核黄素氧化德沃斯氏菌的培养与保存及注意事项！ 核黄素氧化德沃斯氏菌是Devosia属的微生物，原产地为中国。细胞呈杆状，细胞呈二聚排列，革兰氏染色呈阴性G-,细胞生长类型为化能异养，生长过程中需氧气，不需要光照。主要用途为分类；研究；教学。  一、菌种简介平台编号：Bio-135417 规格：冻干物拉丁属名：Devosia Riboflavina 中文名称：核黄素氧化德沃斯氏菌拉丁名称：Devosia riboflavina原始编号：4R3337其他保藏中心编号：AS 1.10398=ATCC 13584 =CCUG 1825 =DSM 7230 =LMG 2277 =JCM 21244=NBRC 13584来源历史/保藏单位：北京化工大学生物安全级别：一级收藏时间：2020-09-09模式菌株：是分离基物：富含核黄素土壤培养基编号：2培养温度(℃)：30℃培养时间(天)：1-2天需氧类型：好氧用途：教学，研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、产品仅用于科研如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 四、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板，操作完毕后尽快置于厌氧环境下恒温培养；若需接种液体培养基，制作培养液时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养液中的氧气）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                永生化小鼠骨髓源巨噬细胞的处理方法与培养步骤！ 小鼠骨髓来源巨噬细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等，某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如脓骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如骼骨）的稀松骨质间的网限中，是—种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代， 后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。 一、产品信息平台编号：Bio-137176 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶细胞信息：IBMDM 细胞名称：IBMDM永生化小鼠骨髓源巨噬细胞产品类别：小鼠细胞系生长特性：贴壁培养体系：专用培养基细胞形态：贴壁细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述巨噬细胞源自单核细胞，属于免疫细胞，有多种功能，属不繁殖细胞群，难以长期培养。巨噬细胞在吞噬和清除异物和衰老死亡细胞、分泌生物活性物质，调节血细胞生成与参与免疫应答等方面发挥着广泛的生物学作用，是一类在体内发挥重要免疫效应的细胞，为体内的稳态维持和组织防御提供保障。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常骨髓组织。2)细胞鉴定：CD68和MAC387免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)生长方式：圆形，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。推荐培养基：永生化小鼠骨髓源巨噬细胞专用培养基 五、小鼠骨髓来源巨噬细胞接受后处理1) 收到非红系有核细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的*培养基。4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。 六、小鼠骨髓来源巨噬细胞培养操作1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为类；1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 七、小鼠骨髓来源巨噬细胞培养注意事项1、收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件*。若由于培养条件不*而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      微生物细胞大小的测定和显微镜直接计数！ 一、实验目的 1、学习接目测微计的校正方法，了解血球计数板的构造和计数原理。 2、学习使用显微镜测微尺测定微生物细胞大小，掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法。 二、实验原理 微生物细胞的大小是微生物分类鉴定的重要依据之一。微生物个体微小，必须借助于显微镜才能观察，要测量微生物细胞大小，也必须借助于特殊的测微计在显微镜下进行测量。 显微测微计由镜台测微计和目镜测微计两部分组成。后者可直接用于测量细胞大小。它是一块圆形玻片，其中央有精确等分到度，测量时将其放在接目镜中的隔板上。由于目镜测微计所测量的是微生物细胞经过显微镜放大之后所成像的大小，刻度实际代表的长度随使用的目镜和物镜放大倍数及镜筒的长度而改变，所以，使用前须先用镜台测微计进行标定，求出某一放大率下，目镜测微计每一小格所代表的长度，然后用目镜测微计直接测被测对象的大小。镜台测微计是一块中央有精确刻玻片，刻度的总长为lmm，等分为100小格，每小格长10um，专用于对目镜测微计进行标定的。 三、实验材料 1、器械 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺，载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、肾形盘、洗瓶、接种环、酒精灯、火柴、滴管。 2、菌种 培养48h的啤酒酵母斜面菌体和菌悬液。 3、革兰氏染液 四、操作流程 1、置目测微计→置台测微计→标定目测微计→测菌体大小→记录结果→用毕擦拭干净 2、检查计数板→稀释样品→加样→计数→计算→清洗 五、操作步骤 1、微生物菌体大小的测定 （1）目镜测微尺的校正 ①更换目镜镜头  更换目镜测微尺镜头（标记为PF）；或者取下目镜上部或下部的透镜，在光圈的位置上安上目镜测微尺，刻度朝下，再装上透镜，制成一个目镜测微尺的镜头。 ②某一倍率下标定目镜刻度 将镜台测微尺置于载物台上，使刻度面朝上，先用低倍镜对准焦距、看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器使两尺重叠，并使二尺的左边的某一刻度相重合，向右寻找另外二尺相重合的刻度。记录两重叠刻度间的目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。 ③计算该倍率下目镜刻度  目镜测微尺每格长度=镜台测微尺格数/目镜测微尺格数xl0um ④标定并计算其他放大倍率下的目镜刻度 以同样方法分别在不同倍率的物镜下测定目镜测微尺每格代表的实际长度。如此测定后的测微尺的长度，仅适用于测定时使用的显微镜以及该目镜与物镜的放大倍率。 （2）菌体大小的测定 ①将啤酒酵母制成水浸片。 ②大小换算 将标本先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺测定每个菌体长度和宽度所占的刻度，即可换算成菌体的长和宽。 ③求平均值 一般测量微生物细胞的大小，用同一放大倍数在同一标本上任意测定l0一20个菌体后，求出其平均值即可代表该菌的大小。 2、用血球计数板测定微生物细胞的数量 （1）检查血球计数板  取血球计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否沾有杂质或干涸着的菌体，若有污物则通过擦洗、冲洗，使其清洁。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。 （2）稀释样品 将培养后的酵母培养液振荡振摇混匀，然后作一定倍数的稀释。稀释度选择以小方格中的分布的菌体清晰可数为宜。一般以每小格内含4～5个菌体的稀释度为宜。 （3）加样 取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用滴管取1滴菌稀释悬液注入盖玻片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可用吸水纸吸去。静置5—10分钟。 （4）镜检 待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找到计数室方格后，再用高倍镜测数。一般应取上下及中央五个中格的总菌数。计数时若遇到位于线上的菌体，一般只计数格上方（下方）及右方（左方）线上的菌体。每个样品重复3次。 （5）计算  取以上计数的平均值，按下列公式计算出每毫升菌液中的含菌量。 菌体细胞数（cfu/mL）＝小格内平均菌体细胞数×400×104×稀释倍数 （6）清洗  计数板用毕后先用95%的形酒精轻轻擦洗，再用蒸馏水淋洗，然后吸干，最后用擦镜纸揩干净。若计数的样品是病原微生物，则须先浸泡在5%石炭酸溶被中进行消毒，然后再行清洗。清洗后放回原位，切勿用硬物洗刷。 六、结果 1、计算出目镜测微尺在低、高倍镜下的刻度值。 2、记录菌体大小的测定结果。 3、计算样品中酵母菌浓度。 七、思考 1、为什么随着显微镜放大倍数的改变，目镜测微计每格相对的长度也会改变？能找出这种变化的规律吗？ 2、根据测量结果，为什么同种酵母菌的菌体大小不完全相同？ 3、能否用血球计数板在油镜下进行计数？为什么？ 4、根据自己体会，说明血球计数板计数的误差主要来自那些方面？如何减少误差？  八、附录 目镜测数尺有两种：一是特制的目镜镜头，镜片上刻有50等分或100等分的刻度，使用时直接安装在显微镜上，取代没有刻度的目镜镜头；另一种是一块直径大约17.5 mm的圆玻璃片，其中央刻有50等分或100等分的刻度，使用时将该玻璃片安装在原来的目镜镜头上即可。由于不同的显微镜放大倍数不同，既使同一显微镜在不同的目镜、物镜组合下其放大倍数也不同，故目镜测微尺每格实际表示的长度随显微镜放大倍数不同而异。也就是说，目镜测微尺上的刻度只代表相对的长度。因此在使用前须用镜台测微尺校正，以确定在一定放大倍数下目镜测微尺的每格长度。 血球计数板是一块特别的厚玻片，玻片中央分剖成两个平面，上面各刻有9区，中央一区为计数室，供计数用，此区的长和宽各为1mm。中央平面两侧有小沟，小沟外有两条突起的平台，平台比中央平面高0.1mm，因此计数室体积为0.1mm3，容积为10-4ml。通常计数室分为25个大格，每大格又分为16个小格，每小格容积为4×10-6ml，即lml菌液容积相当于400万个小格体积。因此只要将细胞悬液注人计算室，计算出一定数量小格的平均菌数即可算出每毫升的细胞数。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  狗肾上皮细胞的培养操作规程及应用研究！ 一、背景 狗肾上皮细胞是一种狗肾上皮细胞株。这些细胞是从表观正常的成年雌性可卡犬的肾脏中建立的，并经过克隆过程得到。当维持高细胞浓度时，狗肾上皮细胞能够形成大量的小管。为了形成这些小管，细胞需要每天两次换液以提供足够的养分。 与原始细胞株相比，狗肾上皮细胞的c-AMP检测水平较低，同时在forskolin刺激下读出的腺苷环化酶水平也较低。此外，其跨上皮抗性也比Super Dome和MDCK细胞低。在狗狗的泌尿系统中，上皮细胞的存在是正常的。它们通常存在于狗尿沉渣中，包括少量红细胞或白细胞以及上皮细胞。此外，年母畜尿中还会含有大量的鳞状上皮细胞，这些都是正常的生理现象。然而，如果狗狗的泌尿系统受到细菌感染，可能会导致尿道上皮损伤，使上皮细胞脱落，从而可能引发结石等问题。 另外，狗肾上皮细胞还与狗狗的配种健康程度有关。在狗狗的阴道中，未角化的细胞和角化细胞的比例可以反映狗狗的配种状况。当狗狗接近最佳配种时间时，阴道中角化上皮细胞的比例会增加，而未角化细胞和红血球的比例则会减少。 二、狗肾上皮细胞培养操作 1)复苏狗肾上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)狗肾上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)狗肾上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 狗肾上皮细胞可以用于猪骨汤胞内抗氧化活性评价模型的研究： 由于骨汤对健康的功效为人们广泛相信,它成为一种长期且广泛被饮用的汤品。现有针对骨汤开展的生物学功效研究较少,饮用骨汤的益处缺乏数据支持。 通过针对性地构建细胞胞内抗氧化活性评价模型,确立评价骨汤在细胞内抗氧化能力合适的方法，通过该模型比较猪骨汤和清汤(工业汤)之间以及骨汤不同粒径组分之间胞内抗氧化能力,并结合骨汤生物化学和胶体化学性质对上述抗氧化能力的差异进行阐述,尝试获得骨汤在体内抗氧化作用机制的梗概,主要研究内容及结果如下： (1)构建骨汤的胞内抗氧化活性评价模型,通过对不同组织来源的细胞,细胞胞内本底自由基和外加氧化剂产生的影响等相关因素进行考察和筛选,最后确定了以上皮细胞系的人结肠癌细胞(Caco-2)和狗肾上皮细胞作为适合评价骨汤抗氧化活性的细胞模型。 (2)通过比较化学法和细胞内抗氧化模型的结果,骨汤在化学法和胞内抗氧化模型存在极大的差异,这说明骨汤在化学水平和细胞水平的抗氧化作用机制可能不同,化学法测定骨汤直接作用于自由基,而在细胞内骨汤则更可能是通过作用于胞内抗氧化酶系而影响自由基水平。胞内抗氧化模型能相对更客观反映骨汤在体内发挥生物功效的作用。 (3)通过构建的胞内抗氧化体系对骨汤和清汤的抗氧化活性进行平行的测定,骨汤和清汤表现出不同的抗氧化活性,在上皮细胞Caco-2胞内清汤和骨汤的抗氧化能力基本一致,而对狗肾上皮细胞清汤抗氧化能力不及骨汤,化学法测定清汤抗氧化能力强于骨汤,说明骨汤经过工业化处理得到清汤时发生了构造改变,并可能表现为化学水平和细胞水平的抗氧化作用差异。 (4)以胞内抗氧化体系对骨汤及其不同粒径组分的抗氧化活性进行对比测定,结果以Caco-2胞内抗氧化能力衡量的强弱顺序为真溶液、颗粒和骨汤原汤,而在狗肾上皮细胞的表现则相反。这两种上皮细胞代表了体内不同组织来源,这可能和骨汤经口进入消化道后,其具有生物学效应的成分会依照粒径大小在不同部位进行转运、吸收和作用有关系。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   黑皮鸡枞菌的生物功能与生活习性及栽培要点！ 黑皮鸡枞菌（Oudemansiella raphanipies）是属担子亚门菌，层菌纲，伞菌目，白蘑科，又名长根菇。该菌具有食用和药用价值，也是中国传统的药用真菌之一。因其鲜嫩醇香，肉质细嫩、洁白如玉、口感独特、生熟皆可食、食药两用、营养丰富而备受人们的关注。 一、菌种简介平台编号：Bio-134327 规格：斜面培养物 外文名称：Oudemansiellaraphanipies中文名称：黑皮鸡枞菌属性：担子亚门菌，层菌纲，伞菌目，白蘑科价值：食用和药用价值类型：我国传统的药用真菌之一成分：氨基酸、维生素和醇类物质培养温度：15-30℃ 用途：研究，教学注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株定义黑皮鸡枞菌（Oudemansiella raphanipies）是属担子亚门菌，层菌纲，伞菌目，口蘑科。 