使用人参皂苷Rg1、Re和Rb1的标准品（固体）和混合对照品溶液（液体），参苓白术散供试品样品（固体）和处理好的溶液（液体），以及不含人参的阴性供试品样品（固体）和处理好的溶液（液体），摸索UHPLC/MS/MS分析方法，使人参皂苷Rb1与基质得到良好的分离，并使各峰间分离度大于1.7，各峰理论塔板数大于3000，专属性（阴性无干扰）和耐用性符合要求。由于实验室之前对人参皂苷Rg1和Re在UHPLC条件下进行分析时，进行过色谱柱筛选，我们直接选用分离情况较好的CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行分析。人参皂苷Rg1、Re和Rb1的结构式如下：（点击查看大图）参考客户实验条件的分析结果我们参考客户提供的实验条件对混合对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液进行分析，结果见图1~3和表1~2。在对照品中，人参皂苷Rg1与Re之间的分离度为3.788。在供试品中，Rg1与Re之间的分离度为3.781，分离良好；Rb1与其峰前杂质之间的分离度为1.903，达到了基线分离。在阴性供试品中的基质中，在Rg1出峰位置附近有干扰峰（图3红色虚线框中）。图1  MGII色谱柱分析对照品溶液结果（梯度条件1）表1  各峰积分结果图2  MGII色谱柱分析供试品溶液结果（梯度条件1）表2  各峰积分结果图3  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件1）色谱条件：色谱柱：CP C18 MGII S2; 2.0×100流动相：A：水，B：乙腈           梯度条件1：B% 19%(0 min)-19%(20 min)-25%(35 min)-38%(50 min)-95%(51 min)-95%(60 min)-19%(61 min)-19%(70 min)流   速：0.4 mL/min温   度：30 ℃检   测：PDA 203 nm进样量：1 µL对照品溶液：人参皂苷Rg1和Re均为0.04 mg/mL、人参皂苷Rb1为 0.08 mg/mL (溶剂70%甲醇)调整优化为了使阴性供试品中的基质杂质峰与目标峰得到分离，继续对流动相的梯度条件进行调整。从实验结果（图4和图5）可以看出，随着梯度条件的变化，阴性供试品中基质的杂质峰与目标峰展现出不同的保留行为，杂质峰1和杂质峰2有时出现在Rg1附近，有时出现在Re附近（图中红色虚线框中）。但Rg1和Re都可以得到良好分离，Rb1与前后其相邻杂质之间也都可以得到分离度大于1.9的分析结果。图4  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件2）图5  MGII色谱柱分析对照品、供试品和阴性供试品溶液结果对比（梯度条件3）色谱条件：色谱柱：CP C18 MGII S2; 2.0×100流动相：A：水，B：乙腈           梯度条件2：B% 19%(0 min)-19%(5 min)-25%(20 min)-38%(35 min)-95%(36 min)-95%(45 min)-19%(45.1 min)-19%(50 min)           梯度条件3：B% 19%(0 min)-19%(10 min)-25%(25 min)-38%(40 min)-95%(41 min)-95%(50 min)-19%(51 min)-19%(60 min)流   速：0.4 mL/min温   度：30 ℃检   测：PDA 203nm进样量：1 µL对照品溶液：人参皂苷Rg1和Re均为0.04 mg/mL、人参皂苷Rb1为 0.08 mg/mL (溶剂70%甲醇)结      论综上，使用CAPCELL PAK C18 MGII S2; 2.0 mm i.d.×100 mm色谱柱，在不同梯度条件下，均可以得到人参皂苷Rg1和Re之间的良好分离，Rb1与其前后相邻杂质之间也可以得到分离度大于1.9的分析结果。使用不用的梯度条件，可得到目标峰与基质杂质峰不同的分离结果，可根据供试品溶液的实际情况，对梯度条件进行相应的调整，以得到目标峰与基质杂质峰的良好分离效果。

近年来，随着临床检验快速发展，临床质谱技术凭借高特异性、高灵敏度、多指标检测等优势，成为了体外诊断极富生命力的新技术和精准医疗的新方向。CAPCELL PAK系列色谱柱以专利的键合相选择，特有的限进介质技术，多样化的色谱柱规格和出众的批次间稳定性，越来越受到临床质谱用户的喜爱。今天和大家分享的是人血浆中五种抗抑郁药物分析的实验数据实验项目名称：五种抗抑郁药物的分析待测物：帕罗西汀、舍曲林、文拉法辛、丙咪嗪和多塞平色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S3, 2.1x100仪   器：Thermo Scientific TSQ Endura流动相：A：含0.1%甲酸、0.5 mM甲酸铵的水溶液；B：100%乙腈柱   温：40 ℃流   速：0.3 mL/min进样量：5 μL样品情况：（1）50 μL血浆，加200 μL乙腈，充分混匀沉淀；（2）12000 rpm 离心5 min；（3）取离心后的上清50 μL至96孔进样板中，加入150 μL 0.1%甲酸水，混匀；（4）即得供试品溶液。样品谱图和实验数据：结     论CAPCELL PAK ADME-HR S3; 2.1mmi.d. x 100mm色谱柱可满足抗抑郁药物帕罗西汀、舍曲林、文拉法辛、丙咪嗪和多塞平在人体血浆中的检测需求。

今天给大家带来一份使用PFP色谱柱对结构近似化合物的实验数据分享。实验项目名称：医药中间体及其结构近似杂质的分析待测物：如谱图中结构式所示【色谱条件】色谱柱：CAPCELL CORE PFP S2.7, 4.6x150流动相：A: 0.1%磷酸溶液，B:乙腈       B%  20%(0 min)-80%(40 min)-20%(40.1 min)-20%(45 min)柱动温：35 ℃流动速：1.0 mL/min进样量：5 μL样动品：1 mg/mL，按0.5%限度加标。样品谱图和实验数据：结       论使用大阪曹達CAPCELL CORE PFP S2.7; 4.6×150mm色谱柱，可实现结构近似物的良好分离。CAPCELL CORE PFP 更高的分离能力与传统的全多孔色谱柱相比，键合五氟苯基（PFP）核-壳型表面多孔填料色谱柱，在分析时展现出更短的扩散路径，可以更快的达到平衡，可得到更高的分离能力。‍‍‍‍CAPCELL CORE PFP更好的结构辨识力PFP色谱柱在反相分析中显示了与C18柱不同的选择性，即由于苯环上置换的氟原子存在引起的氢键作用及偶极-偶极相互作用，另外也可能存在苯环上π电子间的π-π相互作用。‍‍‍‍【色谱条件】色谱柱：CAPCELL CORE PFP S2.7, 2.1x150流动相：A:水，B:乙腈       B%  30%(0 min)-60%(4.5 min)-30%(4.6 min)-30%(5 min)柱动温：40 ℃流动速：0.5 mL/min进样量：3 μL

今天又给大家带来一份法检用户分享的实验数据。农药、安眠药、杀鼠剂和du品等常检项目的一齐分析。实验项目名称：32种农药、安眠药、杀鼠剂和du品等样品同时检测待测物：大隆、溴敌隆、苯巴比妥、乐果、卡马西平、异丙嗪、唑吡坦、扎来普隆、劳拉西泮、咪达唑仑、氯氮平、氯胺酮、6-单乙酰吗啡、地西泮-D5、skf525、甲拌磷、对硫磷、阿普唑仑、三唑仑、地西泮、艾司唑仑、氯硝西泮、7-氨基氯硝西泮、美沙酮、右美托咪定、呋喃丹、毒死蜱、三唑磷、百草枯、敌草快、敌敌畏、甲胺磷和氧化乐果色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5, 2.0x150流动相：A:水（0.1%乙酸+2mmol乙酸铵），B:乙腈       B%  5%(0 min)-5%(1.0 min)-95%(3.0 min)-95%(6.0 min)-5%(6.1 min)-5%(8.0 min)柱   温：40 ℃流   速：0.5 mL/min进样量：5 μL样品：（点击查看大图）样品谱图和实验数据：（点击查看大图）（点击查看大图）（点击查看大图）结     论使用大阪曹達CAPCELL PAK C18 MGIII (S-5) 2.0×150mm色谱柱，可实现32种农药、安眠药、杀鼠剂和du品等常检项目的一齐分析。

大家好~大阪曹達集团三耀精细将于11月23日（周四）15：00-16:00召开极性小分子化合物液相分析中保留模式的选择网络技术交流会。欢迎大家参加交流~

国家药品监督管理局发布了“国家药监局关于将油包水类化妆品的pH值测定方法等21项制修订项目纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2023年第41号）”。新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。今天给大家带来的是“化妆品中CI 10020等11种原料的检验方法”的数据分享、分析注意事项和CP色谱柱推荐。实验参照“化妆品中CI 10020等11种原料的检验方法”对该11种禁用组分进行了测定，并进行了化妆水、乳液样品的确认。1. 标准品分析结果在筛选色谱柱后，用分离及峰形相对更好的CAPCELL PAK C18 MGII S3色谱柱进行了梯度优化，降低10-20 min的梯度斜率后，对CI 10020等11种原料混合溶液进行分析，结果如图1、表1所示，11种原料与其相邻色谱峰均可达到分离度大于1.5的基线分离结果，分离良好。图1梯度调整后11种原料分析结果表1 11种原料分离结果【色谱条件】色谱柱：CP C18 MGII S3; 4.6×250 mm流动相：A：0.02 mol/L 乙酸铵   B：乙腈B%  2%(0 min)-2%(5 min)-10%(7 min)-35%(11 min)-45%(32 min)-90%(34 min)-2%(35 min)流   速：0.80 mL/min柱   温：35℃检   测：PDA 250 nm; 500 nm; 620 nm样   品：除酸性绿1、食品红14、溶剂绿7为100 μg/mL之外，其余浓度均为50 μg/mL。进样量：5 μL2. 样品分析结果及方法学2.1 线性实验考察如表2所示，11种物质在不同范围内线性良好，相关系数均大于0.99，满足标准要求。检出限及定量限见表2。表2 线性范围考察及检出限、定量限（点击查看大图）2.2精密度考察取标准系列曲线中“混标3”溶液，使用自动进样器精确进样适量注入液相色谱仪分析测定，连续进样6次，记录各色谱峰的峰面积计算精密度。分析结果中精密度RSD%测定结果如表3所示，6针RSD在0.31%-1.92%，均小于2%，该方法精密度良好。表3 精密度考察结果2.3样品分析在上述条件下对乳液、面霜、染发剂等化妆品样品进行分析，结果如图2-4所示，三个样品中均未检出11种原料峰。其中乳液样品分析结果见图2，在保留时间5 min左右的峰1出峰位置检出基质干扰峰，经紫外光谱对比确认乳液样品中不含酸性绿1。面霜样品分析结果见图3，未检出11种原料峰，且由于不同物质采用的分析波长不同，因此在面霜样品分析中也未检出任何相关干扰峰。染发剂样品分析结果见图4，在峰4、峰8出峰位置处检出相关干扰峰，经紫外光谱图对比确认染发剂样品中不含食品红9、酸性黄73。图2 乳液样品分析图图3 面霜样品分析图图4染发剂样品分析图2.4 回收率选择样品基质较为干净的面霜样品进行加标回收实验，除酸性绿1、食品红14、溶剂绿7添加10 μg/mL之外，其他8种原料分别添加5 μg/mL，结果如表4所示，CI 10020等11种原料的回收率在94.04%-108.20%之间，满足标准（89.5%-112.7%）要求。表4 面霜加标回收结果3. 分析注意部分样品可能存在较为严重的基质干扰。由于某乳液样品中在峰1出峰位置出现基质干扰，建议使用基质干净的样品进行加标回收实验。图5 乳液样品加标色谱图4. 结论使用CAPCELL PAK C18 MGII S3; 4.6×250 mm色谱柱，在新化妆品检测方法“化妆品中CI 10020等11种原料的检验方法”基础上微调梯度后，能够获得良好检测结果，满足标准要求。5. 阳性结果确认5.1 标准品分析结果按照“化妆品中CI 10020等11种原料的的检验方法”中的方法，对CI 10020等11种原料进行测定。但分析过程中发现食品蓝5未检出，经针泵（Q1、MS2、MRM）确认无法找到母离子、子离子（图10），因此对其余10种原料进行分析，得到结果如图6所示，10种组分峰形良好。图6 CI 10020等10种原料标准谱图【色谱条件】色谱柱：CORE C18 S2.7; 2.1×100 mm流动相：A: 10 mmol/L乙酸铵溶液(pH5.5)  B: 0.02%乙酸乙腈        B%  5%(0 min)-95%(10 min) -95%(16 min) -5%(17 min) -5%(22 min)流   速：0.3 mL/min温   度：室温检   测：SCIEX QTRAP 5500; MRM浓   度：混标储备液，配置酸性绿1、食品红1、食品红9、酸性蓝1、食品蓝5、食品绿3、酸性黄73、酸性红87、食品红14、溶剂绿7各100 ppb，酸性橙6 1000 ppb。进样量：2 µL5.2 样品分析结果按照方法，对乳液、面霜、染发剂3种不同基质样品进行了测定，结果分别如图7-9所示，3种样品中均不含CI 10020等10种组分。图7 乳液样品分析结果图8 面霜样品分析结果图9 染发剂样品分析结果【色谱条件】色谱柱：CORE C18 S2.7; 2.1×100 mm流动相：A: 10mmol/L乙酸铵溶液(pH5.5)  B: 0.02%乙酸乙腈        B%  5%(0 min)-95%(10 min) -95%(16 min) -5%(17 min) -5%(22 min)流   速：0.3 mL/min温   度：室温检   测：SCIEX QTRAP 5500; MRM浓   度：分别精密称取乳液、面霜、染发剂样品0.2 g于10 mL容量瓶，加0.02 mol/L乙酸铵溶解并定容。进样量：2 µL5.3 分析注意事项① 分析过程中发现食品蓝5标准品未能检出，按照标准中方法未见明显色谱峰，经针泵（Q1、MS2、MRM）确认时无法找到母离子、子离子，建议排查标准品情况。图10 食品蓝5 MRM分析图② 酸性橙浓度较高。5.4 质谱条件质谱检测条件使用方法中的参考条件（表5），若定量限不能满足时，建议根据仪器情况进行质谱方法优化。表5 CI 10020等11种组分监测离子对及相关参数设定（点击查看大图）5.5 结论使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1×100mm色谱柱，按照新化妆品检测方法“化妆品中CI 10020等11种原料的检验方法“分析，食品蓝5未能得到良好检出（未找到相关母离子、子离子），但其余10种原料均能获得良好检测结果，满足标准要求。

