中药饮片中标准汤剂超高效液相特征检测方案(液相色谱仪)

实验方法及设计 白术 中药饮片标准汤剂 超高效液相(UPLC)特征图谱文集 ■ .前言......... 4 目 录 中药饮片标准汤剂UPLC特征图谱方法开发.......... ..6 UPLC技术简介......... . . ... .. .6 UPLC特征图谱方法开发及优化....... ...8 UPLC特征图谱方法开发注意事项...... . . . . . . .. . ... .. 18 .中药饮片标准汤剂特征图谱应用案例....... .19 白术.m.mmnns ...20 炒牛蒡子............... .....22 赤芍............. ...24 |楝子........ MAMI QAA ......26 .川牛膝........ ...28 丹参.......... ........30 当归.......... ..32 党参 ..........34 防风风. ......36 甘草.. ........38 钩藤.. ...40 瓜篓.. ....42 .红花. ....44 黄柏.. .....46 黄芩.. .....48 鸡血藤. .....50 荆芥.. .....52 焦栀子 ......54 苦参.. ......56 连翘.. ......58 .麻黄.. ....60 蜜麸炒白芍， ......62 .蜜麸炒苍术. ......64 蜜麸炒枳壳. ......66 .牡丹皮...... ....68 牛膝.. ....70 女贞子. .72 ..人参.......... .....74 .山药......... .76 山茱萸 ....78 夏枯草. ....80 续断............. .....82 .玄........... ..84 ..子.......... ......87 合作发表文章......... .90 中药饮片标准汤剂的质量评价案例一平银花........... .......90 .标准汤剂为基准建立丹参的质量评价方法... ....90 麻黄标准汤剂质量评价体系的建立.. .......91 红花标准汤剂的质量评价............. ...91 栀子标准汤剂的质量评价方法考察.. ..............92 当归标准汤剂质量评价体系的建立.......... ......92 .党沐标准汤剂质量评价的建立.. .........93 基于传统煎药工艺的龙胆饮片标准汤剂制备及质量评价方法研究.. ....93 附录. .94 中药饮片标准汤剂UHPLC(Arc)方法转换流程， ....94 中药饮片标准汤剂Arc方法转换示例. ......95 .中药饮片标准汤剂QDa共有峰指认.. ...98 “中药配方颗粒的概念于上世纪七十年代提出，本质上是中药饮片的现代化形式，，使用现代化提取及浓缩技术(复制制备汤药的传统方法)提取而得。配方颗粒产品包括单方和复方两种：单方产品仅由单味中药饮片制成颗粒；复方产品则为根据中国药典及其他权威中医文献所记载配方由多味中药组合制成颗粒。目前在中国配方颗粒仅单方产品可以生产与销售。 中药配方颗粒的制备，除成型工艺外，其余应与传统汤剂基本一致，即以水为溶媒提取，，以物理方法固液分离、浓缩、干燥、颗粒成型等工艺生产。中药配方颗粒药效物质应与中药饮片水煎汤剂保持基本一致。 中药配方颗粒在美国、欧洲、澳大利亚、韩国、日本、香港和台湾等地发展极快，韩国、日本、香港和台湾除满足本地区外还大量出口。我国中药配方颗粒处于“试生产”阶段，自2001年国家规定试点6个生产企业后，到2016年，一直未增加其他生产企业，此6家企业包括江阴天江(被中国中药公司收购)、广东一方(被中国中药公司收购)，华润三九，南宁培力，北京康仁堂，，四川绿色。但作为一个“年均增长率50%、净利润上亿元”的行业，，中药配方颗粒产品优势明显，市场也在不断扩容，2016年随着《中药配方颗粒管理办法(征求意见稿)》的颁布，配方颗粒投资热潮真正打开，康美药业、上海医药、太极集团等耳熟能详的大型药企纷纷表示已经或正在涉足中药配方颗粒；安徽、浙江、湖北、河南、江西等10多个省也都分别先后设立省级试点，并出台中药配方颗粒省级科研项目以推进工作。2009年国内配方颗粒市场销售规模10.9亿元，到2016年市场整体规模接近110亿元，至2018年将快速增长到192亿元； 来源：前瞻研究院 2016年2月，国务院发布《中医药发展战略规划纲要2016-2030年》，将配方颗粒作为中医药国家战略的重要组成部分；2016年8月，，国家药典委员会发布《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(征求意见稿))》(以下简称“征求意见稿”)，在配方颗粒市场完全打开前，作出明确的要求以规范市场。 为了保证配方颗粒的质量一致性，应按照质量一致性原则，建立从原料、生产到使用的全产业链质量控制体系，以标准汤剂为基准进行批与批之间质量一致性的合理评价，并建立生产工艺标准规程和相应控制方法。作为原料的药材和饮片应符合国家药品标准的相关要求，为保证批间质量基本一致及可追溯，应在工艺规程中建立投料方案，规定原料混批调配投料方法。原料、中间体、成品三者药效物质的指纹或特征图谱和含量测定的成分均应以标准汤剂为基准进行合理评价，并应有确定的量值传递相关性和转移率范围。因此，标准汤剂的质量标准是中药配方颗粒进行质量控制的关键。 中药配方颗粒的品种多、批次多、检验数据量大， 《征求意见稿》明确指出：在选择测定方法时，可优先考虑采用超高效液相色谱方法进行特征图谱或含量测定的质量控制研究。 基于以上，同时为进一步推进中药标准领先并主导国际标准的目标，拓展超高效液相色谱在中药研究领域的应用，沃特世与中国中医科学院中药研究所的陈士林老师课题组合作，建立了60味中药材的标准汤剂的UPLC特征图谱方法，为正在或有意愿使用超高效液相色谱技术的中药配方颗粒或其他相关研究单位提供帮助。 中药饮片标准汤剂UPLC特征图谱方法开发 UPLC技术简介 ACQUITY UPLC H-Class仪器介绍 Waters ACQUITY UPLC是整体创新的结果，该技术同时对LC颗粒技术、色谱柱、进样器、泵和检测器进行了重新设计。亚2-um杂化颗粒色谱柱的更高性能，结合ACQUITYUPLC系统在高压下低扩散输送流动相的特殊能力，最大程度发挥了小颗粒填料在色谱分析方面的优点，比如能得到更尖锐、更窄的色谱峰。 ACQUITYUPLC增加了通量，减少了溶剂使用量，而毫不折衷分析结果。 本文使用的ACQUITY UPLC H-Class系统，少于10uL的扩散体积使得ACQUITY UPLC H-Class系统成为目前市场上分离度最高的四元LC系统。为了获得真正的UPLC性能，需要系统扩散体积(柱外谱带展宽体积)能够与填充亚2 um颗粒的色谱柱相关的峰宽相匹配。尽管其它系统也可能设计用于高压，但这并不意味着它们可以提供与UPLC和ACQUITY UPLC H-Class系统相同的性能和尖峰。 从反相色谱柱选择表到ACQUITY UPLC色谱柱计算器，沃特世的直观工具使获取更快的分析结果和更低的分析成本变得简单。ACQUITY UPLC H-Class系统能轻松应对系统差异，帮助您转换现有方法、提高效率和满足实验室不断增长的需求。 ACQUITY UPLC H-Class系统的灵活性可让您自动筛选重要的方法参数，提供更加耐用的方法，从而为您的样品找到最佳色谱条件，包括： 独立温度控制室中可装载6根色谱柱 Auto-Blend Plus技术帮助找到理想的pH值和离子强度 多溶剂混合-内置溶剂选择阀，将可选溶剂种类扩展至6种 11种独有的梯度模式，为灵活地调节分离条件提供极大的便利 通过将ACQUITY UPLC H-Class系统与Empower Sample Set Generator和Fusion等方法开发软件工具相结合，使筛选程序完全自动化。此外，使用质谱检测器如ACQUITY QDa检测器帮助您轻松追踪峰信息，极大减少了后续分析时间。 ACQUITY UPLC H-Class系统可同时支持HPLC和UPLC方法，这样您的实验室可以在不改变现有工作方式的情况下对实验室的未来进行投资，最终实现UPLC的高品质分离。 其功能和优势如下： 使用四元溶剂管理器(QSM)获取多溶剂混合的灵活性，可将四种溶剂按任何组合或比例混合。可选择使用内部溶剂选择阀将可选的溶剂种类增加至九种，实现方法的灵活性。自动化的溶剂可压缩性允许您以任何比例输送任何溶剂，而不会失去精准度。 直接注射样品的高精度进样。专业设计的针流入路径确保了高压下针头的密封性。支持0.1uL至1mL的进样量。精心设计的洗针程序确保了极低的交叉污染，能够匹配最高灵敏度的质谱仪。 对整个色谱柱进行精准控温。可配置1到6根色谱柱，每根都可装载在带主动预热功能的独立温度控制区，温控范围为4至90°℃。 低扩散检测能力。 ACQUITY UPLC H-Class系统是市场上唯一配备了各种已调校优化到UPLC性能的检测器的四元LC系统。最小的扩散体积以及优化的电子元件和光学路径可得到最窄的UPLC峰，从而获得最高的灵敏度和最好的重现性，进行最精准的定量。 使用Auto·Blend Plus技术，从纯溶剂或浓缩原液的试剂瓶直接取液，按特定的pH值和离子强度自动配制流动相，从而极大地减少了实验准备时间。。该技术与反相、IEX和SEC兼容，使常规分析便于管理和执行，并精简了方法开发和方法稳定性测试，即使是pH值和离子强度的微小变化也可以自动测试，而无需人工配制每种单独的缓冲液。 使用SmartStart技术可自动同步管理梯度的开始时间和预进样步骤。这使您可以在不同LC系统之间转换方法时补偿系统体积差异，或尽量减少进样间的周期时间以满足高通量应用的要求。 满足合规性要求。实验室仪器的检定旨在符合法规和质量标准(如GMP、GLP、ISO 17025、USP <1058>及其他)。ACQUITY UPLC H-Class系统支持基于沃特世Empower的自动化系统检定工具(SQT)，，可以最大程度缩短年检的时间和成本。支持的软件： Empower、Masslynx、UNIFI和几个第三方软件包。 ACQUITY UPLC H-Class UPLC特征图谱方法开发及优化 方法UPLC在中药饮片标准汤剂特征图谱应用中的优势开发 简单快速的方法开发策略 简单快速的化合物鉴定及峰定位 宽泛的色谱柱选择性，应对不同种类药材标准汤剂 解决方案所需仪器及设备 ACQUITY UPLC H-Class， Empower 3 ACQUITY UPLC亚二微米色谱柱 QTOF-UNIFI中药数据库 中药饮片标准汤剂质量标准建立方法摘要 本应用开发了一种应对不同种类中药标准汤剂简单快速的方法开发策略，使用相似度软件建立其特征图谱，并对共有峰/特征峰进行了指认。详细实验流程见图1： 图1.中药饮片标准汤剂特征图谱建立详细流程。 第一步，确定UPLC分离方法，建立中药饮片标准汤剂特征图谱 第二步，运行相似度软件确定共有峰或特征峰，并采用QTOF-UNIFI中药数据库对其进行指认 第三步，将已有结果转移到质谱检测器QDa上，用于常规QC检测 中药饮片标准汤剂UPLC方法开发及优化考察因素 在方法开发过程中，我们需要筛查一系列的色谱参数才能使方法达到足够的分离度并实现稳定的分离。进行方法开发的途径多种多样，例如每次更改一个因子的方法、系统化方法、质量源于设计(QbD)法等等，而采用这些方法优化分离时，需要考虑的因子以及最终的目标都是相同的。在所有的因子中，我们要调整的参数主要包括色谱柱填料、有机溶剂、pH、梯度斜率、流速和温度。影响分离的因素可以通过图2了解： 图2.影响分离度的因素阐述。 其中最主要的影响因素是选择性因子a，而影响选择性因子a的众多因素中，排在前三位的即流动相溶剂、流动相pH及色谱柱。而在中药饮片标准汤剂UPLC方法开发中色谱柱的选择尤为重要。考虑上述因素，将UPLC方法开发实验设计如图3： 图3.中药饮片标准汤剂特征图谱方法开发详细流程。 创建仪器方法 仪器方法 系统： Waters ACQUITY UPLC H-Class 色谱柱： 规格21x100 mm， 1.6-1.8 um，1，-共5根，具体色谱柱种类见表格1： 编号 键合相 粒径 规格 部件编号 1 CORTECS T3 1.6 pm 21x100 mm 186008499 2 HSS T3 1.8 pm 21x100 mm 186003539 3 CORTECS C18 1.6 pm 21x100 mm 186007095 4 CSH C18 1.7 pm 2.1x100 mm 186005297 5 BEH Shield RP18 1.7 pm 21x100mm 186002854 表格1.推荐用于中药饮片标准汤剂特征图谱方法开发UPLC色谱柱种类。 流动相A：酸-水/碱-水柱温：20，30， 40， 50°C流动相B：酸-乙腈/碱-乙腈/酸-甲醇进样量：1-5pL流动相C：水流速：0.3-0.5 ml/min流动相D：乙腈Wash溶液：90%甲醇水溶液流动相梯度洗脱程序：0-7min，5%-90%ACNPurge溶液：10%甲醇水溶液(曲线6)；7-10min，90%-100%ACN(曲线1)；10-13min，100%-5%ACN(曲线1) 样品处理方法 参照标准汤剂制备方法收集到的样品，纯水溶解，12000转速离心20分钟，取上清液。同时，也比较了中药配方颗粒剂和标准汤剂间图谱的差异，如图4： 图4.黄芪配方颗粒剂与黄芪标准汤剂图谱对比。 结果与讨论 中药饮片标准汤剂特征图谱方法开发初筛 第一步，初筛波长、流动相pH及有机相 实验第一步要确定该配方颗粒样品最佳检测波长，运行初始梯度(表2)，采用PDA全扫模式，扫描范围200-498nm；筛选甲醇和乙腈；并考察流动相加酸对分离的影响。 时间 流速(ml/min) 有机相(%) 曲线 0 0.4 5 一 7 0.4 90 6 10 0.4 100 1 13 0.4 5 1 表格2.初始梯度。 PDA全扫确定波长 PDA全扫模式，扫描范围200-498 nm， 提取Maxplot图谱。 Maxplot中文名称：最大值图，即通过全扫拟合出一个所有化合物最大吸收值的色谱图。以此为参考，比较不同波长下化合物的吸收和分布，如图5： 图5.PDA全扫技术确定最佳吸收波长。 以当归为例，得到图6，3D吸收图谱，提取280 nm， 并比较不同波长下的化合物吸收及分布，通过比较确定当归的吸收波长为280 nm。 图6.当归PDA3D图谱及提取特点波长紫外图谱。 有机相的筛选 常规实验室液相分离选取的有机相为甲醇或乙腈， 甲醇在210nm以下有末端吸收，乙腈在低波长下透光性好。此外，二者对于化合物选择性，即出峰时间及分离度也有较大差异，见图7： 图7.甲醇与乙腈选择性差异比较。 实验初期，，分别运行乙腈及甲醇流动相，确定有机相溶剂。针对该样品的分离，选择ACN作为流动相可获得分布均匀且分离较好的结果。 色谱柱的筛选及指导原则 进一步比较流动相酸碱性对分离的影响。而在中药分析中，酸性条件较为推荐，我们比较0.1%甲酸和纯水的差异，通常加酸后能够获得更好的峰形及分离度。在确定波长、有机相及流动相酸碱性后，进行不同选择性色谱柱的筛选。因中药配方颗粒体系的复杂性，色谱柱规格通常为100mm；更为复杂的体系则选择150mm规格。用于中药配方颗粒方法开发的色谱柱颗粒平台见图8： 图8.沃特世UPLC技术色谱柱颗粒平台。 第一个颗粒技术平台是杂化颗粒BEH颗粒平台， BEH C18是沃特世推出的第一款UPLC色谱柱。因其所带来的前所未有的峰对称性、柱效和化学稳定性， ACQUITY UPLC BEHC柱是广泛适用于各种分析物通用的超高效色谱分离柱。因能在pH1-12范围内操作，这些三键键合式烷基柱能够利用pH的能力对可离子化化合物的保留、选择和灵敏度施加巨大影响，同时还能在低pH和高pH条件下保持优异的柱稳定性。 第二个颗粒技术ACQUITY UPLC HSS T3设计用于解决分离科学家共同面对的分析难题：保留水溶性的、极性大的小分子有机化合物。HSS T3固定相是与100%水溶液流动相兼容的Cg固定相，设计用于保留和分离极性有机物。同时对于强保留的物质能够提前出峰，是一款用于中药特征图谱分析的推荐色谱柱。如HSS T3用于某味药材标准汤剂的特征图谱分析见图9： 图9.HSST3色谱柱用于分析某味药材标准汤剂特征图谱。 第三个颗粒技术平台CSH表面带电杂化颗粒技术，是为杂化颗粒表面赋予少量正电荷。利用这一技术可以使用低离子强度的流动相(如0.1%甲酸体系)分析碱性化合物，而仍能获得卓越的峰形与载量。在含生物碱药材的分析中表现尤为突出，如麻黄标准汤剂的特征图谱分析，图10： 图10.麻黄CSHC分离结果。 最新的第四个颗粒技术平台即CORTECS实心核颗粒技术，将仪器性能发挥到极致。 CORTECS 1.6 um实心核颗粒色谱柱是反相色谱柱系列的最新产品，实现了分离效率最大化；与全多孔颗粒色谱柱相比，具有更高的通量和更快的速度。其中CORTECST3色谱柱结合了HSST3极性化合物保留优势和优异的分离度，是用于中药饮片标准汤剂特征图谱分析的首选色谱柱，如当归标准汤剂的特征图谱分析，见图11： 图11.当归CORTECS T3分离结果。 不同类型色谱柱，其选择性差异较大，筛选色谱柱是系统方法开发必要的步骤。图12比较了不同类型色谱柱对丹参分离的影响。最终选定HSST3色谱柱，兼具对丹参标准汤剂中化合物的保留和分离能力： 图12.丹参不同类型色谱柱筛选。 综上，在做中药饮片标准汤剂特征图谱分析时，色谱柱筛选原则如下： CORTECS T3：首选色谱柱，保留水溶性大极性化合物，同时提供优异的分离度 HSS T3：着重提高大极性化合物的保留 CORTECSCg：化合物繁多、基质复杂、分析时间长时的选择 CSHC：：甲酸或甲酸铵条件下分析碱性化合物 以上色谱柱均无法解决，则可考察BEHCi8， BEH Shield RP18或其他类型键合相。其中能耐受100%纯水的色谱柱有： CORTECS T3， HSS T3和BEH Shield RP18。详情请参考沃特世中药及天然产物色谱柱选择卡。 扫描左侧二维码， ( 快速浏览《沃特世中药及天然产物色谱柱选择卡》。 ) 中药饮片标准汤剂特征图谱方法优化 第二步，优化方法，再确定波长、流动相溶剂及酸碱性后，进行方法优化。 梯度的优化 方法初筛时，梯度起始为10%，针对具体药材，需要考察起始度，，如当归的UPLC分离，见图13： 图13.当归UPLC分离条件优化-起始梯度的考察。 比较图谱可以发现，当归极性较大的成分多，如采用起始10%不能够充分保留其中的成分。此时，将起始梯度设置为100%纯水，进行优化。参考Empower软件方法编辑界面的梯度图，微调梯度变化斜率直至所有的化合物分离良好，分布均匀，如图14： 图14. Empower方法编辑器溶剂变化趋势。 添加剂及其浓度的影响 常规实验分析采用0.1%甲酸作为添加剂，同时会考察不同类类添加剂的影响，如甲酸铵及氨水。不同比例添加剂也会带来色谱峰位置和分离度的变化。当特征图谱结果不理想时，可进一步优化不同种类添加剂及其浓度。如白术标准汤剂特征图谱分析时，纯水与甲酸水流动相有显著差异，甲酸可以显著改善峰形、增加分离度，见图15： 图15.流动相中加入添加剂的比较。 温度的优化 温度影响分子扩散，从而影响化合物的分离度，在方法优化时，微调温度也是可以优化的因素，如图16，黄芩标准汤剂不同温度的考察，最终选定40C： 图16.黄芩UPLC分离不同柱温考察。 结论 以上是中药饮片标准汤剂特征图谱UPLC方法开发流程，参考图2实验设计，三步走的模式。逐一确定波长、流动相及色谱柱，再进一步优化梯度、添加剂及柱温，获得均匀分布、分离良好的UPLC特征图谱。借助ACQUITY UPLC H-Class系统，结合UPLC色谱柱颗粒平台，可快速开发配方颗粒不同汤剂的特征图谱。宽泛选择性的UPLC色谱柱颗粒平台，尤其是针对性水提液大极性化合物的HSS T3、CORTECS T3， 充分保证了绝大多数特征图谱色谱峰的检测和分离。 UPLC特征图谱方法开发注意事项 液相方法 平衡时间 所有梯度方法中均加入了回到起始比例的平衡时间；样品序列中针与针之间建议加入3分钟平衡时间。 清洗色谱柱 每个样品运行完毕后，建议充分清洗色谱柱，清洗流程如图17：A为纯水，B为乙腈。 梯度表： 时间(min) 流速(mL/min) B% 0.0 B% B% 曲线 初始 0.200 100.0 0.0 0.0 0.0 0.0 初始 30.00 6 0.200 100.0 0.0 0.0 60.00 0.200 0.0 6 90.00 0.200 0.0 6 120.00 0.200 0.0 100.0 0.0 0.0 6 150.00 0.200 0.0 0.0 6 图17.色谱柱清洗方法。 注：下面图谱中有关色谱图积分原则的说明如下： 积分原则：：一般峰面积大于1%以上，或高分辨质谱鉴定出来或文献报道的。 中药饮片标准汤剂特征图谱应用案例 在进行某味药材标准汤剂的特征图谱方法开发时，我们选取了该药材的12-15个不同批次制得的标准汤剂作为分析样品，因此开发的方法具有普适性； 在进行紫外吸收波长选择时，我们大多选择了峰数较多的，能表现样品图谱全貌特征的波长，对某些成分，并不是最大吸收波长； “样品预处理”项下“标准汤剂”制备方法为：称取100g饮片，根据饮片药用部位及功效加适量水回流提取，合并两次滤液，减压浓缩至500 mL，即得。