其肉质鲜嫩，口感独特，作为食品药品皆可，备受人们关注，黑皮鸡枞菌是相关科研人员经过数年的潜心研究，在2006年选育出能实现人工栽培的珍稀食用菌。 三、生物功能鸡枞菌不仅含有丰富的氨基酸、维生素和醇类物质及多种生物酶，还含有多酚、多糖、黄酮等多种生物活性成分，这些活性成分常被用在镇痛消炎、提高免疫力、修复损伤器官及调节身体机能等方面。 四、生活习性黑皮鸡枞菌为腐生菌或土生菌，适宜微酸性或中性环境中生长；菌丝生长最佳温度 20℃～25℃，菌丝发满袋一般需40天左右，再经40天培养，可达到生理成熟；喜覆土栽培，但不覆土也可出菇；属于较典型的中高温型食用菌品种，一般可安排冬春季节两次制作菌棒，春夏秋三季栽培出菇。 五、栽培要点1、基料配方及其处理；2、菌袋发菌；3、后熟培养：出菇管理和潮间管理。 六、黑皮鸡枞菌的功效与作用及食用方法黑皮鸡枞菌，学名黑皮牛肝菌，是一种食用菌类，具有补充营养、抗氧化作用、改善免疫功能、促进消化等功效和作用。黑皮鸡枞菌可以烹饪成各种美食，如炒菜、炖汤、烤肉等。1、补充营养：黑皮鸡枞菌含有丰富的蛋白质、维生素、矿物质和膳食纤维。是一种低脂肪、低热量的食材，适合作为健康饮食的一部分。2、抗氧化作用：黑皮鸡枞菌富含多种抗氧化物质，如多酚类化合物和维生素C，有助于清除自由基，减少氧化应激，保护细胞免受损害，维护健康。3、改善免疫功能：黑皮鸡枞菌含有多糖类物质，具有免疫调节作用，可以增强免疫系统的功能，提高机体的抵抗力。4、促进消化：黑皮鸡枞菌中的膳食纤维可以促进肠道蠕动，增加排便频率，有助于预防便秘和促进消化。此外，黑皮鸡枞菌中的多糖类物质具有调节血糖的作用，有助于稳定血糖水平，对于糖尿病患者具有一定的益处。黑皮鸡枞菌可以烹饪成各种美食，如炒菜、炖汤、烤肉等。在烹饪前，建议先清洗干净，去除泥土和杂质。同时，确保烹饪透熟，以确保食材的安全和口感。尽管黑皮鸡枞菌具有一定的营养和药用价值，但对于食用野生菌类，特别是对于没有专业辨识能力的人来说，务必要注意食用安全。建议在购买和食用野生菌类时，选择可靠的来源，并咨询专业人士的建议。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 胞外多聚物鞘氨醇单胞菌的培养条件与打管说明！ 胞外多聚物鞘氨醇单胞菌是Sphingomonas属的微生物，原产地为中国。革兰氏阴性、无芽孢的直杆状。单极毛运动。接触酶阳性、菌落为黄色，但不是黄单胞菌素。专性需氧。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。  一、菌种简介平台编号：Bio-56544 规格：冻干物拉丁属名：Sphingomonas Sanxanigenens 中文名称：胞外多聚物鞘氨醇单胞菌拉丁名称：Sphingomonas sanxanigenens来源历史：←国内收集收藏时间：1998/11/13原始编号：NY981114资源归类编码：15131139103模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：菌体呈球状至杆状，单个、成对或呈短链状排列，革兰氏阴性。具体用途：生产黄原胶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0002培养基名称：营养肉汁琼脂培养基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，琼脂 15.0g，蒸馏水 1.0L，pH7.0。[注] 培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。培养温度：30℃需氧类型：好氧保存方法：真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；生产黄原胶。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。甘油请置于-80℃ 三、培养条件1、培养基编号：营养肉汤琼脂（Nutrient Agar）2、培养基成分： 蛋白胨 5.0 g牛肉浸粉 3.0 g NaCl 5.0 g 琼脂 15.0 g 蒸馏水 1000.0 mL pH 7.0培养芽胞杆菌时加入 5 mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽胞。以上成分 121℃，灭菌 15 min。液体培养基不添加琼脂。推荐使用成品培养基。3、需氧类型：好氧4、培养温度：30 ℃ 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、试管斜面菌种请尽快转接，不建议长期存放。3、初次使用时请按照本说明书推荐条件进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系或更换新的菌种。 五、打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉檫试冻干管表面进行消毒，将管顶端于酒精灯外焰上均匀加热；立即滴 2-3 滴无菌水于加热部位，使管壁破裂；再用镊子或其他适宜工具敲下破裂处。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取 0.5ml 左右液体培养基(固体培养基去掉琼脂即可)于冻干管中将冻干菌粉全部溶解。将溶解后的菌悬液转移至盛有 4~5mL 液体培养基的试管中混匀，可将残留在吸管中 1-2 滴菌悬液转接至固体培养基上。将液体试管和斜面试管于推荐条件下静置培养。以液体培养结果为准。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 2-8℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，需要转接至 2-3 代恢复活力。4、复苏后的菌种在传 1-2 代后使用。5、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。6、冻干管打开后需一次用完，不能留存。7、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。8、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。9、如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到后 2 个月内联系，逾期不予受理。10、甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   大鼠支气管上皮细胞的知识与应用及其培养操作！ 一、背景 大鼠支气管上皮细胞是构成大鼠呼吸道的重要组成部分，主要位于支气管内壁。这些细胞在维持呼吸道功能、防止病原体入侵以及参与气道免疫反应等方面发挥着关键作用。 在生物医学研究中，大鼠支气管上皮细胞被广泛用于模拟和研究人类支气管上皮细胞的生物学特性、功能以及疾病发生机制。这些细胞可以用于研究呼吸道感染、哮喘、慢性阻塞性肺疾病（COPD）等呼吸道疾病的发病机制和治疗方法。 为了获取大鼠支气管上皮细胞，研究人员通常需要通过特定的方法从大鼠的支气管组织中分离和培养这些细胞。培养过程需要特定的培养基和条件，以确保细胞的生长和活性。 在实验室环境中，大鼠支气管上皮细胞的培养和实验操作需要遵守严格的无菌操作和细胞培养规范，以确保细胞的纯度和实验结果的可靠性。 二、大鼠支气管上皮细胞培养操作 1)复苏大鼠支气管上皮细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)大鼠支气管上皮细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)大鼠支气管上皮细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 大鼠支气管上皮细胞可以用于PERK/eIF2α通路负调控内质网应激抵抗COPD气道上皮细胞凋亡的机制研究： 体外研究发现在PERK/eIF2a这条通路被敲除后,细胞对内质网应激所致凋亡敏感性增加,而增强PERK/eIF2a通路,细胞凋亡减少,证明上调PERK通路在ERS中具有对抗细胞凋亡的作用。基于目前在COPD发病中,PERK/eIF2a通路在内质网应激诱导的细胞凋亡中如何作用,其与CHOP、caspase关系尚不明确,拟以COPD大鼠及香烟烟雾提取物(CSE)干预大鼠支气管上皮细胞(HBE)为主要模型,探讨PERK通路相关信号分子、凋亡信号指标及之间关系,研究PERK通路的活化剂salubrinal在其中的作用,旨在证实PERK通路在COPD内质网应激诱导的细胞凋亡中具有重要作用,为临床治疗COPD提供新的理论基础和治疗靶点。 PERK/eIF2a通路在COPD大鼠支气管上皮细胞大鼠支气管肺组织中凋亡中的作用目的：观察PERK通路在COPD大鼠内质网应激所致支气管肺组织是否活化及salubrinal对香烟烟雾所致气道上皮细胞凋亡的影响。 方法：36只Wistar大鼠随机均分为3组：正常对照组、COPD模型组、COPD模型加药物组(简称干预组)。采用被动吸烟加气管内滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型,药物组在滴注脂多糖的同时气管内滴注salubrinal(1mg/kg)。造模完成后,测定各组大鼠的肺功能；观察肺组织病理学变化；大鼠支气管上皮细胞免疫组化检测p-PERK、p-eIF2a、caspase-12在支气管肺组织中的表达和分布；western blot检测p-PERK、p-eIF2α、active caspase-12和active caspase-3蛋白水平；TUNEL法检测支气管肺组织上皮细胞凋亡。 结果：模型组的各项肺功能指标较正常组均明显降低,但以salubrinal干预后大鼠各项肺功能指标较于模型组有明显升高。在模型组中内质网应激PERK通路的指标p-PERK、p-eIF2a较正常组相比增高,而干预组的p-eIF2a的表达水平最高；模型组的大鼠支气管上皮细胞凋亡指标active caspase-12和active caspase-3表达较正常组明显升高,干预组凋亡较模型组减少。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物培养与鉴定及药敏检测的相关术语有哪些？ 1、抗微生物药物敏感性试验  Antimicrobial susceptibility testing 检测微生物对抗微生物药物的体外敏感性，以指导临床合理选用药物的微生物学试验，简称药敏试验。 2、最低抑菌浓度  Minimal inhibitory concentration; MIC 在琼脂或肉汤稀释法药物敏感性检测试验中能抑制肉眼可见的微生物生长的最低抗菌药物浓度。 3、折点  Breakpoint 能预测临床治疗效果，用以判断敏感、中介、剂量依赖型敏感、耐药、非敏感的最低抑菌浓度（MIC）或者抑菌圈直径（mm）的数值。 4、敏感  Susceptible; S 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于敏感范围时，使用推荐剂量进行治疗，该药在感染部位通常达到的浓度可抑制被测菌的生长，临床治疗可能有效。 5、中介  Intermediate; I 当菌株的MIC值或抑菌圈直径处于中介时，该数值接近药物在血液和组织中达到的浓度，从而治疗反应率低于敏感菌群。该分类意味着采用高于常规剂量治疗时或在药物生理浓集的部位，临床治疗可能有效。该分类同样可作为“缓冲域”，以防止由微小、不可控的技术因素导致的重大偏差，尤其是毒性范围较窄的药物。 6、剂量依赖型敏感  Susceptible-dose dependent; SDD 细菌菌株对抗菌药物的敏感性依赖于抗菌药物的剂量。当某种药物对菌株的MIC或抑菌圈直径在SDD范围时，临床可通过提高剂量和（或）增加给药频率等修正给药方案以达到临床疗效。 7、耐药  Resistant; R 当抗菌药物对分离株的MIC值或抑菌圈直径处于该分类范围时，使用常规治疗方案，该药在感染部位所达到的药物浓度不能抑制细菌的生长，和（或）被测菌株获得特殊耐药机制，且治疗性研究显示该 药临床疗效不确切。 8、非敏感  Nonsusceptible; NS 对于那些因未现或罕现耐药，而仅具有敏感折点的抗菌药物，当该药对某分离株的MIC值高于或抑菌圈直径低于敏感折点时，此分类为非敏感。 9、流行病学界值  Epidemiological cutoff value; ECV 将微生物群体区分为有或无获得性耐药的MIC值或抑菌圈直径，是群体敏感性的上限。根据ECV，可将菌株分为野生型和非野生型。 10、野生型  Wild-type；WT 将抗菌药物评估中未获得耐药机制或无敏感性下降的菌株，定义为野生型。 11、非野生型  Non-wild-type；NWT 根据ECV值，将抗菌药物评估中获得了耐药机制或存在敏感性下降的菌株，定义为非野生型。 12、效价  Potency  抗菌药物中具有抗菌活性的成分，通过同类标准物质测定得出。单位mg/g、IU/g或用百分比表示。 13、基本一致性  Essential agreement；EA  待测MIC系统与参考方法MIC值相差不超过1个稀释倍数。当待评估方法为纸片扩散法时，不计算EA。 14、分类一致性  Categorical agreement；CA  被评估药敏方法与参考方法判断试验结果为敏感、中介、耐药的一致性。 15、极重大误差  Very major error；VME  将耐药误判为敏感，即假敏感。 16、重大误差  Major error，ME  将敏感误判为耐药，即假耐药。 17、小误差  Minor error  将中介判为敏感或耐药、或者将耐药或敏感判为中介。 18、常规药敏试验  Routine test  用于临床常规检测的纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法。 19、补充药敏试验  Supplemental test  通过常规纸片扩散法、肉汤或琼脂稀释法以外的方法检测某种或某类药物的敏感性或耐药性，且该方法无需额外试验确证药物的敏感性或耐药性。 20、筛选试验  Screening test  提供假定结果的试验。当筛查结果阳性时，需进行附加试验进行确认。 21、替代药物试验  Surrogate agent test  当目标抗菌药物的药敏无法检测或替代药物的药敏检测性能优于目标药物时，该药物可替代目标药物进行药敏试验。 22、等效药物试验  Equivalent agent test  某药可预测与其密切相关的同类药物的药敏结果，测定该药的药敏试验可减少其他相关药物的检测 数量以提高检测效率。 23、接种物浓度  Inoculum  接种于微生物检测系统的菌悬液中微生物的浓度，以每毫升菌落形成单位（colony-forming units per milliliter，CFU/mL）表示。 24、标准菌株  Reference strain  由菌种保藏机构保藏，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 25、准确度  Accuracy  测量值和真实值之间的一致性接近程度。用以描述准确鉴定同一待测菌的能力或准确确定同一待测微生物/抗微生物药物组合敏感性结果的能力。 