唾液中单乙酰吗啡检测方案(液质联用仪)

SSL-CA19-137Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-413 上海市徐汇区宜州路180号B2栋http：//www.shimadzu.com.cn咨询电话：021-34193996Hotline：021-34193996 Nexera Mikros-LCMS-8060分析唾液中6种阿片类化合物 LCMSMS-413 摘要：本文利用岛津 Nexera Mikros 液质联用系统建立了唾液中6种阿片类化合物的分析方法。唾液样品离心过水相滤膜后直接上样，前处理简单便捷，所需样品量少，样品分析速度快，在11 min 内完成6种化合物的上机分析。本方法采用外标法定量，各组分线性良好，线性相关系数均在0.998以上，检出限在0.25 ug/L~1 ug/L，加标回收实验回收率在 86.1%-112.1%之间，连续6次进样保留时间相对标准偏差小于0.7%，峰面积的相对标准偏差小于10%，系统精密度良好。 关键词： Nexera Mikros 液质联用系统阿片类化合物唾液 近年来，毒品在全世界范围内的滥用逐渐渗透到日常生活各个方面，例如吸毒后驾驶、在娱乐场所、工作场所滥用毒品等。随着法律制度的完善和维护自身权益意识的增强，现场实施血液和尿液样品的采集可能存在一定困难，需要其它更易获得的样品替代，唾液由其采集方便、采集成本低以及基质相对干净等优势，在毒品滥用检测和监管等方面的应用越来越广泛。 唾液分析的关键分析难题是与血液和尿液相比可用于测试的样品量有限且毒品在唾液中含量比较低，这就要求仪器的灵敏度能达到定量检测的需要，Nexera Mikros 系统能够在样本量有限的情况下提升检测灵敏度，因此比较适合于唾液中毒毒分析。 本文利用岛津 Nexera Mikros 液质联用系统建立了唾液中6种阿片类化合物的分析方法，该方法灵敏度高，重复性好，供相关人员参考。 I实验部分 1.1仪器 岛津微流量液相色谱仪Nexera Mikros 与三重四极杆质谱仪LCMS-8060 联用系统。具体配置为 LC-Mikros 输液泵， DGU-20A， 在线脱气机， SIL-30AC 自动进样器(15uL定量环)， CTO-40M 柱温箱， CBM-20A系统控制器， LCMS-8060 三重四极杆质谱仪， LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 1.2分析条件 液相色谱条件： 色谱柱：Shim-pack MC-C18 (0.3 mm I.D. × 50 mm L.， 1.9um) 流动相：A相-0.1%甲酸水B相-乙腈 流速：5pL/min 柱温：40C 进样量：1pL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为10%，时间程序见表1。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 1.2 泵 B.Conc 10 5 泵 B.Conc 60 5.2 泵 B.Conc 100 7.5 泵 B.Conc 100 7.6 泵 B.Conc 10 11 控制器 Stop 质谱条件 离子源： ESI(+)接口电压：0.5kV雾化气流速：2L/min加热模块温度：400℃加热气流速： 3L/min扫描模式：多反应监测(MRM)接口温度：100℃MRM 参数：见表2 DL温度：250℃ 表2MRM优化参数 N0. 名称 CAS 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias (V) CE (V) Q3 Pre Bias (V) 1 吗啡 57-27-2 286 152.10* -20 -55 -26 165.1 -11 -39 -30 2 可待因 76-57-3 300 165.10* -22 -42 -18 199.1 -23 -31 -23 3 单乙酰吗啡 2784-73-8 328.1 211.1 -23 -30 -26 165.05* -23 -38 -17 4 苯甲酰爱康宁 519-09-5 290 168.10* -15 -19 -28 105 -15 -29 -10 5 美沙酮 76-99-3 310.2 265.20* -15 -15 -27 105.1 -15 -27 -19 6 杜冷丁 57-42-1 248.1 174.15* -13 -20 -10 220.15 -13 -21 -14 注：*表示定量离子 1.3标准溶液的配置 分别取6种化合物标准溶液，用甲醇稀释，配制标准品混合工作液，放置于-20℃冰箱中保存。 1.4样品前处理方法 唾液采集后，13000 rpm 离心15 min， 取上清过水相滤膜，按照体积比加入0.1%甲酸，待分析。 