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 99 1 初始 5 92 8 6 9 73 27 6 12 70 30 6 15 0 100 6 18 0 100 6 21 99 1 1 图1.白术UPLC分离结果。 白术标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.白术标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 对照特征 图谱 S1 1.000 0.587 0.843 0.589 0.388 0.882 0.407 0.498 0.996 0.508 0.898 0.763 S2 0.587 1.000 0.796 0.928 0.922 0.799 0.902 0.957 0.578 0.927 0.814 0.940 S3 0.843 0.796 1.000 0.834 0.705 0.963 0.704 0.754 0.842 0.770 0.952 0.922 S4 0.589 0.928 0.834 1.000 0.930 0.847 0.940 0.967 0.585 0.989 0.819 0.961 S5 0.388 0.922 0.705 0.930 1.000 0.696 0.970 0.964 0.380 0.955 0.683 0.880 S6 0.882 0.799 0.963 0.847 0.696 1.000 0.685 0.768 0.886 0.792 0.989 0.938 S7 0.407 0.902 0.704 0.940 0.970 0.685 1.000 0.958 0.400 0.959 0.665 0.882 S8 0.498 0.957 0.754 0.967 0.964 0.768 0.958 1.000 0.492 0.980 0.752 0.930 S9 0.996 0.578 0.842 0.585 0.380 0.886 0.400 0.492 1.000 0.504 0.899 0.759 S10 0.508 0.927 0.770 0.989 0.955 0.792 0.959 0.980 0.504 1.000 0.765 0.935 S11 0.898 0.814 0.952 0.819 0.683 0.989 0.665 0.752 0.899 0.765 1.000 0.930 对照特征 图谱 0.763 0.940 0.922 0.961 0.880 0.938 0.882 0.930 0.759 0.935 0.930 1.000 表1.白术相似度计算结果。 炒牛蒡子 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 时间 (min) A% B% 曲线 柱温 30C 初始 90 10 初始 进样体积 1uL 5 60 40 6 流速 0.45 mL/min 7 30 70 6 波长 280nm 8 0 100 1 流动相A 0.1%甲酸水溶液 11 90 10 1 流动相B 0.1%甲酸乙腈 图1.炒牛蒡子UPLC分离结果。 县狂丝秋丝士忆图 凿真)县园形韩吆秋坐士异科 赤芍 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释5倍， 0.2 um GHP滤膜取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 6寸 寸寸N O 8 时间(min) B% 曲线 初始 92 8 初始 10 6 15 60 40 6 17 10 90 6 20 92 8 1 图1.赤芍UPLC分离结果。 注意事项 ·赤芍定性共有峰8个，更多化合物信息请咨询waters。 9Z 0001 9660 9t60 0960 6860 Z760 9660 t660 7660 9660 9660 t660 1660 Z660 9660 096'0 圆 韩艷 9660 000 9860 L860 Z60 6L60 2660 9660 6660 6660 9660 6660 8660 7860 8660 9t60 SIS 9t60 9860 0001 8660 6660 6980 6160 9160 1760 9760 ZZ60 0760 9160 6t6'0 076'0 0L80 tIS 0960 2860 8660 0001 8660 8980 8Z60 0760 t760 8760 6Z60 ZZ60 2160 9960 9760 9280 ELS 6860 2Z60 6660 8660 000% 6t80 0160 2060 9160 9160 0160 9060 2t60 2160 0980 ZIS Zt60 6160 6980 8980 6t80 0001 9760 0760 0260 6160 Z60 6L60 9160 8760 8760 8860 LIS 9660 2660 6L60 8Z60 0160 9760 000'1 6660 6660 8660 8660 8660 9660 9860 6660 1960 OlS t660 9660 9160 0760 2060 0Z60 6660 0001 6660 8660 6660 8660 9660 9860 6660 t60 7660 6660 1760 7760 LL60 0760 6660 6660 000 6660 2660 0001 8660 786'0 6660 Lt60 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特 征图谱 S1 1.000 0.953 0.939 0.944 0.946 0.949 0.946 0.947 0.947 0.951 0.983 0.860 0.875 0.870 0.945 0.960 S2 0.953 1.000 0.986 0.996 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 0.928 0.912 0.925 0.920 0.998 0.996 S3 0.939 0.986 1.000 0.975 0.980 0.990 0.981 0.982 0.985 0.986 0.928 0.947 0.956 0.949 0.984 0.992 S4 0.944 0.996 0.975 1.000 0.999 0.991 0.998 0.998 0.995 0.996 0.916 0.905 0.917 0.916 0.998 0.991 S5 0.946 0.999 0.980 0.999 1.000 0.995 1.000 1.000 0.998 0.998 0.919 0.910 0.922 0.920 0.999 0.994 S6S7 0.949 0.946 0.9990.999 0.9900.981 0.9910.998 0.9951.000 1.0000.996 0.9961.000 0.9970.999 0.999 0.998 0.998 0.998 0.9270.919 0.9160.916 0.9290.928 0.9220.926 0.995 0.999 0.996 0.995 凿真自园形韩丝 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) B% 曲线 初始 0 初始 20 85.5 14.5 6 64 36 6 26 28 0 1 31 100 1 图1.川楝子UPLC分离结果。 ( 注意事 项 ) ■增加柱温、增长色谱柱柱长均有助于分离度的改善。 图2.川楝子标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.769 0.823 0.903 0.871 0.724 0.479 0.613 0.656 0.747 0.729 0.694 0.853 S2 0.769 1.000 0.928 0.950 0.850 0.954 0.743 0.906 0.700 0.847 0.943 0.933 0.959 S3 0.823 0.928 1.000 0.941 0.952 0.866 0.702 0.844 0.742 0.909 0.885 0.911 0.972 S4 0.903 0.950 0.941 1.000 0.909 0.912 0.703 0.846 0.760 0.883 0.901 0.868 0.977 S5 0.871 0.850 0.952 0.909 1.000 0.744 0.575 0.690 0.786 0.884 0.792 0.806 0.930 S6 0.724 0.954 0.866 0.912 0.744 1.000 0.782 0.951 0.598 0.783 0.932 0.915 0.914 S7 0.479 0.743 0.702 0.703 0.575 0.782 1.000 0.861 0.568 0.661 0.739 0.738 0.753 S8 0.613 0.906 0.844 0.846 0.690 0.951 0.861 1.000 0.584 0.764 0.913 0.909 0.879 S9 0.656 0.700 0.742 0.760 0.786 0.598 0.568 0.584 1.000 0.882 0.639 0.667 0.809 S10 0.747 0.847 0.909 0.883 0.884 0.783 0.661 0.764 0.882 1.000 0.830 0.861 0.936 S11 0.729 0.943 0.885 0.901 0.792 0.932 0.739 0.913 0.639 0.830 1.000 0.953 0.930 S12 0.694 0.933 0.911 0.868 0.806 0.915 0.738 0.909 0.667 0.861 0.953 1.000 0.932 对照特征图谱 0.853 0.959 0.972 0.977 0.930 0.914 0.753 0.879 0.809 0.936 0.930 0.932 1.000 表1.川楝子相似度计算结果。 川牛膝 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 5 94 6 6 13.5 85 15 6 14.5 80.5 19.5 6 22 80.5 19.5 6 28 62 38 6 31 0 100 6 34 100 0 1 图1.川牛膝UPLC分离结果。 注意事项 ▪提高柱温可改善川牛膝中化合物的分离。 川牛膝标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.川牛膝标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特 征图谱 S1 1.000 0.273 0.312 0.161 0.296 0.268 0.326 0.151 0.246 0.301 0.335 0.260 0.260 0.258 0.321 0.390 S2 0.273 1.000 0.461 0.750 0.422 0.452 0.427 0.312 0.548 0.519 0.527 0.572 0.591 0.459 0.619 0.698 S3 0.312 0.461 1.000 0.240 0.948 0.464 0.945 0.670 0.917 0.950 0.932 0.915 0.927 0.952 0.914 0.911 S4 0.161 0.750 0.240 1.000 0.241 0.247 0.236 0.154 0.275 0.285 0.291 0.298 0.304 0.249 0.316 0.509 S5 0.296 0.422 0.948 0.241 1.000 0.440 0.989 0.665 0.928 0.975 0.967 0.927 0.941 0.968 0.939 0.918 S6 0.268 0.452 0.464 0.247 0.440 1.000 0.452 0.261 0.384 0.496 0.434 0.611 0.518 0.440 0.467 0.547 S7 0.326 0.427 0.945 0.236 0.989 0.452 1.000 0.647 0.915 0.969 0.960 0.933 0.930 0.955 0.938 0.915 S8 0.151 0.312 0.670 0.154 0.665 0.261 0.647 1.000 0.800 0.689 0.688 0.659 0.709 0.687 0.702 0.720 S9 0.246 0.548 0.917 0.275 0.928 0.384 0.915 0.800 1.000 0.956 0.955 0.929 0.972 0.951 0.972 0.939 S10 0.301 0.519 0.950 0.285 0.975 0.496 0.969 0.689 0.956 1.000 0.990 0.964 0.973 0.967 0.975 0.951 S11 0.335 0.527 0.932 0.291 0.967 0.434 0.960 0.688 0.955 0.990 1.000 0.937 0.959 0.955 0.978 0.946 S12 0.260 0.572 0.915 0.298 0.927 0.611 0.933 0.659 0.929 0.964 0.937 1.000 0.979 0.945 0.955 0.941 S13 0.260 0.591 0.927 0.304 0.941 0.518 0.930 0.709 0.972 0.973 0.959 0.979 1.000 0.968 0.981 0.955 S14 0.258 0.459 0.952 0.249 0.968 0.440 0.955 0.687 0.951 0.967 0.955 0.945 0.968 1.000 0.944 0.924 S15 0.321 0.619 0.914 0.316 0.939 0.467 0.938 0.702 0.972 0.975 0.978 0.955 0.981 0.944 1.000 0.959 对照特征图谱 0.390 0.698 0.911 0.509 0.918 0.547 0.915 0.720 0.939 0.951 0.946 0.941 0.955 0.924 0.959 1.000 表1.川牛膝相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释10倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 柱温 30°C 进样体积 1pL 流速 0.40 mL/min 波长 280/276 nm 流动相A 0.2%甲酸水溶液 流动相B 乙腈 色谱柱 HSS T3，2.1 x150 mm， 1.8 pm， p/n：186003540 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 92 8 初始 5.5 81 19 6 11.5 78 22 6 18.5 70 30 6 22 30 70 6 27 10 90 6 29 10 90 6 32 92 8 1 图1.丹参UPLC分离结果。 注意事项 ▪丹参汤剂中的丹酚酸B及其对应异构体较难分离，采用150 mm长度HSST3色谱柱可实现基线分离。 丹参标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.丹参标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 对照特征 图谱 S1 1.000 0.998 0.996 0.998 0.996 0.997 0.993 0.996 0.990 0.995 0.996 0.995 0.995 0.999 S2 0.998 1.000 0.999 0.992 0.998 0.989 0.997 0.998 0.995 0.998 0.999 0.998 0.998 0.999 S3 0.996 0.999 1.000 0.990 0.997 0.987 0.996 0.998 0.995 0.997 0.999 0.998 0.998 0.998 S4 0.998 0.992 0.990 1.000 0.991 1.000 0.987 0.990 0.983 0.989 0.990 0.989 0.989 0.995 S5 0.996 0.998 0.997 0.991 1.000 0.988 0.998 1.000 0.997 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 S6 0.997 0.989 0.987 1.000 0.988 1.000 0.984 0.987 0.981 0.987 0.987 0.986 0.986 0.993 S7 0.993 0.997 0.996 0.987 0.998 0.984 1.000 0.998 0.999 0.998 0.998 0.998 0.999 0.997 S8 0.996 0.998 0.998 0.990 1.000 0.987 0.998 1.000 0.997 1.000 1.000 1.000 0.999 0.999 S9 0.990 0.995 0.995 0.983 0.997 0.981 0.999 0.997 1.000 0.997 0.997 0.997 0.999 0.996 S10 0.995 0.998 0.997 0.989 0.999 0.987 0.998 1.000 0.997 1.000 0.999 1.000 0.999 0.999 S11 0.996 0.999 0.999 0.990 0.999 0.987 0.998 1.000 0.997 0.999 1.000 0.999 0.999 0.999 S12 0.995 0.998 0.998 0.989 0.999 0.986 0.998 1.000 0.997 1.000 0.999 1.000 0.999 0.999 S13 0.995 0.998 0.998 0.989 0.999 0.986 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 1.000 0.999 对照特 征图谱 0.999 0.999 0.998 0.995 0.999 0.993 0.997 0.999 0.996 0.999 0.999 0.999 0.999 1.000 表1.丹参相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释2.5倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 柱温 30°C B% 曲线 进样体积 1pL 0 初始 流速 0.40 mL/min 5 6 波长 280 nm 35 6 流动相A 0.1%甲酸水溶液 85 6 流动相B 0.1%甲酸乙腈 100 1 色谱柱 CORTECS T3， 2.1x100 mm，1.6 pm， 0 1 p/n： 186008499 图1.当归UPLC分离结果。 当归标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 imng 图2.