娑罗子中七叶皂苷检测方案(快速溶剂萃取)

溶剂的选择2 加速溶剂萃取-顺序萃取法萃取中药娑罗子中的七叶皂苷 车金水叶明立梁立娜赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：加速溶剂萃取；顺序萃取；中药；娑罗子；七叶皂苷 Key words： Accelerated Solvent Extraction； Sequential Extraction；Traditional Chinese Medicine； Aesculi Semen； Aescin 引言 七叶皂苷是中药娑罗子成熟果实中提取出的三萜皂苷，具有清除机体内自由基的功效，同时具有抗炎、抗渗出，提高静脉张力，加快静脉血流，促进淋巴回流，改善血液循环和微循环，并有保护血管壁的作用，广泛用于脑外伤、脑血管疾病、中风、脑肿瘤、颅内感染等疾病的治疗。2010版药典以检测七叶皂苷的含量来评价娑罗子质量的优劣。参照2010版药典，对娑罗子中七叶皂苷的提取需先采用索氏提取法脱脂，然后再超声提取，该前处理方法操作繁琐，需要转换不同的提取器，费时费力"。加速溶剂萃取技术( Accelerated Solvent Extraction， ASE) 是在较高的温度(40℃-200℃)和压力(1500psi)下用溶剂萃取固体或半固体样品的样品前处理方法。ASE具有萃取效率高，速度快、溶剂用量少等优点。目前， ASE广泛应用于环境、食品、药物、天然产物和中药中的活性成分等领域。采用ASE顺序提取法，先后采用不同的溶剂对同一样品进行提取，能够在30分钟内处理好样品，达到除脂和萃取有效成分的目的。该方法节省了置换提取器等繁琐的操作步骤，节省了操作时间，且减少了溶剂消耗。 ASE条件 仪器： ASE 350 前处理方法：取娑罗子样品粉末1g，精密称定，加入硅藻土(DE)适量，混合均匀，转至底层垫有纤维素膜的萃取池(10mL)中，加速溶剂萃取，弃去石油醚相，甲醇相定容，过0.45um滤膜， 待HPLC分析。 表1 ASE萃取条件 ASE条件 Step1 Step2 溶剂 石油醚 甲醇 温度 100℃ 100℃ 加热时间 5min 5min 静态萃取时间 5min 5min 循环次数 1 1-2 吹扫体积 60% 60% 吹扫时间 200s 90s 总体积 30-40mL 总时间 30-35min 图1七叶皂苷结构图 HPLC条件 仪器：： LUltiMate 3000 HPLC 分析柱： Acclaim 120 C18， 5um， 250×4.6mm 流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(36：64) 柱温：30℃ 检测波长：220nm 进样量：10pL 图2标准样品色谱图 图3实际样品色谱图 2010版药典中采用乙醚作为除杂溶剂，而由于ASE不能采用燃点低于200℃的溶剂，故采用石油醚代替乙醚作为除杂除脂溶剂。本实验参考2010版药典方法，采用甲醇作为ASE萃取溶剂。 萃取温度的选择 本实验分别考察了80℃、100℃、120℃和140℃4个温度对娑罗子中的七叶皂苷(以七叶皂苷A计算)萃取率的影响。随着温度的升高，七叶皂苷A的萃取效率随着增大，于100℃达到最佳萃取率，为2.12%，温度升高至120℃时，萃取效率和100℃持平，具有相同的萃取效率。当萃取温度升高至140℃时，七叶皂苷A的萃取效率稍有下降，为1.90%。综合考虑，选择100℃C作为最佳萃取温度。 图4萃取温度对七叶皂苷A萃取率的影响 静态萃取时间及循环次数 本实验采用5 min作为静态萃取时间，对同一样品进行了单次循环实验。实验结果表明，第一次萃取循环对七叶皂苷A的萃取量占3次萃取量的82.8%；第二次萃取循环对七七皂苷A的萃取量占3次萃取量的12.8%；第三次萃取循环对七叶皂苷A的萃取量仅占3次萃取总量的4.4% 图5各次萃取循环对七叶皂苷A萃取量占3次循环总萃取量得比值 ASE和索氏萃取的比较 2010版药典方法：娑罗子样品粉碎至30目左右，过30目筛。取样品粉末1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚，加热回流1小时，弃去乙醚液，药渣连同滤纸筒挥干溶剂后，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，超声处理30分钟，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45pm滤膜， 待HPLC分析。 当ASE采用1次萃取循环作为循环次数时，ASE对娑罗子中的七叶皂苷A的平均萃取率为1.73%， RSD为3.1%(n=3)。同时采用2010版药典规定方法对同一样品进行萃取，索氏提取的平均提取率为1.54%， RSD为2.1%(n=3)。实验结果表明： ASE对娑罗子中的七叶皂苷的萃取率较药典推荐方法-索氏提取萃取率略高，约高10%， 且ASE更加省时，省溶剂。 表2 ASE和索氏提取比较(ASE采用1次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 1g 30mL 27min 1.73% 3.1% SE 1g 150mL 3h 1.54% 2.1% 当ASE采用2次萃取循环作为萃取取环次数时， ASE对娑罗子中的七叶皂苷的平均萃取率为2.10%， RSD为3.6%(n=3)。ASE的提取率较传统的索氏提取提高了约36%，同时比较溶剂消耗量，耗时， ASE具有速度快、溶剂消耗小等优点。 表3 ASE和索氏提取比较(ASE采用2次萃取循环) 萃取方法 样品量 溶剂量 耗时 萃取率 RSD ASE 1g 35mL 32min 2.10% 3.6% SE 1g 150mL 3h 1.54% 2.1% 结论 采用ASE提取娑罗子中的七叶皂苷，当采用1次萃取循环作为循环次数时， ASE较2010版药典推荐方法对七叶皂苷的提取率略高；当采用2次萃取循环作为循环次数时，ASE对七叶皂苷的提取效率较药典方法提高了36%。ASE提取中药中的活性成分时，既能达到药典推荐萃取方法等同的萃取率，在提高萃取条件时， ASE还能达到更高的萃取率。同时具有操作简单、快速、高效等特点，值得在中药领域推广使用。 ( [1]国家药典委员会.中国人民共和国药典2010版第一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010： 283-284. ) thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your l ocal s ales r epresentative for d e tails. ) 北京 免费服务热线： 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118 电话：021-68654588 邮编：100007 传真：021-64457830 电话：010-84193588 传真：010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.上海SCIENTIFIC