基因导入仪

TERESA®活体基因导入仪是目前国内唯一获准进入人体临床试验的活体电穿孔基因导入装置，系上海交通大学国家“863”成果转化项目，由上海塔瑞莎公司进一步深度开发，其独具的特异性技术参数可以显著提高DNA、RNA等核酸及蛋白、化学小分子物质的导入效率，增强基因表达水平及免疫反应。有别于传统基因导入装置，本产品高效、安全、便携且易于操作，特别适合于动物模型中的活体基因导入研究。（最新发表文章：Jingying Zhou, Allen K.L. Cheung,Zhiwei Chen, et al. PD1-based DNA vaccine amplifies HIV-1 GAG-specific CD8+ Tcells in mice. J Clin Invest.2013, doi:10.1172/JCI64704影响因子：15.43Jingying Zhou, Allen K.L. Cheung,Zhiwei Chen, et al. Potentiating Functional Antigen-specific CD8+ T CellImmunity by a Novel PD1 Isoform-based Fusion DNA Vaccine. Molecular Therapy ,2013, doi:10.1038/mt.2013.63）影响因子：7.04公司简介：上海塔瑞莎生物技术有限公司是坐落于上海张江国家自主创新高科技园区的高科技企业，专注于电脉冲导入技术平台开发近15年，与美国洛克菲勒大学、英国纽卡斯尔大学、中国科学院、清华大学等国内外顶尖科研单位开展了广泛合作，先后申请和获得专利等知识产权近40项，获得“国家十一五和十二五重大科技专项”、及“上海市科委国际合作项目基金”等资助。产品已广泛应用于HIV、HBV、结核、流感、肿瘤、糖尿病等多领域的动物、人类疾病防治研究。

上世纪九十年代，基因疗法首次用于治疗“重度联合免疫缺陷症”（SCID），至今已经进行了两千余例的人体试验。早期临床试验表明，基因疗法在治疗白血病、血友病、地中海贫血、帕金森症、阿尔茨海默病等上效果显着，甚至能够令盲人重获光明。而更多的动物模型试验显示，基因治疗大有根治更多顽疾的可能。2012年5月《科学·转化医学》杂志发表的论文，对逾十年基因治疗受试者的血液样本进行分析，得出结论——“T细胞遗传修饰是一种安全的基因疗法”。这或许能部分消解近年来人们对于基因疗法的过度疑虑。宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院的布希曼教授（Frederic D. Bushman）为研究基因疗法的长期有效性和安全性，对接受基因治疗的HIV阳性患者进行长期随访。这些患者在1998—2005年间分别接受了一次或数次“T细胞免疫重建”。这种基因治疗是采用传统的逆转录病毒载体，将嵌合抗原受体基因导入患者体内，该嵌合抗原受体能引导机体的免疫系统杀伤HIV感染的细胞。布希曼教授的研究结果表明：患者在接受基因治疗十年后，导入外源基因依然能够发挥治疗效果。数据显示，该基因疗法的半衰期可达16年，这表明该基因疗法在患者体内的有效作用时间可达十余年。说不定，基因疗法真的是未来我们的唯一救星呢。

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术：被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其了化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。应用酚-氯仿抽提法制备的质粒DNA一般难以达到此标准，目前大多采用进口的术提取纯化试剂盒。具体的基因转染技术有鳞酸钙介导的转染法、DEAE葡聚糖介导转染法、脂质体介导转染法及电击基因转导尘等。靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的直核表达基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。