化妆品中氢溴酸右美沙芬检测方案

样品分析 高效液相色谱法快速测定化妆品中的氢溴酸右美沙芬 黄雄风刘绿叶 金燕许群赛默飞世尔科技(中国)有限公司 引言 氢溴酸右美沙芬，其结构式见图1，是一种常见的中枢性镇咳药的主要成分，服用者偶尔会出现头晕、头痛、困倦、食欲不振等不良反应。除了在药物物面的应用，氢溴酸右美沙芬也是化妆品的添加剂之一，并于2009年被列入 SN/T 2291-2009《进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法》这一标准，但尚未明确氢溴酸右美沙芬在化妆品中的作用及其使用限量‘。 测定氢溴酸右美沙芬的常用方法是高效液相色谱法，由于该化合物同时具有紫外和荧光吸收，因此测定可用高效液相色谱-紫外检测法或高效液相色谱-荧光检测法。基于荧光检测器的高灵敏性和高选择性，本文选用高效液相色谱-荧光检测法测定化妆品中的氢溴酸右美沙芬。为消除氢溴酸右美沙芬在C8色谱柱上的拖尾问题， 《进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法》这一标准采用在流动相中添加三乙胺的方法2。但是三乙胺会影响色谱柱的寿命，本文通过改用C18色谱柱，并提高水相中的酸度，，可显著提高色谱峰的对称性。 图1.氢溴酸右美沙芬结构式 Thermo Scientific M DionexTM UltiMateM 3000RS 四元系统，包括： -LPG-3400RS 四元分析泵(具备溶剂脱气功能) -WPS-3000RS自动进样器(配置100uL定量环)-TCC-3000RS 柱温箱(具备控温功能) -FLD-3000RS(检测池体积 SST-2.5pL) Thermo Scientific Chromeleon 色谱系统控制软件，版本6.80或以上 ( 去离子水，18.2 MQ-cm (Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC， P/N 50131948) ) 乙腈(CH，CN)， HPLC 级 (Fisher Chemical， P/N AC610010040) 甲酸(CH，COONH)， HPLC级(上海安谱科学仪器有限公司)氢溴酸右美沙芬标准品，纯度≥95.0%，(上海安谱科学仪器有限公司) 标准储备液1 准确称0.01g氢溴酸右美沙芬标准品，用甲醇将其定容到 10 mL，得到浓度为1000 mg/L 的标准储备液1。 标准工作溶液 取500pL标准储备液1，并用甲醇定容至10mL，得到浓度为 50 mg/L 的标准溶液。分别取4mL和2mL浓度为50 mg/L 的氢溴酸右美沙芬标准溶液，.，用甲醇定容到10 mL，得到浓度分别为20 mg/L 和 10 mg/L 的标准溶液；将10 mg/L、20mg/L、50 mg/L的标准溶液逐级稀释，则得到浓度为 0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1mg/L 、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、5mg/L的标准溶液。 样品前处理 样品 分别称取两种不同品牌的霜剂和水剂化妆品1g， 于 10mL离心管中，加入8mL甲醇，用力振荡至基质均匀，用甲醇定容至10mL，超声萃取 20 min，混匀，在冰箱冷冻室(-18℃或更低温)放置10 min 后于3500 r/min 下冷冻离心5 min， 将样品放至室温，取上清液经0.22 pm有机滤膜过滤，滤液供液相色谱测定。 样品加标 称取两份霜剂1g于10mL离心管中，分别加入1mL浓度为5 mg/L 和 50 mg/L的氢溴酸右美沙芬标准品，按照样品前处理方法，与样品同步前处理，得到的理论加标浓度分别为0.5 mg/L 和5mg/L。 色谱柱： Thermo Scientific Acclaim RSLC 120， C18， 2.2 pm，3×50mm (P/N 071605) 流动相：乙腈/3%乙酸水溶液， 30：70(v/v) 进样体积：2pL 流速：0.6mL/min 柱温：30℃ 检测：荧光，入x280 nm； 入cm 310 nm 结果与讨论 色谱柱的选择 由于氢溴酸右美沙芬偏碱性，在分析过程中容易出现峰形脱尾的问题。为选择合适的色谱柱用于分析化妆品中的氢溴酸右美沙芬，本文比较了氢溴酸右美沙芬在C18 和C8两种相同规格的色谱柱在同一色谱条件下的结果。结果表明，氢溴酸右美沙芬在 C18色谱柱上的峰形更好，因此选用 C18作为分析柱。 流动相的优化 为优化流动相，在有机相部分，选用甲醇和乙腈作比较；在水相部分，分别比较了0.1%和3%乙酸水溶液。结果表明，选用乙腈和3%乙酸水溶液作为流动相的结果最好。 方法的重现性、线性范围和检测限 为考察方法的重现性，通过连续进样7次浓度为 5 mg/L 的标准溶液，得到氢溴酸右美沙芬的保留时间和峰面积的相对标准偏差(RSD)分别是0.28%和0.97%，色谱图见图2。在优化的色谱条件下，氢溴酸右美沙芬在0.05~50 mg/L 范围内具有良好的线性，得到的标准曲线方程为A=334255C+119757 (R2=0.9998)。其中，C代表氢溴酸右美沙芬的浓度(mg/L)，A代表氢溴酸右美沙芬所对应的峰面积。分别以 S/N=3 和 S/N=10计算目标化合物的检出限(LOD)和检测限(LOQ)，得到其 LOD 和 LOQ分别为 11 pg/L 和36pg/L。 图2.连续进样氢溴酸右美沙芬标准品的叠加色谱图 为考察氢溴酸右美沙芬在不同化妆品的使用情况，本文各选了一个水剂和霜剂的化妆品进行实验，实验结果见图3.由图3可以看出，氢溴酸右美沙芬在水剂和霜剂化妆品中 均未检出。为考察方法的可靠性，理论浓度为0.5 mg/L和5 mg/L氢溴酸右美沙芬的加标样品，回收率分别为99%和 94%，见图4。可见，该方法具有良好的回收率，适用于化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定。 图3.空白、标样、水剂和霜剂样品的色谱图 (1-空白；2-水剂化妆品；3-霜剂化妆品；4-标样(5mg/L)) 图4.(A)空白、标样(5mg/L)、霜剂样品和霜剂样品加标(5mg/L)色谱图 图4.(B)空白、标样(0.5mg/L)、霜剂样品和霜剂样品加标(0.5 mg/L) 色谱图 本文在以3%乙酸水溶液和乙腈为流动相的等度条件下，在3 min 内即可完成化妆品中的氢溴酸右美沙芬的测定，是一种快速、灵敏、简便、准确测定化妆品中氢溴酸右美沙芬的方法。 ( 参考文献 ) ( 1. Mohamed R. L ouhaichi， Sami J ebali， Mohamed H . Loueslati， Lotfi Monser. Simultaneous D eterminationof Dextromethorphan H y drobromide， Pyrilamine Ma l eateand Sodium Benzoate i n a Cough C o ld Syrup by LC，Chromatographia， 2 009，69，421-427. ) ( 2. 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准，SN/T2291-2009，进出口化妆品中氢溴酸右美沙芬的测定液相色谱法. ) 3.梁发华，何瑞兴.高效液相色谱法测定人血中氢溴酸右美沙芬浓度，中国实用医药，2008，34，46-48. 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 650 5118(支持手机用户) SCIENTIFIC AN_C_LC-