国家药品监督管理局发布了“国家药监局关于将油包水类化妆品的pH值测定方法等21项制修订项目纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2023年第41号）”。新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。今天给大家带来的是“化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法”的数据分享、分析注意事项和CP色谱柱推荐。01化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的检测实验参照“化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法”，第一部分化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的检测中方法，对抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸10种组分进行了测定，并进行了面霜、乳液、粉底液样品的分析。1. 混合标准品的分析通过色谱柱筛选后，使用分离及峰形相对更好的CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行了梯度优化，增加18-22 min高比例有机相洗脱时间，对抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料混合溶液进行分析，结果如图1~3、表1所示，10种原料均可达到分离度大于1.5的基线分离结果，分离良好。图1 梯度调整后10种原料分析结果（230nm）图2 梯度调整后10种原料分析结果（250nm）图3 梯度调整后10种原料分析结果（280nm）表1 10种原料分离结果（230nm条件积分结果）【色谱条件】色谱柱：CP C18 MGII S5; 4.6×250 mm流动相：A：0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液    B：甲醇            B%  5%(0 min)-5%(3 min)-40%(8 min)-60%(14 min)-70%(18 min)-70%(22 min)-5%(23 min)-5%(30 min)流速：1.0 mL/min柱   温：25℃检   测：PDA 230 nm; 250 nm; 280 nm样   品：50 µg/mL（按照检验方法中5.1项配置）进样量：10 μL2. 分析结果及方法学2.1 线性实验的考察结果如表2所示，10种物质在不同范围内线性良好，相关系数均大于0.99，满足标准要求。表2 线性范围考察2.2 样品分析在上述条件下对乳液、面霜、粉底液化妆品样品进行分析，结果如图4~6所示，三个样品中均未检出10种原料峰。乳液样品分析结果见图4，其中2.5 min有小溶剂峰与抗坏血酸磷脂镁峰以及抗坏血酸葡糖苷峰重合，在保留时间17 min左右的鞣花酸附近有基质峰，但保留时间不完全一致，该样品中不含有抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料。面霜样品分析结果见图5，未检出10种原料峰，且由于不同物质采用的分析波长不同，因此在面霜样品分析中也未检出任何相关干扰峰。粉底液样品分析结果见图6，在峰5、峰9出峰位置处检出相关干扰峰，经紫外光谱图对比确认粉底液样品中不含以上成分。图4 乳液样品分析结果图5 面霜样品分析结果图6粉底液样品分析结果3 分析注意事项3.1色谱柱筛选按照抗坏血酸磷酸酯镁等10种的检验方法，尝试使用不同极性的C18柱：CAPCELL PAK C18 MGII、CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱，分别对抗坏血酸磷酸酯镁、抗坏血酸葡糖苷、苯乙基间苯二酚、4-丁基间苯二酚、4-甲氧基水杨酸钾、阿魏酸、烟酰胺、曲酸、3-邻-乙基抗坏血酸、鞣花酸10种组分进行分析。其中AQ色谱柱虽然保留时间长，但抗坏血酸磷酸酯镁峰型拖尾，导致与抗坏血酸葡糖苷分离较差，因此选择了CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250 mm色谱柱进行后续分析。3.2 梯度条件的调整按照抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的原检验方法，苯乙基间苯二酚峰无法在梯度条件中良好洗脱，因此我们增加了70%甲醇的洗脱时间，已确保所有目标峰均被洗脱出来。由于不同仪器间存在延迟体积的不同，若遇到分离不好的情况，需要进行梯度条件的微调。流动相：A：0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液   B：甲醇原梯度条件：B%  5%(0 min)-5%(3 min)-40%(8 min)-60%(14 min)-70%(18 min)-5%(25 min)-5%(30 min)优化后梯度条件：B%  5%(0 min)-5%(3 min)-40%(8 min)-60%(14 min)-70%(18 min)-70%(22 min)-5%(23 min)-5%(30 min)3.3 对于有基质干扰的样品，可考虑通过光谱图比对，或调整流动相条件进行分离等方式排查。4 结论综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250 mm色谱柱，在新化妆品检测方法“化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法”第一部分化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等10种原料的检测中方法基础上微调梯度后，能够获得良好检测结果，满足标准要求。02化妆品中凝血酸（氨甲环酸）的检测实验参照“化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法”，第二部分化妆品中凝血酸（氨甲环酸）的检测中方法，对氨甲环酸组分进行了测定，并进行了化妆水、乳液样品的分析。1 标准品分析该方法中有机相比例仅为5%，因此选择可在100%水相中稳定使用的CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱进行分析，得到结果如图1所示，氨甲环酸标准品保留时间6.47 min，理论塔板数16557，拖尾因子1.17。同时我们也用水逐级稀释标准品至五个系列浓度：5 µg/mL，10 µg/mL，20 µg/mL，50 µg/mL，100 µg/mL，测定标准曲线，线性良好，r=0.9992，线性方程为y = 249.89x。以线性最低浓度计算检出限为17.2 ng。图1 氨甲环酸标准品分析结果【色谱条件】色谱柱：CP C18 AQ S5; 4.6×250 mm流动相：A：0.05 mol/L KH2PO4-0.2% H3PO4溶液   B：甲醇            A：B = 95：5流   速：1 mL/min温   度：30 °C检   测：UV 210 nm浓   度：100 µg/mL（水溶）进样量：20 µL2 样品分析按照检验方法，对化妆水、乳液2种不同基质样品进行了测定，结果如图2所示，在化妆水样品中存在一定基质干扰峰，我们在化妆水样品中加入标准品，得到谱图如图3所示，基质干扰峰与氨基环酸峰分离度不足1.5，会影响定量结果。图2 样品分析结果（从下至上：标准品、化妆水、乳液）图3 化妆水样品加标分析结果【色谱条件】色谱柱：CP C18 AQ S5; 4.6×250 mm流动相：A：0.05 mol/L KH2PO4-0.2% H3PO4溶液   B：甲醇            A：B = 95：5流   速：1 mL/min温   度：30 °C检   测：UV 210 nm浓   度：样品处理：准确称取化妆品试样0.5 g于15 mL具塞比色管中，加入5 %甲醇溶液至约9 mL，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取10 min，冷却至室温。转移至10 mL容量瓶中，加5 %甲醇溶液定容至刻度，混匀后转移至离心管中，以12000 r/min的转速离心10 min。上清液经孔径0.22 µm的滤膜过滤后，滤液作为样品待测溶液。进样量：20 µL由于部分样品存在基质干扰，因此在原分析条件基础上，进行了方法调整。一方面降低了流动相中有机相比例，延长氨甲环酸保留时间至10 min以上；另外也加入了梯度洗脱，以便将样品基质中的疏水性物质进行冲洗，更加有利于分析方法整体的稳定性及提高色谱柱寿命。同时对该加标样品进行了回收率测试，回收率为102.86%。图4 方法调整后分析结果图5 方法调整后分析结果局部放大图【色谱条件】色谱柱：CP C18 AQ S5;4.6×250 mm流动相：A：0.05 mol/L KH2PO4-0.2% H3PO4溶液  B：甲醇             B%  0%(0 min)-0%(10 min)-60%(12 min)-60%(15 min)-0%(16 min)-0%(25 min)流   速：1 mL/min温   度：30 °C检   测：UV 210 nm浓   度：样品处理：准确称取化妆品试样0.5 g于15 mL具塞比色管中，加入5 %甲醇溶液至约9 mL，涡旋振荡使试样与提取溶剂充分混匀，超声提取10 min，冷却至室温。转移至10 mL容量瓶中，加5 %甲醇溶液定容至刻度，混匀后转移至离心管中，以12000 r/min的转速离心10 min。上清液经孔径0.22 µm的滤膜过滤后，滤液作为样品待测溶液。进样量：20 µL3 分析注意事项由于该方法水相比例较高，建议选择耐水性能良好的C18色谱柱进行分析；对于有基质干扰的样品，可考虑通过光谱图比对，或调整流动相条件进行分离等方式进行排查。4 结论综上所述，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250mm色谱柱，在新化妆品检测方法“化妆品中抗坏血酸磷酸酯镁等11种原料的检验方法”，第二部分化妆品中凝血酸（氨甲环酸）的检测方法，能够获得良好检测结果，满足标准要求。

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大家好~大阪曹達集团三耀精细将于10月26日15：00-16:00召开CAPCELL 系列 ADME 色谱柱网络技术交流会。欢迎大家参加交流~会前剧透1. ADME的应用场景当化合物极性逐渐增大，常规反向色谱柱无法对化合物进行有效保留时，您是否考虑要放弃使用反相色谱柱呢？当您的样品组分从强极性到疏水性跨度太大，常规色谱柱分析时对强极性化合物保持弱且分离能力差，而疏水性化合物分析时间又冗长到无法接受时，您是否考虑通过拆分组合分析来解决问题呢？那么，当您放弃使用反相色谱柱或拆分组分之前，请一定尝试ADME！2. 为什么用ADME为了满足强极性化合物的分析，想必您的手边一定有能在100%水相条件下使用或者是极性基团内嵌型C18色谱柱。当C18色谱柱仍然无法满足您的工作时，您会考虑采用极性更强的色谱柱，比如C8和C4，甚至CN和C1，但是，不可避免的疏水性分离能力“被”降低了。至今为止的反相色谱柱，主要以C18，C8，C4等直链型烷基为主。以疏水性为横轴，表面极性为纵轴，将这些色谱柱物性值作图。那么，究竟如何才能将坐标点放在这张图的“尽可能靠上，极性强”和“尽可能靠右，兼顾疏水性”的位置呢？事实证明，这个坐标点可以将您的“不可能”变为“可能”。CAPCELL PAK ADME就为您呈现了疏水性1.91，极性0.73的全新物性色谱柱！3. 用ADME做什么No.1：强极性代谢产物的分析No.2：强极性和疏水性化合物同时分析No.3：同分异构体的分析No.4：肽类的分析No.5：核酸类化合物的分析No.6：药物代谢动力学、食品检测领域、化妆品检测领域及其他