26、精密度  Precision  在规定条件下，对同一或相似被测对象重复测量得到的测量示值或测得量值的一致程度。 27、可重复性  Repeatability  在一组测量条件下，包括相同检测程序、相同操作者、相同测量系统、相同操作条件和相同地点，短时间内对同一或相似被测对象重复测量的精密度。 28、再现性  Reproducibility  在包括了不同的地点、不同的操作者、不同的测量系统的测量条件下对同一或相似被测对象重复测量的精密度。 29、符合率  Agreement rate  采用不同方法对同一待测物定性检测结果的一致程度，也称一致率。 30、定量限  Limit of quantitative；LOQ  在规定的实验条件下，样品中待测组分能以规定的准确度（作为总误差或作为偏差和精密度的特定要求）被定量测定的最低量值。 31、检出限  Limit of detection；LOD  指某一分析方法在给定的可靠程度内可以从样品中检测待测物质的最小浓度或最小量。 32、专家系统  Expert system 提示非典型或异常药敏结果的抗微生物药物敏感性的分析软件。 33、即时检测  Point-of-care testing；POCT 亦称近患检验（Near-patient testing），在患者附近或其所在地进行的、其结果可能导致患者的 处置发生改变的检验。 34、临界值  Cut-off value  作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在的界限的数值或量值。 35、正确度  Trueness  多次重复检测所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。通常用“偏倚”表达，是对系统误差的衡量。 36、风险评估  Risk Assessment  是评估危害发生的概率和危害严重程度。风险评估应考虑到错误结果、结果延迟、结果缺失或治疗延误的风险。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                 标准菌的验收制备与保藏传代及使用销毁的管理！ 百欧博伟生物：本文介绍了微生物实验中使用的标准菌的验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁的管理规程。规定了质量管理部门实验用标准菌种的验收、制备、储管、使用、以及销毁等的相关规定。适用于微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物（效价）测定、评价防腐剂和抗菌剂的抑菌效果和确认灭菌效果、检验方法的验证、培养基的适用性检查，样品检验时的阳性对照等。 1、标准菌的来源 标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（China Medical culture collection ,CMCC）提供的冷冻干燥菌种（0代）或由上级药检部门已接种好的菌种斜面（3代）。黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC（B）代表细菌（bacteria）,CMCC(F)代表真菌（fungi）每种菌具有固定的代号。 2、标准菌的验收 从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。储存于2～ 8 ℃，有效期为3个月。 3、标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备 3.1物品及试剂：接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球 3.2培养基 改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮。 液体硫乙醇酸盐培养基:用于生孢梭菌复苏、复壮。 营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。 改良马丁培养基:用于白色念珠菌复苏、复壮。 3.3操作步骤： a.打开洁净工作台。 b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。 c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。 d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5～0.8 ml到安瓿中。 e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。 f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。 g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30～35℃，培养18～24小时；真菌培养温度23～28℃，培养3～5天。观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。 h.黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体1～2滴滴在改良马丁琼脂斜面上，用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7天，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色，斜面侧面无色，接近菌层培养基略带黄色。确认后用含有0.05%（ml/ml）的吐温-80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱到无菌试管中。 i.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。以无菌技术向复壮后的菌种中加入100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。每个菌种制备10支，按顺序进行编号，最后一支做为质控管进行质量控制，即进行相应的确认。其余作为储备管。黑曲霉的h项下洗脱液按h项下方法进行复壮，制成复壮后的孢子悬液20ml。以无菌技术向复壮后的菌种中加入20ml 、30%的无菌甘油混匀，1-2ml/管封存于冻存管。制备10支，按顺序进行编号，最后一支做为质控管进行质量控制，即进行相应的确认。其余作为储备管。将上述制备好的冻存管逐支粘贴标签。内容包括：菌种名称、菌种代号、编号、代次、制备日期、制备人、贮存条件、有效期至等。 j.储备菌种管制备成功，储存于－20℃，有效期为三年。 3.4菌种确认 用无菌接种环从质控管中取细菌培养物接种到营养琼脂培养基平板上，或相应的宜于该细菌生长的鉴别平板上，划线分离出单个菌落。然后在30～35℃下培养2～3天；同样的方法取真菌到玫瑰红钠琼脂培养基平板，并在23～28℃下培养7天；培养后，观察其菌落形态，应符合该菌种形态特征。 3.5污染处理 假如在该平板上发现有其他菌落生长，则说明或操作有污染或菌种不纯。将此被污染了的培养物灭菌处理。可寻找原因重新分离挑选纯菌落转接斜面菌种作为第四代。并重新制备储备菌种管 3.6菌种的传代与保藏 将菌种接种至一新鲜培养基上，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至新培养基内生长，即认为已传代一次，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代，冷冻干燥的原始菌种开启后转种后为第1代，直到第3代为工作菌种。菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代。 菌种的传代保藏过程  3.3项下标准菌的复苏为传第一代，复壮为第二代。 传第三代时取1支冻存管自然解冻，将其转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，工作用菌种为第3代。工作用菌种，分为两类：一类用于定期传代(W3)，一类用于实验用（S3）。 定期传代用菌的传代其操作步骤如下（斜面接种法）： （1）从冰箱冷藏室中取出菌种斜面后，应在室温放置约30分钟。 （2）将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明菌名及接种日期，和传代菌种一并移入洁净工作台，打开紫外灯照射一小时。 （3）关闭紫外灯。点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰上方，右手拿接种棒后端，将接种环烧红约30秒，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过三次。 （4）右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拔开管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷后再至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒并将菌种管口移至火焰上方。　 （5）塞上管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面（或改良马丁琼脂斜面）一支，照上述操作打开管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端，使细菌接种在斜面的表面上。 （6）取出接种环，在火焰上方将培养基管盖上塞子，然后将接种过细菌的接种环在火焰上烧灼灭菌。 （7）将已接种好的细菌管置30～35℃细菌培养箱培养22 ～24h，真菌管置23～28℃真菌培养箱最多培养7天。 当工作用菌种传代代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如：（W3）可直接转接为（W4）。按上述程序操作，直至（W4）转为（W5）为止，需重新接种，旧的工作菌种进行销毁。 菌种斜面的培养、保藏条件及时间 菌种            培养条件及时间      培养基             保存条件及时间大肠埃希菌(CMCC(B)44102)         30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)     30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501)       30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)       30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月乙型副伤寒沙门菌(CMCC(B)50094)   30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月生孢梭菌(CMCC(B)64941)           30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月白色念珠菌(CMCC(F)98001)         23～28℃ 最多7天    改良马丁琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月黑曲霉(CMCC(F)98003)             23～28℃ 最多7天    改良马丁琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月短小芽孢杆菌(CMCC(B)63602)       30～35℃22～ 24h    营养琼脂培养基     2℃～ 8 ℃保存3个月注：菌种斜面1次/周观察状态是否正常。 3.7菌种的使用及销毁 每次进行菌种复活时，只能复活一个菌种。如果要复活其他菌时，应对所用物品重新消毒灭菌。 每次操作，都应进行记录。菌种管上应贴有牢固的标签。标明菌种名称、菌种代号、代次、传代人、编号和传代日期、贮存条件、有效期至等。 废弃菌种及实验用品废弃物的处理：121℃ 高压蒸汽灭菌30分钟。并对操作过程进行记录。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物实验室超净工作台里有没有必要用酒精灯？ 百欧博伟生物：关于超净工作台里有没有必要用酒精灯，一直是许多科研者谈论的火热话题之一。 1、部分人认为超净工作台里不需要放置酒精灯，大致会有如下一些观点： 现在绝大多数细胞培养使用的试剂瓶子，都是塑料制品，经不起灼烧，短暂的过火达不到高温，肯定没有局部消毒的效果，更别说灭菌了； 超净台内的气流本来就应该是无菌的，酒精灯的热气流会干扰通风的流动，反而影响超净台本身的层流除菌除尘效果； 所谓酒精灯周围是无菌区，是在没有超净台的时候，灼烧能产生上升气流，防止灰尘落入瓶口，但有超净台的时候就没有必要； 在正常情况下，快速操作比在酒精灯附近无菌区磨蹭效果更佳； 使用酒精灯增加了火灾的隐患； 2、支持方理由如下： 无菌是分等级的，超净工作台一般可以达到局部百级，不是完全无菌无尘，且紫外线台内不能100%的消灭微生物。而酒精灯周围10cm处可以形成一个天然无菌区，是对局部无菌环境的更进一步保障。 酒精灯有上升气流，可以使其附近大约10cm处的范围内，没有灰尘落下，开启的瓶盖放置在此区域，就算是暴露状态下，也不用太担心灰尘掉落的问题。 培养的试剂，有时不是一次就用完的，需要放置在非无菌环境的冰箱里保存，这过程难免会导致瓶身、瓶口附近附着细菌、灰尘。尽管带入超净台内都会用酒精喷洒，但酒精仍然无法完全灭菌和除尘。其实细菌自己是不会跑的（跑得太慢了），所以细菌的移动不是随着气流，就随着液流，我们适当灼烧瓶口等有液流的地方，使其干燥，就产生了相当于“局部固定”细菌或灰尘的作用，就减少了它们随液流扩散的可能性。 很多单位超净工作台，并没有定期检查维护（达不到国外发达国家的条件），最多也就是定期更换滤网，但是否更换滤网之前，其除菌除尘效果已经早就不达标了也不得知，此时在关键操作环节置于酒精灯附近操作，是更有保障的。 超净台内的酒精灯是不会影响超净台的层流除菌除尘效果的，酒精灯局部的气流范围本身是无菌无尘的，那些看不见的被酒精灯“赶跑”的细菌灰尘，会进入附近超净台提供的层流里，被排出工作台外。 关于安全问题，酒精灯虽然是明火，正确使用下已经算是很安全的了。不要在酒精瓶身、手套沾有未干的酒精情况下去点灯；不要使酒精灯瓶内的酒精过多或过少；不要使酒精灯倾倒；不要加热易燃易爆炸物品。 3、小结，简单来说： 酒精灯提供了明火， 除了一些干燥、高温的独特作用外， 其周围大约10-15cm范围内， 可以形成一个无菌区域， 此范围下方的超净台面， 也不会有灰尘落下。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     变幻青霉的储存与培养及注意事项与打管说明！ 变幻青霉，菌落在CA上25℃培养12天，直径20-28mm，平坦或有少量放射状皱纹并具几道同心环纹；质地通常绒状或在中心面上兼有轻微絮状；分生础子结构少或大量产生，或仅在局部面上较多。主要用于教学，研究。 