人尿液中短链脂肪酸检测方案(气相色谱仪)

SSL-CA19-079Excellence in Science Excellence in ScienceGCMS-317 GCMS 法检测尿液中8种短链脂肪酸含量 GCMS-317 摘要：本文利用岛津公司 GCMS-QP2020 NX气相色谱-质谱联用仪，建立了一种人尿液中8种短链脂肪酸的测定方法。在0.1~400 ug/mL 浓度范围内各组分线性关系良好，各组分相关系数均达到 0.999以上，方法检出限在1.98~5.81 ng/mL。取浓度为 10 ug/L标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于2.35%。以此方法测得实际人尿液样品中8种短链脂肪酸浓度为254.1~1421.1ug/mL。该方法简单方便，能够有效的检测人尿液中8种短链脂肪酸的含量。 的意义，但通常的液相色谱-质谱方法，由于其流动相包含甲酸和乙酸，无法有效地对体液中的短链脂肪酸进行有效检测。 本文利用岛津 GCMS-QP2020 NX 气相色谱-质谱联用仪建立了一种快速测定人尿液中短链脂肪酸含量的方法，该方法前处理过程简单、分离度好，可用于短链脂肪酸含量的测定，可对人体内代谢组学的研究提供重要参考。 I样品前处理 取100pL 人尿液样品，加入400pL甲醇， 经3min 震荡混合后，以12000r/min 离心 6min。将离心后所得上清液取出，待测。 说明：由于短链脂肪酸具有较强的挥发性，为避免实际样品中的成分因前处理过程损失过多，本实验未对离心后的溶液进行氮吹复溶和重复处理。 09 品器 图县秋鞋TE 3具凿影 表1短链脂肪酸各组分信息 No. 中文名称 英文名称 CAS号 保留时间 定量离子 定性离子 (min) (m/z) (m/z) 1 乙酸 Acetic acid 64-19-7 10.065 43.00 45，60 2 丙酸 Propionic acid 79-09-4 11.195 74.00 45，73 3 异丁酸 Isobutyric acid 79-31-2 11.555 43.00 41，73 4 丁酸 Butyric acid 107-92-6 12.350 60.00 73，42 5 异戊酸 Isovaleric acid 503-74-2 12.865 60.00 43，41 6 戊酸 Valeric acid 109-52-4 13.720 60.00 73，41 7 2-乙基丁酸 2-Ethylbutyric acid 88-09-5 13.975 88.00 43，73 8 己酸 Hexanoic acid 142-62-1 15.000 60.00 73，41 3.2标准曲线及检出限 分别以甲醇配制0.1、1.0、5.0、10、50、100、200、400 ug/mL的短链脂肪酸混合标准溶液，取1uL进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，全部化合物标准曲线如图3所示。根据0.1 ug/mL标样数据，以3倍信噪比(峰至峰)计算8种短链脂肪酸方法检出限，各化合物检出限以及线性相关系数如表2所示。 图38种短链脂肪酸标准曲线 表2各组分相关系数及检出限 No. 组分名称 相关系数(R) 检出限(ng/mL) 1 乙酸 0.9991 1.98 2 丙酸 0.9997 3.15 3 异丁酸 0.9999 5.81 4 丁酸 0.9999 2.36 5 异戊酸 0.9998 3.87 6 戊酸 0.9999 2.01 7 2-乙基丁酸 0.9998 4.41 8 己酸 0.9997 2.28 3.3重复性实验 取浓度为10 pg/mL标准品溶液，连续进样6次，考察仪器的重复性，测定结果见表3。 表38种短链脂肪酸峰面积重复性结果 No. 组分名称 RSD(%) 1 乙酸 1.79 2 丙酸 2.22 3 异丁酸 1.13 4 丁酸 1.35 5 异戊酸 2.35 6 戊酸 1.58 7 2-乙基丁酸 1.52 8 己酸 1.82 3.4实际样品实验 实际尿液样品按照上述前处理方法处理，上机测试，测得结果如表4所示。 图4尿液中8种短链脂肪酸 TIC图 表4实际尿液样品中各短链脂肪酸浓度 N0. 组分名称 浓度(ug/mL) 1 乙酸 1421.1 2 丙酸 620.3 3 异丁酸 309.1 4 丁酸 571.1 5 异戊酸 381.6 6 戊酸 715.7 7 2-乙基丁酸 254.1 8 己酸 973.7 ■结论 本方法采用岛津 GCMS-QP2020 NX 检测人尿液中8种短链脂肪酸，在0.1~400 ug/mL浓度范围内标准曲线线性良好，相关系数均在0.999以上，方法检出限在1.98~5.81 ng/mL。取浓度为10 pg/mL标准品溶液连续进样6针，峰面积 RSD 均小于2.35%，精密度良好。以此方法测得实际人尿液样品中8种短链脂肪酸浓度为 254.1~1421.1 ug/mL。该方法简单方便，能够有效的检测人尿液中8种短链脂肪酸的含量。 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Center Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai LTE-SWDnZVWIHS罗 http：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路B栋咨询电话：otline： 短链脂肪酸主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、2-乙基丁酸和己酸等，作为重要的代谢产物广泛存在于人体的体液环境中。短链脂肪酸通常是由蛋白质和碳水化合物在厌氧环境下经肠道菌群发酵而产生的，其中乙酸、丙酸、丁酸等由碳水化合物经肠道菌群发酵产生; 异丁酸、异戊酸、戊酸等主要由蛋白质经肠道菌群发酵产生。对短链脂肪酸进行精确高效的测定对于人体内代谢组学研究有十分重要的意义，但通常的液相色谱-质谱方法，由于其流动相包含甲酸和乙酸，无法有效地对体液中的短链脂肪酸进行有效检测。本文利用岛津GCMS-QP2020 NX气相色谱-质谱联用仪建立了一种快速测定人尿液中短链脂肪酸含量的方法，该方法前处理过程简单、分离度好，可用于短链脂肪酸含量的测定，可对人体内代谢组学的研究提供重要参考。