T-2毒素检测试剂盒

T-2毒素检测试剂盒

本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中T-2毒素。该测试盒反应板可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析需有含450nm波长的微孔板酶标仪。



1 概要



T-2毒素(T-2 toxin)主要是由镰孢属的拟枝孢镰孢（F. sporotrichioides）等产生的有毒代谢产物，属单端孢霉烯族化合物A型，对人畜具有较大的危害。该毒素是体内蛋白质合成的抑制剂，人畜误食后，可引起呕吐、腹泻、发热等急性中毒症状，严重时可损伤造血组织、造成死亡。因此对人类健康和畜牧业发展构成潜在威胁。



目前检测粮食和饲料中T-2毒素的仪器方法有液相色谱、气相色谱、质谱和毛细管电泳法等，这些方法灵敏度较高，结果稳定，但所需仪器设备昂贵，样品准备耗时长，不适于大量样品的筛选。本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方法，可以准确快速检测粮谷类中的T-2毒素。



2 测定原理



本测试盒用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入T-2毒素标准品或样品、抗T-2毒素单克隆抗体进行免疫反应后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG的抗体孵育，加入底物显色，终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。



3 提供的物品



微孔板



5个浓度的T-2标准溶液（各1mL）



标准1：0ng/mL ……………………………………………………………直接使用



标准2：100.0ng/mL ………………………………………………………直接使用



标准3：200.0ng/mL ………………………………………………………直接使用



标准4：500.0ng/mL ………………………………………………………直接使用



标准5：1000.0ng/mL ………………………………………………………直接使用



T-2单克隆抗体溶液(6mL) ………………………………………………………直接使用



酶标物(12mL) …………………………………………………………………直接使用



显色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用



终止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用



浓缩洗液(30mL) …………………………………………………………………稀释使用



空白对照(6mL) …………………………………………………………………直接使用



4 盒中未提供，需自备物品



微孔板酶标仪（含450nm）、振荡器、粉碎机、微量移液器



量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸



氯化钠（分析纯）、甲醇（分析纯）、去离子水或蒸馏水



5 操作者注意事项



标准溶液中含有T-2毒素，应特别小心。



终止液为1N硫酸，避免接触皮肤。



每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。



每步加样时间应控制在5min内。



孵育过程中应避光。



不要使用过期试剂盒。



不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。



6 储存条件



保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻



显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。



将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。



7 试剂变质的标志



标准1的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。



8 样品处理



----样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存；



----取5g粉碎的有代表性的样品，加1.25g氯化钠及25mL 70%甲醇溶液



----强力振荡3分钟



----用快速定性滤纸过滤



----取1mL滤液，用1mL去离子水或蒸馏水稀释



----取50μL稀释液进行分析



----*根据需要可以增加样品量，但甲醇溶液的量也应相应增加。



9 酶免疫分析程序



----浓缩洗液为10倍浓缩液，使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。



----取所需数量的板条插入微孔架，记录样品及标准的位置。



----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。



----加入50mL抗T-2单克隆抗体使用液到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到孔中的液体，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。



----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。



----每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。



----用洗液洗涤微孔板3min×3次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。



----每孔加入显色液100mL（2滴），37℃孵育12-15min。



----每孔加入终止液50mL（1滴），立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD值）。



10 样品浓度计算



以标准溶液OD值与标准1OD值的比值为纵坐标，所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与标准1OD的比值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为T-2毒素浓度的对数值，求得反对数即为测定液中T-2毒素浓度C（ng/mL），按下列公式计算出样品中T-2毒素含量：



T-2毒素含量（mg/kg）= C×K



式中：C：稀释后样品提取液中T-2毒素含量（ng/mL）



K：样品稀释倍数（本提取方法为50）



11试剂盒主要技术指标及参数



测试盒最低检出浓度100.0ng/mL，回收率70%-120%，交叉反应系数小于1%，试剂盒校正曲线的线性范围100.0ng/mL -1000.0ng/mL，试剂盒条内变异＜10%，条间变异＜15%。