一、菌种简介平台编号：Bio-09756 规格：冻干物 拉丁属名：Penicillium Variabile 中文译名：变幻青霉拉丁学名：Penicillium variabile原始编号：12638菌株来源：←中国科学院微生物研究所保藏人：王龙直接来源国家：中国保藏时间：8/25/2005生物危害：四类模式菌株：非模式菌株培养温度：25℃培养基：0013    其他培养条件分离源：土壤采集地点：江苏省苏州市采集国家：中国提供形式：冻干物用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、储存条件冻干菌种和试管斜面请置于 2-8℃冷藏。  三、培养条件麦芽汁琼脂 I 培养基12 Brix. 麦芽汁 1.0 L 琼脂 15.0 g 自然 pH13 号培养或用下列培养基代替葡萄糖 1% 蛋白胨 1% 酵母提取物 0.5% 琼脂 2% 四、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 五、冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂（应避免过多水蒸气影响菌种的复苏），用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、用无菌吸管吸取 0.3ml（建议勿超过 0.5ml）适宜的液体培养基(不添加琼脂)，滴入管内，轻轻振荡，待安瓿管内的菌体溶解呈悬浮状，在用无菌吸管吸取全部菌悬液接在 1-2 支建议的培养基试管中（不超过 2 支，中国微生物菌种查询网提供的培养基配方中有琼脂，请务必做成试管斜面，配方中没有琼脂，试管中液体培养基不超过 5ml），并在建议的条件下静止培养。3、冻干管打开后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管内大部分是用牛奶做保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功。4、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。5、打管操作应在烧杯或托盘上方进行，用完冻干管应灭菌处理后丢弃。6、菌种复苏时，请务必记录好菌种的编号和制备批号，否则不予售后。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                      溜曲霉的主要特点与生存环境及分布范围！ 溜曲霉，菌落在查氏琼脂上25℃7天直径37- 55mm，10- 14天 50- 60mm；菌落在麦芽汁琼脂上25℃7天直径达65- 70mm；质地丝绒状，具不明显的沟纹；初为褐绿色，近于浅黄桔青色（Buffy Citrine，R. XIVI）至暗黄橄揽色（Saccardo' s Olive，R. XVI），老后变褐；有时中央部分有无色渗出液；菌落反面无色。 一、菌种简介平台编号：Bio-84685 规格：冻干粉 拉丁属名：Aspergillus Tamarii 中文名称：溜曲霉拉丁名称：Aspergillus tamarii来源历史：←山东扳倒井股份有限公司收藏时间：2017/5/23原始编号：M-14原产国：中国资源归类编码：15151913102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产特征特性：在CYA培养基上，25℃，培养7d ，菌落直径60-62mm，基部菌丝初为绿色，后变为褐色，质地丝绒状，表面纹饰，反面无色，厚度较厚；无渗出液产生，无可溶性色素产生；分生孢子头大，初球形，后变为稀疏的放射状，顶囊球形或近球形，产孢结构单层或双层，分生孢子球形，壁粗糙。具体用途：白酒酿造。产淀粉酶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0311培养基名称：察氏酵母培养基(CYA)培养基成分：酵母粉 5.0g，蔗糖 30.0g，NaNO3 3.0g，K2HPO4 1.0g，KCl 0.5g，MgSO4 7H2O 0.5g，FeSO4 7H2O 0.01g，琼脂15.0g，蒸馏水 1.0L。培养温度：25℃需氧类型：好氧分离基物：中高温大曲采集地：山东省淄博市高青县保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：白酒酿造。产淀粉酶。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、形态特征菌落在查氏琼脂上25℃7天直径37-55mm，10-14天50-60mm；质地丝绒状，中央部分稍现絮状，分生孢子结构多，初为暗黄绿色，近于老金色（OldGold，R.XVI）或橄榄色（OliveLake，R.XVI），后呈深棕褐色，近于板栗色（Chest一nut，R.II）或勋章青铜色（MedaIBronze，R.IV）；渗出液有或无；菌落反面无色至微褐色。分生孢子头球形至疏松辐射形，直径（150-）200-420μm；分生孢子梗大多生自基质，（280-）560-1600（-2100）μm×8．3-25μm，壁粗糙或近于光滑；顶囊近球形至烧瓶形，直径（18-）23-55（-65μm），大部表面可育；产孢结构双层：梗基（8-）10-14μm×（3-）4.8-5.4（-7.2）μm，瓶梗（5-）9.6-14.6μm×2.4-5.2（-6.4）μm，有时可见长形瓶梗19.5-25μm×3．2-5.2μm，中间具一隔壁，小顶囊上有时只具瓶梗；分生孢子较大，近球形（4.2-）5.2-7.3（-8.3）μm或椭圆至洋梨形，（5.3-）6-7.8（-9.6）μm×4.2-7.2μm，老后多呈球形或近球形，壁极粗糙，呈瘤状突起。菌落在查氏酵母膏琼脂上25℃7天直径55-60mm；质地丝绒状，具辐射状沟纹；颜色与查氏琼脂上者相似，近于老金色（OldGold，R，XVI）至浅黄桔青色（Buffycitrine，R.XLVI）；菌落反面无色。菌落在麦芽汁琼脂上25℃7天直径达65-70mm；质地丝绒状，具不明显的沟纹；初为褐绿色，近于浅黄桔青色（BuffyCitrine，R.XIVI）至暗黄橄揽色（Saccardo'sOlive，R.XVI），老后变褐；有时中央部分有无色渗出液；菌落反面无色。 三、生存环境土壤、塑料管、粪、霉腐物。37℃生长良好。 四、中国分布北京（MQ8679）；上海（MQ8027）；杭州（MQ5221）；福建厦门（MQ9969）、三明（MQ8906）；云南昆明（C4439）、大理（C5684）、瑞丽（C6832）、勐腊（C7056）；陕西富平（MQ4889）；地点不详（MQ298，MQ8475，AS3.3945） 五、世界分布巴哈马、加纳、印度、伊拉克、以色列、马来西亚、尼日利亚、巴布亚新几内亚、秘鲁、葡萄牙、坦桑尼亚、英国、美国等。 六、主要特点溜曲霉与黄曲霉和米曲霉显然相关，但根据颜色变成深棕色至板栗色以及分生孢子较大且具瘤状突起等特征，还是易于区分。Thom&Raper（l945）指出AspergilluserythrocephalusBerk．&Curt．1869（红头曲霉）可能是巨型的溜曲霉。Subramanian（1971）据此把溜曲霉降为A.erythrocephalus的异名，Domschefal．（1980）也按此处理Samson&seifert（1985）检查了A.erythrocephalus的模式标本，认为与溜曲霉具有相似之处，但前者的分生孢子为椭圆形具小刺；在形态上各部分都远比后者的为大，而且后者的分生孢子主要为球形并具明显的瘤状突起，因此二者不是同一个种，我们采纳这个观点。文献报道本种有的菌株能产生紫黑色的菌核。本种能产生曲酸但不产生黄曲霉毒素。  北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   伊氏副球菌的菌株培养与注意事项及保存方法！ 伊氏副球菌是Paracoccus属的微生物，原产地为中国。菌体球形或近球形，单个、成对或成簇排列，革兰氏阴性。主要用途为研究，具体用途为发酵普洱茶。 一、菌种简介平台编号：Bio-116116 规格：冻干物 拉丁属名：Paracoccus Yeei 中文名称：伊氏副球菌拉丁名称：Paracoccus yeei来源历史：←自行分离收藏时间：2017-12-20原始编号：G2-13原产国：中国资源归类编码：15131135102模式菌株：非模式菌株主要用途：研究特征特性：菌体球形或近球形，单个、成对或成簇排列，革兰氏阴性。具体用途：发酵普洱茶。生物危害程度：四类培养基编号：CM0847培养基名称：胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）(CAIQ0701)培养基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化钠 5.0g，琼脂 13.0 g，蒸馏水 1.0L，pH7.3±0.2。推荐使用商品化成品培养基。培养温度：28℃需氧类型：好氧分离基物：晒青毛茶采集地：云南勐海保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享提供形式：冻干物用途：发酵普洱茶 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶请置于-20°C 保存。甘油请置于-80 度。  四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 五、注意事项1) 首次活化，用尽量少的复水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养，如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2) 经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系；7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌种后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 六、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法；②砂土保存法；③硅胶保存法；④磁珠保存法；⑤麸皮保存法；⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。此外，也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右)：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃)：是适用范围*的微生物保存法。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     ATCC 49882 汉赛巴尔通氏体 百欧博伟生物 汉赛巴通体是猫抓病（cat scratch disease, CSD）的主要病原体。传染源主要为猫和狗，尤其是幼猫。 一、菌种简介平台编号：Bio-74284 规格：Freeze-Dried 拉丁属名：Bartonella Henselae 菌株名称：汉赛巴尔通氏体用途：ATCC原装进口 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Bartonella henselae (Regnery et al.) Brenner et al.拉丁名(ATCC? 49882?) 统一编号Deposited As Rochalimaea henselae Regnery et al.Strain Designations 菌株别名Houston-1 [CIP 103737, G5436]Isolation 分离基物 Human blood from an HIV-positive male Houston Texas, United StatesBiosafety Level 生物安全等级 2Biosafety classification is based on U.S. Public Health Service Guidelines, it is the responsibility of the customer to ensure that their facilities comply with biosafety regulations for their own country.Product Format 提供形式 freeze-driedStorage Conditions 保藏条件Frozen 冷冻物: -80℃ or colderFreeze-Dried 冻干物: 2℃ to 8℃Live Culture 活物: See Propagation SectionPreceptrol? noGenome Sequenced Strain Bartonella henselae strain Houston-1, complete genome.Type Strain 模式菌株 yesComments Genome sequencing strainMedium 培养基 ATCC? Medium 18: Trypticase Soy Agar/BrothATCC? Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep bloodGrowth Conditions 生长条件Temperature 培养温度: 37℃Atmosphere 需氧情况: 5% CO2Name of Depositor 寄存人 RL RegneryU.S. Patent Number 5,399,485Isolation 分离基物 Human blood from an HIV-positive male Houston Texas, United StatesReferences 参考文献 Validation list no. 42. Int. J. Syst. Bacteriol. 42: 511, 1992.Regnery RL, et al. Characterization of a novel Rochalimaea species, R. henselae sp. nov., isolated from blood of a febrile, human immunodeficiency virus-positive patient. J. Clin. Microbiol. 30: 265-274, 1992. PubMed: 1371515Brenner DJ, et al. Proposals to unify the genera Bartonella and Rochalimaea, with descriptions of Bartonella quintana comb. nov., Bartonella vinsonii comb. nov., Bartonella henselae comb. nov., and Bartonella elizabethae comb. nov., and to remove the family Bartonellaceae from the order Rickettsiales. Int. J. Syst. Bacteriol. 