当归标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特 征图谱 S1 1.000 0.960 0.966 0.993 0.976 0.993 0.946 0.958 0.990 0.959 0.969 0.976 0.993 0.968 0.996 0.994 S2 0.960 1.000 0.956 0.940 0.947 0.981 0.924 0.934 0.979 0.950 0.971 0.985 0.966 0.892 0.950 0.976 S3 0.966 0.956 1.000 0.960 0.940 0.971 0.897 0.916 0.964 0.932 0.956 0.964 0.968 0.919 0.966 0.969 S4 0.993 0.940 0.960 1.000 0.950 0.978 0.936 0.952 0.973 0.925 0.939 0.951 0.982 0.982 0.995 0.982 S5 0.976 0.947 0.940 0.950 1.000 0.981 0.939 0.942 0.982 0.993 0.988 0.976 0.983 0.923 0.968 0.983 S6 0.993 0.981 0.971 0.978 0.981 1.000 0.947 0.957 0.998 0.973 0.985 0.992 0.991 0.942 0.986 0.997 S7 0.946 0.924 0.897 0.936 0.939 0.947 1.000 0.998 0.957 0.920 0.919 0.930 0.955 0.944 0.943 0.964 S8 0.958 0.934 0.916 0.952 0.942 0.957 0.998 1.000 0.964 0.922 0.925 0.938 0.965 0.957 0.956 0.972 S9 0.990 0.979 0.964 0.973 0.982 0.998 0.957 0.964 1.000 0.974 0.985 0.993 0.990 0.940 0.982 0.997 S10 0.959 0.950 0.932 0.925 0.993 0.973 0.920 0.922 0.974 1.000 0.993 0.978 0.969 0.889 0.948 0.972 S11 0.969 0.971 0.956 0.939 0.988 0.985 0.919 0.925 0.985 0.993 1.000 0.993 0.977 0.894 0.958 0.981 S12 0.976 0.985 0.964 0.951 0.976 0.992 0.930 0.938 0.993 0.978 0.993 1.000 0.979 0.903 0.963 0.987 S13 0.993 0.966 0.968 0.982 0.983 0.991 0.955 0.965 0.990 0.969 0.977 0.979 1.000 0.958 0.988 0.996 S14 0.968 0.892 0.919 0.982 0.923 0.942 0.944 0.957 0.940 0.889 0.894 0.903 0.958 1.000 0.979 0.957 S15 0.996 0.950 0.966 0.995 0.968 0.986 0.943 0.956 0.982 0.948 0.958 0.963 0.988 0.979 1.000 0.990 对照特征图谱 0.994 0.976 0.969 0.982 0.983 0.997 0.964 0.972 0.997 0.972 0.981 0.987 0.996 0.957 0.990 1.000 表1.当归相似度计算结果。 党参 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释5倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 4 100 0 6 10 92 8 6 18 72 28 6 20 10 90 6 23 10 90 6 26 100 0 1 p/n： 186003539 图1.党参UPLC分离结果。 党参标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.党参标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 对照特 征图谱 S1 1.000 0.998 0.998 0.942 0.928 0.939 0.930 0.935 0.929 0.926 0.929 0.997 0.820 0.960 0.979 S2 0.998 1.000 0.999 0.936 0.921 0.936 0.926 0.933 0.920 0.919 0.922 0.997 0.815 0.954 0.976 S3 0.998 0.999 1.000 0.943 0.929 0.945 0.936 0.942 0.927 0.927 0.931 0.997 0.827 0.961 0.981 S4 0.942 0.936 0.943 1.000 0.992 0.985 0.977 0.978 0.989 0.992 0.990 0.945 0.921 0.979 0.986 S5 0.928 0.921 0.929 0.992 1.000 0.985 0.977 0.978 0.994 0.996 0.996 0.930 0.928 0.983 0.981 S6 0.939 0.936 0.945 0.985 0.985 1.000 0.995 0.994 0.974 0.989 0.988 0.940 0.913 0.983 0.986 S7 0.930 0.926 0.936 0.977 0.977 0.995 1.000 0.996 0.962 0.985 0.982 0.928 0.901 0.977 0.978 S8 0.935 0.933 0.942 0.978 0.978 0.994 0.996 1.000 0.963 0.984 0.983 0.935 0.899 0.977 0.981 S9 0.929 0.920 0.927 0.989 0.994 0.974 0.962 0.963 1.000 0.991 0.990 0.931 0.937 0.980 0.978 S10 0.926 0.919 0.927 0.992 0.996 0.989 0.985 0.984 0.991 1.000 0.995 0.927 0.931 0.983 0.981 S11 0.929 0.922 0.931 0.990 0.996 0.988 0.982 0.983 0.990 0.995 1.000 0.931 0.927 0.983 0.982 S12 0.997 0.997 0.997 0.945 0.930 0.940 0.928 0.935 0.931 0.927 0.931 1.000 0.828 0.958 0.980 S13 0.820 0.815 0.827 0.921 0.928 0.913 0.901 0.899 0.937 0.931 0.927 0.828 1.000 0.916 0.902 S14 0.960 0.954 0.961 0.979 0.983 0.983 0.977 0.977 0.980 0.983 0.983 0.958 0.916 1.000 0.992 对照特征图谱 0.979 0.976 0.981 0.986 0.981 0.986 0.978 0.981 0.978 0.981 0.982 0.980 0.902 0.992 1.000 表1.党参相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 99 1 初始 2 94 6 6 3.5 78 22 6 5.5 77.5 22.5 6 8 40 60 6 10 10 90 1 13 99 1 1 p/n： 186008499 图1.防风UPLC分离结果。 防风标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.防风标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.870 0.962 0.876 0.945 0.919 0.963 0.964 0.817 0.884 0.867 0.914 0.954 S2 0.870 1.000 0.925 0.863 0.923 0.978 0.945 0.948 0.949 0.960 0.945 0.877 0.959 S3 0.962 0.925 1.000 0.871 0.956 0.965 0.980 0.970 0.904 0.938 0.935 0.898 0.973 S4 0.876 0.863 0.871 1.000 0.918 0.906 0.905 0.938 0.813 0.891 0.835 0.993 0.947 S5 0.945 0.923 0.956 0.918 1.000 0.943 0.986 0.984 0.839 0.896 0.866 0.936 0.973 S6 0.919 0.978 0.965 0.906 0.943 1.000 0.970 0.976 0.960 0.983 0.968 0.920 0.987 S7 0.963 0.945 0.980 0.905 0.986 0.970 1.000 0.990 0.883 0.925 0.903 0.928 0.984 S8 0.964 0.948 0.970 0.938 0.984 0.976 0.990 1.000 0.887 0.941 0.914 0.958 0.994 S9 0.817 0.949 0.904 0.813 0.839 0.960 0.883 0.887 1.000 0.974 0.980 0.819 0.918 S10 0.884 0.960 0.938 0.891 0.896 0.983 0.925 0.941 0.974 1.000 0.985 0.900 0.965 S11 0.867 0.945 0.935 0.835 0.866 0.968 0.903 0.914 0.980 0.985 1.000 0.849 0.940 S12 0.914 0.877 0.898 0.993 0.936 0.920 0.928 0.958 0.819 0.900 0.849 1.000 0.963 对照特 征图谱 0.954 0.959 0.973 0.947 0.973 0.987 0.984 0.994 0.918 0.965 0.940 0.963 1.000 表1.防风相似度计算结果。 甘草 样品预处理供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释10倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 85 15 初始 7 50 50 6 10 0 100 1 13 85 15 1 流动相A 0.1%甲酸水溶液 流动相 B 0.1%甲酸乙腈 色谱柱 CORTECS T3， 2.1x100 mm， 1.6 um， p/n： 186008499 Minutes 图1.甘草UPLC分离结果。 甘草标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.甘草标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照特征图谱 S1 1.000 0.962 0.989 0.991 0.932 0.955 0.958 0.971 0.971 0.969 0.993 S2 0.962 1.000 0.975 0.983 0.822 0.870 0.890 0.968 0.970 0.944 0.970 S3 0.989 0.975 1.000 0.998 0.917 0.946 0.959 0.977 0.978 0.975 0.998 S4 0.991 0.983 0.998 1.000 0.906 0.936 0.950 0.982 0.983 0.975 0.997 S5 0.932 0.822 0.917 0.906 1.000 0.989 0.979 0.879 0.874 0.919 0.932 S6 0.955 0.870 0.946 0.936 0.989 1.000 0.986 0.906 0.904 0.938 0.957 S7 0.958 0.890 0.959 0.950 0.979 0.986 1.000 0.937 0.936 0.969 0.970 S8 0.971 0.968 0.977 0.982 0.879 0.906 0.937 1.000 0.998 0.985 0.982 S9 0.971 0.970 0.978 0.983 0.874 0.904 0.936 0.998 1.000 0.985 0.982 S10 0.969 0.944 0.975 0.975 0.919 0.938 0.969 0.985 0.985 1.000 0.983 对照特征 图谱 0.993 0.970 0.998 0.997 0.932 0.957 0.970 0.982 0.982 0.983 1.000 表1.甘草相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 95 5 初始 7 89.5 10.5 6 8 87 13 6 15 74 26 6 18 60 40 6 21 0 100 1 24 95 5 1 图1.钩藤UPLC分离结果。 钩藤标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.钩藤标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.997 0.996 0.993 0.952 0.987 0.977 0.991 0.969 0.992 0.997 0.972 0.998 S2 0.997 1.000 0.996 0.993 0.952 0.984 0.976 0.991 0.966 0.988 0.996 0.970 0.997 S3 0.996 0.996 1.000 0.992 0.967 0.992 0.975 0.989 0.954 0.992 0.997 0.981 0.996 S4 0.993 0.993 0.992 1.000 0.955 0.989 0.977 0.993 0.962 0.990 0.994 0.970 0.996 S5 0.952 0.952 0.967 0.955 1.000 0.966 0.926 0.955 0.876 0.963 0.958 0.989 0.957 S6 0.987 0.984 0.992 0.989 0.966 1.000 0.957 0.983 0.933 0.988 0.991 0.978 0.988 S7 0.977 0.976 0.975 0.977 0.926 0.957 1.000 0.977 0.966 0.972 0.976 0.945 0.983 S8 0.991 0.991 0.989 0.993 0.955 0.983 0.977 1.000 0.960 0.993 0.994 0.977 0.995 S9 0.969 0.966 0.954 0.962 0.876 0.933 0.966 0.960 1.000 0.953 0.959 0.912 0.972 S10 0.992 0.988 0.992 0.990 0.963 0.988 0.972 0.993 0.953 1.000 0.991 0.979 0.994 S11 0.997 0.996 0.997 0.994 0.958 0.991 0.976 0.994 0.959 0.991 1.000 0.978 0.997 S12 0.972 0.970 0.981 0.970 0.989 0.978 0.945 0.977 0.912 0.979 0.978 1.000 0.976 对照特征图谱 0.998 0.997 0.996 0.996 0.957 0.988 0.983 0.995 0.972 0.994 0.997 0.976 1.000 表1.钩藤相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class B% 曲线 柱温 40°C 0 初始 进样体积 3 pL 25 6 流速 0.35 mL/min 50 6 波长 235nm 100 1 流动相A 0.2%甲酸水溶夜 0 1 流动相B 0.2%甲酸乙腈 色谱柱 HSS T3， 2.1 x 150 mm， 1.8 pm， p/n：186003540 图1.瓜蒌UPLC分离结果。 注意事项 ( · 瓜蒌中极性较大的化合物可使用极性保留柱HSST3获得更好的保留和分离度。 ) 图2.瓜蒌标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.968 0.957 0.356 0.486 0.957 0.848 0.957 0.819 0.972 0.911 0.990 0.927 S2 0.968 1.000 0.949 0.365 0.508 0.919 0.798 0.930 0.857 0.966 0.881 0.963 0.919 S3 0.957 0.949 1.000 0.428 0.572 0.946 0.822 0.966 0.825 0.957 0.940 0.947 0.944 S4 0.356 0.365 0.428 1.000 0.972 0.384 0.498 0.388 0.299 0.349 0.363 0.352 0.656 S5 0.486 0.508 0.572 0.972 1.000 0.496 0.602 0.521 0.477 0.483 0.511 0.476 0.768 S6 0.957 0.919 0.946 0.384 0.496 1.000 0.821 0.938 0.730 0.935 0.878 0.958 0.907 S7 0.848 0.798 0.822 0.498 0.602 0.821 1.000 0.811 0.734 0.804 0.842 0.842 0.886 S8 0.957 0.930 0.966 0.388 0.521 0.938 0.811 1.000 0.816 0.972 0.943 0.946 0.926 S9 0.819 0.857 0.825 0.299 0.477 0.730 0.734 0.816 1.000 0.841 0.802 0.789 0.819 S10 0.972 0.966 0.957 0.349 0.483 0.935 0.804 0.972 0.841 1.000 0.927 0.959 0.919 S11 0.911 0.881 0.940 0.363 0.511 0.878 0.842 0.943 0.802 0.927 1.000 0.899 0.897 S12 0.990 0.963 0.947 0.352 0.476 0.958 0.842 0.946 0.789 0.959 0.899 1.000 0.917 对照特征图谱 0.927 0.919 0.944 0.656 0.768 0.907 0.886 0.926 0.819 0.919 0.897 0.917 1.000 表1.瓜蒌相似度计算结果。 红花 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释5倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 8N N O 双 9086- O618L8 O 9009- O 寸 A 寸寸 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 1 100 0 6 5 92.5 7.5 6 10 91.5 8.5 4 23 75 25 6 29 45 55 6 32 0 100 1 35 100 0 1 图1.红花UPLC分离结果。 注意事项 ▪红花中的化合物在该检测波长下响应较低，但可呈现最大峰容量，推荐样品处理时加大样品浓度。 红花标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.