国家药品监督管理局发布了“国家药监局关于将油包水类化妆品的pH值测定方法等21项制修订项目纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2023年第41号）”。新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。今天给大家带来的是“化妆品中联苯乙烯二苯基二磺酸二钠等5种原料的检验方法”的数据分享和CP色谱柱推荐。按照标准检验方法，分别用CAPCELL PAK C18 MGII和CAPCELL PAK C18 BB色谱柱对5种组分进行测定，同时也测定了化妆水、乳液、面霜样品并对化妆水做了加标回收率测试。01CP C18 MGII 分析结果1.1 标准品分析结果按照检验方法，使用色谱柱CAPCELL PAK C18 MGII S5, 4.6 mm×250 mm对标准品进行分析，结果如图1所示。5种标准物质的理论塔板数为6275~168626，分离度均达到基线分离要求。注：峰上标由下至上分别为分离度、保留时间、理论塔板数图1 C18 MGII色谱柱分析结果-标准溶液【色谱条件】色谱柱：CP C18 MGII S5, 4.6×250流动相：A：25 mmol/L乙酸铵溶液，用氨水调节pH至8.0，过滤    B：乙腈            B%  30%(0 min)-30%(10 min)-90%(16 min)-90%(20 min)-98%(20.1 min)-98%(38 min)-30%(40 min)-30%(45 min)流   速：1.0 mL/min柱   温：35 °C进样量：10 μL检   测：激发波长，360；发射波长，440样   品：1.4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐(500 ng/mL)，2.联苯乙烯二苯基二磺酸二钠(50 ng/mL)，3.二乙氨基甲基香豆素(50 ng/mL)，4.二苯并噁唑基萘(50 ng/mL)，5.双(叔丁基苯并噁唑基)噻吩(50 ng/mL)，(溶剂为70% 25 mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调节pH至8.0) + 30% 乙腈)1.2 方法学考察1.2.1 标准曲线的绘制用N,N-二甲基甲酰胺溶解后初始比例流动相最终稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线，如表1所示。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9953~0.9999。表1 线性范围、标曲、相关系数(点击查看大图)1.2.2 样品测试按照标准方法分别对水剂、乳剂、霜剂样品进行测试，测试结果如图2所示，样品均未达到标准中要求的最低定量浓度。同时对水剂进行加标测试，回收率为82%~119%。图2 水、乳、霜样品分析图1.3 分析注意事项1.3.1 标准品4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐出峰前后均有杂质峰干扰，我们尝试了降低初始有机相比例到27%（30%→27%）来提高目标峰和杂质峰之间的分离度，测试结果如图3所示。图3 方法优化前后对比图1.3.2 空白干扰在进行空白溶剂和标准品测试时，发现空白溶剂峰对目标峰有干扰，测试结果如图4所示图4 空白干扰为改善梯度空白的影响，我们尝试在泵后连接鬼峰捕集柱，测试结果如图5所示，加入鬼峰捕集柱（Ghost-Cleaner I）后干扰峰明显减少。图5空白干扰02CP C18 BB 分析结果2.1 标准品分析结果由于检验方法中流动相pH相对较高，因此我们也尝试用耐碱型CAPCELL PAK C18 BB S5, 4.6 mm×250 mm对标准品进行分析，5种目标物均能很好分离，但是目标峰4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐和前后杂质之间未达到基线分离，我们尝试降低有机相的初始比例到27%进行测试，测试结果如图6-7所示。目标峰4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐和前后杂质分离度均在3.0以上。注：峰上标为分离度图6 方法优化前后对比结果注：峰上标由下至上分别为分离度、保留时间、理论塔板数图7 方法优化后标准品测试结果【色谱条件】色谱柱：CP C18 BB S5, 4.6×250流动相：A：25 mmol/L乙酸铵溶液，用氨水调节pH至8.0，过滤    B：乙腈            B%  27%(0 min)-27%(10 min)-90%(16 min)-90%(20 min)-98%(20.1 min)-98%(38 min)-27%(40 min)-27%(45 min)流   速：1.0 mL/min柱   温：35 °C进样量：10 μL检   测：激发波长，360；发射波长，440样   品：1.4,4'-双[(4-苯胺基-6-羟乙基氨基-1,3,5-三嗪-2-基)氨基]二苯乙烯-2,2'-二磺酸二钠盐(500 ng/mL)，2.联苯乙烯二苯基二磺酸二钠(50 ng/mL)，3.二乙氨基甲基香豆素(50 ng/mL)，4.二苯并噁唑基萘(50 ng/mL)，5.双(叔丁基苯并噁唑基)噻吩(50 ng/mL)，(溶剂为70% 25 mmol/L乙酸铵溶液(用氨水调节pH至8.0) + 30% 乙腈)2.2 方法学考察2.2.1标准曲线的绘制用N,N-二甲基甲酰胺溶解后初始比例流动相最终稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线，如表2所示。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9993~0.9994。表2 线性范围、标曲、相关系数(点击查看大图)2.2.2 样品测试按照标准方法分别对水剂、乳剂、霜剂样品进行测试，测试结果如图8所示，样品均未达到标准中要求的最低定量浓度。同时对水剂进行加标测试，回收率为83%~117%。图8水、乳、霜样品分析图结      论综上，参考《化妆品安全技术规范 （2015年版）》第四章理化检验方法中8.3化妆品中联苯乙烯二苯基二磺酸二钠等5种原料的检验方法，使用CAPCELL PAK C18 MGII S5, 4.6 mm×250 mm色谱柱可以得到良好分析结果，线性、回收率良好，且目标峰和杂质峰之间能够达到基线分离。使用CAPCELL PAK C18 BB S5, 4.6 mm×250 mm色谱柱，在降低初始有机相比例到27%时，也能达到目标峰和杂质峰的基线分离同时也可以得到良好分析结果，线性、回收率良好。因为方法中流动相A的pH值为8，为了延长色谱柱的使用寿命，建议及时冲洗色谱柱并保存在高有机相下。

近日，国家药品监督管理局发布了“国家药监局关于将油包水类化妆品的pH值测定方法等21项制修订项目纳入化妆品安全技术规范（2015年版）的通告（2023年第41号）”。对《化妆品安全技术规范（2015年版）》中原有的5项检验方法进行了修订，自2024年3月1日起，化妆品注册、备案及抽样检验相关检验应当采用新发布的检验方法。新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。今天给大家带来的是“化妆品中丙烯酰胺的检验方法”的数据分享。丙烯酰胺属于化妆品禁用物质，即不得添加使用。但丙烯酰胺作为化妆品原料聚丙烯酰胺的分解残留物常存在于化妆品当中，丙烯酰胺具有神经毒性、生殖毒性和致癌作用，所以法规中对聚丙烯酰胺有明确的限用加量。在检验方法原条件下，使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，可得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果，四种化妆品样品中均不含丙烯酰胺，符合要求。使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1×150 mm和CAPCELL PAK ADME-HR S2; 2.1×100 mm色谱柱，在原条件基础上对梯度条件进行优化后，可在5 min内完成检测，同样可以得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果。化妆品中丙烯酰胺的检验方法原条件参考检验方法中丙烯酰胺LC-MS分析方法，使用核壳型CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，对丙烯酰胺标准品及化妆品样品进行分析。标准品分析结果如图1所示，丙烯酰胺保留时间5.89 min，保留及峰形良好。图1 丙烯酰胺标准品分析色谱图【色谱条件】色谱柱：CC C18 S2.7; 4.6×150 mm流动相：A：0.05%甲酸   B：甲醇B% 10%(0min)-10%(8min)-100%(8.5min)-100%(12min)-10%(13min)-10%(19min)流动速：0.3 mL/min柱动温：室温检动测：AB SCIEX QTRAP 5500样动品：10 ppb进动量：10 μL在上述条件下进行线性实验的考察。结果如图2所示，丙烯酰胺在2.0~200 ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数r=0.999＞0.995，满足标准要求。图2 丙烯酰胺线性在上述条件下对化妆水、乳液、面霜、BB霜等化妆品样品进行分析（样品处理：称取样品0.3 g，加水3 mL、石油醚3 mL，涡旋1 min，超声处理10 min，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液1 mL，加5%甲酸溶液20 μL，石油醚1 mL，涡旋30 s，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液，过0.22 μm微孔滤膜，滤液作为待测溶液），结果如图3所示，四种化妆品样品在5.89 min左右均有不同程度的响应，但经过监测离子的丰度比对比确定四种化妆品样品中不含丙烯酰胺。图3 不同样品分析结果（点击查看大图）快速分析方法建立为进一步节省分析时间，进行快速分析，在原流速0.3 mL/min不变的情况下更换2.1内径色谱柱，对分析梯度条件进行优化后，分别使用CAPCELL CORE C18和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，对丙烯酰胺标准品进行分析。结果如图4、5所示，两支色谱柱均可在5 min内完成整体分析，其中150 mm柱长的CORE C18色谱柱分析丙烯酰胺保留时间1.36 min，柱长100 mm的ADME-HR色谱柱分析丙烯酰胺保留时间1.77 min。图4 丙烯酰胺标准品分析色谱图 CORE C18图5 丙烯酰胺标准品分析色谱图 ADME-HR【色谱条件】色谱柱：CC C18 S2.7; 2.1×150谱谱谱：CP ADME-HR S2; 2.1×100流动相：A，0.05%甲酸；B，甲醇B% 5%(0 min)-5%(2 min)-100%(2.1 min)-100%(3min)-5%(3.1min)-5%(5min)流动速：0.30 mL/min柱动温：室温检动测：AB SCIEX QTRAP 5500样动品：10 ppb进样量：10 μL在上述条件下进行线性实验的考察。结果如图6、7所示，丙烯酰胺在2.0~200 ng/mL浓度范围内线性良好，CORE C18色谱柱分析结果中相关系数r=0.9993＞0.995，ADME-HR色谱柱分析结果中相关系数r=0.9963＞0.995，均满足标准要求。图6 CORE C18-2.1图7 ADME-HR-2.1在上述条件下对化妆水、乳液、面霜、BB霜等化妆品样品进行分析（样品处理：称取样品0.3 g，加水3 mL、石油醚3 mL，涡旋1 min，超声处理10 min，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液1 mL，加5%甲酸溶液20 μL，石油醚1 mL，涡旋30 s，于12000 r/min离心10 min，取下层水溶液，过0.22 μm微孔滤膜，滤液作为待测溶液），结果如图8、9所示，分析结果经过监测离子的丰度比对比确定四种化妆品样品中不含丙烯酰胺。图8 样品分析结果 CORE C18-2.0（点击查看大图）图9 样品分析结果 ADME-HR-2.0（点击查看大图）结      论综上，在检验方法原条件下，使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×150 mm色谱柱，可得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果，四种化妆品样品中均不含丙烯酰胺，符合要求。使用CAPCELL CORE C18 S2.7; 2.1×150 mm和CAPCELL PAK ADME-HR S2; 2.1×100 mm色谱柱，在原条件基础上对梯度条件进行优化后，可在5 min内完成检测，同样可以得到丙烯酰胺标准品及四种化妆品样品良好分析结果。

