豆酱中氨基酸检测方案(氨基酸分析仪)

Biochrom30+氨基酸分析仪检测豆酱中酸水解氨基酸 一、样品前处理 1、 所用试剂 1、1 浓盐酸，1优级纯 1、2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合 1、3 水：去离子水 1、、24 苯酚：须重蒸 1、、5 17种氨基酸标准品 行号 氨基酸 行号 氨基酸 1 Asp 天冬氨酸 2 Thr 苏氨酸 3 Ser 丝氨酸 4 Glu 谷氨酸 5 Pro 脯氨酸 6 Gly 甘氨酸 7 Ala 丙氨酸 8 Cys 胱氨酸 9 Val 缬氨酸 10 Met 蛋氨酸 11 lle 异亮氨酸 12 Leu 亮氨酸 13 Tyr 酪氨酸 14 Phe 苯丙氨酸 15 His 组氨酸 16 Lys 赖氨酸 17 Arg 精氨酸 18 2、 标样配置 氨基酸混合标准储备液：：含有天冬氨酸、苏氨酸等17种常见组成蛋白质的氨基酸。 将17种氨基酸混合标准储备液、牛磺酸标准储备液、正亮氨酸标准储备液及PH2.2的柠檬酸缓冲液按照1：9 配置成 0.25umol/L的标准品待用。 3、 前处理设备 1 天平 2 水解管 3) 量筒 4) 无油真空泵 5) 干浴水解、浓缩仪 6 移液管 7) 0.45um滤膜 4、 样品制备(参考国标 GB/T5009.124-2003) 酸水解法： 称取含蛋白 399.9mg的试样，于20mL安培瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸置液氮中冷冻，然后，抽真空至近 OPa 后充入高纯氮，再抽真空充氮气3次，在充氮气情况下封口。将水解管放入干浴水解、浓缩仪中，110℃水解22h，冷却、混匀、开管、过滤，用移液管取适量滤液，在干浴水解、浓缩仪中60℃吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次， 定容到100ml容量瓶中，取2ml蒸干，用5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液，混匀、过滤后上机。 二、分析方法描述(Biochrom 30+) 氨基酸分析仪分析方法参数： 1) 色谱柱： Biochrom Na 型阳离子交换树脂柱，4.6×20cm 2) 分离程序： NO. Time Temp Buffer Pump Nin Rec Commands 1 01：00 43 1 35.0ml/h ON OFF 2 00：00 43 1 35.0ml/h ON OFF Reset 3 01：00 43 1 35.0ml/h ON OFF Load 4 06：40 43 1 35.0ml/h ON ON 5 13：00 52 2 35.0ml/h ON ON 6 01：00 52 5 35.0ml/h ON ON 7 16：00 95 5 35.0ml/h ON ON 8 04：00 95 6 35.0ml/h ON ON 9 04：00 95 1 35.0ml/h ON ON 10 09：00 43 1 40.0ml/h OFF OFF 11 02：00 43 1 35.0ml/h ON OFF End 3) 运行时间：经分析时间+再生时间 57min 4) 反应单元温度：：135°C。 ( 5) 检测波长：5 7 0nm、440nm 同时检测。 ) 三、外标法定量 1) 17种氨基酸标准品谱图 时间 2) 进标样，拟合校正曲线，使用外标法软件自动算出每个氨基酸的含量。 3) 样品中含量的计算公式 按照以下公式计算各个氨基酸在样品中的质量百分比： W一某种氨基酸含量 A-每毫升上机水解液中氨基酸含量，ng m-样品质量，mg D一样品稀释倍数 附、豆酱分析图谱及做样结果 化合物名称 保留时间min1 峰面积 mV 含量 mgj 含量 %1 峰 类型 1 天冬氨酸 7.876 1749.188 3.446 0.862 Ordnr 2 苏氨酸 9.417 209.731 0.366 0.092 Ordnr 3 丝氨酸 10.227： 301.428 0.429 0.107 Ordnr 4 谷氨酸 ：12.504： 4971.608 10.899 2.725 Ordnr 5 甘氨酸 17.867 336.946 0.363 0.091 Ordnr 6 丙氨酸 18.993 484.485 0.607 0.152 Ordnr 8 缬氨酸 20.777： 263.741 0.395 0.099 Ordnr 9 异亮氨酸 23.756： 127.621 0.256 0.064 Ordnr 10 亮氨酸 24.628 262.893 0.473 0.118 Ordnr 11 酪氨酸 27.320 89.117 0.243 0.061 Ordnr 12 苯丙氨酸 28.033 383.051 0.874： 0.219 Ordnr 14 组氨酸 32.668 146.656 0.301 0.075 Ordnr 15 赖氨酸 34.520 253.621 0.462 0.116 Ordnr 17 精氨酸 41.777： 153.128 0.368 0.092 Ordnr 合计 9733.213 399.900 4.872 化合物名称 保留时间[min1 峰面积mVi 含量imgl 含量%1 峰 类型 1 脯氨酸 13.744 48.583 0.256 0.064 Ordnr 合计 48.583 399.900 0.064