红花标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.995 0.998 0.992 0.991 0.991 0.991 0.985 0.994 0.997 0.997 0.998 0.975 0.970 0.974 0.998 S2 0.995 1.000 0.996 0.989 0.989 0.992 0.991 0.988 0.995 0.993 0.994 0.994 0.962 0.957 0.978 0.995 S3 0.998 0.996 1.000 0.991 0.991 0.990 0.991 0.985 0.993 0.996 0.997 0.998 0.969 0.965 0.974 0.997 S4 0.992 0.989 0.991 1.000 0.986 0.987 0.983 0.986 0.986 0.990 0.990 0.991 0.979 0.977 0.973 0.995 S5 0.991 0.989 0.991 0.986 1.000 0.989 0.995 0.987 0.991 0.991 0.990 0.990 0.967 0.964 0.975 0.994 S6 0.991 0.992 0.990 0.987 0.989 1.000 0.989 0.991 0.994 0.994 0.992 0.990 0.969 0.965 0.976 0.995 S7 0.991 0.991 0.991 0.983 0.995 0.989 1.000 0.985 0.991 0.991 0.990 0.990 0.962 0.958 0.975 0.993 S8 0.985 0.988 0.985 0.986 0.987 0.991 0.985 1.000 0.990 0.983 0.982 0.981 0.961 0.958 0.976 0.990 S9 0.994 0.995 0.993 0.986 0.991 0.994 0.991 0.990 1.000 0.993 0.992 0.992 0.967 0.962 0.981 0.995 S10 0.997 0.993 0.996 0.990 0.991 0.994 0.991 0.983 0.993 1.000 0.999 0.998 0.975 0.971 0.976 0.998 S11 0.997 0.994 0.997 0.990 0.990 0.992 0.990 0.982 0.992 0.999 1.000 0.999 0.973 0.968 0.975 0.997 S12 0.998 0.994 0.998 0.991 0.990 0.990 0.990 0.981 0.992 0.998 0.999 1.000 0.973 0.969 0.975 0.997 S13 0.975 0.962 0.969 0.979 0.967 0.969 0.962 0.961 0.967 0.975 0.973 0.973 1.000 0.999 0.951 0.982 S14 0.970 0.957 0.965 0.977 0.964 0.965 0.958 0.958 0.962 0.971 0.968 0.969 0.999 1.000 0.948 0.978 S15 0.974 0.978 0.974 0.973 0.975 0.976 0.975 0.976 0.981 0.976 0.975 0.975 0.951 0.948 1.000 0.980 对照特征图谱 0.998 0.995 0.997 0.995 0.994 0.995 0.993 0.990 0.995 0.998 0.997 0.997 0.982 0.978 0.980 1.000 表1.红花相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 95 5 初始 10 88 12 6 13 70 30 6 15 20 80 6 17 0 100 1 20 95 5 1 色谱柱 HSS T3， 2.1 x100 mm， 1.8 pm， p/n： 186003539 图1.黄柏UPLC分离结果上图：全局图；下图：局部放大图。 注意事项 升高柱温有助于提高黄柏中化合物的分离度。 °酯胖单 000'1 0001 000'l 000'1 7660 2660 000'l 0001 2660 6660 8660 6660 000'1 6660 0001 0001 园卫 韩 000% 0001 0001 0001 9660 8660 000'1 6660 2660 6660 2660 6660 0001 6660 6660 6660 0001 0001 0001 0001 9660 6660 6660 6660 2660 6660 9660 6660 0001 8660 6660 6660 tIS 0001 000'l 0001 0001 9660 8660 6660 6660 2660 6660 266'0 6660 6660 6660 6660 6660 EIS 7660 9660 9660 9660 0001 6660 7660 660 1660 2660 2860 7660 9660 1660 Z66'0 8660 ZIS 2660 8660 6660 8660 6660 0001 2660 9660 Z660 8660 8660 9660 2660 9660 9660 9660 lis 0001 000'1 6660 6660 7660 2660 000'1 6660 8660 6660 9660 8660 000'1 6660 6660 0001 OLS 0001 6660 6660 6660 1660 9660 6660 0001 8660 8660 8660 6660 6660 000L 0001 000'1 6S 2660 266'0 2660 266'0 1660 Z660 8660 8660 0001 2660 Z66'0 9660 6660 2660 2660 6660 8S 6660 6660 6660 6660 2660 8660 6660 8660 2660 000'1 9660 8660 6660 2660 8660 6660 LS 8660 2660 9660 2660 2860 8660 9660 8660 7660 9660 000'l 6660 9660 6660 8660 9660 9S 6660 6660 6660 6660 Z660 9660 8660 6660 9660 8660 6660 0001 8660 0001 0001 6660 9S 000'l 000'1 0001 6660 9660 2660 000'l 6660 6660 6660 9660 8660 000'1 6660 6660 000'1 ts 6660 6660 8660 6660 1660 9660 6660 000'1 2660 2660 6660 0001 6660 0001 000'1 6660 ES 0001 6660 6660 6660 7660 9660 6660 000 2660 8660 8660 000 6660 0001 0001 000L ZS 0001 6660 6660 6660 8660 9660 0001 000'1 6660 6660 9660 6660 000l 6660 0001 0001 IS 图亚 韩 is tls ElS ZIS Ils OIS 6S 8S LS 9S 9S tS ES ZS IS 合 °韩终秋丝鲜单忆图 凿真到自园形韩丝料兽 样品预处理供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释10倍，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 82 18 初始 2 80 20 6 2.1 74 26 6 5 74 26 6 5.5 45 55 6 8 35 65 6 10 0 100 1 13 82 18 1 图1.黄芩UPLC分离结果。 ( 注意事项 ) ·4min左右的6个色谱峰可在40°C时实现基线分离。 000'1 0001 6660 0001 2660 0001 0001 0001 0001 6660 000'1 000% 000'1 6660 0001 0001 图形韩 0001 0001 8660 6660 8660 6660 6660 6660 6660 6660 0001 6660 6660 8660 6660 6660 lS 6660 8660 0001 0001 9660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 0001 6660 6660 000'1 6660 0001 0001 2660 0001 000l 0001 000'1 6660 0001 0001 6660 0001 0001 0001 ELS 2660 8660 9660 2660 0001 2660 2660 9660 9660 9660 2660 2660 2660 9660 2660 2660 ZIS 0001 6660 6660 0001 2660 000l 0001 6660 0001 6660 0001 0001 0001 6660 000'1 0001 IlS 0001 6660 6660 0001 2660 0001 000'1 000l 000'1 0001 0001 0001 6660 6660 0001 0001 OLS 0001 6660 6660 0001 9660 6660 0001 0001 000'1 0001 000% 000'l 6660 6660 6660 0001 6S 0001 6660 6660 0001 9660 0001 0001 0001 0001 6660 0001 000'1 0001 6660 0001 000'l 8S 6660 6660 6660 6660 9660 6660 0001 0001 6660 0001 6660 6660 6660 6660 6660 6660 LS 0001 0001 6660 000'1 2660 0001 000l 000'l 6660 000'l 0001 0001 6660 000'1 000'l 9S 000'l 6660 6660 000'l 2660 0001 000'1 000'l 0001 6660 000'1 000'1 000l 6660 0001 000'1 9S 000'1 6660 6660 6660 2660 0001 6660 6660 000'1 6660 00'l 0001 000'1 6660 000'1 0001 tS 6660 8660 0001 000'1 9660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 6660 0001 6660 6660 ES 0001 6660 6660 0001 2660 0001 0001 6660 0001 6660 000'1 000'l 000'1 6660 0001 0001 ZS 000'1 6660 6660 000'1 2660 0001 000l 000'1 0001 6660 000' 000'1 000'l 6660 000'1 000 LS 形韩 9IS tls EIS ZlS lls Ols 6S 8S LS 9S 9S ts ES ZS IS 图形韩丝秋兽忆图 凿影真1卫吆丝单 鸡血藤 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 1 100 0 6 16 89 11 6 28 77 23 6 35 55 45 6 37 0 100 1 40 100 0 1 p/n： 186003540 图1.鸡血藤UPLC分离结果。 注意事项 鸡血藤中的化学成分复杂，需要使用150 mm UPLC色谱柱，以增加分离度。 鸡血藤标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.鸡血藤标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.944 0.904 0.917 0.891 0.909 0.894 0.926 0.780 0.955 0.946 0.961 0.957 S2 0.944 1.000 0.906 0.920 0.895 0.903 0.902 0.921 0.847 0.917 0.904 0.964 0.960 S3 0.904 0.906 1.000 0.843 0.966 0.917 0.945 0.973 0.915 0.868 0.954 0.885 0.964 S4 0.917 0.920 0.843 1.000 0.825 0.932 0.911 0.854 0.814 0.957 0.849 0.919 0.942 S5 0.891 0.895 0.966 0.825 1.000 0.912 0.918 0.952 0.882 0.850 0.950 0.890 0.949 S6 0.909 0.903 0.917 0.932 0.912 1.000 0.943 0.909 0.871 0.938 0.917 0.888 0.967 S7 0.894 0.902 0.945 0.911 0.918 0.943 1.000 0.951 0.928 0.910 0.920 0.891 0.974 S8 0.926 0.921 0.973 0.854 0.952 0.909 0.951 1.000 0.886 0.878 0.973 0.916 0.969 S9 0.780 0.847 0.915 0.814 0.882 0.871 0.928 0.886 1.000 0.808 0.819 0.792 0.910 S10 0.955 0.917 0.868 0.957 0.850 0.938 0.910 0.878 0.808 1.000 0.884 0.937 0.953 S11 0.946 0.904 0.954 0.849 0.950 0.917 0.920 0.973 0.819 0.884 1.000 0.913 0.956 S12 0.961 0.964 0.885 0.919 0.890 0.888 0.891 0.916 0.792 0.937 0.913 1.000 0.951 对照特 征图谱 0.957 0.960 0.964 0.942 0.949 0.967 0.974 0.969 0.910 0.953 0.956 0.951 1.000 表1.鸡血藤相似度计算结果。 荆芥 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 流动相条件： 梯度表： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 时间(min) A% B% 曲线 柱温 30°C 初始 100 0 初始 进样体积 1pL 0.2 99.5 0.5 15 6 6 流速 0.40 mL/min 8 85 6 波长 270 nm 15 76 24 6 流动相A 0.1%甲酸水溶液 21 55 45 6 流动相B 0.1%甲酸乙腈 24 100 1 27 1 图1.荆芥UPLC分离结果。 荆芥标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.荆芥标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特 征图谱 S1 1.000 0.949 0.941 0.958 0.948 0.972 0.966 0.956 0.980 0.922 0.920 0.934 0.971 S2 0.949 1.000 0.972 0.943 0.990 0.974 0.978 0.971 0.967 0.970 0.964 0.966 0.985 S3 0.941 0.972 1.000 0.959 0.982 0.976 0.979 0.972 0.975 0.980 0.977 0.979 0.987 S4 0.958 0.943 0.959 1.000 0.959 0.968 0.969 0.951 0.976 0.953 0.954 0.961 0.976 S5 0.948 0.990 0.982 0.959 1.000 0.982 0.986 0.973 0.973 0.987 0.983 0.985 0.993 S6 0.972 0.974 0.976 0.968 0.982 1.000 0.999 0.975 0.987 0.968 0.967 0.974 0.993 S7 0.966 0.978 0.979 0.969 0.986 0.999 1.000 0.974 0.985 0.975 0.974 0.979 0.995 S8 0.956 0.971 0.972 0.951 0.973 0.975 0.974 1.000 0.982 0.954 0.954 0.957 0.983 S9 0.980 0.967 0.975 0.976 0.973 0.987 0.985 0.982 1.000 0.959 0.959 0.967 0.991 S10 0.922 0.970 0.980 0.953 0.987 0.968 0.975 0.954 0.959 1.000 0.996 0.993 0.983 S11 0.920 0.964 0.977 0.954 0.983 0.967 0.974 0.954 0.959 0.996 1.000 0.997 0.982 S12 0.934 0.966 0.979 0.961 0.985 0.974 0.979 0.957 0.967 0.993 0.997 1.000 0.987 对照特 征图谱 0.971 0.985 0.987 0.976 0.993 0.993 0.995 0.983 0.991 0.983 0.982 0.987 1.000 表1.荆芥相似度计算结果。 样品预处理 焦栀子供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释5倍，12000转离心20 min， 取上清液，加水稀释10倍即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class B% 曲线 柱温 30C 5 初始 进样体积 1pL 20 6 流速 0.40 mL/min 26 1 波长 440/238nm 40 6 流动相A 水 90 1 流动相B 乙腈 5 1 CORTECS C18 2.1 x100 mm， 1.6 pm， 色谱柱p/n： 186007095 图1.焦栀子UPLC分离结果。 注意事项 ( 焦栀子中的成分在238nm和440nm下分别有较大响应，选取两个波长互相补充。 ) 1wA1网N3 。吉自管拳营 3出 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 流动相条件： 时间(min) A% B% 曲线 初始 99.5 0.5 初始 5.5 80 20 6 8 80 20 6 9.5 65 35 6 11 30 70 6 12 0 100 1 15 99.5 0.5 1 图1.苦参UPLC分离结果。 ( 注意事项 ) ( · 苦参中含有较多生物碱等碱性成分，需使用表面带电杂化颗粒色谱柱CSHC在甲酸条件下获得优异的峰形和分离度。 ) 苦参标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.苦参标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 对照特征 图谱 S1 1.000 0.992 0.995 0.994 0.995 0.995 0.995 0.965 0.992 0.995 0.995 0.996 S2 0.992 1.000 0.991 0.992 0.993 0.991 0.994 0.979 0.999 0.992 0.993 0.996 S3 0.995 0.991 1.000 0.998 0.999 0.999 0.999 0.970 0.992 0.998 0.999 0.998 S4 0.994 0.992 0.998 1.000 0.999 0.998 0.999 0.975 0.991 0.999 0.999 0.999 S5 0.995 0.993 0.999 0.999 1.000 0.998 1.000 0.975 0.993 0.999 0.999 0.999 S6 0.995 0.991 0.999 0.998 0.998 1.000 0.998 0.966 0.993 0.998 0.999 0.998 S7 0.995 0.994 0.999 0.999 1.000 0.998 1.000 0.977 0.993 0.999 0.999 1.000 S8 0.965 0.979 0.970 0.975 0.975 0.966 0.977 1.000 0.971 0.975 0.973 0.979 S9 0.992 0.999 0.992 0.991 0.993 0.993 0.993 0.971 1.000 0.991 0.993 0.995 S10 0.995 0.992 0.998 0.999 0.999 0.998 0.999 0.975 0.991 1.000 0.999 0.999 S11 0.995 0.993 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 0.973 0.993 0.999 1.000 0.999 对照特征图谱 0.996 0.996 0.998 0.999 0.999 0.998 1.000 0.979 0.995 0.999 0.999 1.000 表1.苦参相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 时间 (min) A% B% 曲线 柱温 40°C 初始 98 2 初始 进样体积 1pL 3 82 18 6 流速 0.50 mL/min 6 82 18 6 波长 235nm 10 30 70 6 流动相A 0.1%甲酸水溶液 13 0 100 1 流动相B 0.1%甲酸乙腈 16 98 2 1 图1.