43: 777-786, 1993. PubMed: 8240958Dehio C, Meyer M. Maintenance of broad-host-range incompatibility group P and group Q plasmids and transposition of Tn5 in Bartonella henselae following conjugal plasmid transfer from Escherichia coli. J. Bacteriol. 179: 538-540, 1997. PubMed: 8990308Engbek K, et al. Immunopurified extracellular Bartonella henselae antigen for detecting specific antibodies by enzyme immunoassay. APMIS 105: 941-950, 1997. PubMed: 9463512Kordick DL, et al. Bartonella vinsonii subsp. berkhoffii subsp. nov., isolated from dogs; Bartonella vinsonii subsp. vinsonii; and emended description of Bartonella vinsonii. Int. J. Syst. Bacteriol. 46: 704-709, 1996. PubMed: 8782679Cross References Nucleotide (GenBank) : AX109520 Sequence 253 from Patent WO0123604.Nucleotide (GenBank) : AJ251257 Bartonella henselae partial 23S rRNA gene, strain ATCC 49882.Nucleotide (GenBank) : U78514 Bartonella henselae heat shock protein HSP60 (groEL) gene, complete cds.Nucleotide (GenBank) : BX897699 Bartonella henselae strain Houston-1, complete genome. 三、生物学性状汉赛巴通体形态多样，主要为杆状，大小为1×0.5mm左右。革兰染色阴性，姬姆萨染色呈蓝紫色，镀银染色呈棕黄色。 由临床新鲜标本中分离的汉赛巴通体有菌毛，而经实验室传代后可丧失。其生化反应不活泼，不发酵各种糖类。 四、致病性与免疫性1、感染途径传染源主要为猫和狗，尤其是幼猫。90%以上的患者与猫或狗有接触史，75%的病例有被猫或狗抓伤、咬伤的历史，猫口腔、咽部的病原体经伤口或通过其污染的毛皮、脚爪侵入而传播，多发于学龄前儿童及青少年。2、所致疾病由于国内外养宠物者增多，因此猫抓病病例增加。病原体从抓伤处进入体内，局部皮肤出现丘疹或脓疱，继而发展为以局部引流淋巴结肿大为特征的临床综合征，出现发热、厌食、肌痛、脾肿大等。常见的临床并发症是结膜炎伴耳前淋巴结肿大（Parinaud眼淋巴腺综合征），系猫抓病的重要特征之一。汉赛巴通体尚可引起免疫功能低下的患者杆菌性血管瘤—杆菌性紫癜（bacillary angiomatosis-bacillary peliosis, BAP），主要表现为皮肤损害和内脏器官小血管增生。BAP可见于HIV感染者、肿瘤或器官移植的病人，其杆菌性血管瘤可发生在体内任何实质性器官，而杆菌性紫癜则多见于肝脏、脾脏。 五、微生物学检查法实验室检查可取病灶组织（淋巴结、皮肤、肉芽肿等）作超薄切片，进行组织病理学检查。此外，还可用羊血琼脂或巧克力色琼脂等培养基，或采用原代细胞或传代细胞，对新鲜组织标本培养和鉴定。 六、防治原则对宠物定期检疫，杀灭感染动物。与猫、狗接触时避免被抓伤或咬伤，若被抓、咬伤后，可用碘酊局部消毒。可采用环丙沙星、红霉素、利福平等治疗感染猫或病人。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                   大毛霉菌的生物学特征与临床应用及实验室诊断！ 毛霉菌（mucor）又叫黑霉、长毛霉。毛霉菌是接合菌亚门接合菌纲毛霉目毛霉科真菌中的一个大属。以孢囊孢子和接合孢子繁殖。毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。 一、菌种简介平台编号：Bio-65781 提供形式：冻干物拉丁属名：Mucor Mucedo 中文名称：大毛霉属名：Mucor种名加词：mucedo来源历史：←黑龙江省轻工科学研究院（L33）收藏时间：2005.12.30原始编号：3438资源归类编码：15151319106模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：豆腐乳。特征特性：菌丛黄灰色，孢囊梗不分枝，孢子囊球形，孢子椭圆形。最适生长温度30-35℃。    生物危害程度：四类致病对象：无培养基：马铃薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，琼脂 15.0g，pH自然。[注] 马铃薯提取液：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1.0L煮沸30min，滤去马铃薯块，将滤液补足至1.0L。培养温度：28-32℃资源保藏类型：培养物保存方法：真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享源数据主键：40516用途：研究；生产；豆腐乳。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、生物学特征它的菌丝可分为直立菌丝和匍匐菌丝。营养菌丝上长出分枝或不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成孢子囊，有囊轴、囊领、无囊托，无匍匐枝、无假根，有性生殖产生接合孢子，接合孢子外无附属丝。毛霉是单细胞真菌，菌丝无隔膜，无性生殖时菌丝顶端膨大形成圆形柱、或犁头形的囊轴，围绕着囊轴形成孢子囊，孢子囊内有孢囊孢子。 三、临床应用毛霉的用途很广，常出现在酒药中，能糖化淀粉并能生成少量乙醇，产生蛋白酶，有分解大豆蛋白的能力，我国多用来做豆腐乳、豆豉。许多毛霉能产生草酸、乳酸、琥珀酸及甘油等，有的毛霉能产生脂肪酶、果胶酶、凝乳酶等。 四、相关疾病毛霉病是一种发病急、进展快、病死率极高的系统性条件致病性真菌感染。尤其是慢性消耗性疾病如糖尿病、白血病、长期应用化疗、皮质类固醇激素的患者。临床上常见的是眼眶及中枢神经系统的毛霉病。起初多发于鼻粘膜或鼻窦，继则眼眶软组织及脑，也可全身性播散，预后较为严重，常在病死后尸检才明确。该菌主要通过皮肤黏膜交界处、呼吸道、消化道、手术或插管及破损皮肤进入人体。可侵犯血管壁，引起血栓，组织坏死。器官移植患者和恶性肿瘤患者中的发病率约1%。依据临床表现分6种:鼻脑型(39%~75%)、肺型(24%)、播散型(23%)、皮肤型(19%)、胃肠型及单纯中枢神经系统型少见。 五、临床表现主要分为以下几点1、鼻脑型：毛霉菌从鼻腔，副鼻窦沿小血管到达脑部，引起血栓及坏死。鼻脑型70%存在糖尿病，而糖尿病患者中的毛霉菌病66%表现为该型。2、肺型：最常见的基础疾病史为血液系统恶性肿瘤和使用糖皮质激素。3、影像学：常表现为进行性、均质性肺叶或肺段的实变，双肺多发结节，很难与其他血管侵袭性真菌感染(如曲菌)鉴别。有以下特征更倾向于毛霉菌病的诊断:伴鼻窦炎、CT上超过10个肺结节、胸腔积液以及预防性使用伏立康唑。4、播散型：表现为两个或以上不相邻系统受累，脑为最常见的播散部位，常迅速致死。5、皮肤型：切口红肿不明显;坏死组织多，呈灰黄色或灰黑色，主要位于腹膜外和肌层并连成片状;皮下脂肪可见岛状坏死灶;病变进展迅速。6、胃肠道毛霉菌病，多见于回肠末端、盲肠及结肠、食道及胃亦可累及。 六、实验室诊断    1、确诊:真菌病原学和组织病理学。2、毛霉菌病的最终诊断依赖于病理发现并经培养证实，但培养的假阴性多。组织病理学或涂片常成为诊断的唯一证据。3、G试验、GM试验等在毛霉菌感染时均为阴性。4、分子生物学检测。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                     芽孢乳杆菌属的形态特征与菌株分类及鉴别方法！ 芽孢乳杆菌属，革兰氏染色呈阳性，以周生鞭毛运动。芽孢产生稀少，椭圆形，中生，膨大。兼性厌氧，但在大气中生长贫乏。糖类同型发酵产D-乳酸。不产接触酶和氧化酶。最适温度35℃，从鸡饲料和土壤中分离到，也可能广泛分布于环境中。 一、菌种简介平台编号：Bio-85244 规格：冻干粉 拉丁属名：Sporolactobacillus Pectinivorans 中文名称：芽孢乳杆菌属拉丁名称：Sporolactobacillus pectinivorans来源历史：←深圳市计量质量检测研究院收藏时间：2015-02-11原始编号：GD201205原产国：中国资源归类编码：15131314101模式菌株：模式菌株(新种)主要用途：研究特征特性：(G+C) mol%为48.7mol%生物危害程度：四类培养基编号：CM0446培养基名称：葡萄糖酵母蛋白胨培养基（Gyp glucose-yeast-peptone medium）培养基成分：葡萄糖 20.0g，酵母膏 10.0g，蛋白胨 10.0g，乙酸钠 10.0g，盐溶液 5.0ml，蒸馏水 1.0L，pH6.8。[注] 盐溶液配方：MgSO4 7H2O 40.0g，MnSO4 4H2O 2.0g，FeSO4 7H2O 2.0g，NaCl 2.0g，蒸馏水 1.0L。培养温度：37℃需氧类型：厌氧分离基物：果冻保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、芽孢杆菌属的特征芽孢杆菌属的特征：细胞直杆，有时弯曲，（0.4-1.0）um*（2.0-5.0）um，形成芽孢，芽孢内生呈卵圆形。单个、成对，偶见短链。兼性厌氧。发酵代谢，以典型的同型发酵途径分解己糖产生D-乳酸或DL-乳酸。接触酶阴性，无细胞色素。含有甲基萘醌，主要是MK-7。从葡萄糖、果糖和甘露糖产酸。DNA的G+C含量为摩尔分数38%-39.3%（模式种），43%-46%。该菌分离自鸡饲料、根际土壤、土壤和发酵引子等。模式种：菊糖芽孢乳杆菌 三、菊糖芽孢乳杆菌（Sporolactobacillus inulinus）细胞直杆或略弯，圆端较细长，常见成蝌蚪状细胞，尤其当培养基中省去（NH4）2SO4和CaCO3成分时。（0.7-0.8）um*（3-5）um，芽孢椭圆形，端生或次端生，孢囊随着芽孢的成熟而膨大，芽孢可耐热80℃10min，一般不耐90℃高温。在葡萄糖酵母膏蛋白胨（GYP）培养基上生长良好。GYP琼脂上生长的菌落呈针尖状；在半固体琼脂表面或培养基内菌落稍大。在深层琼脂中除表面外，小菌落均匀分布。在培养液中生长物混浊逐渐变成沉淀。从下列碳水化合物：果糖、葡萄糖、菊糖、麦芽糖、甘露糖、棉籽糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇和a-甲基葡糖苷产生D（-）乳酸，但不产气。不从阿拉伯塔、木糖、半乳糖、乳糖、蜜二糖、松三糖、纤维二糖、糊精、淀粉、甘油、赤藓醇、阿东糖醇、鼠李糖和水杨苷产酸。从葡萄糖酸盐产CO2和D（-）乳酸。pH极限值是4.0，然而当有CaCO3时，20%或更多的葡萄糖可被完全发酵。细胞壁的肽聚糖是内消旋-二氨基庚二酸直接类型。模式株：ATCC15538. 四、芽孢乳杆菌属的分类位置由于芽孢杆菌属具有乳杆菌属和芽孢杆菌属的特征，因此常议论到它的分类位置是在乳杆菌科还是在芽孢杆菌科，它的脂肪酸图谱和存在甲基萘醌表明它与芽孢杆菌属更接近。菊糖芽孢乳杆菌与好氧芽孢杆菌对比乳杆菌属更为密切的系统关系在近年获得的16SrRNA寡核苷酸的序列分析结果中已得到证明，然而由于芽孢乳杆菌缺乏血红素蛋白，接触酶和细胞色素都是阴性，而且FOX和Ash等依据16SrRNA序列的分析，菊糖芽孢乳杆菌在系统发育亲缘关系上仍有别于好氧芽孢杆菌属的所有种。 五、芽孢乳杆菌属现有的种及其鉴别特征Yanggida和Suzuki等从土壤和含有乙醇的饮料发酵引子中分离到一些菌株，它们具有芽孢乳杆菌的共同特征：革兰氏阳性，生成芽孢的杆菌（0.4-1.0）um*（2.0-4.0）um。通常运动；接触酶阴性，缺乏细胞色素；兼性厌氧。在含葡萄糖的培养基上生长良好；同型发醇产生D-乳酶或DL-乳酸；细胞脂肪酸是支链酸，细胞壁含有内消旋-二氨基庚二酸；主要含甲基萘醌MK-7。按这些菌株的不同特征Yanagida和Suzuki等将它们分为四个新种和2个亚种，命名为纳卡氏芽孢乳杆菌纳卡亚种和消旋亚种，土生芽孢乳杆菌、科夫芽孢乳杆菌、乳糖芽孢乳杆菌。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                小鼠肝动脉平滑肌细胞的实验室分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-73788 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 产品名称：小鼠肝动脉内皮细胞培养条件：原代细胞取组织现分组织来源：肝动脉组织产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介小鼠肝动脉内皮细胞分离自肝动脉组织；在胚胎期，肝脏有3条动脉供血，分别来源于胃左动脉、腹腔动脉和肠系膜上动脉，这3条动脉分别供应肝脏的不同部位。出生后，一般保留一条动脉，大部分为起源于腹腔动脉的动脉，由其分出左、右肝动脉供应左、右半肝。偶尔也可见起源于胃左动脉的动脉或起源于肠系膜上动脉的动脉。但也有2条动脉并存的情况，如起源于腹腔动脉和起源于胃左动脉(25%)，起源于腹腔动脉和起源于肠系腊上动脉(10%)，而起源于胃左动脉和起源于肠系膜上动脉的2条动脉同时存在的情况比较少见。此外，还有5%像胚胎期一样，3条动脉同时存在。这种起源于腹腔动脉以外的肝动脉称为迷走肝动脉，如果肝脏没有起源于腹腔动脉的动脉供血时，此种异位起源的肝动脉称替代动脉，如果在常见肝动脉类型外，还有一支这种异位起始的动脉供应肝脏的一部分血流，这种肝动脉称副肝动脉。肝动脉内皮细胞是衬于肝动脉内表面的单层扁平上皮，在炎症时高表达黏附分子，与血流中白细胞表面黏附分子相互作用，从而介导白细胞穿越血管壁，亦属一类非专职抗原提呈细胞。它们吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与集体免疫活动，包括：①血管收缩及血管舒张，从而控制血压；②凝血(血栓形成及纤维蛋白溶解)；③动脉硬化；④血管生成；⑤炎症及肿胀(浮肿)；⑥内皮细胞亦控制一些物质，如白血球进出血管。 三、方法简介实验室分离的小鼠肝动脉内皮细胞采用混合酶消化法结合差速贴壁法，并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测实验室分离的小鼠肝动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%） 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 内皮细胞样 传代特性 可传2-3代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 小鼠肝动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  DSM 1030伍氏醋酸杆菌的形态特征与分布范围！ 