斑蝥中斑蝥素检测方案(液相色谱柱)

引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：40061 65163中国药典2010版对应高效液相色谱图集 斑蝥分析 斑蝥的高效液相色谱 1.药典收载情况 【来源】本品为芫青科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas 或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus 的干燥体。夏、秋二季捕捉，闷死或烫死，晒干。 【功能与主治】破血消削，功毒蚀疮，引赤发泡。用于癥瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌。 【含量测定】 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(23：77)为流动相；检测波长为230 nm。理论板数按斑蝥素峰计算应不低于3000。 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备：取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，用三氯甲烷作溶剂，超声处理(功率400W，频率40 kHz)2次(每次30 mL， 15分钟)，滤过，用少量三氯甲烷分次洗涤容器，滤液和洗涤液一并回收至干，残渣用甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.斑蝥药材高效液相色谱方法的建立 【色谱行为描述】 《中国药典》中斑蝥的含量测定以斑蝥素为质量评价依据，斑蝥素在Inertsil ODS-4中的色谱特点为：检测波长在230 nm时斑蝥素吸收较强，色谱图较好；在流动相组成为甲醇-水系统时，流动相的比例对斑蝥素及相邻色谱峰的分离具有显著的影响，流动相甲醇的比例在23左右时，其分离度较好，选择甲醇比例在15~25%(v/v)之间均可以获得满意的分离度及分析效果，考虑到分析时间，采用上述色谱柱，优化流动相比例为甲醇-水(23：77)；柱温对斑蝥素的保留时间也有一定影响，温度越高，保留时间越短，样品在25到45度均有较好的分析效果，考虑到样品的稳定性及分析效果，本次采用35度条件对斑蝥样品进行分析测定。 斑蝥 ( 样品来源：本品为芫 青 本昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas 或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus 的干燥体。 ) 对照品：斑蝥素(成都曼斯特生物科技有限公司，批号：A0167， 含量：98%) 供试品溶液的制备：取本品粗粉约1g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，用三氯甲烷作溶剂，超声处理(功率400W，频率40 kHz)2次(每次30 mL， 15分钟)，滤过，用少量三氯甲烷分次洗涤容器，滤液和洗涤液一并回收至干，残渣用甲醇溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每!mL含1mg的溶液，即得。 引领分析科技尽在北京谱朋-企业QQ：4006165163 色谱柱： Inertsil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um) 推荐使用条件范围： 流动相：甲醇-水(23：77) 色谱柱： Intersil ODS-4(4.6×150 mm， 5 um) 柱主温： 35℃ 流动相：甲醇-水(15~25：85~75) 检测波长：230nm 柱温：225~45℃ 流 速：1.0 mL/min 检测波长：230nm 进样量：10pL 流 速：：1.0mL/min 仪器配置： LC-20ADXR高压泵 SPD-M20A二极管阵列紫外可见光检测器CTO-20AC 柱温箱CBM-20A 系统控制器 SIL-20AC自动进样器 对照品 实际样品 名称 保留时间 面积 高度 理论塔板 拖尾因子 斑蝥素 16.344 581204 22372 9596 1.77 斑蝥素标准曲线 重复性数据如下： 斑蝥素 No. 对照品分析 样品分析 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 1 16.414 589130 16.450 636881 2 16.344 581204 16.404 623345 3 16.379 586993 16.431 627845 Average 16.379 585776 16.43 629357 RSD% 0.21 0.70 0.14 1.10 *本数据由北京大学医学部陈世忠教授课题组提供 色谱柱：Inertsil ODS-4(4.6 x 150 mm, 5um)流动相：甲醇-水(23:77)柱温：35°C检测波长：230 nm流速：1.0 mL/min进样量：10ul