连翘UPLC分离结果。 注意事项 ■增加味温可改善化合物的分离度，最终选定柱温40°℃。 连翘标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.连翘标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.999 0.968 0.493 0.950 0.971 0.972 0.988 0.990 0.658 0.968 0.998 0.965 0.749 0.705 0.990 S2 0.999 1.000 0.972 0.488 0.950 0.971 0.973 0.990 0.991 0.659 0.971 0.998 0.967 0.747 0.703 0.992 S3 0.968 0.972 1.000 0.472 0.908 0.932 0.939 0.971 0.979 0.615 0.996 0.965 0.940 0.722 0.687 0.974 S4 0.493 0.488 0.472 1.000 0.426 0.462 0.458 0.497 0.489 0.810 0.421 0.516 0.451 0.866 0.881 0.501 S5 0.950 0.950 0.908 0.426 1.000 0.983 0.981 0.960 0.960 0.570 0.910 0.946 0.952 0.670 0.607 0.967 S6 0.971 0.971 0.932 0.462 0.983 1.000 0.999 0.988 0.970 0.622 0.928 0.973 0.990 0.713 0.658 0.988 S7 0.972 0.973 0.939 0.458 0.981 0.999 1.000 0.990 0.971 0.618 0.935 0.975 0.992 0.712 0.659 0.990 S8 0.988 0.990 0.971 0.497 0.960 0.988 0.990 1.000 0.986 0.649 0.965 0.991 0.989 0.747 0.701 0.998 S9 0.990 0.991 0.979 0.489 0.960 0.970 0.971 0.986 1.000 0.627 0.977 0.985 0.959 0.747 0.701 0.992 S10 0.658 0.659 0.615 0.810 0.570 0.622 0.618 0.649 0.627 1.000 0.594 0.680 0.626 0.870 0.871 0.655 S11 0.968 0.971 0.996 0.421 0.910 0.928 0.935 0.965 0.977 0.594 1.000 0.962 0.933 0.685 0.647 0.970 S12 0.998 0.998 0.965 0.516 0.946 0.973 0.975 0.991 0.985 0.680 0.962 1.000 0.971 0.762 0.720 0.991 S13 0.965 0.967 0.940 0.451 0.952 0.990 0.992 0.989 0.959 0.626 0.933 0.971 1.000 0.712 0.665 0.984 S14 0.749 0.747 0.722 0.866 0.670 0.713 0.712 0.747 0.747 0.870 0.685 0.762 0.712 1.000 0.993 0.754 S15 0.705 0.703 0.687 0.881 0.607 0.658 0.659 0.701 0.701 0.871 0.647 0.720 0.665 0.993 1.000 0.708 对照特征图谱 0.990 0.992 0.974 0.501 0.967 0.988 0.990 0.998 0.992 0.655 0.970 0.991 0.984 0.754 0.708 1.000 表1.连翘相似度计算结果。 样品预处理供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释2.5倍，0.2 um GHP滤膜取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 99.5 0.5 初始 0.5 99.5 0.5 6 15 85 15 6 20 70 30 6 25 0.5 99.5 6 30 99.5 0.5 1 色谱柱 CSH C18 2.1x100 mm， 1.7 um， p/n：186005297 图1.麻黄UPLC分离结果。 注意事项 ·麻黄中麻黄碱、伪麻黄碱含量较低，进样二者标准品可见如下图30结果。 麻黄汤剂使用表面带电杂化颗粒色谱柱CSH C8可获得常规文献及标准中未分离检测到的化合物，数目较多；且使用Qtof-UINIF进行了定性分析。 图2.麻黄碱、伪麻黄碱标准品分离结果。 麻黄标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图3.麻黄标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照特征 图谱 S1 1.000 0.796 0.753 0.669 0.721 0.537 0.550 0.498 0.491 0.566 0.773 S2 0.796 1.000 0.782 0.746 0.787 0.644 0.682 0.663 0.706 0.720 0.884 S3 0.753 0.782 1.000 0.814 0.973 0.754 0.784 0.648 0.759 0.565 0.907 S4 0.669 0.746 0.814 1.000 0.774 0.912 0.965 0.766 0.867 0.588 0.932 S5 0.721 0.787 0.973 0.774 1.000 0.698 0.742 0.714 0.732 0.677 0.905 S6 0.537 0.644 0.754 0.912 0.698 1.000 0.934 0.743 0.841 0.546 0.875 S7 0.550 0.682 0.784 0.965 0.742 0.934 1.000 0.747 0.869 0.529 0.897 S8 0.498 0.663 0.648 0.766 0.714 0.743 0.747 1.000 0.785 0.859 0.848 S9 0.491 0.706 0.759 0.867 0.732 0.841 0.869 0.785 1.000 0.581 0.863 S10 0.566 0.720 0.565 0.588 0.677 0.546 0.529 0.859 0.581 1.000 0.765 对照特征图谱 0.773 0.884 0.907 0.932 0.905 0.875 0.897 0.848 0.863 0.765 1.000 表1.麻黄相似度计算结果。 蜜麸炒白芍 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 97 3 初始 0.7 93 7 6 5 80 20 6 7 52 48 6 9 0 100 6 12 97 3 1 色谱柱 CORTECS C18，2.1x100 mm， 1.6 pm 图1.蜜麸炒白芍UPLC分离结果(不同批次)。 蜜麸炒白芍标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.蜜麸炒白芍标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.982 0.362 0.387 0.352 0.352 0.360 0.361 0.362 0.465 0.339 0.403 0.363 0.374 0.378 0.493 S2 0.982 1.000 0.291 0.323 0.296 0.296 0.302 0.302 0.303 0.371 0.289 0.330 0.304 0.311 0.315 0.433 S3 0.362 0.291 1.000 0.705 0.681 0.664 0.691 0.684 0.695 0.735 0.711 0.680 0.681 0.682 0.675 0.723 S4 0.387 0.323 0.705 1.000 0.994 0.993 0.992 0.992 0.992 0.972 0.992 0.990 0.993 0.993 0.994 0.989 S5 0.352 0.296 0.681 0.994 1.000 0.999 0.999 0.999 0.999 0.963 0.997 0.991 0.999 0.998 0.997 0.986 S6 0.352 0.296 0.664 0.993 0.999 1.000 0.999 0.999 0.998 0.962 0.995 0.990 0.999 0.998 0.997 0.985 S7 0.360 0.302 0.691 0.992 0.999 0.999 1.000 1.000 1.000 0.967 0.995 0.990 0.999 0.998 0.997 0.988 S8 0.361 0.302 0.684 0.992 0.999 0.999 1.000 1.000 1.000 0.968 0.995 0.992 0.999 0.999 0.998 0.988 S9 0.362 0.303 0.695 0.992 0.999 0.998 1.000 1.000 1.000 0.969 0.995 0.991 0.999 0.999 0.997 0.988 S10 0.465 0.371 0.735 0.972 0.963 0.962 0.967 0.968 0.969 1.000 0.951 0.984 0.968 0.974 0.975 0.980 S11 0.339 0.289 0.711 0.992 0.997 0.995 0.995 0.995 0.995 0.951 1.000 0.982 0.995 0.992 0.991 0.982 S12 0.403 0.330 0.680 0.990 0.991 0.990 0.990 0.992 0.991 0.984 0.982 1.000 0.994 0.996 0.997 0.989 S13 0.363 0.304 0.681 0.993 0.999 0.999 0.999 0.999 0.999 0.968 0.995 0.994 1.000 0.999 0.999 0.988 S14 0.374 0.311 0.682 0.993 0.998 0.998 0.998 0.999 0.999 0.974 0.992 0.996 0.999 1.000 0.999 0.990 S15 0.378 0.315 0.675 0.994 0.997 0.997 0.997 0.998 0.997 0.975 0.991 0.997 0.999 0.999 1.000 0.990 对照特 征图谱 0.493 0.433 0.723 0.989 0.986 0.985 0.988 0.988 0.988 0.980 0.982 0.989 0.988 0.990 0.990 1.000 表1.蜜麸炒白芍相似度计算结果。 蜜麸苍术 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 12 85 15 6 13 82 18 6 20 70 30 6 25 50 50 6 30 75 25 6 34 0 100 6 39 100 0 1 图1.蜜麸苍术UPLC分离结果。 蜜麸苍术标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.蜜麸苍术标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 对照特征图谱 S1 1.000 0.947 0.759 0.911 0.761 0.694 0.679 0.674 0.699 0.748 0.828 0.660 0.661 0.711 0.696 0.967 0.844 S2 0.947 1.000 0.713 0.897 0.771 0.740 0.728 0.725 0.748 0.739 0.891 0.721 0.691 0.751 0.704 0.923 0.863 S3 0.759 0.713 1.000 0.852 0.857 0.845 0.835 0.832 0.834 0.876 0.798 0.802 0.856 0.837 0.889 0.863 0.904 S4 0.911 0.897 0.852 1.000 0.795 0.757 0.745 0.735 0.775 0.794 0.838 0.731 0.751 0.767 0.799 0.952 0.889 S5 0.761 0.771 0.857 0.795 1.000 0.954 0.941 0.946 0.891 0.909 0.879 0.895 0.886 0.911 0.885 0.798 0.944 S6 0.694 0.740 0.845 0.757 0.954 1.000 0.993 0.991 0.967 0.918 0.913 0.972 0.960 0.971 0.941 0.748 0.960 S7 0.679 0.728 0.835 0.745 0.941 0.993 1.000 0.997 0.966 0.928 0.910 0.971 0.960 0.966 0.934 0.737 0.955 S8 0.674 0.725 0.832 0.735 0.946 0.991 0.997 1.000 0.956 0.925 0.905 0.961 0.947 0.961 0.922 0.731 0.949 S9 0.699 0.748 0.834 0.775 0.891 0.967 0.966 0.956 1.000 0.920 0.942 0.985 0.975 0.982 0.947 0.760 0.960 S10 0.748 0.739 0.876 0.794 0.909 0.918 0.928 0.925 0.920 1.000 0.896 0.912 0.917 0.934 0.936 0.807 0.949 S11 0.828 0.891 0.798 0.838 0.879 0.913 0.910 0.905 0.942 0.896 1.000 0.932 0.895 0.945 0.876 0.852 0.963 S12 0.660 0.721 0.802 0.731 0.895 0.972 0.971 0.961 0.985 0.912 0.932 1.000 0.968 0.991 0.950 0.714 0.947 S13 0.661 0.691 0.856 0.751 0.886 0.960 0.960 0.947 0.975 0.917 0.895 0.968 1.000 0.962 0.965 0.742 0.944 S14 0.711 0.751 0.837 0.767 0.911 0.971 0.966 0.961 0.982 0.934 0.945 0.991 0.962 1.000 0.960 0.760 0.964 S15 0.696 0.704 0.889 0.799 0.885 0.941 0.934 0.922 0.947 0.936 0.876 0.950 0.965 0.960 1.000 0.773 0.949 S16 0.967 0.923 0.863 0.952 0.798 0.748 0.737 0.731 0.760 0.807 0.852 0.714 0.742 0.760 0.773 1.000 0.892 对照特征图谱 0.844 0.863 0.904 0.889 0.944 0.960 0.955 0.949 0.960 0.949 0.963 0.947 0.944 0.964 0.949 0.892 1.000 表1.蜜麸苍术相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min， 取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 梯度表： 液相系统 ACQUITYUPLC H-Class B% 曲线 柱温 35C 0 初始 进样体积 1uL 20 6 流速 0.4 mL/min 30 6 波长 283/225nm 6 流动相A 0.1%甲酸水溶液 1 流动相B 0.1%甲酸甲醇 色谱柱 HSS T3，2.1x100 mm， 1.8 pm， p/n： 186003539 图1.蜜麸炒枳壳UPLC分离结果。 蜜麸炒枳壳标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.蜜麸炒枳壳标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.992 0.997 0.998 0.997 0.995 0.990 0.996 0.976 0.997 0.989 0.992 0.999 S2 0.992 1.000 0.988 0.988 0.984 0.981 0.999 0.997 0.946 0.983 0.966 0.972 0.990 S3 0.997 0.988 1.000 0.999 0.999 0.998 0.984 0.994 0.978 0.995 0.989 0.995 0.998 S4 0.998 0.988 0.999 1.000 1.000 0.999 0.984 0.995 0.981 0.996 0.991 0.996 0.999 S5 0.997 0.984 0.999 1.000 1.000 0.999 0.980 0.993 0.984 0.996 0.993 0.998 0.999 S6 0.995 0.981 0.998 0.999 0.999 1.000 0.976 0.992 0.989 0.997 0.995 0.999 0.998 S7 0.990 0.999 0.984 0.984 0.980 0.976 1.000 0.995 0.939 0.980 0.961 0.966 0.986 S8 0.996 0.997 0.994 0.995 0.993 0.992 0.995 1.000 0.968 0.993 0.981 0.986 0.997 S9 0.976 0.946 0.978 0.981 0.984 0.989 0.939 0.968 1.000 0.988 0.996 0.994 0.982 S10 0.997 0.983 0.995 0.996 0.996 0.997 0.980 0.993 0.988 1.000 0.997 0.996 0.998 S11 0.989 0.966 0.989 0.991 0.993 0.995 0.961 0.981 0.996 0.997 1.000 0.997 0.993 S12 0.992 0.972 0.995 0.996 0.998 0.999 0.966 0.986 0.994 0.996 0.997 1.000 0.996 对照特征图谱 0.999 0.990 0.998 0.999 0.999 0.998 0.986 0.997 0.982 0.998 0.993 0.996 1.000 表1.蜜麸炒枳壳相似度计算结果。 牡丹皮 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 流动相条件： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class B% 曲线 柱温 40°C 2 初始 进样体积 0.5 pL 13 6 流速 0.50 mL/min 13 6 波长 254/225nm 40 6 流动相A 0.2%甲酸水溶液 100 6 流动相B 0.1%甲酸乙腈 100 6 色谱柱 BEH Shield RP18， 2.1x100 mm， 1.7 um， 2 1 p/n： 186002854 图1.牡丹皮UPLC分离结果。 牡丹皮标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.