2015化妆品安全技术规范方法配制，使用2 g/L亚硫酸氢钠稀释至约0.25 mg/mL

流动相：A :20 mM 磷酸氢二钾 (磷酸调pH 7.5)    B :甲醇 

梯度如下表所示：  

结果讨论和注意点

柱温的影响

柱温对部分组分的分离有较大的影响，降温有助于3、4和18的分离，升温有助于22、12、9和14的分离，其他组分分离情况较好，柱温的变化影响不大。

有机相比例的影响

有机相比例和梯度的调整对整体的分离也有较大影响，在该项目征求意见稿的参考谱图中，第一组的3、4、18号物质的出峰顺序为3→18→4，若将第一组分析流动相中的乙腈也变更为甲醇，则会得到相同的出峰顺序，但后半部分的组分分离较困难，无法得到较好的分离；而22、12、9和14的分离需要适当提高乙腈的比例，适当加快洗脱的速度，猜测主要原因为甲醇和乙腈对于不同的组分有不同的选择性。

色谱柱的影响

该方法初始水相比例较高，对色谱柱的耐水性能有一定考验，ODS-P可连续分析30针以上保持分离性能（通常第一针保留时间及分离情况不稳定，分析开始前需一定的平衡时间才可得到稳定的结果）。

稳定性

除色谱柱的稳定性之外，仪器和方法的稳定性亦非常重要。该方法需要一定的平衡时间才可得到稳定结果（2-3h），另外该方法初始有机相比例较低，柱温也较低，对于泵的准确性和稳定性，柱温的控制均要求较高。

以上实验结果在岛津LC-30A四元低压泵上获得，不同仪器的死体积大小同样也会在不同程度上影响实验结果，可能需要对方法进行微调（柱温和梯度）。流动相的配制较为简单，多次配制的结果无明显差异。

总结

综上，使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P; 4.6 mm i.d.×250 mm对于2组32种染发剂的分析可得到良好稳定的分析结果，在实际分析时，可能需根据实际情况对方法进行微调。