猪场肥猪新鲜猪粪及酿酒糟中酵母菌检测方案(喷雾干燥机)

来亨科学仪器Laiheng Lab-Equipment 饲用酵母菌的分离与鉴定 一、实验材料 猪场肥猪新鲜猪粪及酿酒糟 二、主要设备及仪器 PCR扩增仪美国、高速低温离心机、浓度测定仪、超纯水系统、超净工作台； 恒温摇床、恒温振荡器、台式离心机、电热恒温水浴谷、恒温烘箱、恒温培养箱； 恒温磁力搅拌器、电子天平、计算机成像系统、医用高压灭菌锅、格兰仕微波炉； 稳压稳流电泳仪、超低温冰箱、PH计。 ( 销售中心：北京丰台区丰北路甲45号鼎恒中心6A ) 技术中心：北京金桥科技产业基地 景盛南二街33号4号楼4层 三、缓冲液和常用试剂的配置 1裂解液 2醋酸钾 3醋酸钠 4TE 缓冲液 5TAE储备液 6琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液 7EB贮存液 四、培养基 1LB培养基：胰蛋白胨 2牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 3马丁氏培养基：葡萄糖 4马铃薯培养基：马铃薯 5麦芽汁培养基葡萄糖 6WL营养培养基 五、酵母菌的分离与纯化 A分离：采用稀释平板分离法，称取待测样品 10g 左右，放入装有无菌水 90ml并加入玻璃珠的离心管中，置于摇床震荡 20min，使微生物细胞分散，静置。即成10稀释液；再用1支无菌吸管吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml 无菌水的试管中，吹吸3次，让稀释液充分混合，即成10稀释液；再换1支无菌吸管吸取10稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中，即成 北京来亨科学仪器有限公司 销售中心：北京丰台区丰北路甲45号鼎恒中心6A 技术中心：北京金桥科技产业基地 景盛南二街33号4号楼4层 10稀释液。同理，制成104、105、10-6稀释液。取合适倍数的稀释液1ml加入到孟加拉红培养基中，静置30分钟后倒置放于28℃恒温培养箱中，培养三天。 B纯化培养：划线纯化法。灭菌 PDA 培养基，倒平板，挑取单菌落划线，28℃倒置培养三天，如此工作重复三次，以得到纯菌体。 六、酵母菌的鉴定 从猪粪和酒糟中共分离八株酵母菌，经鉴定共有种酵母菌，它们分别是皱褶假丝酵母、酿酒酵母、一东方伊萨酵母、团假丝酵母、热带假丝酵母、毛抱子菌属。从猪粪中分离两株酵母，分别是热带假丝酵母菌和毛抱子菌。这些分离出的酵母菌，除毛抱子菌外，其他都可以作为饲料酵母使用。 ( 销售中心：北京丰台区丰北路甲45号鼎恒中心6A ) ( 技术中心：北京金桥科技产业基地 ) 景盛南二街33号4号楼4层 北京来亨科学仪器有限公司 一、实验材料猪场肥猪新鲜猪粪及酿酒糟 二、主要设备及仪器PCR扩增仪美国、高速低温离心机、浓度测定仪、超纯水系统、超净工作台；恒温摇床、恒温振荡器、台式离心机、电热恒温水浴锅、恒温烘箱、恒温培养箱；恒温磁力搅拌器、电子天平、计算机成像系统、医用高压灭菌锅、格兰仕微波炉；稳压稳流电泳仪、超低温冰箱、PH计。 三、缓冲液和常用试剂的配置   1裂解液   2醋酸钾   3醋酸钠   4TE缓冲液   5TAE储备液   6琼脂糖凝胶电泳上样缓冲液   7EB贮存液四、培养基1LB培养基:胰蛋白胨2牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3马丁氏培养基：葡萄糖4马铃薯培养基：马铃薯5麦芽汁培养基葡萄糖6WL营养培养基 五、酵母菌的分离与纯化 A分离：采用稀释平板分离法,称取待测样品10g左右,放入装有无菌水90ml并加入玻璃珠的离心管中,置于摇床震荡20min,使微生物细胞分散,静置。即成10-1稀释液;再用1支无菌吸管吸取10-1稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让稀释液充分混合,即成10-2稀释液;再换1支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml移入装有9ml无菌水的试管中,即成10-3稀释液。同理,制成10-4、10-5、10-6稀释液。取合适倍数的稀释液1ml加入到孟加拉红培养基中,静置30分钟后倒置放于28℃恒温培养箱中,培养三天。B纯化培养:划线纯化法。灭菌PDA培养基,倒平板,挑取单菌落划线,28℃倒置培养三天,如此工作重复三次,以得到纯菌体。 六、酵母菌的鉴定从猪粪和酒糟中共分离八株酵母菌,经鉴定共有种酵母菌,它们分别是皱褶假丝酵母、酿酒酵母、一东方伊萨酵母、团假丝酵母、热带假丝酵母、毛抱子菌属。从猪粪中分离两株酵母,分别是热带假丝酵母菌和毛抱子菌。这些分离出的酵母菌,除毛抱子菌外,其他都可以作为饲料酵母使用。 七、酵母菌发酵液的喷雾干燥。