牡丹皮标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.993 0.876 0.968 0.969 0.972 0.971 0.996 0.994 0.987 0.991 0.957 0.977 0.988 0.849 0.993 S2 0.993 1.000 0.853 0.959 0.960 0.969 0.974 0.996 0.995 0.991 0.991 0.970 0.988 0.984 0.830 0.991 S3 0.876 0.853 1.000 0.933 0.828 0.867 0.846 0.868 0.850 0.844 0.841 0.833 0.861 0.928 0.990 0.909 S4 0.968 0.959 0.933 1.000 0.957 0.939 0.952 0.962 0.961 0.960 0.966 0.922 0.957 0.978 0.918 0.983 S5 0.969 0.960 0.828 0.957 1.000 0.948 0.968 0.965 0.973 0.954 0.965 0.908 0.946 0.946 0.796 0.964 S6 0.972 0.969 0.867 0.939 0.948 1.000 0.959 0.979 0.966 0.965 0.957 0.963 0.968 0.968 0.834 0.978 S7 0.971 0.974 0.846 0.952 0.968 0.959 1.000 0.974 0.975 0.956 0.966 0.927 0.963 0.964 0.829 0.975 S8 0.996 0.996 0.868 0.962 0.965 0.979 0.974 1.000 0.995 0.989 0.989 0.968 0.985 0.986 0.839 0.993 S9 0.994 0.995 0.850 0.961 0.973 0.966 0.975 0.995 1.000 0.986 0.992 0.950 0.975 0.979 0.821 0.987 S10 0.987 0.991 0.844 0.960 0.954 0.965 0.956 0.989 0.986 1.000 0.993 0.978 0.986 0.973 0.818 0.986 S11 0.991 0.991 0.841 0.966 0.965 0.957 0.966 0.989 0.992 0.993 1.000 0.957 0.977 0.973 0.820 0.985 S12 0.957 0.970 0.833 0.922 0.908 0.963 0.927 0.968 0.950 0.978 0.957 1.000 0.988 0.955 0.805 0.966 S13 0.977 0.988 0.861 0.957 0.946 0.968 0.963 0.985 0.975 0.986 0.977 0.988 1.000 0.976 0.838 0.987 S14 0.988 0.984 0.928 0.978 0.946 0.968 0.964 0.986 0.979 0.973 0.973 0.955 0.976 1.000 0.910 0.995 S15 0.849 0.830 0.990 0.918 0.796 0.834 0.829 0.839 0.821 0.818 0.820 0.805 0.838 0.910 1.000 0.887 对照特征图谱 0.993 0.991 0.909 0.983 0.964 0.978 0.975 0.993 0.987 0.986 0.985 0.966 0.987 0.995 0.887 1.000 表1.牡丹皮相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 5 94 6 6 13.5 85 15 6 14.5 80.5 19.5 6 22 80.5 19.5 6 28 62 38 6 31 0 100 6 34 100 0 1 p/n： 186008500 图1.牛膝UPLC分离结果。 牛膝标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.牛膝标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.849 0.975 0.832 0.535 0.530 0.883 0.863 0.844 0.527 0.536 0.814 0.840 S2 0.849 1.000 0.886 0.970 0.856 0.867 0.978 0.990 0.970 0.872 0.863 0.986 0.991 S3 0.975 0.886 1.000 0.855 0.568 0.572 0.892 0.890 0.870 0.589 0.579 0.844 0.868 S4 0.832 0.970 0.855 1.000 0.847 0.867 0.987 0.981 0.997 0.866 0.855 0.949 0.982 S5 0.535 0.856 0.568 0.847 1.000 0.989 0.826 0.857 0.836 0.984 0.994 0.891 0.892 S6 0.530 0.867 0.572 0.867 0.989 1.000 0.839 0.863 0.854 0.991 0.986 0.894 0.898 S7 0.883 0.978 0.892 0.987 0.826 0.839 1.000 0.988 0.987 0.836 0.829 0.961 0.985 S8 0.863 0.990 0.890 0.981 0.857 0.863 0.988 1.000 0.982 0.869 0.865 0.978 0.994 S9 0.844 0.970 0.870 0.997 0.836 0.854 0.987 0.982 1.000 0.858 0.844 0.947 0.982 S10 0.527 0.872 0.589 0.866 0.984 0.991 0.836 0.869 0.858 1.000 0.990 0.890 0.900 S11 0.536 0.863 0.579 0.855 0.994 0.986 0.829 0.865 0.844 0.990 1.000 0.886 0.896 S12 0.814 0.986 0.844 0.949 0.891 0.894 0.961 0.978 0.947 0.890 0.886 1.000 0.984 对照特征图谱 0.840 0.991 0.868 0.982 0.892 0.898 0.985 0.994 0.982 0.900 0.896 0.984 1.000 表1.牛膝相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 97 3 初始 10 82 18 6 13 60 40 6 15 0 100 6 18 0 100 6 20 97 3 1 色谱柱 HSS T3， 2.1x 150 mm， 1.8 pm， p/n： 186003540 图1.女贞子UPLC分离结果。 女贞子标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.女贞子标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.520 0.740 0.734 0.777 0.951 0.956 0.706 0.949 0.921 0.923 0.942 0.898 S2 0.520 1.000 0.804 0.805 0.807 0.566 0.497 0.526 0.557 0.593 0.587 0.484 0.755 S3 0.740 0.804 1.000 0.999 0.997 0.841 0.643 0.900 0.826 0.861 0.854 0.702 0.950 S4 0.734 0.805 0.999 1.000 0.997 0.837 0.637 0.897 0.821 0.857 0.851 0.696 0.947 S5 0.777 0.807 0.997 0.997 1.000 0.867 0.689 0.890 0.853 0.885 0.879 0.740 0.966 S6 0.951 0.566 0.841 0.837 0.867 1.000 0.923 0.831 0.995 0.991 0.991 0.948 0.959 S7 0.956 0.497 0.643 0.637 0.689 0.923 1.000 0.588 0.933 0.901 0.905 0.969 0.847 S8 0.706 0.526 0.900 0.897 0.890 0.831 0.588 1.000 0.826 0.843 0.835 0.680 0.869 S9 0.949 0.557 0.826 0.821 0.853 0.995 0.933 0.826 1.000 0.989 0.989 0.963 0.953 S10 0.921 0.593 0.861 0.857 0.885 0.991 0.901 0.843 0.989 1.000 0.999 0.932 0.964 S11 0.923 0.587 0.854 0.851 0.879 0.991 0.905 0.835 0.989 0.999 1.000 0.933 0.961 S12 0.942 0.484 0.702 0.696 0.740 0.948 0.969 0.680 0.963 0.932 0.933 1.000 0.880 对照特征图谱 0.898 0.755 0.950 0.947 0.966 0.959 0.847 0.869 0.953 0.964 0.961 0.880 1.000 表1.女贞子相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释5倍， 0.2 um GHP滤膜取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 80 20 初始 6.5 80 20 6 10 70 30 6 19.5 67.5 32.5 8 22.5 0 100 1 25.5 80 20 1 色谱柱 CORTECS C18 21x100 mm， 1.6 pm， p/n：186007095 图1.人参UPLC分离结果。 注意事项 人参汤剂中大极性成分较多，需加强色谱柱的清洗； ▪人参皂苷Rg1与Re保留行为接近，可增加梯度时间或者更换更长色谱柱得到实现更好的分离； ■人参中皂苷类成分可在QDa等质谱检测器上获得更好的响应，作为UV可见化合物的补充。 人参标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.人参标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照特征图谱 S1 1.000 0.981 0.899 0.975 0.970 0.989 0.883 0.898 0.947 0.957 0.973 S2 0.981 1.000 0.938 0.977 0.977 0.985 0.914 0.926 0.975 0.966 0.987 S3 0.899 0.938 1.000 0.941 0.899 0.908 0.983 0.986 0.967 0.969 0.972 S4 0.975 0.977 0.941 1.000 0.978 0.964 0.930 0.928 0.982 0.960 0.985 S5 0.970 0.977 0.899 0.978 1.000 0.961 0.877 0.888 0.966 0.935 0.968 S6 0.989 0.985 0.908 0.964 0.961 1.000 0.886 0.904 0.950 0.959 0.973 S7 0.883 0.914 0.983 0.930 0.877 0.886 1.000 0.978 0.957 0.960 0.959 S8 0.898 0.926 0.986 0.928 0.888 0.904 0.978 1.000 0.954 0.982 0.968 S9 0.947 0.975 0.967 0.982 0.966 0.950 0.957 0.954 1.000 0.968 0.989 S10 0.957 0.966 0.969 0.960 0.935 0.959 0.960 0.982 0.968 1.000 0.990 对照特征图谱 0.973 0.987 0.972 0.985 0.968 0.973 0.959 0.968 0.989 0.990 1.000 表1.人参相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 色谱柱 p/n： 186003540 流动相条件： 梯度表： 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 时间 (min) A% B% 曲线 柱温 30°C 初始 100 0 初始 进样体积 5pL 7 84 16 6 流速 0.35 mL/min 9 50 50 6 波长 270nm 11 0 100 1 流动相A 0.1%甲酸水溶液 14 100 0 1 流动相B 0.1%甲酸乙腈 图1.山药UPLC分离结果。 注意事项 ·山药中的极性成分在普通C柱上无法保留，使用150mm柱长极性化合物专用柱HSST3可获得保留，且得到基线分离。 山药标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.山药标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 对照特征图谱 S1 1.000 0.567 0.817 0.772 0.857 0.650 0.843 0.757 0.812 0.932 0.760 0.898 S2 0.567 1.000 0.618 0.624 0.555 0.592 0.677 0.574 0.621 0.600 0.657 0.722 S3 0.817 0.618 1.000 0.939 0.977 0.643 0.792 0.878 0.651 0.765 0.733 0.931 S4 0.772 0.624 0.939 1.000 0.935 0.623 0.769 0.898 0.575 0.712 0.739 0.921 S5 0.857 0.555 0.977 0.935 1.000 0.642 0.793 0.852 0.650 0.789 0.748 0.925 S6 0.650 0.592 0.643 0.623 0.642 1.000 0.594 0.603 0.917 0.639 0.563 0.749 S7 0.843 0.677 0.792 0.769 0.793 0.594 1.000 0.739 0.702 0.928 0.927 0.904 S8 0.757 0.574 0.878 0.898 0.852 0.603 0.739 1.000 0.607 0.707 0.721 0.919 S9 0.812 0.621 0.651 0.575 0.650 0.917 0.702 0.607 1.000 0.805 0.627 0.790 S10 0.932 0.600 0.765 0.712 0.789 0.639 0.928 0.707 0.805 1.000 0.845 0.886 S11 0.760 0.657 0.733 0.739 0.748 0.563 0.927 0.721 0.627 0.845 1.000 0.868 对照特征 图谱 0.898 0.722 0.931 0.921 0.925 0.749 0.904 0.919 0.790 0.886 0.868 1.000 表1.山药相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 97 3 初始 1 97 3 6 2.5 92 8 6 6 92 8 6 9 85 15 6 13 72 28 6 15 2 98 1 18 97 3 1 图1.山茱萸UPLC分离结果。 山茱萸标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.山茱萸标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特 征图谱 S1 1.000 0.995 0.991 0.993 0.997 0.988 0.996 0.992 0.994 0.993 0.996 0.996 0.998 S2 0.995 1.000 0.997 0.983 0.996 0.995 0.999 0.983 0.996 0.995 0.997 0.997 0.998 S3 0.991 0.997 1.000 0.974 0.996 0.999 0.997 0.974 0.995 0.997 0.998 0.998 0.997 S4 0.993 0.983 0.974 1.000 0.985 0.969 0.982 1.000 0.977 0.975 0.980 0.980 0.988 S5 0.997 0.996 0.996 0.985 1.000 0.994 0.998 0.984 0.998 0.999 0.999 0.999 0.999 S6 0.988 0.995 0.999 0.969 0.994 1.000 0.996 0.969 0.992 0.996 0.996 0.996 0.994 S7 0.996 0.999 0.997 0.982 0.998 0.996 1.000 0.982 0.998 0.998 0.999 0.999 0.999 S8 0.992 0.983 0.974 1.000 0.984 0.969 0.982 1.000 0.977 0.975 0.980 0.980 0.988 S9 0.994 0.996 0.995 0.977 0.998 0.992 0.998 0.977 1.000 0.998 0.998 0.998 0.997 S10 0.993 0.995 0.997 0.975 0.999 0.996 0.998 0.975 0.998 1.000 0.999 0.999 0.997 S11 0.996 0.997 0.998 0.980 0.999 0.996 0.999 0.980 0.998 0.999 1.000 1.000 0.999 S12 0.996 0.997 0.998 0.980 0.999 0.996 0.999 0.980 0.998 0.999 1.000 1.000 0.999 对照特征图谱 0.998 0.998 0.997 0.988 0.999 0.994 0.999 0.988 0.997 0.997 0.999 0.999 1.000 表1.山茱萸相似度计算结果。 夏枯草 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液用50%乙醇稀释50倍。 UPLC分离条件及结果 液相系统 ACQUITY UPLC H-Class 柱温 40°C B% 曲线 进样体积 1pL 2 初始 流速 0.4 mL/min 18 6 波长 260/330 nm 28 6 流动相A 水 38 6 流动相B 乙腈 100 1 色谱柱 HSS T3，2.1x100 mm， 1.8 pm， 2 1 p/n：186003539 图1.夏枯草UPLC分离结果。 夏枯草标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.