醋酸杆菌常存在于醋和醋的食品中。工业上可以利用醋酸杆菌酿醋、制做醋酸和葡萄糖酸等。 一、菌种简介平台编号：Bio-110698 规格：冻干粉/培养物 拉丁属名：Acetobacterium Woodii 菌株名称：伍氏醋酸杆菌用途：DSM原装进口注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、详细描述Name:Acetobacterium woodii Balch et al. 1977DSM No.:1030, Type strainStrain designation:WB1Other collection no. or WDCM no.:ATCC 29683, JCM 2381Isolated from:mudCountry:United States of America Massachusetts, Woods Hole, Oyster Pond InletDate of sampling:before 02.03.1977Nagoya Protocol Restrictions:There are NO known Nagoya Protocol restrictions for this strain.History:Genbank accession numbers:16S rRNA gene: X96954complete genome: CP002987Cultivation conditions:Medium 135 , anaerobic, 30°C Medium/media recipe(s) required for preparing 135:-  Medium 141 Please follow special instructions: 'Cultivation of Anaerobes'Complete DSMZ Media ListSummary and additional information:For detailed information:BacDive - The Bacterial Diversity MetadatabaseLiterature:1300, 1423, 1424, 1425, 4306Risk group:1 (classification according to German TRBA)Supplied as:Delivery form PricesPrice Category for this culture: 1Freight and handling charges will be added. See price list.Other cultures:All DSMZ cultures of the speciesPrint data sheet 三、形态特征细胞呈椭圆形杆状，革兰氏染色阳性，无芽孢，有鞭毛或无鞭毛，不产色素，液体培养形成菌膜。  四、生化特性化能异养型，能利用葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、酒精作为碳源，可利用蛋白质水解物、尿素、硫酸铵作为氮源，生长繁殖需要的无机元素有P、K、Mg。严格好氧，具有醇脱氢酶、醛脱氢酶等氧化酶类，因此除能氧化酒精生成醋酸外，还可氧化其他醇类和糖类生成相应的酸和酮。 最适生长温度30-35℃，不耐热。最适生长pH为3.5-6.5。某些菌株耐酒精和耐醋酸能力强。不耐食盐，因此醋酸发酵结束后，添加食盐除调节食醋风味外还可防止醋酸菌继续将醋酸氧化为CO2和H2O。  五、分布范围醋酸杆菌属在自然界分布较广，在发酵的粮食，腐败的水果、蔬菜和果汁、醋或酒精饮料中都有醋酸杆菌存在。纹膜醋酸杆菌常使葡萄酒和果汁变酸。  六、主要菌种（1）纹膜醋酸杆菌培养时液面形成乳白色、皱褶状的黏性菌膜。摇动时，液体变混。能产生葡萄糖酸，最高产醋酸量8.75%。生长温度范围4℃-42℃，最适生长温度30℃能耐14%-15%的酒精。 （2）奥尔兰醋酸杆菌它是纹膜醋酸杆菌的亚种，也是法国奥尔兰地区用葡萄酒生产食醋的菌种。能产生葡萄糖酸，产酸能力较弱，最高产醋酸量2.9%，耐酸能力强。生长温度范围7℃-39℃，最适生长温度30℃。 （3）许氏醋杆菌它是法国著名的速酿食醋菌种，也是酿醋工业重要的菌种之一。产酸能力强，最高产醋酸量达11.5%。对醋酸没有进一步的氧化作用，耐酸能力较弱。最适生长温度25℃-27.5℃，最高生长温度37℃。 （4）AS1.41醋酸杆菌它属于恶臭醋酸杆菌的混浊变种，是我国酿醋工业常用菌种之一。细胞杆状，常成链排列。固体培养菌落表面光滑，灰白色，液体培养液面形成菌膜并沿容器上升，液体不混浊。产醋酸量6%-8%，产葡萄糖酸能力弱，可将醋酸进一步氧化为CO2和H2O。最适生长温度28℃-30℃，最适生长pH3.5-6.5。耐酒精浓度8%。 （5）沪酿1.01醋酸杆菌它属于巴氏醋酸杆菌的亚种，是从丹东速酿醋中分离得到的，也是我国酿醋工业常用菌种之一。细胞杆状，常成链排列，液体培养时液面形成淡青色薄层菌膜。氧化酒精生成醋酸的转化率达93%-95%。  微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。

                 NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系的应用研究！ 一、背景 NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系于1988年6月建立，来源软组织转移灶。患者接受了早期放射治疗，是一位吸烟者。 二、NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞复苏、传代及冻存流程参考： 1、NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞复苏 1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）； 2）细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min； 3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）； 4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。 2、NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞传代 1）待细胞生长到80%-90%汇合度时，吸弃旧的培养基，加入1ml无菌PBS润洗一次，以去除残余的培养基及血清（血清含有胰酶的抑制因子），然后加入1ml 0.25%胰酶，37℃培养箱中消化（1~2min左右，不同细胞消化时间不同），取出细胞，镜下观察细胞至细胞皱缩变圆； 2）加入1ml完全培养基（含FBS）终止消化，轻轻拍打，使细胞脱落下来成单个细胞悬液，收集细胞于15ml无菌离心管中，1000rpm，离心5min； 3）收集细胞沉淀，完全培养基重悬，一分为二（可根据细胞生长速度调整比例），分别加入到2个新的培养瓶中，做好标记，放入培养箱中培养。 3、NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系细胞冻存 1）按照细胞传代方法，在超净工作台内消化收集细胞沉淀，取少量细胞用于计数； 2）用预冷的1ml冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）或者无血清细胞冻存液重悬细胞，加入到1.2ml冻存管中，密度为1*106个/ml。 3）放入程序冻存盒，-80℃过夜后，转入液氮长期保存。 三、应用 NCI-H1944人非小细胞肺癌贴壁细胞系可以用于mTOR激酶抑制剂PQR620抗非小细胞肺癌的机制研究： 在非小细胞肺癌(NSCLC)中,哺乳动物雷帕霉素靶标(m TOR)异常激活促进了肿瘤的发生发展。PQR620是一种新型高效的m TOR激酶抑制剂。 在这里测试了它在NSCLC细胞中的潜在活性。在原代人类NSCLC细胞和已建立的细胞系(A549和NCI-H1944)中,PQR620抑制细胞生长、增殖和细胞周期进程,以及细胞迁移和侵袭,同时显著诱导细胞凋亡。PQR620破坏了m TOR复合物1(m TOR-Raptor)和m TOR复合物2(m TOR-Rictor-Sin1)的组装,并阻断了NSCLC细胞中的Akt、S6K1和S6磷酸化。过表达持续性激活的Akt1(S473D)激活Akt-m TOR信号通路仅部分抑制PQR620诱导的NSCLC细胞的细胞毒性。 PQR620在Akt1/2沉默的NSCLC细胞中仍然具有细胞毒性,这表明PQR620并不完全依赖Akt-m TOR信号发挥抑制NSCLC进展的功能。 事实上,PQR620在原发性NSCLC细胞中诱导鞘氨醇激酶1(Sph K1)抑制、神经酰胺产生和氧化应激。体内研究表明,每天口服单剂PQR620可有效抑制严重联合免疫缺陷小鼠的原发性NSCLC异种移植物生长。在PQR620处理的裸鼠移植瘤中,检测到Akt-m TOR失活、凋亡诱导、Sph K1抑制和氧化应激。 总之,PQR620通过m TOR依赖性和非依赖性机制发挥有效的抗NSCLC细胞活性。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 单核细胞增生李斯特菌染料法荧光定量PCR试剂盒！ 一、产品特点1、即开即用，用户只需要提供病毒样品。2、根据单核细胞增生李斯特菌保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。3、灵敏度可以达到几百拷贝/反应。4、一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。5、本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。6、本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。 二、使用方法（一）样品采集：1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。（二）稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）1、注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。2、标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。3、用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。4、在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5、换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。6、换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。7、重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。（三）DNA提取：可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议最后在样品制备区域加入阳性对照。 三、检测步骤设置qPCR反应（20μL体系，在样品制备室进行）如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。 四、结果分析1、结果分析条件设定直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。2、试验成立判定1）阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。 2）阳性对照(ESKZ -PTC)：均产生扩增曲线，且Ct值≤35。3）以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。3、结果判定1）在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明阪崎肠杆菌核酸阳性。2）Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明阪崎肠杆菌核酸阴性。3）如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。4）对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行阪崎肠杆菌real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明阪崎肠杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。 五、注意事项1）初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。2）所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。3）PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。4）样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。5）试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   代谢产物具有抗菌活性的：纯白链霉菌粉白变种 纯白链霉菌粉白变种，孢子丝直。孢子卵圆形。主要用于代谢产物具有抗菌活性。 一、菌种简介平台编号：Bio-17474 提供形式：斜面培养物英文名称：Streptomyces candidus var. alboroseus中文名称：纯白链霉菌粉白变种属名：Streptomyces种名加词：candidus var. alboroseus来源历史：←湖北省生物农药工程研究中心收藏时间：2006-9-10原始编号：HBERC 00351，Wa-05699原产国：中国资源归类编码：15131517101模式菌株：非模式菌株主要用途：a:1:{i:0;s:4:研究;}特征特性：在高氏一号培养基上，菌丝生长尚可。基丝无色至乳白色，直径约0.5-0.7µm，无隔不断裂；气丝近白色，直径约0.6-0.8µm；孢子丝波曲，孢子卵圆形，大小0.7-0.8µm。在所试培养基上均不产生水溶性色素。明胶液化，牛奶凝固且胨化，淀粉水解，不产硫化氢，不产黑色素，产淡红棕色素，不还原硝酸盐，纤维素上不生长。利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、鼠李糖、肌醇、D-甘露醇。具体用途：代谢产物具有抗菌活性。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：土壤采集地：河南伏牛山培养基编号1：0027资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:2:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:14:真空冷冻干燥法;}共享方式：a:4:{i:0;s:16:资源纯交易性共享;i:1;s:12:合作研究共享;i:2;s:18:知识产权性交易共享;i:3;s:14:资源交换性共享;}用途：代谢产物具有抗菌活性。