近日，国家药品监督管理局发布了修订《化妆品安全技术规范（2015年版）》中原有的5项检验方法，自2024年3月1日起，化妆品注册、备案及抽样检验相关检验应当采用新发布的检验方法。新增14项检验方法，纳入《化妆品安全技术规范（2015年版）》，自通告发布之日起实施。对应新的检验方法，今天给大家带来的是“化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法”的数据分享。使用CAPCELL PAK MGIII C18色谱柱可以得到α-熊果苷、β-熊果苷相对较好的分离，目标峰线性、回收率良好。使用CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，对色谱条件做一些调整后，方法验证可得到良好分析结果，线性、回收率良好，同时α-熊果苷和β-熊果苷的分离度可达到3.58，并缩短了整体分析时间。01不同保留机理色谱柱的比较首先使用不同保留机理的色谱柱对α-熊果苷和β-熊果苷的分离效果进行比较。在常规C18体系下，CAPCELL PAK C18 MGIII可以得到较好的分离效果，而使用键合金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，在相同液相条件下能得到更好的分离效果，分析结果如图1所示。图1  C18 MGIII和ADME-HR色谱柱α-熊果苷、β-熊果苷对照品分析结果对比图【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250动动动动CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250流动相：水 / 甲醇 = 95 / 5流动速：0.5 mL/min柱动温：20 °C检动测：激发波长：292；发射波长：337样动品：α-熊果苷20 μg/mL, β-熊果苷10 μg/mL  (溶剂为甲醇)进样量：5 μL02参考检验方法得到的结果参考检验方法中推荐的色谱柱类型和规格，使用CAPCELL PAK C18 MGIII色谱柱对标准品、乳液样品和化妆水样品进行分析，可获得良好的分析结果。图2  MGIII色谱柱分析结果-标准溶液1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚表1  MGIII色谱柱标准溶液积分结果表【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250流动相：A，水；B，甲醇B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)流动速：0.5 mL/min柱动温：20 °C检动测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318。样动品：α-熊果苷2 μg/mL，β-熊果苷2 μg/mL，氢醌0.2 μg/mL，苯酚0.4 μg/mL (溶剂为甲醇)。进样量：5 μL标准曲线用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9997~1.0000，测试结果如表2所示。表2  α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的线性方程、线性范围和相关系数回收率按照标准方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验，α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20μg，氢醌添加量为2μg，苯酚添加量为4μg。对样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，分析谱图如图4和图5所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为91.3%~108.9%，回收率良好。图3  化妆水样品和化妆水加标样品分析图1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚图4 乳液样品和乳液加标样品分析图1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250流动相：A，水；B，甲醇B% 5%(0min)-5%(21min)-45%(22min)-50%(43min)-50%(48min)-100%(48.1min)-100%(50min)-5%(50.1min)-5%(60min)流动速：0.5 mL/min柱动温：20 °C检动测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318。样动品：称取样品1.0 g（精确到0.001 g），置10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL，在涡旋混匀器上高速振荡30 s，使样品与提取溶剂充分混合。密塞，超声提取20 min，静置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000 r/min）5 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。进样量：5 μL03使用CP ADME-HR的结果基于α-熊果苷和β-熊果苷差向异构的化学性质，使用键合金刚烷基团的CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，在检验方法的液相条件下能得到更好的分离效果，但保留时间较长，和氢醌峰接近，所以检验方法中的梯度条件不适合此款色谱柱。尝试在检验方法的基础上对色谱条件进行调整，使目标峰能够获得更好的分离。通过相应的方法学验证后，证实新方法下线性、回收率良好，同时α-熊果苷和β-熊果苷的分离度可达到3.58，并缩短了测试时间。图5  ADME-HR色谱柱分析结果-标准溶液1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚表3  ADME-HR色谱柱标准溶液积分结果表【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250流动相：A，水；B，甲醇B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)流动速：0.5 mL/min柱动温：30 °C检动测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318。样动品：α-熊果苷2 μg/mL，β-熊果苷2 μg/mL，氢醌0.2 μg/mL，苯酚0.4 μg/mL (溶剂为甲醇)。进样量：5 μL标准曲线用甲醇将固体标准品溶解稀释配制成标准工作溶液，浓度依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，绘制标准工作曲线。标准曲线在浓度范围内线性良好，线性系数r的范围为0.9998~0.9999，测试结果如表4所示。表4  α-熊果苷、β-熊果苷、氢醌和苯酚的线性方程、线性范围和相关系数回收率按照规范方法分别对化妆水和乳液样品进行加标回收实验，α-熊果苷和β-熊果苷添加量为20 μg，氢醌添加量为2 μg，苯酚添加量为4 μg。对样品和加标样品进行分析，计算得到回收率结果，分析谱图如图6和图7所示。化妆水样品和乳液样品加标回收率范围为88.4%~99.9%，回收率较好。图6 化妆水样品和化妆水加标样品分析图1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚图7 乳液样品和乳液加标样品分析图1.β-熊果苷  2.α-熊果苷  3.氢醌  4.苯酚【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250流动相：A，水；B，甲醇B% 13%(0min)-13%(15min)-45%(15.1min)-49%(35min)-49%(36min)-100%(36.1min)-100%(40min)-13%(40.1min)-13%(50min)流动速：0.5 mL/min柱动温：30 °C检动测：α-熊果苷、β-熊果苷的激发波长为292，发射波长为337；氢醌的激发波长为298，发射波长为345；苯酚的激发波长为：280，发射波长为318。样动品：称取样品1.0 g（精确到0.001 g），置10 mL具塞比色管中，加入甲醇至10 mL，在涡旋混匀器上高速振荡30 s，使样品与提取溶剂充分混合。密塞，超声提取20 min，静置至室温，取适量样品溶液离心（转速14000 r/min）5 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测溶液。必要时用适量甲醇稀释。进样量：5 μL‍‍结      论‍‍综上，参考《化妆品安全技术规范 （2015年版）》第四章理化检验方法中8.2化妆品中α-熊果苷等4种原料的检验方法，使用CAPCELL PAK C18 MGIII S5;4.6×250色谱柱可以得到α-熊果苷和β-熊果苷较好的分离，目标峰线性和回收率良好。使用CAPCELL PAK ADME-HR S5;4.6×250色谱柱，对检验方法进行调整后，可得到良好分析结果，线性和回收率良好，同时α-熊果苷和β-熊果苷的分离度可达到3.58，并缩短了测试时间。

今天又给大家带来两份用户反馈的实验数据一、头孢泊肟酯的分析，参考《中国药典》（2020版），头孢泊肟酯【异构体】二、注射用头孢呋辛钠的分析，参考《中国药典》（2020版），注射用头孢呋辛钠【含量测定】实验项目名称头孢泊肟酯【异构体】的分析待测物：头孢泊肟酯异构体A；头孢泊肟酯异构体B；相邻杂质参考方法：《中国药典》（2020版），头孢泊肟酯【异构体】色谱条件：色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S3, 4.6x100流动相：水/甲醇 = 55/45柱温：40 ℃流速：0.3 mL/min进样量：20 μL样品情况：按头孢泊肟酯异构体A、头孢泊肟酯异构体B的顺序出峰，头孢泊肟酯异构体A与头孢泊肟酯异构体B峰之间的分离度应大于4.0；头孢泊肟酯异构体A峰与相邻杂质峰、头孢泊肟酯异构体B峰与相邻杂质峰之间的分离度均应符合要求。样品谱图和实验数据：图1 CAPCELL PAK C18 MGII S3, 4.6x100保留时间：13-17分钟图2 某进口品牌色谱柱C18 5μm 4.6x150保留时间：20-29分钟图3 某进口品牌色谱柱C18 5μm 4.6x250保留时间：53-69分钟结论：筛选多家品牌色谱柱，进行分析效果对比，最终选定大阪曹達CAPCELL PAK C18 MGII (S-3) 4.6X100色谱柱，该色谱柱既可满足药典方法，又节省了宝贵时间。实验项目名称注射用头孢呋辛钠【含量测定】的分析待测物：头孢呋辛；去氨甲酰头孢呋辛参考方法：《中国药典》（2020版），注射用头孢呋辛钠【含量测定】色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5, 4.6×250流动相：醋酸盐缓冲液/乙腈 = 86/14进样量：20 μL样品情况：供试品溶液，取本品适量，精密称定，加水适量，充分振摇使溶解并定量稀释制成每1 mL含0.1 mg的溶液。系统适用性溶液，取本品适量，加水溶解并定量稀释制成每1 mL含0.1 mg的溶液。谱图和实验数据：图4 供试品分析谱图图5 系统适用性分析谱图表1 系统适用性溶液分析结果积分表

聚乙二醇（简称：PEG）是相对分子量在200～8000或者8000以上的乙二醇高聚物的总称，分子式为HO(CH2CH2O)nH，n代表氧乙烯基的平均数。室温下相对分子量为200～600的是液体，相对分子量为1000及以上者是固体。聚乙二醇在水中具有较好的溶解性和良好的与药物及其他溶剂的相容性，相对分子量小的液体聚乙二醇可以在制剂中作为溶剂使用，相对分子量大的固体聚乙二醇可以与难溶性药物制成固体分散体，以促进药物的溶出。聚乙二醇已被中国、美国、英国等许多国家药典收载作为药用辅料，在制剂中应用十分广泛。01背景 美洛昔康几乎不溶于水，微溶于甲醇或乙醇，因此美洛昔康片剂和胶囊剂在胃肠道中的溶出速率慢导致起效慢、难以获得足够的生物利用度。聚乙二醇可以增加美洛昔康的溶解度，但在析晶工艺完成后需要过滤除去，其残留量可能会影响有效性和安全性。因此，准确监控制剂中聚乙二醇400的含量，对生产工艺和产品的质量控制有着重要意义。02现有检测方法 目前通用的标准方法目前通用的国际标准方法是采用二相萃取的weibull 法，该方法的缺点是操作频繁，温度控制严格，测定周期长（大约需8～10 h），并且灵敏度不高。中国药典2020 年版四部（3202 通则）中用比色法测定聚乙二醇含量，该方法的同样操作繁琐，方法灵敏度受聚乙二醇分子量影响，受具有能与钡离子和碘离子形成复合物的其他辅料和在500 nm附近有紫外吸收的辅料很强的干扰，该方法通常不适用于含有多种辅料的药物制剂中对聚乙二醇含量的测定，且线性范围窄（10 μg/mL～50 μg/mL）。其他的检测方法其他采用高效液相色谱测定聚乙二醇含量的方法，均使用十八烷基硅烷键合硅胶填料的色谱柱进行反相洗脱。聚乙二醇由于含有较多的羟基和氧孤对电子，使其具有较大的极性、较强的亲水性，易形成氢键，其与色谱柱的亲和力很弱，而且样品中的水分和其他溶剂及辅料也会干扰聚乙二醇的出峰，分离度欠佳、峰型差、响应低、保留时间短、长时间进样柱压升高等，影响定量结果。03本发明 提供了一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量的检测方法，该检测方法具有良好的测定准确度、而且灵敏度高，定量限低，检测范围宽，特别适用于聚乙二醇400残留的含量检测。该检测方法解决了现有技术中分离度不佳、峰型差、响应低、以及长时间进样柱压升高的缺陷。04具体的 通过利用样品中聚乙二醇400各组分疏水性的不同，通过优化样品前处理和色谱条件，使用合适的色谱柱填料的粒径与孔径实现优质分离和响应，用示差折光检测器鉴别聚乙二醇400的色谱峰，并通过外标法定量样品中聚乙二醇400的绝对含量和相对含量。05技术方案  本发明的目的可通过以下技术方案来实现一种美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量检测方法，包括下述操作步骤：STEP 1 反相键合色谱柱（CAPCELL PAK ADME-HR，键合金刚烷（ADME）基团的硅胶填料），规格为250 mm×4.6 mm 5 μm；采用等度洗脱，以甲醇（体积分数为28%～32%）与磷酸水溶液（水用磷酸调pH值2.8～3.2）混合液为流动相；示差折光检测器（waters 2414 RI Detector），检测器温度40 ℃；柱温38～42 ℃；流速范围1.1～1.3 mL/min；进样量100 μL，磷酸水溶液（水用磷酸调pH 值为1.8～2.2）为稀释剂。STEP 2将与样品中的待测聚乙二醇400分子量相等或相近的聚乙二醇400对照品，用稀释剂溶解并稀释，配成对照品溶液。STEP 3将所述对照品溶液直接进样，记录检测器的峰信号（峰信号或峰面积为色谱图中聚乙二醇400前三个不受干扰的组分峰的峰面积之和）。STEP 4精密称定待测样品150 mg，置20 mL西林瓶中，加入10 mL溶剂振荡5 min，离心10000 rpm，10 min后，取上清液用0.45 μm滤头（Hydrophilic PTFE 材质）过滤，取滤液于85 ℃水浴30 min，滤液冷却至室温后用0.45 μm滤头过滤，舍弃初滤液约1 mL，取续滤液作为样品溶液。利用所述对照品溶液中聚乙二醇400的峰面积与对应的对照品溶液的浓度以及样品中聚乙二醇400在检测器输出的信号峰面积，按外标法计算样品中聚乙二醇400的含量。06实施例 实施例1（对比例）测定聚乙二醇400灵敏度溶液和对照品溶液的色谱图，该对照品为购自南京威尔药业集团股份有限公司，分子量为400。图1 实施例1的聚乙二醇400对照品溶液色谱图图2 实施例1的聚乙二醇400定量限溶液色谱图实施例2、3、4实施例2、3和4分别为不同来源的美洛昔康粉末制剂，该药物含有治疗作用的药物美洛昔康和辅料，辅料中残留一定量的聚乙二醇400，分子量为400。图3 实施例2的美洛昔康粉末制剂色谱图图4 实施例3的美洛昔康粉末制剂中聚乙二醇400含量测定色谱图图5 实施例4的聚乙二醇400对照品峰面积与浓度的线性关系图07有益效果 与现有技术相比，本发明具有下述有益效果（1）通过选择合适的色谱柱，优化样品前处理方法和色谱条件，可以延长聚乙二醇400各组分的保留时间并提高组分之间分离度，改善聚乙二醇400各组分峰型，提高方法灵敏度，定量限低，检测范围宽，特别适用于聚乙二醇400残留的含量检测；（2）在10.3276 μg/mL～516.3800 μg/mL加标浓度范围内的回收率范围为88.6%～106.9%，均能满足中国药典对方法验证中回收率的要求80.0%～120.0%，进一步表明了本发明的检测方法具有良好的测定准确度；（3）检测方法中，采用“将待测样品用稀释剂溶解，离心，过滤，水浴，再过滤”的样品前处理，可有效消除难溶性颗粒，解决长时间进样导致柱压升高问题。