夏枯草标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18 对照 特征 图谱 S1 1.000 1.000 0.999 0.999 0.841 0.8420.850 0.808 0.974 0.974 0.844 0.882 0.894 0.865 0.833 0.880 0.813 0.802 0.916 S2 1.000 1.000 0.999 0.999 0.842 0.843 0.851 0.809 0.973 0.974 0.845 0.883 0.894 0.865 0.8340.880 0.814 0.803 0.916 S3 0.999 0.999 1.000 1.000 0.843 0.973 0.973 0.848 0.887 0.895 0.867 0.8350.882 0.8150.804 0.918 S4 0.999 0.999 1.000 1.000 0.839 0.839 0.847( 0.805 0.973 0.973 0.844 0.884 0.891 0.863 0.831 0.878 0.810 0.800 0.914 S5 0.841 0.842 0.843 0.8391 1.000 0.771 0.772 0.995 0.988 0.982 0.992 0.994 0.981 S6 0.842 0.843 0.844 0.839 0.993 11.000 1.000 0.991 0.763 0.764 0.993 0.983 0.970 0.980 0.979 0.967 0.974 0.980 0.979 S7 0.850 0.851 0.852 0.8470.993 11.000 1.000 0.989 0.772 0.773 0.992 0.984 0.971 0.981 0.978 0.968 0.9730.979 0.981 S8 0.808 0.809 0.810 0.805 0.995 0.991 0.989 1.000 0.723 0.725 0.991 0.976 0.965 0.979 0.987 0.962 0.988 0.991 0.970 S9 0.974 0.973 0.973 0.973 0.771 0.763 0.772 0.723 1.000 1.000 0.767 0.822 0.854 0.815 0.771 0.848 0.740 0.725 0.865 S10 0.974 0.974 0.973 0.973 0.772 0.7640.773 0.725 1.000 1.000 0.769 0.824 0.856 0.817 0.773 0.849 0.742 0.727 0.866 S11 0.844 0.845 0.848 0.8440.995 0.767 0.769 1.000 0.993 0.977 0.988 0.9870.973 0.9820.985 0.983 S12 0.882 0.883 0.887 0.8840.988 0.976 0.822 0.824 0.993 1.000 0.985 0.991 0.980 0.982 0.9680.970 0.991 S13 0.894 0.894 0.895 0.891 0.982 0.970 0.9710.965 0.854 0.856 0.977 0.985 1.000 0.995 0.9880.998 0.9750.973 0.995 S14 0.865 0.865 0.867 0.863 60.992 0.980 0.981 0.979 0.815 0.817 0.988 0.991 0.995 1.000 0.993 0.995 0.9840.983 0.992 S15 0.833 0.834 0.835 0.831 (0.994 0.979 0.9780.987 0.771 0.773 0.987 0.980 0.988 0.993 1.000 0.986 0.9960.996 0.983 S16 0.880 0.880 0.882 0.878 0.981 0.9671 0.968( 0.962 0.848 0.849 0.973 0.982 0.998 0.995 0.986 1.000 0.9720.970 0.991 S17 0.813 0.814 0.815 0.810 0.989 0.9740.973 0.988 0.740 0.742 0.982 0.968 0.975 0.984 0.9960.972 S18 0.802 0.803 0.804 0.800 (0.992 0.980 0.979 0.991 0.725 0.727 0.985 0.970 0.973 0.983 0.9960.970 0.9981.000 0.970 对照特征 图谱 0.916 0.916 0.918 0.914 0.985 0.979 0.981 0.970 0.865 0.866 0.983 0.991 0.995 0.992 0.983 0.991 0.9720.970 1.000 表1.夏枯草相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间 (min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 1.5 87 13 6 7 65 35 6 8.5 50 50 6 10 0 100 1 ：13 100 0 1 色谱柱 BEH Shield RP18， 2.1x100 mm， 1.7 um， p/n： 186002854 图1.续断UPLC分离结果。 续断标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.续断标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.961 0.882 0.894 0.962 0.886 0.892 0.797 0.863 0.803 0.868 0.877 0.944 S2 0.961 1.000 0.812 0.831 0.922 0.825 0.829 0.846 0.882 0.813 0.817 0.820 0.910 S3 0.882 0.812 1.000 0.973 0.934 0.975 0.973 0.779 0.751 0.914 0.916 0.965 0.961 S4 0.894 0.831 0.973 1.000 0.941 0.999 1.000 0.789 0.771 0.923 0.976 0.990 0.980 S5 0.962 0.922 0.934 0.941 1.000 0.940 0.940 0.866 0.898 0.899 0.899 0.932 0.981 S6 0.886 0.825 0.975 0.999 0.940 1.000 0.999 0.788 0.775 0.932 0.972 0.993 0.979 S7 0.892 0.829 0.973 1.000 0.940 0.999 1.000 0.788 0.768 0.924 0.976 0.991 0.979 S8 0.797 0.846 0.779 0.789 0.866 0.788 0.788 1.000 0.862 0.868 0.781 0.788 0.866 S9 0.863 0.882 0.751 0.771 0.898 0.775 0.768 0.862 1.000 0.833 0.756 0.784 0.871 S10 0.803 0.813 0.914 0.923 0.899 0.932 0.924 0.868 0.833 1.000 0.893 0.936 0.942 S11 0.868 0.817 0.916 0.976 0.899 0.972 0.976 0.781 0.756 0.893 1.000 0.975 0.956 S12 0.877 0.820 0.965 0.990 0.932 0.993 0.991 0.788 0.784 0.936 0.975 1.000 0.976 对照特征图谱 0.944 0.910 0.961 0.980 0.981 0.979 0.979 0.866 0.871 0.942 0.956 0.976 1.000 表1.续断相似度计算结果。 样品预处理 供试品溶液的制备取标准汤剂适量，12000转离心20 min，取上清液用50%乙醇稀释50倍。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 1.5 99 1 6 5 90 10 6 10 60 40 6 13 0 100 6 16 100 1 HSS T3， 21x100 mm， 1.8 um， 色谱柱 p/n： 186003539 图1.玄参UPLC分离结果。 玄参标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.玄参标准汤剂特征图谱。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.932 0.930 0.794 0.822 0.783 0.716 0.748 0.883 0.909 0.814 0.908 0.893 0.859 0.885 0.913 S2 0.932 1.000 0.994 0.720 0.725 0.713 0.516 0.679 0.777 0.821 0.788 0.866 0.791 0.873 0.800 0.851 S3 0.930 0.994 1.000 0.712 0.720 0.699 0.512 0.666 0.768 0.818 0.777 0.867 0.790 0.870 0.794 0.846 S4 0.794 0.720 0.712 1.000 0.994 0.980 0.918 0.972 0.934 0.926 0.956 0.882 0.945 0.921 0.952 0.964 S5 0.822 0.725 0.720 0.994 1.000 0.971 0.930 0.961 0.954 0.947 0.954 0.900 0.965 0.923 0.966 0.973 S6 0.783 0.713 0.699 0.980 0.971 1.000 0.908 0.991 0.922 0.911 0.952 0.871 0.923 0.896 0.943 0.954 S7 0.716 0.516 0.512 0.918 0.930 0.908 1.000 0.898 0.874 0.856 0.811 0.767 0.884 0.748 0.882 0.865 S8 0.748 0.679 0.666 0.972 0.961 0.991 0.898 1.000 0.910 0.877 0.950 0.829 0.904 0.866 0.913 0.932 S9 0.883 0.777 0.768 0.934 0.954 0.922 0.874 0.910 1.000 0.962 0.941 0.921 0.978 0.907 0.962 0.970 S10 0.909 0.821 0.818 0.926 0.947 0.911 0.856 0.877 0.962 1.000 0.919 0.983 0.985 0.946 0.992 0.982 S11 0.814 0.788 0.777 0.956 0.954 0.952 0.811 0.950 0.941 0.919 1.000 0.902 0.937 0.937 0.941 0.962 S12 0.908 0.866 0.867 0.882 0.900 0.871 0.767 0.829 0.921 0.983 0.902 1.000 0.958 0.955 0.972 0.963 S13 0.893 0.791 0.790 0.945 0.965 0.923 0.884 0.904 0.978 0.985 0.937 0.958 1.000 0.935 0.986 0.983 S14 0.859 0.873 0.870 0.921 0.923 0.896 0.748 0.866 0.907 0.946 0.937 0.955 0.935 1.000 0.948 0.963 S15 0.885 0.800 0.794 0.952 0.966 0.943 0.882 0.913 0.962 0.992 0.941 0.972 0.986 0.948 1.000 0.988 对照特 征图谱 0.913 0.851 0.846 0.964 0.973 0.954 0.865 0.932 0.970 0.982 0.962 0.963 0.983 0.963 0.988 1.000 表1.玄参相似度计算结果。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.993 0.895 0.998 0.999 0.997 0.998 0.998 0.998 0.987 0.998 0.994 0.999 0.998 0.998 0.999 S2 0.993 1.000 0.877 0.986 0.993 0.987 0.994 0.989 0.991 0.978 0.993 0.986 0.993 0.990 0.993 0.992 S3 0.895 0.877 1.000 0.903 0.886 0.900 0.895 0.900 0.892 0.878 0.899 0.894 0.895 0.900 0.893 0.898 S4 0.998 0.986 0.903 1.000 0.996 0.998 0.994 0.999 0.998 0.989 0.997 0.995 0.998 0.999 0.997 0.998 S5 0.999 0.993 0.886 0.996 1.000 0.996 0.998 0.997 0.997 0.988 0.998 0.993 0.998 0.997 0.998 0.998 S6 0.997 0.987 0.900 0.998 0.996 1.000 0.994 0.998 0.996 0.994 0.998 0.996 0.998 0.999 0.997 0.999 S7 0.998 0.994 0.895 0.994 0.998 0.994 1.000 0.997 0.997 0.984 0.998 0.992 0.998 0.996 0.998 0.998 S8 0.998 0.989 0.900 0.999 0.997 0.998 0.997 1.000 0.999 0.988 0.997 0.995 0.998 0.999 0.998 0.999 S9 0.998 0.991 0.892 0.998 0.997 0.996 0.997 0.999 1.000 0.987 0.997 0.995 0.998 0.997 0.997 0.999 S10 0.987 0.978 0.878 0.989 0.988 0.994 0.984 0.988 0.987 1.000 0.990 0.990 0.988 0.989 0.987 0.991 S11 0.998 0.993 0.899 0.997 0.998 0.998 0.998 0.997 0.997 0.990 1.000 0.995 0.999 0.999 0.999 0.999 S12 0.994 0.986 0.894 0.995 0.993 0.996 0.992 0.995 0.995 0.990 0.995 1.000 0.996 0.995 0.995 0.997 S13 0.999 0.993 0.895 0.998 0.998 0.998 0.998 0.998 0.998 0.988 0.999 0.996 1.000 1.000 1.000 0.999 S14 0.998 0.990 0.900 0.999 0.997 0.999 0.996 0.999 0.997 0.989 0.999 0.995 1.000 1.000 0.999 0.999 S15 0.998 0.993 0.893 0.997 0.998 0.997 0.998 0.998 0.997 0.987 0.999 0.995 1.000 0.999 1.000 0.999 对照特 征图谱 0.999 0.992 0.898 0.998 0.998 0.999 0.998 0.999 0.999 0.991 0.999 0.997 0.999 0.999 0.999 1.000 表1.焦栀子相似度计算结果(238nm)。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 对照特征图谱 S1 1.000 0.995 0.005 0.989 0.998 0.908 0.994 0.955 0.987 0.979 0.993 0.722 0.589 0.526 0.594 0.990 S2 0.995 1.000 0.004 0.977 0.993 0.885 0.983 0.933 0.973 0.963 0.985 0.696 0.562 0.500 0.566 0.979 S3 0.005 0.004 1.000 0.016 0.006 0.019 0.008 0.020 0.013 0.015 0.011 0.071 0.082 0.103 0.083 0.018 S4 0.989 0.977 0.016 1.000 0.990 0.945 0.995 0.984 0.998 0.993 0.996 0.793 0.691 0.632 0.696 0.998 S5 0.998 0.993 0.006 0.990 1.000 0.923 0.995 0.962 0.989 0.983 0.996 0.741 0.611 0.545 0.613 0.993 S6 0.908 0.885 0.019 0.945 0.923 1.000 0.946 0.984 0.953 0.973 0.947 0.896 0.802 0.726 0.796 0.954 S7 0.994 0.983 0.008 0.995 0.995 0.946 1.000 0.979 0.996 0.995 0.998 0.772 0.648 0.579 0.649 0.998 S8 0.955 0.933 0.020 0.984 0.962 0.984 0.979 1.000 0.988 0.993 0.979 0.853 0.759 0.691 0.759 0.986 S9 0.987 0.973 0.013 0.998 0.989 0.953 0.996 0.988 1.000 0.996 0.996 0.796 0.689 0.626 0.693 0.999 S10 0.979 0.963 0.015 0.993 0.983 0.973 0.995 0.993 0.996 1.000 0.994 0.822 0.714 0.646 0.714 0.997 S11 0.993 0.985 0.011 0.996 0.996 0.947 0.998 0.979 0.996 0.994 1.000 0.788 0.668 0.604 0.670 0.999 S12 0.722 0.696 0.071 0.793 0.741 0.896 0.772 0.853 0.796 0.822 0.788 1.000 0.910 0.866 0.903 0.799 S13 0.589 0.562 0.082 0.691 0.611 0.802 0.648 0.759 0.689 0.714 0.668 0.910 1.000 0.988 0.997 0.688 S14 0.526 0.500 0.103 0.632 0.545 0.726 0.579 0.691 0.626 0.646 0.604 0.866 0.988 1.000 0.990 0.624 S15 0.594 0.566 0.083 0.696 0.613 0.796 0.649 0.759 0.693 0.714 0.670 0.903 0.997 0.990 1.000 0.690 对照特征图谱 0.990 0.979 0.018 0.998 0.993 0.954 0.998 0.986 0.999 0.997 0.999 0.799 0.688 0.624 0.690 1.000 表2.焦栀子相似度计算结果(440 nm)。 栀子 样品预处理 栀子供试品溶液的制备取标准汤剂适量，加水稀释10倍，i，12000转离心20 min，取上清液，加水稀释10倍即得。 UPLC分离条件及结果 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 95 5 初始 4 80 20 6 4.1 74 26 1 8.5 60 40 6 10 10 90 1 13 95 5 1 色谱柱 CORTECS C18 2.1x100 mm， 1.6 um， p/n：186007095 图1.栀子UPLC分离结果。 注意事项 栀子中的成分在238nm和440nm下分别有较大响应，选取两个波长互相补充。 栀子标准汤剂特征图谱及相似度计算结果 图2.栀子标准汤剂特征图谱(238nm)。 图3.栀子标准汤剂特征图谱(440 nm)。 