烟草中茄尼醇检测方案(快速溶剂萃取)

图4超声提取，索氏提取和快速溶剂萃取对茄尼醇萃取率的比较 编号： RLC-SH-20110504 ASE-HPLC分析检测烟草中的茄尼醇 检测项目 茄尼醇 仪器设备 ASE350 UltiMate3000： LPG-3400 WPS-3000SLTCC-3000SD VWD-3000 参考应用文献 方法开发 车金水 最终审核 叶明立 茄尼醇(Solanesol) 是一种九聚异戊二烯醇，主要存在于烟叶，马铃薯和桑叶中，在烟叶中含量达0.3-3%。茄尼醇特殊的全反式链节结构及其本身具有的脂质抗氧化作用和清除人体自由基的功能，使其成为合成辅酶Q10和维生素K2的侧链，以及合成抗溃疡药物、抗癌药物不可替代的天然原料。目前，对茄尼醇的提取方法主要为浸提法、索氏提取法、超声提取法等。这些方法消耗溶剂量大，耗时，对茄尼醇提取率低。加速溶剂萃取技术(AcceleratedSolvent Extraction， ASE)是在较高的温度和压力下用溶剂萃取固体或半固体样品的新颖的样品前处理方法。在高温高压条件下，待测物从基体上的解吸和溶解动力学过程加快，可大大缩短提取时间，可减少溶剂的用量，同时提高对目标产物的提取率。本方法优化了ASE对烟草中茄尼醇萃取条件，再结合HPLC-UV对烟草中茄尼醇进行了检测。实验结果表明： ASE是一种适合对烟草中茄尼醇提取的方法，具有操作简单，省时省溶剂，提取率高等优点。 、材料与方法 标准物质茄尼醇，购自阿拉丁试剂有限公司；甲醇，乙乙： Fisher公司；乙醇，正己烷，丙酮：国药集团；水：： 18.2MQ/cm， Millipore 公司。 标准溶液配制：取一定量的标准物质，用甲醇溶解，配成1000 ug/ml储备液，用甲醇逐级稀释成 200 ug/ml， 100 g/ml，50 ug/ml， 25ug/ml，10ug/ml， 供 HPLC测试。 将烟草于粉碎机中粉碎至30目左右，取 0.5g烟草样品和硅藻土混匀，倒入事先垫有纤维素膜的萃取池 (SST) 中， 进行 ASE 萃取。萃取完毕后定容，过 0.45um 滤膜，待 HPLC分析。 2、、仪器条件 2.1ASE条件 a.萃取溶剂：甲醇(0.1mol/L NaOH) b. 萃取温度：120℃ c.静态萃取时间： 5min d.循环次数：3次 d. 萃取池：10mL SST 2.2HPLC条件 A.色谱柱： Acclaim C18 120A 5.0um 4.6X250mm 色谱柱温度：40℃ b.：流动相： 甲醇/异丙醇=60/40de 检测波长：213nm 进样量：10pL 3、 色谱条件优化选择 3.1色谱条件选择 图1标准溶液色谱图(10ug/mL) Acclaim C18 色谱柱(120A 5.0um 4.6 X 250mm， PN： 059149)，流动相甲醇/异丙醇60：40等度洗脱，流速为1mL/min， 柱温40℃，检测波长 213 nm，进样量10L。采用上述色谱条件，峰型尖锐，分离效果好，理论塔板数为15000，保留时间为9.1min。而采用纯甲醇，乙腈，或者两者的混合，茄尼醇出峰时间缓慢，峰型较宽。 3.2 ASE 萃取溶剂选择 本实验分别采用了水，乙醇，甲醇，丙酮，正己烷五种有机溶剂对烟草中的茄尼醇进行萃取。其中采用水做萃取剂时，完全没有茄尼醇被萃取出来。而采用甲醇，乙醇，丙酮，正己烷进行萃取时，以甲醇对茄尼醇的萃取率最高，达到了0.946%(120℃，静态萃取时间为5min， 两次循环)。据报道，茄尼醇还可能以茄尼醇酯的形态存在，在萃取液中加入碱，有助于使以茄尼醇酯形态的物质解离，提高茄尼醇的提取率。如采用甲醇先提取，后采用加碱皂化的方法对烟草中的茄尼醇进行萃取分析，将需要额外皂化3h。