利用UHPLC等先进技术 |中药夏至草谱效关系初探

近日，江西中医药大学何军伟副教授课题组利用中药药理学的方法考察了一种中药的作用原理。该团队对夏至草的乙醇提取部位及其大孔吸附树脂洗脱部位为对象进行了具体的研究。实验作用的模型为急性血瘀证大鼠。

实验研究

夏至草Lagopsis supina (Steph) IK.-Gal. Ex Knorr.为唇形科夏至草属多年生草本植物，药用历史悠久。由于临床功效与益母草一致，都有凉血活血之功，故常以益母草的替代品使用。

为了研究夏至草的药效物质基础及作用机制，需要首先明确有效成分，然后确认成分与作用的关系。本研究中，首先分离得出夏至草乙醇提取物及其大孔吸附树脂30%乙醇洗脱部位的特征图谱，接下来又证明了夏至草提取物或总生物碱具有改善血液和淋巴微循环障碍作用。通过显著地改善血瘀证大鼠的血流动力学、血液流变学特性，表现在抗凝血、抗血小板聚集、抗纤维蛋白溶解等指标的改善。

实验中通过UHPLC-qTOF-MS/MS技术从夏至草总提取物中鉴定了51个成分，采用HPLC技术测定了该植物中的2个主要活性成分（水苏苷A和毛蕊花糖苷）的含量。

利用全自动生化仪对SD大鼠血清中的相关血液因子进行了分析，得出了夏至草提取物及其部位对急性血瘀微循环障碍大鼠小肠、胃、肝器官微区血流量的影响。

核心技术探讨

1. UPLC与UHPLC的区别：

UPLC是超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）的简称。借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLC^TM超高效液相色谱系统在1996年问世。

赛默飞 Vanquish™ UHPLC超高效液相色谱系统

沃特世 ACQUITY Arc系统

UHPLC的特点是工作压力硬件通常可以承受超过9,000 psi（620 bar）或更高的系统压力。不仅可以实现更高的分辨率、缩短整体分析时间，还可以实现精确的温度控制。UHPLC系统的扩散体积和耐受压力方面进行了优化，可以匹配2.5–3.5 μm颗粒度的柱子，最大限度发挥色谱性能。UHPLC是目前使用最为广泛的液相色谱仪，常见系统多有安捷伦1260SL，岛津Prominence UFLC，Thermo Ultimate3000。最近，Waters的ACQUITY Arc加入了这个阵营。

2. 生化分析仪

罗氏Cedex Bio多参数生化分析仪

全自动生化分析仪是根据光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。将原始手工操作过程中的取样、混匀、温浴（37℃）检测、结果计算、判断、显示和打印结果及清洗等步骤全部或者部分自动运行。运行速度最快可达9,600 样品/小时。具有测量速度快、准确性高、消耗试剂量小等特点，现已在各级医院、防疫站、计划生育服务站得到广泛使用。可以搭配不同的试剂盒并建立不同的检测方法。

研究成果发表在Elsevier旗下Biomedicine & Pharmacotherapy期刊，题目为“Lagopsis supina extract and its fractions exert prophylactic effects against blood stasis in rats via anti-coagulation, anti-platelet activation and anti-fibrinolysis and chemical characterization by UHPLC-qTOF-MS/MS”。

期刊Biomed. Pharmacother.创办于1982年。杂志主要集中在药理毒理学、生物医药等领域，至今已发展30多年，最新的IF为4.545。

目前，中药药效物质基础的研究比较热门。除了应用在单味饮片中，对于复方的研究，也在逐步开展。