结果与讨论 2.1标准溶液的MRM色谱图 图1标准品 MRM 色谱图 (10 ug/L) 2.2线性范围 按照1.4中的方法处理空白唾液，然后用空白唾液将1.3中的混合标准溶液稀释成不同浓度，上机测试，以各目标物浓度为横坐标，目标物峰面积为纵坐标，以外标法绘制标准曲线，所得校准曲线线性关系良好，均大于0.998。线性方程及相关系数见表3。 表3校准曲线参数 化合物 校准曲线 线性范围 (ng/mL) 相关系数r 准确度% 吗啡 Y=(2573.41)X+(-963.682) 1-80 0.999 95.8-104.3 可待因 Y=(4540.92)X+(-509.078) 0.5-80 0.998 94.4-108.7 单乙酰吗啡 Y=(26183.7)X+(646.816) 0.5-80 0.999 95.9-109.4 苯甲酰爱康宁 Y=(320597)X+(439.657) 0.5-80 0.999 93.9-105.0 美沙酮 Y=(450114)X+(31395.1) 0.5-80 0.999 94.0-104.6 杜冷丁 Y=(49287.1)X+(-2393.02) 0.5-80 0.999 87.7-109.2 2.3.灵敏度实验 取空白唾液，加入一定量的混合沐准溶液，上机检测，各组分在检测限附近的色谱图如下图所示。 图26种阿片类化合物检出限MRM 色谱图 2.4精密度实验 按照1.4中的方法处理空白唾液，然后用空白唾液将1.3中的混合标准溶液稀释成低、中、高三个不同浓度，连续进样6次，考察保留时间和峰面积的重复性，结果如下表4所示。6种化合物的保留时间的 RSD 均小于0.7%，峰面积的RSD 均小于10%，表明重复性良好。 表4精密度实验(n=6) 化合物 浓度1 浓度2 浓度3 CONC. R.T. Aera CONC. R. T. Aera CONC. R.T. Aera /ng/L RSD/% RSD/% /ng/L RSD/% RSD/% /ng/L RSD/% RSD/% 吗啡 5 0.45 7.45 20 0.59 9.27 40 0.31 6.56 可待因 5 0.21 9.46 20 0.67 8.23 40 0.11 4.93 单乙酰吗啡 5 0.22 3.73 20 0.55 6.47 40 0.14 9.56 苯甲酰爱康宁 5 0.14 5.27 20 0.54 4.51 40 0.14 2.57 美沙酮 5 0.31 2.24 20 0.47 2.77 40 0.19 2.98 杜冷丁 5 0.23 4.66 20 0.43 1.91 40 0.22 4.16 2.5.加标回收实验 按照1.4中的方法处理空白唾液，然后用空白唾液将1.3中的混合标准溶液稀释成低、中、高三个不同浓度水平加标浓度，结果如下表5所示，测试结果显示：6种化合物的加标回收率在86.1%~112.1%之间。 表5基质加标实验结果 化合物 加标1 加标2 加标3 加标浓度 回收率% 加标浓度 回收率% 加标浓度 回收率% (ng/L) (ng/L) (ng/L) 吗啡 5 86.1 20 92.2 40 95.9 可待因 5 101.9 20 111.1 40 97.9 单乙酰吗啡 5 99.9 20 99.2 40 100.8 苯甲酰爱康宁 5 111.1 20 112.1 40 105.2 美沙酮 5 108.1 20 111.1 40 104.6 杜冷丁 5 93.5 20 95.6 40 100.5 I结论 本文利用岛津Nexera Mikros 液质联用系统建立了唾液中6种阿片类化合物的分析方法。该方法灵敏度高，前处理简单便捷，所需样品量少，少品分析速度快， 在11 min 内完成6种化合物的上机分析。本方法采用外标法定量，各组分线性良好，线性相关系数均在0.998以上，检出限在0.25ug/L~1 ug/L， 加标回收实验回收率在86.1%-112.1%之间，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差分别小于0.7%和10%，系统精密度良好，供相关人员参考。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai 本文利用岛津Nexera Mikros液质联用系统建立了唾液中6种阿片类化合物的分析方法。唾液样品离心过水相滤膜后直接上样，前处理简单便捷，所需样品量少，样品分析速度快，在11 min内完成6种化合物的上机分析。本方法采用外标法定量，各组分线性良好，线性相关系数均在0.998以上，检出限在0.25 µg/L~1 µg/L，加标回收实验回收率在86.1%-112.1%之间，连续6次进样保留时间相对标准偏差小于0.7%，峰面积的相对标准偏差小于10%，系统精密度良好。