在本方法中，采用碱化甲醇对烟草中的茄尼醇进行提取，实验结果表明，在甲醇中添加 0.1mol/L的氢氧化钠，可以提高茄尼醇的提取率，为1.06%，提高了12%，达到提取与皂化一步完成的目的。所以本方法采用含0. 1mol/L氢氧化钠的甲醇作为萃取剂。 1.2 1 0.8萃取率 0.6 0.4 0.2 0 3.3ASE 萃取温度选择 本方法研究了5种不同萃取温度(60、80、100、120和140℃)对烟草中茄尼醇的萃取率的影响，实验结果表明，随着萃取温度的升高， ASE 对茄尼醇的萃取率也随之升高，于120℃时达到最高，达到了1.06%，温度升高至140设施都，茄尼醇的萃取率略有下降。所以，本方法以120℃作为烟草中茄尼醇的萃取温度。 图2萃取温度的影响 3.4 ASE 萃取循环次数选择 本方法采用 5min 作为 ASE 的静态萃取时间，采用单循环对同一样品分别萃取4次。实验结果表明：第-次萃取量占总萃取量的83.9%；第二次萃取量占总萃取量的14.3%；第三次萃取量占总萃取量的1.7%；第四次萃取液中未检出茄尼醇。所以本方法采用3次循环萃取烟草中的茄尼醇。 图3循环次数的影响 3.5检出限、线性、重现性 以三倍信噪比计算本方法的检出限为 0.2 u g/mL；在 10-200 ug/mL 范围内成良好线性关系，线性方程为y=0.3903x+0.2643，线性相关系数为0.9997；对同一样品进行3次平行萃取，RSD为1.7% 图4标准曲线色谱图Sample1Sample2Sempl 图3重复性实验色谱图(n=3) 4、与索氏提取，超声波提取比较 ：本方法比较了索氏提取，超声波提取和快速溶剂萃取对烟草中茄尼醇的萃取率。索氏提取法采用甲醇100mL， 样样0.5g，3于水浴锅上90℃萃取6h，提取完后定容，过0.45um滤膜，待 HPLC分析。超声提取法采用甲醇 50mL， 样品 0.5g， 于超声波清洗器上超声提取 1h提取完后定容，过0.45um滤膜， 待HPLC 分析。将索氏提取，超声提取同快速溶剂萃取进行比较，在均以甲醇作为萃取剂的时候， ASE 对烟草中的茄尼醇明显高于索氏提取及超声提取， RSD 也小于索氏提取和超声提取。当采用含 0.1mol/L NaOH 的甲醇作为萃取剂时， ASE对茄尼醇的萃取率比以甲醇为萃取剂时高出12.6%。对比三种方法的溶剂消耗，时间消耗，萃取率及 RSD， 可以看出， ASE 是一种快速，环保，高效的前处理方法。 表1超声提取，索氏提取和快速溶剂萃取比较 方法 溶剂体积 萃取时间 萃取率 RSD (n=3) 超声提取 50mL 1h 0.64% 5.30% 索氏提取 100mL 6h 0.87% 6.78% 快速溶剂萃取 25mL 0.5h 1.11% 1.70% 5、样品分析 本实验于市面上购买了5种香烟，在去掉包装纸后将烟叶粉碎至30目左右，待 ASE 萃取分析。对5个香烟样品进行分析，发现5种香烟的色谱图峰型良好，均无杂质干扰。5种香烟中的茄尼醇含量分别为：1.01%、1.02%、0.92%、1.10%和1.06%。 图55种香烟样品色谱图 5、结果 采用 ASE-HPLC 法测定烟草中茄尼醇。该方法对茄尼醇的检出限为 0.2 ug/mL， 在10-200 ug/mL 范围内成良好线性关系， RSD 为1.7%。采用 ASE 对烟草中的茄尼醇进行萃取，萃取效率明显高于索氏提取及超声提取，而且 ASE 更加节省溶剂和时间，具有操作简单、快速、高效等特点。 采用 ASE-HPLC 法测定烟草中茄尼醇。该方法对茄尼醇的检出限为 0.2μg/mL，在10-200μg/mL范围内成良好线性关系，RSD为1.7%。采用ASE对烟草中的茄尼醇进行萃取，萃取效率明显高于索氏提取及超声提取，而且ASE更加节省溶剂和时间，具有操作简单、快速、高效等特点。