极性农药草甘膦中分离检测方案(液相色谱仪)

「入门指南lWatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「入门指南 Torus DEA色谱柱极性农药分离入门指南 注：： Torus DEA色谱柱的生产和QC测试都是针对超临界色谱分析进行的，而非极性农药的亲水作用色谱分离。 目录 I.简介 首先，非常感谢您选择Torus""DEA色谱柱。：为确保该色谱柱成功用于极性农药分析，本指南介绍了有关系统清洗、色谱柱启用以及色谱柱清洗的详细步骤。 采用此特定色谱柱、Waters ACQUITY UPLCI-Class系统和Xevo°TQ-XS质谱仪并结合下述参数分析草甘膦及其相关化合物(如图1所示)。 如未采用本指南中所指定的分离条件和仪器配置，则色谱分析性能和重现性无法保持。 颗粒形状 粒径 孔径 孔体积 表面积 封端 色谱柱 固定相 (um) (A) (cc/g) (m²/g) Torus DEA 二乙胺 球形 1.7 130 0.7 185 专利 分析草甘膦等极性农药时，需要先用初始流动相冲洗色谱柱并进行平衡，以得到可重现结果。本指南详细介绍了使用Torus DEA 色谱柱分析极性农药时所需的色谱柱流动相、色谱柱平衡条件和分离条件。这些条件适用于2.1 mmx100 mm色谱柱配置(部件号186007616)· Ⅱ.入门指南 安装色谱柱前，可能需要先用酸清洗液钝化LC系统(详见第lV节)以去除金属离子和系统中累积的可与极性农药相互作用的其它干扰物质。分析物的峰形可能会随时间推移而变差，具体取决于样品类型或所用试剂的质量，此时可能需要对系统进行再次钝化。请参阅第IV节“故障排除”，了解详细说明。 色谱柱清洁方案 为实现性能保留时间和峰形的稳定，需要按下述步骤对色谱柱进行冲洗、平衡。不按该方案执行可能会导致草甘膦和AMPA等强极性化合物峰形较宽(请参阅第IV节“故障排除”)。 1. 向管路A1注入50mM甲酸铵(pH2.9)，并向B1注入0.9%甲酸的乙腈溶液，每条管路灌注2min。 2. 用40倍柱体积(对于2.1x100mm色谱柱，约为13.8 mL)的50：50 A1：B1以0.5 mL/min的流速冲洗30 min。 3. 向管路A1和B1注入水，每条管路灌注4 min。 4. 制备色谱柱清洗溶液(5mM Na EDTA， 用80：20的水：乙腈制备)，如第Illa节所述。 ( 5. 将LC液流导入废液， 因 为Na2EDTA可能会抑制质谱仪信号。 ) ( 6. 向管路A1和B1注入清洗溶液，每条管路灌注6 min。 ) ( 7. 用50：50 A1：B1以0.5 mL/min的流速冲洗色谱柱20 min。 ) 8. 完成后，用水分别灌注溶剂管路A1管B1 3 min · 注：由于分离在亲水作用色谱(HILIC)模式下进行，因此在完成溶剂管路灌注后不允许再有水流经色谱柱。 9. 向管路A1注入50mM甲酸铵(pH2.9)，并向B1注入0.9%甲酸的乙腈溶液，每条管路灌注5 min。 10. 按50：50 A1：B1以0.5 mL/min运行10 min。 11. 将LC液流连至MS。以初始梯度条件平衡色谱柱，并使压力和温度稳定(压力变化<30 psi)至少15 min。 Ⅲ.分析方法 a.试剂制备 1. 制备色色柱清洗溶液5mM Na.EDTA a. 称取1.86g乙二胺四乙酸二钠(Na，EDTA； CAS 139-33-3)，然后用80：20的水：乙腈定容至1L。 b.超声处理上述溶液5 min。 2. 样品制备 a.溶剂标准品： 草甘膦、AMPA和草铵膦购自供应商。各储备液按1 mg/mL的水溶液制备。100 ppb (ng/mL)的三种化合物混合溶液用含有0.25 mM NaEDTA的50：50乙腈：水溶液制备。 注：由于分离在亲水作用色谱(HILIC)模式下进行，因此不推荐使用100%水溶液作为样品稀释剂。进样中应至少含有50%的有机溶剂，如乙腈。 