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特征图谱 S1 1.000 0.991 0.997 0.997 0.998 0.995 0.997 0.996 0.997 0.995 0.996 0.996 0.999 S2 0.991 1.000 0.988 0.988 0.986 0.990 0.986 0.988 0.987 0.995 0.990 0.996 0.993 S3 0.997 0.988 1.000 0.995 0.997 0.993 1.000 0.999 0.994 0.994 0.998 0.993 0.998 S4 0.997 0.988 0.995 1.000 0.999 0.998 0.996 0.995 0.996 0.993 0.996 0.994 0.998 S5 0.998 0.986 0.997 0.999 1.000 0.998 0.997 0.995 0.998 0.992 0.995 0.993 0.998 S6 0.995 0.990 0.993 0.998 0.998 1.000 0.993 0.993 0.996 0.992 0.994 0.994 0.997 S7 0.997 0.986 1.000 0.996 0.997 0.993 1.000 0.999 0.994 0.994 0.998 0.992 0.998 S8 0.996 0.988 0.999 0.995 0.995 0.993 0.999 1.000 0.992 0.995 0.999 0.992 0.998 S9 0.997 0.987 0.994 0.996 0.998 0.996 0.994 0.992 1.000 0.992 0.994 0.994 0.997 S10 0.995 0.995 0.994 0.993 0.992 0.992 0.994 0.995 0.992 1.000 0.997 0.995 0.997 S11 0.996 0.990 0.998 0.996 0.995 0.994 0.998 0.999 0.994 0.997 1.000 0.994 0.999 S12 0.996 0.996 0.993 0.994 0.993 0.994 0.992 0.992 0.994 0.995 0.994 1.000 0.997 对照特征图谱 0.999 0.993 0.998 0.998 0.998 0.997 0.998 0.998 0.997 0.997 0.999 0.997 1.000 编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 对照特 征图谱 S1 1.000 0.989 0.989 0.992 0.990 0.988 0.995 0.987 0.992 0.985 0.991 0.983 0.992 S2 0.989 1.000 0.995 0.999 0.998 0.999 0.997 0.993 0.997 0.999 1.000 0.999 0.999 S3 0.989 0.995 1.000 0.995 0.996 0.995 0.994 0.984 0.995 0.991 0.996 0.993 0.995 S4 0.992 0.999 0.995 1.000 0.999 0.999 0.999 0.995 0.999 0.997 0.998 0.998 1.000 S5 0.990 0.998 0.996 0.999 1.000 0.999 0.997 0.992 0.999 0.996 0.998 0.997 0.999 S6 0.988 0.999 0.995 0.999 0.999 1.000 0.996 0.992 0.998 0.998 0.999 0.998 0.999 S7 0.995 0.997 0.994 0.999 0.997 0.996 1.000 0.995 0.999 0.996 0.997 0.995 0.999 S8 0.987 0.993 0.984 0.995 0.992 0.992 0.995 1.000 0.995 0.994 0.992 0.993 0.996 S9 0.992 0.997 0.995 0.999 0.999 0.998 0.999 0.995 1.000 0.996 0.997 0.997 0.999 S10 0.985 0.999 0.991 0.997 0.996 0.998 0.996 0.994 0.996 1.000 0.998 0.999 0.998 S11 0.991 1.000 0.996 0.998 0.998 0.999 0.997 0.992 0.997 0.998 1.000 0.997 0.999 S12 0.983 0.999 0.993 0.998 0.997 0.998 0.995 0.993 0.997 0.999 0.997 1.000 0.998 对照特征图谱 0.992 0.999 0.995 1.000 0.999 0.999 0.999 0.996 0.999 0.998 0.999 0.998 1.000 表2.栀子相似度计算结果(440 nm). 中药饮片标准汤剂的质量评价案例一金银花 代云桃，李琦?，范自全3，王丹丹3，董青，仝家羽，友田健久“，陈士林' 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 上海市药材有限公司，上海200002； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206； 4日本株式会社津村，东京1078521。 摘要：中药饮片标准汤剂是标化中药不同用药形式的参照物，为解决中药配方颗粒等不同中药现代剂型存在的质量不均一、质量标准不明确等问题提供了新的方向。目前，中药单味药标准汤剂在理念、方法和操作层次均缺乏研究。国家也急需这方面的资料，以提高中药制剂的一致性和稳定性。该文将以金银花为例，阐述中药饮片标准汤剂的制备和质量评价方法。收集有代表性的12批合格的金银花药材，建立金银花汤剂指纹图谱，采用UPLC QTOF MS对主要色谱峰进行结构确认，明确煎液中主要成分为有机酸和环烯醚萜类；标准煎液出膏率为(34.2±2.9)%、转移率为(78.6±8.4)%，变化范围在均值的(75-125)%。该文建立了金银花标准煎液的质量评价方法，，为所有源于中药水煎剂的终端产品的质量控制方法的制定提供参考。 以标准汤剂为基准建立丹参的质量评价方法 董青13，於化桃，代云桃，赵嵘，范自全?，王丹丹2，朱超，陈士林' 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206； 德州学院医药与护理学院，山东德州253023。 摘要：市售的丹参配方颗粒质量差异大，主要原因是丹参原料饮片质量的不均一性、缺乏统一规范的生产工艺和系统的质量评价方法。配方颗粒和“标准汤剂”具有质量一致性。该文将从“标准汤剂”角度，建立评价丹参水煎液质量的系统评价方法，探索影响丹参配方颗粒质量均一性差的主要因素。制备丹参标准汤剂，建立指纹图谱并测定丹酚酸B含量，采用UPLC QTOF MS对主要色谱峰进行结构确认；计算出膏率、指标成分转移率和pH等参数，评价工艺的稳定性。结果显示丹参标准煎液的主要成分为酚酸类成分，丹参煎液的出膏率、丹酚酸B的转移率和pH变化不大，且所得标准汤剂的指纹图谱相似度高，表明制备工艺的稳定性良好；标准煎液中丹酚酸B含量范围波动大，主要源于丹参药材中丹酚酸B含量的差异性。 麻黄标准汤剂质量评价体系的建立 全家羽12.3，赵嵘'，代云桃'，范自全，王丹丹4，秦雪梅，陈士林' 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 山西大学中医药现代研究中心，山西太原030006； 3山西大学化学化工学院，山西太原030006； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206。 摘要：建立麻黄标准汤剂质量控制方法，为所有中药饮片标准汤剂质量评价方法的制定提供参考。制备麻黄标准汤剂，建立UPLCUV指纹图谱并测定其麻黄碱和伪麻黄碱总含量；采用UPLC QTOF MS对主要色谱峰进行结构确认，明确汤剂中的主要化学成分；计算出膏率、指标成分转移率、pH，评价工艺的稳定性。结果麻黄汤剂中麻黄碱与伪麻黄碱的平均总浓度为(2.11±0.70)g.L；所有麻黄水煎液指纹图谱相似度均大于0.85；麻黄标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有10个，包括生物碱、有机酸类和黄酮；麻黄标准汤剂出膏率为(17±3.2)%、麻黄碱与伪麻黄碱的整体转移率为(32.4±8.1)%。该文建立了系统评价麻黄标准汤剂的质量评价方法，为所有源于麻黄水煎液的制剂的质量控制标准的制定提供参考。 红花标准汤剂的质量评价 董青12，赵嵘2，代云桃，李琦，友田健久，范自全，王丹丹5，马玉芹 长春理工大学化学与环境工程学院，长春130022； 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 上海市药材有限公司，上海200002； 4日本株式会社津村，东京107-8521； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206。 摘要： 目的：建立红花标准汤剂的质量控制方法。 方法：收集有代表性的红花14批制备红花标准汤剂，，1计算出膏率、指标成分转移率和溶液pH等参数，评价工艺的稳定性；建立指标成分含量测定和指纹图谱方法，采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认，明确红花标准汤剂中的主要化学成分。 结果：：标准汤剂出膏率32.6%，羟基红花黄色素A的转移率61.2%， pH4.1；汤剂中基基红花黄色素A平均质量浓度3.6g.L，指纹谱谱相似度均>0.9，标准汤剂的主要成分为黄酮类成分。 结论：建立了系统评价红花标准汤剂的质量评价方法，为所有源于红花水煎液的制剂的质量标准制定提供参考，所得红花标准汤剂指标成分转移率高、质量均一性良好。 栀子标准汤剂的质量评价方法考察 徐姣12，赵嵘，代云桃，朱超，李琦4，友田健久，范自全，王丹丹6 北京科技大学化学与生物工程学院，北京100083； 2中国中医科学院中药研究所，北京100070； 德州学院医药与护理学院，山东德州253023； 上海市药材有限公司，上海200020； 日本株式会社津村，东京107-8521； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206。 摘要： 目的：建立栀子标准汤剂的质量评价方法，为所有源于栀子水提液的制剂的质量标准制定提供参考。 方法：制备15批栀子标准汤剂，测定其出膏率、指标成分转移率和pH；建立栀子标准汤剂的UPLC指纹图谱并对主要色谱峰进行质谱鉴定，离子化模式为正、负离子，离子源温度150℃，流速800Lh，毛细管电压1.0 kV， 锥孔电压30V，扫描范围m/z50~1200。 结果：：1栀子标准汤剂的平均出膏率28.4%，栀子苷转移率77.7%， pH均为4。所有样品的指纹图谱相似度均>0.99，栀子标准汤剂的主要成分为栀子苷。 结论：及建立的栀子标准汤剂的质量评价方法稳定可行、重复性好，该评价方法灵敏、准确，J5为所有源于栀子水煎剂的制剂的质量控制提供参考。 当归标准汤剂质量评价体系的建立 仝家羽12.3，赵嵘，代云桃，范自全，王丹丹4，李琦5，秦雪梅* 中山西大学中医药现代研究中心，太原030006； 山西大学化学化工学院，太原030006； 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206； 上海市药材有限公司，上海200002。 摘要： 目的：建立当归标准汤剂的质量控制方法，为其他中药饮片标准汤剂的质量评价提供参考。 方法：收集代表性当归饮片，制备当归标准汤剂；测定阿魏酸含量，建立指纹图谱并采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认，明确汤剂中的主要化学成分；计算出膏率、指标成分转移率，评价工艺的稳定性。 结果：当归标准汤剂中阿魏酸平均质量分数0.077%，与对照图谱相比，指纹图谱相似度均>0.9；当归标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有11个，包括有机酸类、挥发油类、核苷类等；；当归标准汤剂平均出膏率51%，阿魏酸平均转移率78.5%。 结论：建立的质量评价方法可用于系统评价当归标准汤剂，为当归水煎剂相关制剂的质量控制制定提供参考。 党参标准汤剂质量评价的建立 于小红2，赵嵘，代云桃，范自全，王丹丹3，李琦琦，友田健久，赵奎君，马致洁致 首都医科大学附属北京友谊医院，北京100050； 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206； “上海市药材有限公司，上海200002； 日本株式会社津村，东京107-8521。 摘要： 目的：建立党参标准汤剂的质量控制方法，评价其质量的稳定性和主要影响因素。 方法：收集有代表性的党参药材及饮片，制备党参标准汤剂；建立UPLC指纹图谱及党参炔苷的含量测定方法；采用UPLC-Q-TOF/MS对主要色谱峰进行结构确认，明确标准汤剂中的主要化学成分；计算出膏率#指标成分转移率和溶液pH等参数，评价工艺的稳定性。 结果：：5党参标准汤剂中党参炔苷平均质量分数0.02%，指纹图谱相似度均>0.9；党参标准汤剂对照指纹图谱主要共有峰有12个，出膏率45.4%，转移率58.1%。 结论：建立的系统评价党参标准汤剂的质量评价方法稳定可行，党参饮片厚度是影响其标准汤剂出膏率的主要因素。 基于传统煎药工艺的龙胆饮片标准汤剂制备及质量评价方法研究 朱广伟，李西文，李琦2*，刘傲雪3，罗赣'，杉田享4，友田健久“，范自全，王丹丹5 中国中医科学院中药研究所，北京100700； 2上海市药材有限公司，上海200002； 北京中医药大学，北京100102； “日本国株式会社津村，东京107-8521； 沃特世科技(上海)有限公司，上海201206。 摘要： 目的：建立5产地15批次胆胆饮片标准汤剂质量评价方法，并以出膏率、指标成分量及转移率、指纹图谱为指征进行研究。 方法：以水为溶剂，参照传统煎药工艺制各标准汤剂，采用UPLC-DAD法测定龙胆苦苷量，，计算转移率、出膏率，采用UPLC/Q-TOF-MSMS法进行指纹图谱研究并确认共有峰。 结果：115批次龙胆样品制成的标准汤剂中龙胆苦苷量为1.57~2.81 mg/mL， 龙胆苦苷转移率在50.71%~67.70%，平均转移率为59.20%，标准偏差(RE)为7.31%。出膏率为15.72%~25.52%，平均出膏率为19.20%， RE为2.85%。指纹图谱共有峰10个，确认10个，分别为紫丁香酸葡萄糖苷、1-(4-羟基-3-甲氧基)-苯基-1，2，3-丙三醇或异构体、马钱酸、四乙酰开联番木鳖苷、龙胆苦苷、naptho(2，3-c)furan-1(3H)-one-9-(acetyloxy)-6-methoxy-8-[(23，4-tri-O_acety1-6-0-(2，3，4-tr-O-acetyl-β-D-xylopyranosy1)-β-D-glucopyranosyl)oxy] 或异构体、C46H54028(未知化合物)、C46H54O27(未知化合物)、macrophylloside B、isomacrophylloside。 结论：115批次龙胆饮片标准汤剂制备工艺符合传统汤剂制法，样品来源具有代表性，样品批次符合指纹图谱研究要求，质量评价内容涌盖面广，所得数据具有代表性，可用于龙胆饮片标准汤剂的制备及质量评价，可以为配方颗粒标准的制定及工业化生产提供基础数据支撑。 中药饮片标准汤剂UHPLC(Arc)方法转换流程 ACQUITY Arc系统可最大程度减少停机时间并提高效率，在法规环境中实现新技术的无缝采用。配备ArcMultiflow pathM技术， ACQUITY Arc可轻松重现传统LC仪器上开发的方法，而且不需要对方法做任何改变。同时，只需一个切换开关即可实现HPLC和UHPLC方法的兼容性， ACQUITY Arc系统十分灵活，可将高效、快速的2.5 um-2.7 um UHPLC色谱柱效能最大化。 在配方颗粒特征图谱的研究过程中，我们也将开发完成的4种中药汤剂品种转移到Arc仪器上。借助于Empower软件自带的方法转换器功能，可快速方便有效的实现转移。具体转换方法如下： 第1步 打开方法转换器，选择需要转移的系统，并填写系统体积。同时，将已有UPLC方法输入方法转换器，点击计算： 图1.方法转换器界面。 第2步将出现如下界面： 图2.方法转换器转换结果界面。 第3步在系统压力范围内，选择蓝条标记的转换方法。同时，也可以根据经验，调整流速，重新计算转换后的梯度方法： 图3.方法转换器调节流速界面。 中药饮片标准汤剂Arc方法转换示例 当归Arc方法转移 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 100 0 初始 4 95 5 6 16 65 35 6 18 15 85 6 23 10 90 1 28 100 0 1 色谱柱 CORTECS T3， 4.6x150 mm， 2.7 um 图1.当归UPLC-Arc方法转换结果。 甘草Arc方法转移 时间(min) A% B% 曲线 初始 85 15 初始 13 58 42 6 16 10 90 1 21 85 15 1 波长 270/237 nm 流动相A 0.1%甲酸水溶液 流动相B 0.1%甲酸乙腈 色谱柱 CORTECS T3， 4.6x150 mm， 2.7 um 图1.甘草UPLC-Arc方法转换结果。 黄芩Arc方法转移 梯度表： 时间(min) A% B% 曲线 初始 82 18 初始 1.5 82 18 6 6.5 80 20 6 7 75 25 6 16 75 25 6 18 45 55 6 21 0 100 1 25 82 18 1 图1.当归UPLC-Arc方法转换结果。 中药饮片标准汤剂QDa共有峰指认 在指纹/特征图谱研究过程中，特征峰不能仅依靠对照品相对保留时间来确认，而且，很多成分分离困难、对照品昂贵，或根本无法买到对照物质；另外，在进行方法转换时，由于色谱条件改变，可能发生峰保留时间漂移甚至峰错位的情况。QDa能快速进行MS分析，得到一级质谱数据，较快的分析出化合物的分子量，对结构明确的化合物可以进行快速匹配，完美的解决以上的问题。同时，很多中药组分没有紫外吸收，该质谱检测器能互补性的检测常规紫外检测器检测不到的成分，对于质量的监控起到了关键的作用，而且对于中药质量标准的提高也提供了好的工具。 即开即用，操作简易，无需质谱背景； 可以与任何液相、制备仪器无缝衔接； 有效检测无紫外吸收化合物，弥补传统检测的不足； 提供分子量，快速峰定位，提高方法开发效率； ACQUITY QDa 质谱检测器 快速判断共流出现象，降低风险； 提高检测灵敏度，可定量。 采用紫外检测器并联QDa检测器，对色谱峰进行确认，，以下是人参汤剂QDa指认结果。 人参共有峰QDa指认 QDa参数设置： 系统：ACQUITY QDa质谱检测器， Performance 模式； 离子化方式：ESI+/ESI-； 监测方式：Full Scan， m/z 700-1220； 方法设定： 图1.QDa参数设置。 图2.人参QDa定性结果上图：色谱图；下图：质谱图。 ACQUITY QDa质谱检测器，适用于所有分离，无论是HPLC， UPLC， 还是UPCC， LC还是SFC纯化。可与您现有仪器进行完美整合。与传统质谱仪相比，它占用的实验台空间更少，能耗也更低，可以作为您常规工作流程的一部分。同时也为配方颗粒常规检测测行提供有力的工具。 ACQUITY QDa检测器已被众多行业积极采用，可帮助用户解决共流出峰、无发色团化合物和数据可靠性等面临的挑战。QDa能够最大程度降低共流出物或成分带来的风险，通过可靠的质谱检测分析确认痕量成分，提升分析的质量和效率。 沃特世科技(上海)有限公司 地址：上海市浦东新区金海路1000号 金领之都13栋 邮编：201206 电话：021-61562666 传真：021-61562777 北京分公司 地址：北京市朝阳区铜牛国际大厦 光华路15号院2号楼9层 邮编：100026 电话：010-52093866 传真：010-5293 2298 广州分公司 地址：广州市荔湾区中山七路50号 西门口广场1707-08室 邮编：510170 电话：020-28296555 传真：020-28296556 成都分公司 地址：成都市高新区科斗南路88号 天府生命科技园孵化楼C1栋411室 邮编：610023 电话：028-6765 3588 扫一扫，关注沃特世微信 传真：028-6765 3580 沃特斯中国有限公司 地址：香港新界沙田科学园 Www.waters.com 科技大道西16号907-908室 电话：852-2964 1800 传真：852-2549 6802 全国免费售后服务热线： 800(400)820 2676 WWw.waters.com Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters和The Science of What's Possible是沃特世公司的注册商标。 C2017沃特世公司中国印刷2017年11月 中药配方颗粒在美国、欧洲、澳大利亚、韩国、日本、香港和台湾等地发展极快，韩国、日本、香港和台湾除满足本地区外还大量出口。 为进一步推进中药标准领先并主导国际标准的目标，拓展超高效液相色谱在中药研究领域的应用，沃特世与中国中医科学院中药研究所的陈士林老师课题组合作，建立了60味中药材的标准汤剂的UPLC特征图谱方法，为正在或有意愿使用超高效液相色谱技术的中药配方颗粒或其他相关研究单位提供帮助。