实战宝典 新颁布36项兽残标准前处理关键点和要点（上篇）

关键词：酸化乙腈提取

要点：

Ø    有一些有机磷农药在碱性条件下特别容易降解，所以在提取过程中加入一定的酸，比较有代表性的敌百虫，特别容易在碱性条件下转化为敌敌畏，在检测中会发现敌敌畏的峰高了很多，出现敌百虫回收率下降，敌敌畏回收率增高现象。

关键词： 40～60 μm

要点：

Ø    在选择PSA吸附剂材料的颗粒直径是40～60 μm，因为直径在细一点或在粗一点，会导致在前处理过程中的吸附效果和净化效果有差别。

关键词：粉碎均匀

要点：

Ø    在粉碎过程中一定要把样品粉碎均匀，粉碎不均匀容易导致在提取过程中，相应的农药提取不出来，导致结果偏差。

关键词：温度

要点：

Ø    标准中净化是在45℃下氮气吹干，有机磷农药在高温的情况下特别容易分解，导致回收率下降。所以为了避免有机磷农药受到温度降解，可以把温度调低一点，可以在30℃氮吹。

Ø  TIPS：在色谱柱前增加一个溶剂效应消除器（PN：AN80C037），可省去净化后氮吹，直接乙腈提取后进样分析，不但解决了溶剂效应问题，而且峰形更对称。更大的优势是一方面可节省2-3个小时的氮吹过程（乙腈作为提取剂，挥发性较差，氮吹时间非常长），提高检测效率和降低检测成本，另一方面避免了氮吹浓缩过程中有机磷农药的降解和挥发，提高了回收率。

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关键词：滤膜

要点：

Ø    第二步净化，上清液过膜时，经过第一步PSA净化后，现在上清液是70%的水相，过膜前需要考察一下滤膜的吸附性，因为水相高时容易导致膜吸附目标物，从而影响回收率。

Ø    再生纤维素滤膜，可以较好解决高水相滤膜吸附目标物的问题。（Anavo-U Syringe Filter, RC, 0.22μm, 13 mm，PN：AN40A025）

关键词：高脂肪样品

要点：

Ø    对于高脂肪含量的水产品（鳗鱼），在使用乙腈进行萃取时，一方面，一些脂类化合物会被同时萃取出来对下一步的分析带来困难；另一方面，一些脂溶性的非极性化合物会保留在样品基质中而降低萃取效率。因此，对于高脂肪含量的样品需要进行冷冻离心处理。

关键词：发热、回收率

要点：

Ø    在样品制备时，粉碎的时间如果太长，发热严重的话会对回收率有影响（如四环素类的金霉素），具体参照GB/T 30891-2014 中附录B 的要求制样。

关键词：提取次数2次

要点：

Ø    标准品中用了2次提取，两次提取用的提取液是不一样的。

第1次采用Mcllvaine-Na2EDTA，此缓冲液是提取四环素类兽残的常用试剂，

但有几个在磺胺类药物单纯用Mcllvaine-Na2EDTA提取回收率不理想，第2次提取用了Mcllvaine-Na2EDTA+磷酸盐缓冲液，对于磺胺类药物有较好的回收率。

关键词：低温

要点：

Ø    在提取过程中降低离心的温度至-2℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。

关键词：亲水亲脂平衡型固相萃取柱

要点：  

Ø    国标中净化材料的是亲水亲脂平衡型固相萃取柱，也就是我们平时用的HLB小柱 200 mg/6 mL（纳鸥科技，PN:AN60A005），HLB小柱表面同时具有亲水性和疏水性基团，对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用。

Ø    其吸附能力和样品容量是 C18 键合硅胶的 3~10 倍，许多在 C18 难以得到保留的强亲水性化合物，在HLB 上仍有较好的回收率。

关键点：氮吹

要点：

Ø    建议控制氮吹时间、温度和流速。实验过程氮吹时间非常长，约60分钟，容易造成部分化合物回收率偏低（比如：四环素类、青霉素类）。

Ø    建议氮吹至100 μL 左右，不氮吹干，可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。

关键词：溶剂效应

要点：

Ø    复溶时，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，降低溶剂效应，同时提高部分化合物的回收率。

Ø    此外，在色谱柱前加一个小配件（溶剂效应消除器，PN：AN80C037），可较好解决由于样品溶剂和流动相不匹配而造成的溶剂效应问题，使峰形更好，响应更高。

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关键词：洗涤样品

要点：

Ø    GB/T 21311-2007之前的标准的样品在水解之前先用10 mL甲醇水洗涤样品，新标准在水解前是不洗涤样品的。

Ø    这一点需要注意，因为硝基呋喃类药物的代谢物在动物体内多数是以蛋白结合的形式存在，但有部分是游离态的，比如说SEM、AOZ。

Ø    目前没有明确的实验结论证明，硝基呋喃类药物的代谢物只是以蛋白结合状态存在，所以洗涤样品的时候会将游离态的残留物洗掉，从而影响结果的准确性。

关键词：调pH值至7.0～7.5

要点：

Ø  大量研究表明，在 pH 为 7-7.5 的弱碱性条件下，乙酸乙酯对AOZ、AMOZ、AHD、SEM 衍生产物的提取效率极高（能达到 90%以上）。

Ø  因为弱碱环境可以抑制目标物的电离，使其绝大部分呈分子状态存在于衍生溶液中，有利于乙酸乙酯对目标物的提取或HLB 固相萃取柱的吸附，从而增强富集净化的效果。

Ø  但当 pH 值为 8-10 时，乙酸乙酯对 AHD 的萃取效率很低，因此需要将硝基呋喃代谢物酸性衍生溶液的 pH 值调节到 7-7.5 范围。

关键词：高速离心，0.22   um滤膜

要点：

Ø  相之前的标准，新标准增加了高速离心步骤（14000 r/min的转速离心），以及过0.22 um滤膜。

Ø  通过高速离心可以进一步净化试样溶液，把一些不溶于5%甲醇溶液的物质，通过高速离心沉淀下来，有部分的脂肪也可以通过高速离心分离出来。

Ø  另外，新增的0.22   um，为更好去除试样的杂质，保护色谱分析系统。

关键词：浑浊

要点：

Ø  最后一步用 5%甲醇水定容后出现浑浊，说明溶质过饱和（可能是样品的脂肪、蛋白等含量过高所致），通常是前处理过程中净化步骤不彻底导致的。

Ø  一般解决方法有两种：一是定容后置于冰箱（4℃）冷藏 2 小时以上，使脂肪充分析出，取出后高速冷冻离心，取上清液进行检测；

Ø  二是参考《GB/T   20752-2006》标准的处理方式——加入 10 mL 甲醇+水混合溶液（2+1）均质，然后离心弃去上清液再过 Anavo HLB 小柱净化效果更好。