又到了我们可爱的热心用户反馈的数据分享时间~今天给大家带来两份实验数据一、复方丹参片中三七的分析，参考《中国药典》（2020版），复方丹参片【含量测定】三七二、伤科跌打片中大黄的分析，参考国家药品标准WS3-B-0925-91-4，伤科跌打片【含量测定】大黄实验项目名称：复方丹参片中三七的分析待测物：三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；人参皂苷Re；人参皂苷Rb1参考方法：《中国药典》（2020版），复方丹参片【含量测定】三七色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：A，乙腈  B，水柱动温：30 ℃流动速：1.0 mL/min检动测：UV 203 nm进样量：20 μL理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000，人参皂苷Rg1与人参皂苷Re的分离度应大于1.8。供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约1 g，精密称定，精密加入70%甲醇50 ml称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。‍‍对照品分析谱图对照品积分表供试品分析谱图供试品积分表实验项目名称：复方丹参片中三七的分析待测物：大黄素，大黄酚参考方法：国家药品标准WS3-B-0925-91-4，伤科跌打片【含量测定】大黄色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：CAPCELL CORE C18 S2.7; 4.6×100柱谱温：30 ℃流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（82：18）流谱速：1.0 mL/min检谱测：UV 254 nm进样量：2 μL理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。供试品溶液的制备：取装量差异项下本品适量，研细，取约1 g，精密称定，加入甲醇25 mL，称定重量， 加热回流0.5 小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液2 mL，置烧瓶中，挥去溶剂，加 2.5 mol/L硫酸溶液10 mL，超声处理5 分钟，再加三氯甲烷10 mL，加热回流1 小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2次，每次8 mL，合并三氯甲烷液，用无水硫酸钠脱水，移至锥形瓶中，挥去三氯甲烷，残渣精密加甲醇10 mL，称定重量，置水浴中微热使溶解，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。对照品分析谱图‍‍供试品分析谱图供试品积分表

8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠，简称SNAC，是一种氨基酸衍生物吸收促进剂，能促进肝素及人生长激素等多种蛋白质类药物溶液的口服吸收，且可用于治疗胃肠道疾病，具有较好的应用前景。用户提供了SNAC [8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠] 的系统适用性溶液（液体），并反馈使用其他公司的C18（4.6*250mm，5μm）色谱柱，按照现有方法进行分析时，可以得到满足分离要求的分析结果，但目前使用的色谱柱耐用性一般。希望大曹三耀实验室可以推荐一款在满足分离要求的同时寿命较好的色谱柱。用户提供的分析方法中，流动相中缓冲盐的pH值为6.70-6.75，起始有机相比例为10%，实验室首先选用了可以在100%水相下稳定使用的CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱，和同样可以在100%水相下稳定使用的特殊金刚烷基键合的CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱，按照用户提供的分析方法，分别对系统适用性溶液进行了分析。具体分析结果如下：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×250mm，按照用户提供的分析方法，对系统适用性溶液进行了分析，结果见图1和表1。各成分峰之间的分离度均大于1.5，满足用户要求。图1  AQ色谱柱分析结果表1  各峰积分结果表色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250流动相：A：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾2.72 g，加水1000 mL溶解，用2  mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.70-6.75）；B：乙腈            B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)流动速：0.8 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 230 nm样动品：系统适用性溶液（用户提供）进样量：10 µLCAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6mm i.d.×250mm，按照用户提供的分析方法，对系统适用性溶液进行了分析，结果见图2和表2。各成分峰之间的分离度均大于1.5，满足用户要求。图2  ADME-HR色谱柱分析结果表3  各峰积分结果表色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6×250流动相：A：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾2.72 g，加水1000 mL溶解，用2  mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.70-6.75）；B：乙腈流动相：B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)流动速：0.8 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 230 nm样动品：系统适用性溶液（用户提供）进样量：10 µL从以上实验结果可知，CAPCELL PAK C18 AQ和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱均能满足用户分析方法中对8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠的分离要求，并且均可以在100%水相下使用，pH值使用范围均为2-9。为了更好的延长色谱柱使用寿命，尝试降低流动相pH值。使用0.02 mol/L的磷酸缓冲盐（pH值约为4.6），其他条件不变，对系统适用性溶液进行了分析，结果见图3和表3。其中，前两个峰的分离度为1.327，从峰高判断，这两个峰的出峰顺序可能发生了翻转，其他峰之间的分离度均大于1.5，但保留时间都有所延长，所以，流动相的pH值对出峰顺序、保留时间和分离度都有较大的影响，此时，如果考虑调整pH值，需要相应的调整洗脱梯度才可能获得良好的分析结果。图3  AQ色谱柱分析结果（调整缓冲盐pH值后）表3  各峰积分结果表色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250流动相：A：0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾2.72 g，加水1000 mL溶解）；B：乙腈流动相：B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)流动速：0.8 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 230 nm样动品：系统适用性溶液（用户提供）进样量：10 µL结     论按照客户提供的分析方法，使用CAPCELL PAK C18 AQ和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱对8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠进行分析，均能得到满足分离要求的分析结果，由于该方法使用C18色谱柱，并且起始有机相比例较低，所以推荐使用CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱进行分析。考虑到色谱柱寿命、流动相中缓冲盐的pH值和初始有机相的比例等因素，尝试将流动相中的水相调整为0.02 mol/L的磷酸缓冲盐（不调节pH值，其pH值约为4.6），其他条件不变进行分析，此时系统适用性溶液中前两个峰的分离度下降为1.327，且从峰高判断，这两个峰的出峰顺序可能发生了翻转，其他峰之间的分离度均大于1.5，但保留时间都有所延长。流动相的pH值对出峰顺序、保留时间和分离度都有较大的影响，也可根据具体情况对流动相条件进一步优化。

1. 盐酸克林霉素含量测定  参考《中国药典》（2020版）盐酸克林霉素 M.W. 461.444按照20版药典盐酸克林霉素含量测定项下方法，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，对供试品进行了分析，结果如图1图2所示。供试品分析结果中，主峰保留时间11.013min，与相对保留时间0.8的7-差向克林霉素峰（8.988min）分离度为6.17，相对保留时间0.65的克林霉素B峰（7.247min）与7-差向克林霉素峰分离度为6.817，均能够满足药典分离度不低于3的要求。图1 盐酸克林霉素分析结果图2 局部放大图【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：以磷酸二氢钾溶液（每1 mL中含磷酸二氢钾6.8 mg，用25%的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5）/ 乙腈 = 55 / 45流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 210 nm浓动度：供试品溶液 1 mg/mL（甲醇）进样量：20 µL结     论使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱可在药典条件下，实现盐酸克林霉素含量测定分析，分离度及保留时间符合药典要求。2. 碘海醇水解物的分析客户提供了碘海醇水解物（固体），并反映使用Y公司的ODS-AQ柱做该项目色谱柱寿命短，希望本实验室能够筛选出对碘海醇水解物具有良好分离，同时还能有良好的使用寿命的色谱柱。使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行了分析，按照客户提供方法，对碘海醇水解物的分析结果见图3和表1。主峰前分离出两个比较明显的杂质峰，且两个杂质以及杂质与主峰之间的分离度均大于1.5。图3  C18 MGII色谱柱分析结果表1   各峰积分结果表【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S3; 4.6×250流动相：A，0.05%三氟乙酸水   B，三氟乙酸 / 乙腈 / 甲醇 = 0.05 / 50 / 50         B% 1%(0 min)-10%(42 min)-75%(53 min)-75%(58 min)-1%(58.01 min)-1%(70 min)流动速：0.6 mL/min温动度：45 ℃检动测：UV 254 nm进样量：15 µL浓动度：1 mg/mL（溶剂为甲醇：水=1：99）结     论使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，按照客户提供分析方法，对碘海醇水解物供试品进行分析，分离度较好。流动相条件中，梯度起始有机相比例仅为1%，因此在不同设备上可能会出现保留时间和分离度上略有差异的情况。建议适当调整梯度中有机相的起始比例，并在色谱柱使用完后及时进行冲洗，以减少高水相流动相可能对色谱柱带来的损伤。

随着研究的不断深入，研究者们对于样品的检测方法也越来越多样，除了最常见的UV、RI等检测器以外，气溶胶检测器逐渐被人们认识并被广泛使用，中国药典中也已收录使用气溶胶检测器的项目。通用型气溶胶检测器水凝粒子激光计数检测器NQAD一般来说，选择性和灵敏度是评价检测器最重要的两个要素。NQAD作为气溶胶检测器的一种，适用于几乎所有物质（挥发性物质除外）的检测，如缺乏紫外吸收的物质（如：表面活性剂、脂肪酸、磷脂、胺类、氨基酸、甾类化合物、胆固醇、蛋白质、肽类、糖类、金属离子型化合物等）均可以使用NQAD进行高灵敏度检测。NQAD适用化合物1) 没有紫外吸收的物质2) 离子化比较难的物质3) 没有电化学活性的物质4) 性质不明的物质等NQAD特点检测适用范围广：几乎所有不挥发和半挥发物质都能检测；高灵敏度：达到ng级的高灵敏度（较ELSD高1-2个数量级）；质量响应型：仅依赖千质量的信号响应一致性，与化学性质无关；线性响应范围宽：动态监测范围可达4个数量级，从ng到µg；兼容性强：可与各主流HPLC、UHPLC系统实现数据交互；环境稳定性优异：几乎不受外界环境（如温度）变动的影响 ；经济环保：可仅使用压缩空气， 也可使用氮气；操作直观：触摸屏面板操作；维护简单：仅需每半年更换一次小配件“wick”。在科研领域和国际市场上，蒸发光散射检测器（ELSD-Evaporative Light Scattering Detection）、电雾式检测器（CAD-Charged Aerosol Detector）和水凝粒子激光计数检测器（NQAD-Nano Quantity Analyte Detector）都被定义为基于相同检测原理的气溶胶检测器（Aerosol-based Detectors）。气溶胶检测器通常是采用气体（通常是氮气）通过喷雾方法转将液相色谱流出物形成体积极小，数量众多的雾滴，流动相和其他挥发性成分在蒸发器中汽化，形成不挥发或难挥发物质颗粒。不同的气溶胶检测器使用不同的方法来检测这些产生的粒子。蒸发光散射检测器、电雾式检测器和水凝粒子激光计数检测器的检测原理如图1-3所示①。图1 蒸发光散射检测器检测原理示意图图2 电雾式检测器检测原理示意图图3 水凝粒子激光计数检测器检测原理示意图水凝粒子激光计数检测器（NQAD）使用激光脉冲计数待测物颗粒进行定量，响应值和待测物的量呈线性关系，而非指数关系或需要经过对数转换或用二次函数计算②③，是在技术上独树一帜的气溶胶检测器，应用前景广阔，可以帮助研究者得到更全面、更准确的样品检测结果，是提升实验室检测水平的不二之选。和传统气溶胶型检测器相似的是，NQAD的检测过程中首先会在雾化室中将样品雾化，之后进入漂移管中将挥发性组分挥发，形成气溶胶颗粒；其次，将气溶胶颗粒通过NQAD的核心组件WCPC（水凝粒子激光计数器，如图4所示）对其附加过饱和水蒸气进行体积增大的过程；然后，通过激光计数器对长大后的粒子进行计数；最后，通过激光计数器所得数值与待测物质量浓度成正比，从而完成定量。图4 WCPC结构示意图因此，NQAD检测的响应值只和样品形成的气溶胶颗粒的尺寸和数量相关，而与样品的化学性质无关。和其他气溶胶型检测器不同，NQAD的响应值（IR）可以在一定范围内和样品质量浓度（C）呈一次线性关系，即C = aIR + b，响应系数a和b与流动相组成和物质形成气溶胶颗粒的特性相关，对于大部分化合物的动态线性范围可以达到3-4个数量级。NQAD适用方法NQAD是一种基于气溶胶原理的通用型检测器，用于与液相/超临界色谱仪的联用，适用于几乎所有的非挥发性物质和半挥发性物质。可以用于HPLC或UHPLC的等度和梯度洗脱，并适用于反相、正相、亲水作用、离子交换、体积排阻、超临界等色谱分离模式。通过检测器所记录的色谱峰面积以外标法、内标法、面积归一化等方法对目标化合物进行定量。由于NQAD的定量基于粒子计数原理，其峰面积的大小仅与化合物进样质量有关，因此定量计算时无须对峰面积进行如ELSD和CAD一样的对数或二次函数转换，同时容易获得更宽的动态线性响应范围。由于NQAD响应不依赖分子结构，对各种化合物的响应因子具有相对的一致性，同时结合更宽的线性响应范围，在应用时，容易获得更加准确的结果，避免响应因子差异对结果准确性的影响，且可在一定范围内省去校正因子计算的步骤，提高效率。在不使用标准品的情况下，也可进行化合物的辅助定量。了解更多NQAD详细信息请在推送下方留言处，留下您的快递信息，我们将为您递送一份NQAD样本。参考文献：①Aerosol-based detectors for liquid chromatography，Journal of Chromatography A，1421(2015)68–81②HPLC_NQAD和HPLC_ELSD法测定硫酸卡那霉素注射剂的含量，药物分析杂志，2014，34(4)③氨基糖苷类抗生素检测技术的发展，药学与临床研究，2022 Oct;30(5)