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株属性高氏合成1号琼脂：气丝粉白色，绒状，基丝无色或略微黄色。无可溶色素。 高氏有机2号琼脂：气丝无或出现迟晚，微白色层。基丝无色。无可溶色素。 马铃薯块：气丝白色变微粉色。基丝好。基质不染。 明胶不液化，无色素。牛奶先凝固，后胨化，黄色或黄褐色素。淀粉水解快。纤维素上不生长。硝酸盐还原(随株而异)。 轻度抑制金黄色葡萄球菌、霉状杆菌。 三、培养条件1、营养肉汁琼脂：牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.0。[注]培养芽孢杆菌时加入5mg MnSO4·H2O，则有利于产生芽孢。pH7.0。121℃，15min。2、需氧类型：好氧3、培养温度：55℃ 四、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在 上延续使用半年左右。6、如果有些菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，酿酒酵母菌组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   小鼠膀胱癌细胞的特点与应用及培养操作规程！ 一、背景 小鼠膀胱癌细胞是指在小鼠体内培育出的膀胱癌细胞系。这些细胞系通常来自于小鼠的膀胱组织，经过一系列的实验室操作，如分离、培养和传代，最终形成稳定的细胞系。 二、小鼠膀胱癌细胞系具有以下特点 形态特征：小鼠膀胱癌细胞通常呈多角形或长条形，大小不一，有明显的核仁和胞质。 生长特性：小鼠膀胱癌细胞具有较强的增殖能力，可以在体外持续传代，并且可以在体内形成肿瘤。 基因表达：小鼠膀胱癌细胞系通常表达多种与膀胱癌相关的基因，如VEGF、EGFR等。 小鼠膀胱癌细胞系在生物学研究中具有广泛的应用价值，例如用于研究肿瘤发生和发展的机制、筛选抗肿瘤药物、评估治疗效果等。同时，由于小鼠与人类在生理和病理方面存在一定的相似性，因此小鼠膀胱癌细胞系也被广泛应用于人类肿瘤的研究中。 三、小鼠膀胱癌细胞培养操作 1)复苏小鼠膀胱癌细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠膀胱癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)小鼠膀胱癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 四、应用 小鼠膀胱癌细胞可以用于猪苓多糖通过诱导自噬抗膀胱癌研究： 研究均一猪苓多糖(homogeneous polyporus polysaccharide,HPP)对膀胱癌细胞自噬的影响,探讨HPP通过调节自噬抗膀胱癌的作用机制,为膀胱癌治疗提供实验数据。 方法：建立BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,成瘤后将小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照吉西他滨(Gemcitabine,Gem)组、HPP低/中/高剂量组,分别给予对应药物腹腔注射。给药期间,每天观察小鼠生命体征等情况,每隔一天称体重,并用游标卡尺测量肿瘤最大径(a)及最小径(b),计算肿瘤体积。给药结束后,取小鼠肿瘤拍照、称重。并采用Western blot检测肿瘤组织中自噬及其相关蛋白Beclin1及p62的表达。 建立模拟体外肿瘤微环境的RAW264.7与小鼠膀胱癌细胞(小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞))共培养模型,将其分为对照组及HPP低、中、高剂量组。共培养24h后,采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)实验检测HPP对小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)增殖能力的影响。 采用单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)荧光染色实验检测细胞质中自噬体的形成,并采用Western blot检测自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62、LC3BⅡ的表达。再采用Western blot检测自噬上游信号通路PI3K/Akt/mTOR蛋白的表达。然后,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA),检测细胞质中自噬体形成的变化、自噬标志蛋白LC3BⅡ表达的变化,及小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)增殖能力的变化。 采用Western blot检测小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)在单独培养与共培养细胞模型中自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62的表达情况,并检测HPP单独作用对小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62表达的影响。 结果：体内实验结果： 1、与阴性对照组相比,Gem组小鼠体重明显下降(P0.05)。 2、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠体重均呈增加的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与Gem组相比,HPP各浓度组小鼠体重显著增加(P 3、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠肿瘤体积无明显变化(P>0.05),肿瘤重量呈下降趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。 4、与阴性对照组相比,HPP各浓度组小鼠肿瘤组织中Beclin1蛋白表达升高(P 体外实验结果： 1、在共培养细胞模型中,与对照组相比,HPP能抑制小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)的增殖能力(P 2、与单独培养相比,小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)在共培养细胞模型中自噬相关蛋白SirT1、Beclin1、p62的表达无明显变化(P>0.05)。 3、与空白组相比,HPP单独处理后,小鼠膀胱癌细胞(MB49细胞)中SirT1、p62蛋白的表达无明显变化(P>0.05),Beclin1蛋白的表达呈上升趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   微生物基本知识分享：真细菌的形态和大小！ 一、形态 细菌的基本形态有三种：即球状,杆状和螺旋状,分别称为球菌、杆菌和螺旋菌。 (一)球菌(voccus) 细胞呈球形或椭圆形,它们分裂后常呈一定的空间排列形式,这些排列形式在分类学上有一定的意义: 1、单球菌 如尿微球菌（Micrococcus ureae） 2、双球菌 如肺炎双球菌(Diplococcus preumoniae) 3、链球菌 如乳酸链球菌(Streptococcus lactis) 4、四链球菌:细胞沿两个相互垂直的平面进行分裂，分裂后四个细胞连在一起。如四联微球菌〔Micrococus tetregenus) 5、八叠球菌:细胞沿着三个互相垂直的方向进行分裂,分裂后八个细胞叠在一起呈立方形。如尿素八叠球菌(Sarcina ureae)。 6、葡萄球菌:细胞无定向分裂,分裂后细胞如一串葡萄连在一起。 如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。 (二)杆菌(rod) 杆菌的细胞呈杆状或圆柱状。有的粗短、有的细长,短的近似球状,长的近丝状, 杆菌两端有的平截,有的略尖,有的半圆。杆菌在分裂过程中有的呈链状排列,有的呈栅状,有的呈八字形排列。杆菌是细菌中种类最多的一群细菌,生产中所应用的细菌也大多是杆菌。 (三)螺旋菌(spiral-shaped bacteria) 菌体呈螺旋状的原核生物有螺旋菌和螺旋体之分。前者以鞭毛运动, 后者以细胞表面的轴丝伸缩运动。螺旋菌中又根据螺旋的数目分为螺旋菌与弧菌。菌体弯曲不足一圈的叫弧菌如霍乱弧菌(Vibrio cholerae),菌体弯曲一圈以上的叫螺旋菌, 这两菌的差别在于前者一端生丛生鞭毛,后者两端都生鞭毛。 (四)特殊形态 上面所说的球状,杆状和螺旋状是细菌的三种基本形态,除这以外, 还有些细菌的形态比较特殊。 1、有些细菌的单细胞连结成丝状的群体,外面由鞘套包围，例如浮游球衣菌(Sphaerotilusnatans); 2、有的细菌菌体分叉,如双歧杆菌属(Bificlobacterium)。 3、有的细菌菌体未端有柄如柄杆菌属(Caulobacter)。 4、有的细菌的菌体有附属物如臂微菌属(Ancalomicrobium)。 (五)不良环境条件下的异常形态 当环境条件不适合某细菌生长时,  会导致细菌产生异常形态,例如巴氏醋杆菌(Acetobacter pasteurium)当培养温度改变时,菌体会由短杆状变为纺锤状,丝状或链锁状。但这种因环境条件不适而产生的异常菌体当环境条件恢复正常时菌体也会恢复正常的形态。  二、大小 细菌的大小用微米(μm)来表示,1μm=10－3mm。 球菌：通常在0.5-1μm; 杆菌：0.5-1×1-5μm; 螺旋菌：0.3-1μm×1-50μm; 最小的细菌：芬兰科学家最近发现了一种引起尿结石的纳米细菌(nanobacteria)其直径只有50nm，比最大的病毒还小。 最大的细菌：德国科学家在纳米比亚海底沉积物中发现了一种硫细菌,其大小在0.1-0.3mm,有些可达0.75mm。 杆菌和螺旋菌大小的表示通常用宽×长来表示。细菌的大小受培养时间的影响,通常幼龄菌体比老菌体要大,同时也受测定方法的影响,测活菌的大小要比测染色涂片的大小大1/3-1/4。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                     微生物实验室洁净级别的选择依据与要求！ 百欧博伟生物：微生物实验室的洁净级别是衡量其性能的重要指标之一，不同洁净级别的实验室适用于不同类型的微生物实验和研究。今天小编就带大家了解相关知识。 一、微生物实验室洁净级别的选择依据 1、人员安全： 在选择微生物实验室的洁净级别时，需要考虑人员安全因素，选择符合安全要求的洁净级别。 2、预算和资源： 不同洁净级别的微生物实验室建设和运行成本不同，需要根据预算和资源情况来选择合适的洁净级别。 3、实验要求： 不同实验对空气中的尘埃、细菌、病毒等微生物污染控制要求不同，根据实际需求选择相应洁净级别的微生物实验室。 4、实验类型： 不同类型微生物实验所需的洁净级别不同，高洁净度实验需要选择百级或千级实验室，而一般性微生物检测和鉴定等较低洁净度实验可以选择万级或十万级实验室。 二、微生物实验室洁净级别的要求 1、建筑结构： 洁净级别的微生物实验室的建筑结构应具有良好的气密性和隔音性能，能够有效地防止室外空气污染和噪音干扰。 2、洁净工作台或无菌操作间： 为了进行高洁净度的实验操作，微生物实验室需要配置相应的洁净工作台或无菌操作间，以确保实验操作环境的洁净度。 3、空气净化系统： 为了达到相应的洁净级别，微生物实验室需要配置高效的空气净化系统，包括空气过滤器、空气循环装置等，不断过滤和净化室内空气。 4、消毒和灭菌设备： 微生物实验室需要配置相应的消毒和灭菌设备，如紫外线灯、臭氧发生器、高压蒸汽灭菌器等，以对实验室内环境和实验器具进行消毒和灭菌。 5、实验操作规范： 为了确保微生物实验的成功进行和实验结果的准确性和可靠性，实验人员需要遵守相应的实验操作规范，包括实验前的准备、实验操作流程、实验后的清理和消毒等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    EL4（小鼠淋巴瘤细胞）的培养操作及应用！ 一、背景 EL4是一种来源于小鼠的淋巴瘤细胞系，常被用作生物医学研究的模型系统。这种细胞系具有特定的生物学特性和广泛的应用价值，尤其在免疫学、肿瘤学和药物筛选等领域中备受关注。 EL4细胞系具有快速增殖和易于培养的特点，这使得它成为研究淋巴细胞生物学行为的理想模型。此外，EL4细胞系还具有一些特定的基因表达模式和信号转导通路，这使得它成为研究肿瘤发生和发展机制的重要工具。 在免疫学研究中，EL4细胞系常被用作T细胞淋巴瘤的模型，用于研究T细胞的增殖、分化和凋亡等生物学过程。同时，EL4细胞系也可用于研究肿瘤免疫逃逸机制，以及免疫疗法对肿瘤细胞的杀伤作用。 在药物筛选方面，EL4细胞系具有对多种化疗药物的敏感性，因此常被用作药物筛选的模型。通过研究药物对EL4细胞系的杀伤作用，可以评估药物的抗肿瘤活性，为临床用药提供参考。 二、EL4细胞系培养操作 1)复苏EL4细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)EL4细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)EL4细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 EL4可以用于S1P信号通路影响肥胖合并淋巴瘤侵袭性生长机制研究： 为肥胖合并淋巴瘤患者这一特殊患者群体,通过改善脂代谢提高预后提供理论依据。 方法： 1、在人标本实验中:对人NHL微组织阵列样本进行S1P水平免疫组化染色;对于常见亚型非霍奇金淋巴瘤,使用GEO数据库研究用于S1P生物合成的两种鞘氨醇激酶(SPHK1和SPHK2)的基因表达。进一步证实非霍奇金淋巴瘤存在鞘脂代谢异常。 2、构建肥胖小鼠模型:出生6周C57BL/6J小鼠,西方高脂肪饮食(western style high fat diet,WSHFD,35%w/w脂肪和26%w/w果糖通)及其对照饮食喂养16周,构建肥胖脂代谢异常小鼠模型。(1)对小鼠进行体重、脂肪重量测定、用ELISA测定血清甘油三酯水平,验证脂质代谢异常小鼠模型建模成功;(2)应用western blot对小鼠脂肪组织进行脂肪酸分解酶p HSL、HSL检测;应用免疫组化对脂肪组织中IRS,MPO进行检测;探讨肥胖对脂代谢异常及炎症反应两方面影响； 3、在脂代谢异常小鼠背景下,皮下种植小鼠EL4细胞(T细胞淋巴瘤),建立淋巴瘤模型。分为EL4-CD、EL4-WSHFD两组,监测21天内小鼠体重、肿瘤大小变;21天后处死小鼠,评估肿瘤重量,依据病理仿照临床Ann-Arbor分期评估累及范围;通过western blot检测两组c-MYC,CCND1,E-cadherin,Vimentin;ELISA测定两组血清及淋巴瘤组织甘油三酯水平;探讨脂代谢异常对淋巴瘤增殖及EMT的影响。 