盐酸小檗碱的分析

盐酸小檗碱的分析

客户提供盐酸小檗碱系统适用性溶液及盐酸巴马汀对照品，希望按照2020版中国药典方法进行色谱柱筛选，满足盐酸小檗碱与盐酸巴马汀分离度大于1.5，柱温不低于25℃及主峰保留时间不大于25min要求。

首先，按照2020版中国药典盐酸小檗碱有关物质项下方法，我们选用不同碳含量C₁₈色谱柱进行了筛选，对比结果如图1所示。其中DAISOPAK ODS-P色谱柱保留时间较长，主峰超过25min，且由于主峰过载导致盐酸巴马汀与主峰分离度仅有0.6；CAPCELL PAK C18 MGII和CAPCELL PAK C18 UG120色谱柱均能够看到二者的分离趋势，但同样未得到分离度大于1.5的结果；低碳含量的CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱无分离趋势。

图1  C₁₈不同色谱柱对比分析结果

HPLC Conditions

色谱柱：DAISOPAK ODS-P S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

              CAPCELL PAK C18 MGII S3; 4.6 mm i.d.×250 mm

              CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6 mm i.d.×250 mm

              CAPCELL PAK C18 UG120 S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流动相：A：0.01mol/L磷酸二氢铵  B：乙腈   A:B = 75:25

流  速：1 mL / min(CAPCELL PAK C18 MGII S3使用0.8mL / min）

温  度：30 °C

检  测：PDA 345 nm

进样量：10 µL

浓  度：客户提供液标直接进样

我们在前期分离较好的CAPCELL PAK C18 UG120色谱柱上，尝试对流动相条件进行了微调。

首先对流动相比例进行了微调，分别尝试22%、25%（原条件）、26%乙腈，结果如图2所示。随着有机相比例降低，保留时间延长，主峰拖尾现象会更加明显，导致分离度积分结果下降，但如果将有机相比例调整过高又会影响前面杂质分离度，因此选择26%有机相比例进行下一步尝试。

图2 不同有机相比例分析对比图

接下来我们继续对柱温进行了优化，分别使用了40、30、25℃柱温进行分析，发现柱温低有利于盐酸巴马汀和主峰分离，但同样由于主峰拖尾过载原因，分离度积分结果无法达到1.5以上。结果如图3所示。

图3 不同柱温分析对比图

同时我们也尝试对流速进行了调整，分别使用0.8 mL/min和1.0 mL/min流速，但同样，降低流速后主峰展宽，分离度有下降趋势，结果如图4所示。

图4 不同流速分析对比图

*图上所示数字为分离度

同时我们也尝试了换用不同柱型色谱柱，包括2.0 mm i.d.×150 mm等色谱柱规格，同时对进样量进行调整，但均未能获得基线拆分结果。

最终我们在CAPCELL PAK C18 UG120 S5; 4.6 mm i.d.×250 mm色谱柱，将进样量调整至5 µL后，能够获得基线分离结果，结果如图5所示。

图5 调整进样量后分析结果图

HPLC Conditions

色谱柱：CAPCELL PAK C18 UG120 S5;4.6 mm i.d.×250 mm

流动相：A：0.01 mol/L磷酸二氢铵  B：乙腈   A / B = 74 / 26

流  速：1 mL / min

温  度：25 °C

检  测：PDA 345 nm

进样量：5 µL

浓  度：客户提供液标直接进样

综上所述，使用CAPCELL PAK C18 UG120 S5; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱，在对流动相及进样量调整后能够完成盐酸小檗碱和盐酸巴马汀分离。

注： 图中色谱峰线条不平滑是由于图像在复制过程中解像度问题引起的。