按照《GB 5009.120-2016 食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》中方法，对丙酸标准品及实际样品（面包和调味料样品）进行了测定。1. 标准品分析结果国标方法中流动相使用纯水相，所以选用可耐受100%水相的高极性C18柱CAPCELL PAK C18 AQ按照标准方法对丙酸标准品进行了分析。在CAPCELL PAK C18 AQ S5;4.6 mmi.d.×150 mm色谱柱上丙酸保留时间为8.2 min，理论塔板数12537，不对称因子1.15（如图1所示），能够获得良好分析结果。同时，按照国标方法中要求，对丙酸系列浓度标准品（0.04-0.5 mg/mL）进行分析，得到良好线性结果，r=0.9999（如图2所示）。图1  标准品分析结果图2  线性分析结果【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×150流动相：1.5 g/L磷酸氢二铵，磷酸调节pH为2.7流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 214 nm浓动度：0.3 mg/mL进样量：20 µL2. 实际样品分析结果按照5.2.2直接浸提法，对面包和调味料样品进行了前处理，并进样分析（分析结果如图3所示），选取的两种实际样品均未检测出丙酸峰。图3 样品分析结果【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×150流动相：1.5 g/L 磷酸氢二铵，磷酸调节pH为2.7流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 214 nm浓动度：5.2.2直接浸提法:准确称取5 g试样至100 mL烧杯中,加水20 mL,加入1 mol/L磷酸溶液0.5 mL,混匀,经超声浸提10 min后,用1 mol/L磷酸溶液调pH为3左右,转移试样至50 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。将试样全部转移至50 mL具塞塑料离心管中, 10000 r/min离心10 min,取上清液,经0.25 μm微孔滤膜过滤。进样量：20 µL3. 分析注意事项探讨（1）在进样过程中发现，由于该分析方法为等度方法且为纯水相流动相，样品基质中有较多成分无法洗脱，对后续样品分析及色谱柱寿命均可能存在影响，因此尝试通过梯度条件加入有机相对色谱柱进行冲洗（分析结果如图4所示），可以看到在高比例有机相冲洗时，大量基质峰被洗脱出来。图4 梯度条件分析结果【色谱条件】色谱柱： CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×150流动相：A：1.5 g/L 磷酸氢二铵，磷酸调节pH为2.7，B：乙腈动动动动B  0%(0 min)-0%(8 min)-70%(8.1 min)-70%(12 min)-0%(12.1 min)-0%(20 min)流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 214 nm浓动度：5.2.2直接浸提法:准确称取5 g试样至100 mL烧杯中,加水20 mL,加入1 mol/L磷酸溶液0.5 mL,混匀,经超声浸提10 min后,用1 mol/L磷酸溶液调pH为3左右,转移试样至50 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀。将试样全部转移至50 mL具塞塑料离心管中, 10000 r/min离心10 min,取上清液,经0.25 μm微孔滤膜过滤进样量：20 µL（2）为了在较短时间内即获得良好检测结果，本实验使用了150 mm柱长耐纯水C18 AQ色谱柱。若更换为国标要求使用的250 mm柱长色谱柱，同样能够获得良好分析结果，保留时间为12.5 min，可根据实际分析需求选择柱长。结     论综上所述，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×150mm或250mm色谱柱，按照《GB 5009.120-2016 食品安全国家标准 食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》中方法，能够获得良好检测结果，满足标准要求。《GB 5009.120-2016食品中丙酸钠、丙酸钙的测定》推荐用柱F92044 CAPCELL PAK C18 AQ

地西他滨是一种天然2′-脱氧胞苷酸的腺苷类似物，通过抑制DNA甲基转移酶，减少DNA的甲基化，从而抑制肿瘤细胞增殖以及防止耐药的发生，为目前已知最强的DNA甲基化特异性抑制剂，属于S期细胞周期特异性药物，适用于治疗骨髓增生异常综合征。胞苷、5-氮杂胞苷、地西他滨、阿糖胞苷等胞苷类似物均为核酸抗癌药物，在白血病治疗中起到重要作用。使用CAPCELL PAK ADME-HR S5色谱柱、CAPCELL PAK 高极性C18色谱柱及其他公司C18色谱柱，在反相模式下对四种胞苷类化合物进行了分析对比。1. 胞苷(50 μg/mL)Cytidine (M.W. 243.2)2. 5-氮杂胞苷(50 μg/mL)5-Azacytidine (M.W. 244.2)3. 地西他滨(50 μg/mL)5-Aza-2’-deoxycytidine (M.W. 228.2)4. 阿糖胞苷(50 μg/mL)Cytarabine (M.W. 243.2)同时具有高表面极性和适当疏水性的CP ADME-HR色谱柱，在保留能力上与高极性C18色谱柱近似，同时又体现出与C18色谱柱不同的分离选择特性，从而得到了良好的分离结果（如下图所示）。【色谱条件】色谱柱: 5 μm, 4.6 mm i.d. x 150 mm流动相: 10 mmol/L HCOONH4流动速: 1 mL/min温动度: 40 ℃检动测: UV 260 nm进样量: 5 μL溶动剂: H2O同时，也使用HILIC模式对以上4个胞苷类化合物进行了分析，在HILIC模式下的色谱柱分离选择特性与反相模式大相径庭，胞苷的保留相较地西他滨和5-氮杂胞苷更强（如下图所示）。【色谱条件】色谱柱: PC HILIC S5; 4.6 mm i.d. x 150 mm流动相: 10 mmol/L HCOONH4 / CH3CN = 10 / 90流动速: 1 mL/min温动度: 40 ℃检动测: UV 260 nm进样量: 5 μL溶动剂: 70 vol% CH3CN结     论综上所述，在反相模式下分析胞苷、5-氮杂胞苷、地西他滨和阿糖胞苷时，CAPCELL PAK ADME-HR比C18色谱柱表现出更好的分离效果和不同的分离选择特性，可以得到更好的分析结果；在HILIC模式下，PC HILIC色谱柱能够对该类化合物获得良好保留，同时准确识别了结构中的差异部分并获得良好分离。胞苷类化合物分析推荐柱反相模式 F93374 CP ADME-HR S5; 4.6 x 150HILIC模式 F93115 PC HILIC S5; 4.6 x 150

螺内酯（Spironolactone）又名螺瑞酮、安体舒通，是一种低效利尿剂，其结构与醛固酮相似，为醛固酮的竞争性抑制剂。由于螺内酯仅作用于远曲小管和集合管，对肾小管其他各段无作用，故利尿作用较弱；另外，螺内酯对肾小管以外的醛固酮靶器官有作用，也是治疗高血压的辅助药物。按照《中国药典》（2020版），使用CAPCELL PAK C8 DD和C8 UG120色谱柱进行有关物质的分析，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行含量测定的分析，具体实验结果如下：1. 有关物质药典中螺内酯有关物质项下分析方法，要求使用C8色谱柱，以乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74为流动相，流速1.8 mL / min。系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中（254 nm），螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度应大于1.4，对照溶液（2）色谱图中（254 nm）主峰的信噪比应大于6。螺内酯 (M.W. 416.57)Spironolactone坎利酮 (M.W. 340.46)Canrenone分别使用两款CP C8色谱柱对系统适用性溶液和对照溶液（2）进行了分析。需要注意的是，由于流速为1.8 mL / min，使用250 mm柱长的色谱柱时压力较高，所以我们选择使用150 mm柱长的色谱柱进行分析。1.1 CAPCELL PAK C8 DD 色谱柱分析结果系统适用性溶液和对照溶液（2）的分析结果见图1、2和表1、2。系统适用性溶液分析中，螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度为2.857，能够满足药典中分离度大于1.4的要求；对照溶液（2）分析中，主峰的信噪比为18.90，满足药典中大于6的要求。图1  系统适用性溶液分析结果（C8 DD）表1  各峰积分结果表图2  对照溶液（2）分析结果（C8 DD）表2  各峰积分结果表色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C8 DD S5; 4.6×150流动相：乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74流动速：1.8 mL / min温动度：35 °C检动测：PDA 254 nm浓动度： 系统适用性溶液：螺内酯和坎利酮均为25 μg / mL对照溶液（2）：1.25 μg / mL（少量四氢呋喃溶解后，流动相稀释）进样量：20 µL1.2 CAPCELL PAK C8 UG120 色谱柱分析结果系统适用性溶液和对照溶液（2）的分析结果见图3、4和表3、4。系统适用性溶液分析中，螺内酯峰与坎利酮峰之间的分离度为1.681，能够满足药典中分离度大于1.4的要求；对照溶液（2）分析中，主峰的信噪比为20.07，满足药典中大于6的要求。图3  系统适用性溶液分析结果（C8 UG120）表3  各峰积分结果表图4  对照溶液（2）分析结果（C8 UG120）表4  各峰积分结果表色谱条件：色谱柱：CAPCELL PAK C8 UG120 S5; 4.6×150流动相：乙腈 / 四氢呋喃 / 水 = 8 / 18 / 74流动速：1.8 mL / min温动度：35 °C检动测：PDA 254 nm浓动度： 系统适用性溶液：螺内酯和坎利酮均为25 μg / mL对照溶液（2）：1.25 μg / mL（少量四氢呋喃溶解后，流动相稀释）进样量：20 µL2. 含量测定药典中螺内酯含量测定项下分析方法，要求使用C18色谱柱，以乙腈 / 水 = 50 / 50为流动相。系统适用性要求：理论板数按螺内酯峰计算不低于3000，螺内酯峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱对对照品溶液进行了分析，结果见图5、6和表5。螺内酯峰理论板数为19743，满足药典中不低于3000的要求；螺内酯峰与其后杂质峰之间的分离度为4.664，满足药典要求。图5  对照品溶液分析结果（C18 MGII）图6  图5局部放大图表5  各峰积分结果表HPLC Conditions ：色谱柱： CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：乙腈 / 水 = 50 / 50流动速：1.0 mL / min温动度：35 °C检动测：PDA 238 nm浓动度：对照品溶液：25 μg / mL（溶剂为流动相）进样量：20 µL结     论综上所述，按照《中国药典》（2020版）中螺内酯有关物质项下分析方法，使用CAPCELL PAK C8 DD和C8 UG120色谱柱，均可以得到满足药典要求的分析结果。按照《中国药典》（2020版）中螺内酯含量测定项下分析方法，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，也可以得到满足药典要求的分析结果。2020年版《中华人民共和国药典》螺内酯有关物质分析推荐用柱F90984 CP C8 DD S5; 4.6×150F71503 CP C8 UG120 S5; 4.6×150螺内酯含量测定推荐用柱F92533 CP C18 MGII S5; 4.6×250

《中国药典》2020版中盐酸萘替芬有关物质项下方法，要求使用C18色谱柱，以醋酸胺溶液（取醋酸胺1.154 g，加水300 mL使其溶解，加冰醋酸0.2 mL）/ 甲醇 = 30 / 70为流动相进行分析。系统适用性要求：理论塔板数按萘替芬峰计算不低于2000。盐酸萘替芬 (M.W. 323.88)Naftifine Hydrochloride按照20版中国药典盐酸萘替芬有关物质项下方法，分别使用CAPCELL PAK C18 MGII和DAISOPAK SP-100-5-ODS-P色谱柱分别对对照溶液和供试品进行了分析。CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱分析结果使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱进行了分析，对照品和供试品分析结果如图1和图2所示。对照品分析结果中，主峰保留时间16.840 min，不对称因子1.0，峰型良好，理论塔板数13466。供试品分析中主峰理论塔板数4321，与前后杂质峰分离度分别为2.68和5.10，均能够满足药典理论塔板数不低于2000要求。图1 对照品分析结果图上所示数字为保留时间、理论塔板数和不对称因子图2 供试品分析结果图上所示数字为分离度和理论塔板数HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×150流动相：醋酸胺溶液（取醋酸胺1.154 g，加水300 mL使其溶解，加冰醋酸0.2 mL）/ 甲醇 = 30 / 70流动速：1.0 mL / min温动度：35°C检动测：PDA 254 nm浓动度： 供试品溶液：取本品，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL中约含2 mg的溶液。对照溶液：精密量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1 mL中含20 µg的溶液进样量：10 µLDAISOPAK SP-100-5-ODS-P 色谱柱分析结果使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P色谱柱进行分析，对照品和供试品分析结果如图3和图4所示。对照品分析结果中，主峰保留时间23.603 min，不对称因子0.98，峰型良好，理论塔板数10620。供试品分析中主峰理论塔板数5093，与前后杂质峰分离度为2.98和5.45，同样能够满足药典理论塔板数不低于2000要求。图3 对照品分析结果图上所示数字为保留时间、理论塔板数和不对称因子图4 供试品分析结果图上所示数字为分离度和理论塔板数HPLC Conditions ：色谱柱： DAISOPAK SP-100-5-ODS-P S5; 4.6×150流动相：醋酸胺溶液（取醋酸胺1.154 g，加水300 mL使其溶解，加冰醋酸0.2 mL）/ 甲醇 = 30 / 70流动速：1.0 mL / min温动度：35°C检动测：PDA 254 nm浓动度： 供试品溶液: 取本品，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL中约含2 mg的溶液。对照溶液: 精密量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1 mL中含20 µg的溶液进样量：10 µL结     论综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII和SP-100-5-ODS-P色谱柱均可在药典条件下，实现盐酸萘替芬有关物质分析，理论塔板数高，峰型良好。2020年版《中华人民共和国药典》盐酸萘替芬有关物质项下方法推荐用柱F92532 CP C18 MGII S5; 4.6×150DP957047 SP-100-5-ODS-P; 4.6×150