4、EL4-CD、EL4-WSHFD两组小鼠通过RT-PCR检测脂质代谢通路及S1P通路代谢酶,通过western blot,免疫组化检测两组p SPHK1/SPHK1,S1PR1,S1PR3蛋白质表达水平;探讨脂代谢异常对淋巴瘤FA的外源性摄取及内源性合成的影响及对S1P通路影响。 5、应用细胞实验探索S1P对淋巴瘤增殖及EMT的机制:测定人HH、SUDHL-4淋巴瘤细胞系S1PR表达,空白对照、S1P、S1PR抑制剂处理人HH、SU-DHL-4淋巴瘤细胞系,通过XTT方法测定增殖,transwell评估细胞迁移,western blot测定S1P-S1PR下游YAP信号转导通路。 6、探索S1P对肿瘤微环境巨噬细胞的影响:动物实验:构建脂代谢异常EL4淋巴瘤小鼠模型腹水淋巴瘤瘤模型;通过免疫荧光及流式细胞学检测淋巴瘤微环境中骨髓衍生抑制细胞(MDSCs)CD11b+Ly6Chi及肿瘤相关巨噬细胞F4/80+CD206+表达;CD4+、CD8+T细胞比例； 7、通过细胞实验探索S1P诱导巨噬细胞极化机制:探索巨噬细胞ALOX15表达实验:通过免疫组化探索脂代谢异常EL4小鼠淋巴瘤ALOX15表达;并用人单核细胞THP定向刺激分化成M1、M2,S1P验证ALOX15在M1、M2中表达情况;WT小鼠及Alox15-/-小鼠经CD和WSHFD喂养后,构建小鼠腹腔淋巴瘤模型,流式细胞术检测腹腔积液CD11b+Ly6Chi及肿瘤相关巨噬细胞F4/80+CD206+表达;8.构建脂代谢异常EL4淋巴瘤小鼠模型,给予白藜芦醇和PDL1抑制剂治疗,探索白藜芦醇通过改善S1P代谢,对淋巴瘤增殖的抑制作用及对PDL1的协同作用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                       猪B淋巴细胞收到后的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-53586 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：猪B淋巴细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述B淋巴细胞的祖细胞存在于胎肝的造血细胞岛中，此后B淋巴细胞的产生和分化场所逐渐被骨髓所代替。成熟的B细胞主要定居于淋巴结皮质浅层的淋巴小结和脾脏的红髓和白髓的淋巴小结内。B细胞在抗原刺激下可分化为浆细胞，浆细胞可合成和分泌抗体（免疫球蛋白），主要执行机体的体液免疫。B细胞在骨髓内分化各阶段的主要变化为免疫球蛋白基因的重排和膜表面标志的表达。B细胞在发育分化过程中，同样也经历选择作用，以除去非功能性基因重排B细胞和自身反应性B细胞，形成周围成熟的B细胞库。B细胞表面有多种膜表面分子，识别抗原、与免疫细胞和免疫分子相互作用，也是分离和鉴别B细胞的重要依据。B细胞表面分子主要有白细胞分化抗原、MHC以及多种膜表面受体。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常外周血组织。2)细胞鉴定：CD19免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：悬浮培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输。收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过 85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 七、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 3）细胞冻存：1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    微生物菌种冷冻干燥保藏法的操作流程与步骤！ 1、目的 1.1理解冷冻干燥保藏菌种的原理 1.2掌握冷冻干燥保藏菌种的方法 2、原理 冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。 3、材料 3.1菌株  待保藏的各种菌种。 3.2试剂 2% HCl；牛奶。 3.3器具   安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。 4、流程 备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化 5、步骤 5.1准备安瓿管 安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安培管内，管口塞上棉花，灭菌备用。 5.2制备脱脂乳 用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。 5.3制菌悬液 将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。 5.4分装 用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装量约为0.9毫升。(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3) 5.5预冻 将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东。 5.6真空干燥 预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。 5.7封管 封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。 5.8保藏 做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。 5.9活化 如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。在用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。 6、结果  6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理。 6.2记录大肠杆菌斜面作液体石蜡封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要点。 7、思考 7.1菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？ 7.2经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？ 7.3沙土管法适合保藏那一类微生物？ 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    大鼠膀胱基质成纤维细胞的运输和保存及使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-132324 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞名称：大鼠膀胱基质成纤维细胞用途：原代细胞 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱是一个储尿器官。它是一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱基质成纤维细胞作为膀胱上皮细胞的支持细胞，起着十分重要的作用。体外培养膀胱基质成纤维细胞不仅为组织工程膀胱，尿道提供种植细胞的必要手段，也是研究膀胱纤维化的基础与前提。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常膀胱组织。2)细胞鉴定：波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：长梭形细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。4、静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细胞汇合度 80%左右时正常传代。5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。7、该细胞仅供科研使用。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      RIN-m5F细胞系的知识与应用及培养操作！ 一、背景 RIN-m5F是一种来源于大鼠的胰岛β细胞瘤细胞系。这些细胞是通过大剂量放射线照射近交系NEDH大鼠，再经过裸鼠维持肿瘤后得到的。RIN-m5F细胞系具有分泌胰岛素及L型多巴脱羧酶的特性，但不产生生长激素抑制激素。因此，它们常被用于胰岛细胞信号转导和胰岛肿瘤相关的研究。 在研究中，RIN-m5F细胞系常被用作体外模型来模拟胰岛β细胞的功能和行为。例如，它们可以用于研究胰岛素的分泌、合成和代谢等生物学过程，以及胰岛β细胞在糖尿病等疾病中的变化。此外，RIN-m5F细胞系也可以用于药物筛选和毒理学研究，以评估药物对胰岛β细胞的影响和潜在毒性。 然而，需要注意的是，虽然RIN-m5F细胞系具有一定的代表性，但并不能完全模拟真实的人体环境。因此，在将实验结果应用于临床之前，仍需要进行更多的实验验证和临床研究。 此外，有研究表明，金丝桃素的光动力学效应可以显著地抑制RIN-m5F细胞的增殖，这为开发新的抗肿瘤药物提供了思路。同时，RIN-m5F细胞系也被用于软琼脂克隆形成实验，以研究化合物对细胞活力的影响。 二、RIN-m5F细胞系培养操作 1)复苏RIN-m5F细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)RIN-m5F细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)RIN-m5F细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 RIN-m5F可以用于γ-氨基丁酸对RIN-m5f细胞的保护作用及机制探究： 研究拟建立高糖（G）和H2O2氧化损伤RIN-m5f细胞模型，以探讨GABA对胰岛β细胞抗氧化调节作用及其作用机制。 方法：分别采用11mM、22mM、44mM G孵育RIN-m5f细胞48h，以及10μM、50μM、100μM H2O2孵育1h建立体外氧化损伤细胞模型。GABA干预实验分为：对照组（11mM G）、损伤组（G/H2O2）、GABA组（G/H2O2+GABA）、硫辛酸组（G/H2O2+LA）。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS水平；检测细胞氧化还原状态指标和胰岛素分泌水平；MTT法测定细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡线粒体膜电位；RT-PCR法检测与抗氧化、抗凋亡和胰岛素分泌相关基因mRNA表达水平；Western blot法检测Nrf2和GSK-3β蛋白水平、p-GSK-3β（Ser9）和p-GSK-3β（Tyr216）磷酸化水平。 结果：随着G和H2O2浓度的增加，胞内ROS和MDA水平显著提高（P0.05）。 结论：GABA可显著增强氧化损伤（G和H2O2）RIN-m5f细胞抗氧化能力，提高细胞存活率和胰岛素合成分泌，具有抗凋亡作用；GABA可调节胞内GSK-3β/Nrf2通路相关基因mRNA表达水平，显著提高Nrf2核质比例，增强细胞抗氧化能力，其作用机制可能与提高p-GSK-3β(Ser9)磷酸化水平、降低GSK-3β蛋白水平有关；GABA抗氧化调节作用具有浓度依赖效应，即随着氧化损伤程度的增加，GABA需要量增加。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  微生物学的基础性工作：微生物的分类和鉴定！ 百欧博伟生物：微生物的分类和鉴定是微生物学的基础性工作。微生物分类是在对大量单个微生物进行观察、分析和描述的基础上，以它们的形态、结构、生理生化反应和遗传性等特征的异同为依据，并根据生物进化的规律和应用方便，将微生物分门别类地排列成一个系统。目前微生物分类鉴定方法分为以下几个方面。 1、形态特征 ①个体特征，包括在显微镜下的细胞大小、形状、排列、运动性、鞭毛着生部位和数目、芽孢有无、部位和形状、有无荚膜，放线菌和真菌繁殖器官的形状、构造、孢子数目、形状、大小、颜色和表面特征等。 ②群体特征即培养特征，菌落是菌株在一定的培养基中的群体特征。包括固体培养基上菌落的形状、大小、颜色、光泽、黏稠度、隆起情况、透明度及边缘特征，是否分泌水溶性色素、质地、移动性和气味；半固体培养基上穿刺接种后的生长及运动情况；液体培养基中培养液混浊程度，表面有无菌膜，有无沉淀及其沉淀的形态，有无气泡产生，培养液的色泽变化等。 2、生理和生化特征 ①营养来源 可以试验多种糖能否被微生物作为碳源和能源利用，以及微生物对特定有机化合物和CO2的利用能力。对于氮源，看其是利用蛋白质、蛋白胨、氨基酸或铵盐、硝酸盐中的氮，还是大气中的游离氮。 ②代谢产物 例如在培养基中检测微生物有否形成有机酸、有否产生气体，能否分解色氨酸产生吲哚，能否使硝酸盐还原硝酸盐或氮，能否产生色素或抗生素等。 ③与温度和氧气的关系 有嗜热菌，嗜冷菌，嗜温菌之分，也有好氧菌，厌氧菌和兼性好氧菌之分。 3、血清反应 将已知菌种、型或菌株制成抗血清，根据它是否与待鉴定对象发生特异性血清反应鉴别未知菌。此反应也用于病毒分类，尤其是噬菌体分类。 4、生态特性 微生物与其他生物的寄生或共生，细菌的致病性，微生物在自然界中是否耐高渗、是否嗜盐性等。 5、生活史 亲代个体经一系列生长、发育阶段而产生子一代个体的全部经历，就称为该生物的生活史或生命周期。微生物个体发育的阶段变化也是分类鉴别的重要依据。 6、对噬菌体的敏感性 与血清反应类似，各噬菌体有严格的寄生范围，可以根据菌体对噬菌体的敏感性进行区分。 7、核酸分析 DNA是遗传物质的携带者，决定生物的表型。遗传信息在DNA中的存在形式表现为DNA的碱基数目及其排列顺序。亲缘关系越远的种，其碱基数目和排列顺序相差越大。 8、DNA杂交试验 进一步判断微生物间的亲缘关系，须比较DNA的碱基序列，最简便的方法是DNA杂交。其基本原理是DNA解链的可逆性和碱基配对的专一性。提取DNA并使之解链，再使互补的碱基重新配对结合成双链。根据能生成双链的情况，可测知杂合率。杂合率越高，表示两个DNA之间碱基顺序的相似越高，亲缘关系也就越近。 9、细胞壁成分分析 不同微生物的细胞壁，在其组成单位的物质基础或在结构方面有许多明显的特殊性。比如，霉菌的细胞壁主要含有几丁质；而细菌细胞壁的主要成分是肽聚糖。革兰阴性菌细胞壁的肽聚糖含量较低，另外还有多肽、脂蛋白及脂多糖等；革兰阳性菌细胞壁肽聚糖的比例则较高，另外有蛋白质、多糖、磷壁酸和磷璧质等。 10、红外光谱 一般认为每种物质的化学结构都具有特定的红外光谱。若两个样品红外吸收光谱完全相同，可以初步认为它们是同一种物质。所以，利用红外光谱技术测定微生物的化学成分，也能用于微生物分类，简单快速，样品用量少。 11、数值分类法 又称统计分类法。根据“等重要原则”，不分主次，以分析多数特征为基础，进行菌株间两两比较，通过计算菌株间的总相似值来分群归类，数据处理量较大，需借助于计算机实现。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！