3. 流动相制备 a.流动相A，50mM甲酸铵， pH 2.9 1)称取3.15g甲酸铵(试剂级或更高级别)，然后向容量瓶中加入500 mL水。 2)超声处理溶液，直至所有甲酸铵溶解。 3)加入400mL水。 4)1)使用磁力搅拌器和经校准的pH计，通过少量添加甲酸将pH调节至2.9加水并定容至1L。 5)注：定期制备新鲜缓冲液以防止污染并保持pH始终为2.9，这对获得目标色谱分析效果至关重要。 b.流动相B，0.9%甲酸的乙腈溶液 1) 移取9mL甲酸加入约800mL乙腈中。充分混合。 2)添加乙腈，将总体积定容至1L。 (min) (mL/min) %A %B 曲线 初始 0.50 10.0 90.0 - 4.50 0.50 60.0 40.0 2 8.50 0.50 60.0 40.0 6 20.0 0.50 10.0 90.0 1 注：在梯度表中，从8.50 min至20.0 min的长时间色谱柱平衡是必须的，这样才能确保保留时间和峰形等色谱分析性能稳定 *如下图所示，进样后存在320uL的梯度起始延迟。 c.质谱仪参数 极性农药的质谱设置和MRM通道如下。如存在系统间差异，则需要优化下列参数才能实现最佳性能和灵敏度。 MS仪器： Xevo TQ-XS 电离模式：ESI-毛细管电压：2.4kV脱溶剂气温度：600°C脱溶剂气流速：1000L/hr离子源温度：150°℃喷雾器压力：7 bar 化合物 通道 锥孔电压(V) 碰撞能量(eV) 草甘膦 168.0>62.9 30 16 168.0>80.9 18 AMPA 110.0>62.9 30 15 110.0>80.0 12 草铵膦 179.5>95 30 25 179.8>85 16 图2.AMPA、草铵膦和草甘膦的色谱分离结果示例，保留时间(min)标于峰顶点。 灵敏度降低或峰形变差 LC 系统和色谱柱中的金属离子污染可能会使分析物的峰形在多次进样后受到影响。金属污染会使峰变宽并加重峰拖尾情况，从而导致信号强度下降。 建议按照第II节中的色谱柱入门方案清洁色谱柱。 完成色谱柱清洁步骤后，峰形应得到改善，如图3B所示。如果峰形仍不可接受，则应考虑LC系统中是否存在污染。如需清洁沃特世LC系统，请参阅沃特世文档715001307，LC-MS系统的污染控制中的“通过清洁消除污染”部分(清洁条件3，使用磷酸清洗液)。如果您在故障排除或液相色谱系统清洁方面需要更多指导和建议，请联系当地的沃特世代表。对于非沃特世LC系统，请联系相应供应商获取有关液相色谱系统清洁的具体信息。 图3.使用EDTA二钠溶液清洗色谱柱的作用。通过吏用EDTA二钠冲洗色谱柱，峰拖尾情况得到了改善，如圆形区域所示。(A)色谱柱未经EDTA二钠溶液清洗；(B)色谱柱经过EDTA二钠溶液清洗。 V.其他极性农药的应用 相同的方法已应用于其它极性农药的分析。 选定分析物的保留时间示例如图4所示。 图4.使用Torus DEA色谱柱分析含13种阴离子型极性农药的扩增分析物组所得到的色谱分析结果示例。 扫一扫，关注沃特世微信 沃特斯中国有限公司 沃特世科技(上海)有限公司 北京：010-52093866 THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 上海：021-6156 2666 广州：020-28295999 成戈：028-67653588 Waters，The Science of What’s Possible，UNIFI， Rapi Fluor-MS、ACQUITY和UPLC是沃特世公司的注册商标。其它所有商标均归各自的拥有者所有。 香港：852-29641800 免费售后服务热线：800(400) 820 2676Www.waters.com Torus DEA 色谱柱极性农药分离入门指南 Torus DEA 色谱柱极性农药分离入门指南 为确保该色谱柱成功用于极性农药分析，本指南介绍了有关系统清洗、色谱柱启用以及色谱柱清洗的详细步骤。