用户反馈灭蝇胺残留量的检测在农残检测中作为常检测项目，但时常会出现保留时间不稳定，主峰与杂质无法分离，低浓度加标样品不出峰等问题，希望能参考《NY/T 1725-2009蔬菜中灭蝇胺残留量的测定-高效液相色谱法》进行相应的液相方法优化，从而得到稳定的实验结果。首先，尝试在NY/T原方法下，使用多元胺键合的CAPCELL PAK NH2色谱柱，对用户提供的质控样品进行分析。由于等度条件不能将样品中所有基质洗脱，会导致连续进样保留时间不稳定以及基线抬升的问题，因此，在原条件的12.5 min后添加梯度条件来增加洗脱能力，以消除样品基质残留带来的影响。在此条件下分析样品加标溶液结果如图1所示，灭蝇胺保留时间在10 min左右，但其出峰位置有较大的基质干扰，与其相邻杂质未得到良好分离，与用户反映情况一致。尝试对流动相中有机相比例进行微调，但都对分离效果改善不大。图1 CAPCELL PAK NH2色谱柱分析色谱图HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK NH2 UG80 S5; 4.6×250流动相：A：水 ；B：乙腈流动相：B% 97%(0 min)-97%(12.5 min)-50%(12.6 min)-50%(18 min)-97%(18.1 min)-97%(25 min)流动速：1.0 mL/min柱动温：35 ℃进样量：10 μL浓动度：用户提供检动测：PDA 215 nm接下来，使用另一款氨丙基键合的DAISOPAK SP-120-5-APS-P色谱柱，参考NY/T方法，对用户提供的样品加标溶液进行分析。DP SP-APS-P对灭蝇胺保留相较CP NH2更强，为消除基质残留影响，在25 min后添加梯度条件来增强洗脱。结果如图2所示，灭蝇胺保留时间19.58 min，样品加标溶液分析中灭蝇胺峰与其相邻杂质分离度1.702，可达到基线分离，且重复性良好图2 SP-APS-P色谱柱分析色谱图HPLC Conditions ：色谱柱：DAISOPAK SP-120-5-APS-P; 4.6×250流动相：A：水; B：乙腈流动相相B% 97%(0 min)-97%(25 min)-50%(25.1 min)-50%(30 min)-97%(30.1 min)-97%(40 min)流动速：1.0 mL/min柱动温：35 ℃进样量：10 μL浓动度：用户提供检动测：PDA 215 nm也尝试通过调节流动相中初始有机相比例来缩短整体保留，结果如图3所示，加标样品分析结果中灭蝇胺峰与其相邻杂质有重合趋势，无法得到良好分离结果。图3 SP-APS-P调节梯度条件后HPLC Conditions ：色谱柱：DAISOPAK SP-120-5-APS-P; 4.6 ×250流动相：A：水 ; B：乙腈流动相：B% 95%(0 min)-95%(15 min)-50%(15.1 min)-50%(20 min)-95%(20.1 min)-95%(30 min)流动速：1.0 mL/min柱动温：35 ℃进样量：10 μL浓动度：用户提供检动测：PDA 215 nm结    论综上，在《NY/T 1725-2009蔬菜中灭蝇胺残留量的测定-高效液相色谱法》原条件下，分析灭蝇胺样品存在样品残留导致保留不稳的情况，可通过在分析方法中加入部分梯度条件，增加流动相洗脱能力来解决。使用DAISOPAK SP-120-5-APS-P色谱柱，在原条件25 min后增加梯度条件的情况下，可得到灭蝇胺加标样品溶液的良好分析结果，且重现性良好。但由于流动相中初始条件下水相及有机相比例相差较大，不同仪器之间保留及分离可能略有差异。

《中国药典》2020版中硝酸益康唑有关物质项下分析方法，要求使用C18色谱柱，以甲醇 / 0.077%醋酸铵溶液 = 20 / 80为流动相A，甲醇 / 乙腈 = 40 / 60为流动相B，进行梯度洗脱。系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，益康唑峰的保留时间约为15分钟，益康唑峰与咪康唑峰间的分离度应大于8.0硝酸益康唑 (M.W.444.70)Econazole nitrate咪康唑 (M.W. 416.13)Miconazole按照20版中国药典硝酸益康唑有关物质项下方法，分别使用CAPCELL PAK C18 MGII和DAISOPAK SP-100-5-ODS-P色谱柱分别对对照溶液和系统适用性溶液进行了分析。CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱分析结果使用CP C18 MGII色谱柱进行了分析，对照溶液和系统适用性溶液的分析结果见图1、2和表1、2。将流速调整为1.5 mL / min时，益康唑峰的保留时间约为15分钟，对照溶液分析结果中，主峰保留时间为15.834 min，理论塔板数为77610，拖尾因子为0.943，峰形良好。系统适用性溶液分析中，益康唑峰与咪康唑峰间的分离度为13.053，能够满足药典中分离度大于8.0的要求图1  对照溶液分析结果表1  各峰积分结果表图2  系统适用性溶液分析结果表2  各峰积分结果表HPLC Conditions ：色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×150流动相：A：甲醇 / 0.077%醋酸铵溶液 = 20 / 80流动相：B：甲醇 / 乙腈 = 40 / 60流动相：B% 40%(0 min)-90%(25 min)-90%(27 min)-40%(28 min)-40%(33 min)流动速：1.5 mL / min温动度：35 °C检动测：PDA 225 nm浓动度： 对照溶液：20 μg / mL（溶剂为甲醇）系统适用性溶液：取硝酸益康唑与硝酸咪康唑，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL中各含50 μg的混合溶液。进样量：10 µLDAISOPAK SP-100-5-ODS-P 色谱柱分析结果我们也使用DAISOPAK ODS-P色谱柱进行了分析，对照溶液和系统适用性溶液的分析结果见图3、4和表3、4。将流速调整为1.5 mL / min时，益康唑峰的保留时间约为15分钟，对照溶液分析结果中，主峰保留时间为15.745 min，理论塔板数为57301，拖尾因子为0.928，峰形良好。系统适用性溶液分析中，益康唑峰与咪康唑峰间的分离度为11.235，能够满足药典分离度大于8.0的要求。图3  对照溶液分析结果表3 各峰积分结果表图4  系统适用性溶液分析结果表4  各峰积分结果表HPLC Conditions ：色谱柱： DAISOPAK SP-100-5-ODS-P S5; 4.6×150流动相：A：甲醇 / 0.077%醋酸铵溶液 = 20 / 80流动相： B：甲醇 / 乙腈 = 40 / 60）流动相： B% 40%(0 min)-90%(25 min)-90%(27 min)-40%(28 min)-40%(33 min)流动速：1.5 mL / min温动度：35 °C检动测：PDA 225 nm浓动度： 对照溶液：20 μg / mL（溶剂为甲醇）系统适用性溶液：取硝酸益康唑与硝酸咪康唑，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL中各含50 μg的混合溶液。进样量：10 µL结     论综上，按照《中国药典》2020年版中硝酸益康唑有关物质项下分析方法，使用S5; 4.6mm i.d.×150mm的CAPCELL PAK C18 MGII和DAISOPAK SP-100-5-ODS-P色谱柱，均可以得到满足药典要求的分析结果。

灰黄霉素是一种抗真菌的口服药物。临床上主要用于头癣、严重体股癣、叠瓦癣、手足甲癣等，对头癣的疗效较明显。《中国药典》中灰黄霉素有关物质项下系统适用性要求：灵敏度溶液色谱图中，主成分色谱峰峰高的信噪比应大于10。含量测定项下系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，去氢灰黄霉素峰（相对保留时间约为1.1）与灰黄霉素峰间的分离度应符合要求。灰黄霉素结构式如下：灰黄霉素C17H17ClO6CAS号:126-07-8有关物质使用CAPCELL PAK C18 MGII（以下简称MGII）色谱柱，按照有关物质项下要求分别进样灵敏度溶液、供试品溶液与对照品溶液，分析结果如图1、图2、表1所示。其中灵敏度溶液结果谱图中，主成分色谱峰峰高的信噪比约为138.67，满足20版药典中“主成分色谱峰峰高的信噪比应大于10”的要求。图1  灵敏度溶液分析结果谱图对照品溶液结果中，灰黄霉素主峰保留时间为12.245min，理论塔板数为22501，不对称因子1.06，峰形良好。供试品溶液结果中，灰黄霉素峰和相对保留时间为1.07的色谱峰之间的分离度为2.22，分离度良好。图2  供试品溶液与对照品结果谱图表1  供试品溶液结果数据【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：A，50 mmol/L 磷酸二氢钾溶液/乙腈/甲醇(57/38/5)(pH=3.7)；B，50 mmol/L 磷酸二氢钾溶液/乙腈/甲醇(28/68/8)(pH=3.7)B% 0%(0min)-0%(14min)-100%(24min)-100%(34min)-0%(39min)-0%(49min)流速：1.0 mL/min温度：35 °C检测：PDA 254 nm对照品溶液：5 μg/mL(溶剂为流动相A)供试品溶液：0.5 mg/mL(溶剂为流动相A)灵敏度溶液：0.25 μg/mL(溶剂为流动相A)进样量：10 µL含量测定仍然使用MGII柱，按照含量测定项下要求进样系统适用性溶液与供试品溶液，分析结果如图3、图4、表2、表3所示。系统适用性溶液结果谱图中，灰黄霉素峰和相对保留时间为1.07的色谱峰之间的分离度为2.23，符合药典要求。图3  系统适用性溶液结果谱图表2  系统适用性溶液结果数据图4  供试品溶液含量测定结果谱图表3  供试品溶液含量测定结果数据【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5;4.6×250流动相：50 mmol/L 磷酸二氢钾溶液/乙腈/甲醇(57/38/5)(pH=3.7)流速：1.0 mL/min柱温：35 °C检测：PDA 254 nm系统适用性溶液：0.5 mg/mL(溶剂为流动相)供试品溶液：0.1 mg/mL(溶剂为流动相)进样量：10 μL综上所述，使用CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，照药典有关物质与含量测定项下规定条件分析灰黄霉素，均可得到符合药典要求的结果。同时，我们也考察了DAISOPAK SP-100-5-ODS-P在相同色谱柱规格、流动相条件和待测物的情况下的分析结果，对比如下：‍‍《中国药典》2020版 灰黄霉素分析推荐用柱F92533 CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250DP957040 DAISOPAK SP-100-5-ODS-P 4.6X250‍‍

用户反馈在感冒灵颗粒的分析中时常发生未知杂质干扰咖啡因和马来酸氯苯那敏出峰的情况，为了得到良好的分离结果，并探讨分析结果不稳定的原因，大曹三耀实验室使用用户提供的感冒灵颗粒样品、对照品、咖啡因和马来酸氯苯那敏定位溶液、空白溶液等对感冒灵颗粒的分析进行了系列实验。1. 色谱柱筛选选用5支不同极性和疏水性的的C18色谱柱，包括：CP系列中等极性CAPCELL PAK C18 MGII高表面极性CAPCELL PAK C18 AQ S3/S5低表面极性SUPERIOREX ODSDP系列DAISOPAK SP-100-5-ODS-P使用以上色谱柱，分别对供试品（样品1）进行了分析对比，得到结果如图1所示。结果显示，在AQ S3色谱柱上，马来酸氯苯那敏和咖啡因出峰顺序与其他色谱柱相反，另外4支C18色谱柱中，MGII色谱柱上马来酸氯苯那敏峰积分峰面积明显大于其他色谱柱，可能有未知杂质峰合并；S-ODS色谱柱与峰前杂质分离度不满足基线分离要求；AQ S5和ODS-P色谱柱相对分离结果较好。考虑该方法水相比例较高，我们暂时使用能够在纯水相下稳定使用的AQ S5色谱柱上，进行了下一步的方法摸索。图1 不同色谱柱对比结果【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S3; 4.6×250CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250SUPERIOREX ODS S5; 4.6×250DAISOPAK ODS-P S5; 4.6×250流动相：A：水（含0.5%磷酸和0.4%三乙胺）动动动动B：乙腈动动动动A：B = 94:6流动速：1 mL / min温动度：30 ℃检动测：PDA 264 nm浓动度：客户提供液标进样量：10 µL2.流动相条件影响因素使用C18 AQ色谱柱，分别对不同流动相条件进行了方法调整，并对比了分析结果。2.1 色谱柱筛选在30 ℃和40 ℃柱温下的分析结果如图2所示。当柱温升高时，咖啡因保留时间明显缩短，同时未知杂质峰出峰顺序由马来酸氯苯那敏后移动至前面，但峰面积差别不大（30 ℃：咖啡因：379,605，氯苯那敏：182,560；40 ℃：咖啡因：376,908，氯苯那敏：184,753）。柱温对该项目影响较大，特别是对未知杂质峰会表现出不同的出峰顺序。图2 不同柱温对比结果2.2 不同有机相比例影响分别将有机相比例调整±1%，在5%、6%、7%有机相条件下进行了对比（柱温使用40℃），结果如图3所示。即使流动相比例仅有1%变化，咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间均有较大变化，同时杂质分离情况也有明显差别。在5%乙腈条件下，马来酸氯苯那敏与峰前杂质未能分离；随着乙腈比例提高，又会出现峰后杂质与目标峰分离度下降的情况。图3 不同有机相比例对比结果2.3 流动相A配置的影响 从流动相的微小变化对分析结果出现较大改变的情况来看，流动相的配置过程同样重要。不同实验员对流动相A进行配置时，在同一台仪器和同一支色谱柱上，也出现了咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间差异较大，同时分离结果不完全一致的情况。结果如图4所示。从流动相的微小变化对分析结果出现较大改变的情况来看，流动相的配置过程同样重要。不同实验员对流动相A进行配置时，在同一台仪器和同一支色谱柱上，也出现了咖啡因和马来酸氯苯那敏保留时间差异较大，同时分离结果不完全一致的情况。结果如图4所示。图4 不同实验员配置流动相后分析结果对比结   论使用CAPCELL PAK C18 AQ S5色谱柱，可以实现感冒灵颗粒中咖啡因和马来酸氯苯那敏与杂质的分离。但色谱条件中诸多细节的微小差异都会对实验结果产生影响，实际分析中在方法转移上较为困难，请根据实际情况，对实验条件进行再调整。感冒灵颗粒分析  推荐用柱F92045 CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250

CP补货季与众不同只为您2023年5月1日至2023年6月27日- 以三耀精细收到订单时间为准 -"什么涨价了?""谁又涨价了？""居然双叒叕涨价了！"与众不同的YoYo从来不卷只为您错过2022年末促销季？没关系！CP补货季开始了！除了有买有赠和多买多折之外YoYo还特别定制了一批用于新柱验收和旧柱检测的实验室必备佳品“柱效检测标准液”随单赠送  数量有限  赠完为止快来给您的色谱柱做一次体检吧！安心 安全 专注 专业液相色谱柱还得是CAPCELL PAK#1有买有赠CAPCELL PAK色谱柱单笔订单每满15000元赠送一支Ghost Cleaner I 鬼峰捕集柱或 一根IDEX万能管线CAPCELL PAK色谱柱单笔订单每满25000元赠送一支DAISOPAK P系列液相分析柱* IDEX万能管线数量有限，赠完即止#2多买多折累计购买CAPCELL PAK色谱柱达到下列数量可在现有折扣基础上获得更多折扣减免。* 10mmi.d.色谱柱按2倍累计色谱柱数量* 20mmi.d.色谱柱按4倍累计色谱柱数量* 预柱产品不累计色谱柱数量#3赠柱效液疫情过了，工作突然就多起来，去年雪藏的色谱柱还好吗？疫情过了，工作突然就多起来，今年新买的色谱柱都好吗？别等到谱图不好再往回找各种原因了，让我们抽点时间先确认一下色谱柱的状态吧！活动期间，YoYo将为每一份订单附送“柱效检测用标准液”2支。请为您液相工作的好伙伴做一次体检吧！*柱效检测用标准液限500份,赠完即止“有买有赠”和“多买多折”活动请您根据实际的订单情况择一参与；“赠柱效液”活动，因数量有限，赠完即止。更多促销细则，欢迎您致电我们的营业人员进行沟通，您的专属营业人员联系方式可在公众号对话框中输入您所在直辖市、省份或自治区的名称进行查询。

甲磺酸培氟沙星为喹诺酮类抗菌药，具广谱抗菌作用，对下列细菌具有良好的抗菌作用：肠杆菌科的大部分细菌，包括大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、志贺菌属、伤寒及沙门菌属以及流感嗜血杆菌、奈瑟菌属等。对铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌也有一定的抗菌作用。对肺炎球菌、各组链球菌和肠球菌仅具轻度作用。此外对麻风杆菌也有抗菌活性。 《中国药典》2020年版中甲磺酸培氟沙星有关物质项下分析方法，要求使用C18色谱柱，以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液 / 0.05mol/L四丁基溴化铵溶液 / 乙腈（80 / 8 / 9）（用磷酸调节pH值至4.0）为流动相。      系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序依次为诺氟沙星、培氟沙星，培氟沙星峰的保留时间约为15分钟，诺氟沙星峰与培氟沙星峰之间的分离度应大于6.0，培氟沙星峰与相邻杂质峰之间的分离度应符合要求。      甲磺酸培氟沙星和诺氟沙星的结构式如下：甲磺酸培氟沙星 (M.W. 429.46)诺氟沙星 (M.W. 319.26)CAPCELL PAK C18 AQ      使用CAPCELL PAK C18 AQ S5;4.6×250 色谱柱进行分析，对照品溶液、系统适用性溶液和供试品溶液的分析结果见图1~3和表1~3。      将流速调整为0.9 mL/min时，对照溶液分析结果中，培氟沙星主峰保留时间为14.941min，符合药典要求，理论塔板数为13338。图1  对照溶液分析结果表1  各峰积分结果表      系统适用性溶液分析中，诺氟沙星峰与培氟沙星峰之间的分离度为6.565，能够满足药典分离度大于6.0的要求。图2  系统适用性溶液分析结果图表2  各峰积分结果表图3  供试品溶液分析结果表3  各峰积分结果表【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250流动相：0.04mol/L磷酸二氢钾溶液 / 0.05mol/L四丁基溴化铵溶液 / 乙腈 = 80 / 8 / 9（用磷酸调节pH值至4.0）流速：0.9 mL/min温度：40 °C检测：PDA 273 nm对照品溶液：2 μg/mL供试品溶液：0.2 mg/mL系统适用性溶液：取培氟沙星对照品与诺氟沙星对照品各适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中含培氟沙星与诺氟沙星各约20 μg进样量：20 µL      综上所述，按照《中国药典》2020年版中甲磺酸培氟沙星有关物质项下分析方法，使用CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250色谱柱，可得到满足药典要求的分析结果。      另外，由于流动相条件中含有离子对试剂，所以需要较长时间的平衡。《中国药典》2020版 甲磺酸培氟沙星分析推荐用柱F92045 CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250

喹诺酮类(4-quinolones)抗生素，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药，主要作用于革兰阴性菌的抗菌药物，对革兰阳性菌的作用较弱（某些品种对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌作用）。抗生素分析一直是CAPCELL PAK系列色谱柱擅长的领域，随着DAISOPAK系列色谱柱的上市，用户希望能更加全面的了解DP色谱柱的分离特点。借诺氟沙星的对比实验结果，切实对比一下CP MGII和DP ODS-P色谱柱在诺氟沙星分析上的分离效果。按照20版药典诺氟沙星含量测定和有关物质项下方法，分别使用CP C18 MGII和DP ODS-P色谱柱对系统适用性溶液进行了分析。CAPCELL PAK C18 MGII 色谱柱分析结果使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6mm i.d.×250mm色谱柱含量测定分析结果如图1所示。系统适用性溶液分析结果中，调整流速为1.3 mL/min后，诺氟沙星保留时间9.4 min，理论塔板数13238，与依诺沙星分离度4.91，与环丙沙星分离度3.85，均能够满足药典主峰保留时间约为9 min，且分离度大于2的要求。图1 含量测定分析结果(MGII)图上所示数字从下到上为分离度、保留时间、理论塔板数【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）/ 乙腈 = 87 / 13流动速：1.3 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 278 nm浓动度： 系统适用性溶液：每1 mL中含诺氟沙星25 µg、环丙沙星和依诺沙星各5 µg （流动相）进样量：20 µL有关物质分析结果如图2-图4所示，系统适用性溶液色谱图（278 nm）中，诺氟沙星峰的保留时间为9.3 min，与依诺沙星和环丙沙星分离度分别为3.81和3.49，能够满足药典主峰保留时间约为9 min，且分离度大于2的要求。图2 有关物质分析结果(278 nm)图3 局部放大图(278 nm)图上所示数字从下到上为分离度、保留时间、理论塔板数图4 有关物质分析结果(262 nm)【色谱条件】色谱柱：CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6×250流动相：A: 0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）/ 乙腈 = 87 / 13 ；B: 乙腈流动相：B% 0%(0 min)-0%(10 min)-50%(20 min)-50%(30 min)-0%(32 min)-0%(42 min)流动速：1.3 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 278、262 nm浓动度： 系统适用性溶液：每1 mL中含诺氟沙星0.15 mg、环丙沙星和依诺沙星各3 µg进样量：20 µLDAISOPAK SP-100-5-ODS-P 色谱柱分析结果由于ODS-P系列色谱柱保留更强，为满足药典中主峰保留时间约为9 min的要求，选用了柱长150 mm的色谱柱，且与CP C18 MGII相比选用了更低的流速。使用DAISOPAK SP-100-5-ODS-P S5;4.6mm i.d.×150mm色谱柱含量测定分析结果如图5所示。系统适用性溶液分析结果中，诺氟沙星保留时间9.4 min，理论塔板数9963，与依诺沙星分离度4.24，与环丙沙星分离度3.81，均能够满足药典主峰保留时间约为9 min，且分离度大于2的要求。图5 含量测定分析结果图上所示数字从下到上为分离度、保留时间、理论塔板数【色谱条件】色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P S5; 4.6×150流动相：0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）/ 乙腈 = 87 /13流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 278 nm浓动度： 系统适用性溶液：每1 mL中含诺氟沙星25 µg、环丙沙星和依诺沙星各5 µg进样量：20 µL有关物质分析结果如图6-图8所示，系统适用性溶液色谱图（278 nm）中，诺氟沙星峰的保留时间为9.2 min，与依诺沙星和环丙沙星分离度分别为2.64和3.17，能够满足药典主峰保留时间约为9 min，且分离度大于2的要求。图6 有关物质分析结果(278 nm)图7 局部放大图(278 nm)图上所示数字从下到上为分离度、保留时间、理论塔板数图8 有关物质分析结果(262 nm)【色谱条件】色谱柱：DAISOPAK SP-100-5-ODS-P S5; 4.6×150流动相：A: 0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）/ 乙腈 = 87 / 13 ；B: 乙腈流动相：B% 0%(0 min)-0%(10 min)-50%(20 min)-50%(30 min)-0%(32 min)-0%(42 min)流动速：1.0 mL/min温动度：35 °C检动测：PDA 278、262 nm浓动度： 系统适用性溶液：每1 mL中含诺氟沙星0.15 mg、环丙沙星和依诺沙星各3 µg进样量：20 µL结论使用CAPCELL PAK C18 MGII以及DAISOPAK SP-100-5-ODS-P色谱柱均可在药典条件下，实现诺氟沙星有关物质以及含量测定分析，理论塔板数高，峰型良好，分离度符合药典要求。相较CAPCELL PAK C18 MGII色谱柱，SP-100-5-ODS-P色谱柱的保留能力更强，在相同流动相下可使用更短的色谱柱和更低的流速达到相同的保留强度，但随着柱长的降低，理论塔板数和分离度同步略有降低。2020年版《中华人民共和国药典》诺氟沙星含量测定和有关物质项下方法推荐用柱F92533 CP C18 MGII S5; 4.6×250DP957047 SP-100-5-ODS-P; 4.6×150