人肾上皮细胞接收后的处理方法与培养步骤及注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-73527 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：人肾上皮细胞培养条件：原代细胞取组织现分用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞特性1）来源：小鼠   乳腺组织2）形态：上皮样 贴壁生长3）含量：>1x106  细胞数4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装5）用途：仅供科研使用。 三、细胞的运输和保存干冰运输及复苏好存活细胞（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 四、细胞接收后的处理方法1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。                       五、细胞培养步骤1、培养基及培养冻存条件准备1）准备1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。2、细胞处理1）冻存细胞的复苏将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

            嗜水气单胞菌分离株的鉴定与菌株肠毒素及致病性研究！ 嗜水气单胞菌(Aeromonas  hydrophila,以下简称Ah)广泛分布于污水、池水及河底土壤中,为革兰阴性杆菌,是引起腹泻的新病原菌。关于此菌的感染, 国外有较多报道, 而国内仅见有零星报道。近年来,我们对云南边防部队感染性腹泻进行病原监测,采集腹泻患者粪便标本328份,在分离多种肠道病原菌的同时,从中分离出5株Ah,该菌经镜检、培养、法国梅里埃VITEK32微生物全自动分析仪系统鉴定及电子显微镜下观察予以证实,并对菌株进行了肠毒素及致病性研究，报道如下。　　一、材料和方法　　1、菌株来源 　　从云南边防部队感染性腹泻患者粪便标本中分离。　　2、分离培养 　　将腹泻患者粪便标本接种于SS琼脂平板上置37℃孵箱培养18～24h，挑取可疑菌落进行纯培养。　　3、生化鉴定 　　采用常规法和法国梅里埃VITEK32全自动微生物分析仪NFC卡进行系统鉴定。　　4、电子显微镜检查 　　将分离菌接种普通肉汤培养基,37℃培养18h, 2%磷钨酸(PH6.4)负染制样,用日立－2型电镜检查。　　5、侵袭性测定 　　采用豚鼠角膜试验（Sereny  test）。　　6、肠毒素测定 　　采用乳鼠灌胃法测定热稳定性肠毒素(ST)。　　7、致病力测定 　　15～18g健康小白鼠（购自昆明医学院实验动物中心）雌雄兼用，随机分成试验组和对照组，每组5只，试验组注射Ah肉汤培养物，每只0.5ml,观察小白鼠发病情况，对照组同法注射无菌肉汤，观察7d。　　8、药敏试验 　　采用K-B纸片扩散法。药敏纸片系北京天坛生物技术开发公司产品，在有效期内使用。　　二、结果　　1、生物学特性 　　在SS琼脂平板上经37℃培养24h,其菌落形态为圆形，半透明、边缘整齐、光滑、湿润、微隆、直径1～2mm。菌体形态为革兰阴性杆菌，两端钝圆呈单或呈双排列。在暗视野下观察运动极为活泼，在电子显微镜下可见极端鞭毛（见图1）。　　2、系统生化鉴定　　VITEK32全自动微生物分析仪NFC卡系统鉴定结果见表1。表1 分离的嗜水气单胞菌生化特征试验项目结果 　　3、侵袭力测定 　　豚鼠角膜试验阴性。　　4、肠毒素测定 　　经乳鼠灌胃试验测试，分离的5株Ah肠/体之比均大于0.083,分别是0.091、0.105、0.087、0.123、0.096。证明产生较强的热稳定性肠毒素（ST）。　　5、致病力测定 　　5株分离菌肉汤培养物分别腹腔注射小白鼠后，均在24h左右发病，表现为弓背、耸毛、运动迟缓、食欲不振，双眼半闭、呼吸急促等症状，72h内相继死亡。解剖死亡的小白鼠，发现肠水肿，肠腔积液等，取肠内容物培养，仍获原感染菌。注射无菌肉汤的对照组观察7d无不良反应。　　6、药敏试验 　　在所试的12种抗菌药物中 ，对9种敏感，1种中度敏感，3种耐药，见表2。表2 分离的嗜水气单胞菌药敏试验结果抗菌素纸片含量（略）注：S: 敏感； MS: 中度敏感； R：耐药。　　三、讨论　　1、Ah是气单胞菌属中的细菌之一，该菌广泛存在于水环境中，是一种人—畜—水生动物共患病病原菌。此类菌致病性决定于某些菌株的侵袭力、热稳定性肠毒素和不稳定性肠毒素，该毒素和溶血素为气单胞菌类主要致病因子。该分离菌侵袭力测定为阴性，产热稳定性肠毒素（ST），致病性测定有较强的致病力，与临床症状密切相关。我们从边防部队腹泻病人粪便标本中分离出5株Ah，患者的主要临床表现是：类似急性胃肠炎，症见腹泻、呕吐、腹痛，无发热。Ah不仅感染动物，而且也是引起人类腹泻的新病原菌。由于条件所限，未做不稳定肠毒素和溶血素测试。目前，国外已将Ah纳入腹泻病原菌的检测范围。　　2、气单胞菌属的细菌通常不产生赖氨酸脱羧酶，但与致病性有关的气单胞菌赖氨酸脱羧酶阳性率较高，如本次分离的5株Ah赖氨酸脱羧酶均为阳性。对Ah的研究，国内很少有人用电子显微镜观察其菌体形态，我们使用了较先进的电镜对分离的Ah进行观察，有助于对菌体结构的认识。使用先进的VITEK32全自动微生物分析仪对其菌株进行鉴定，具有快速、省事、省力且结果准确等优点。由于Ah的生化特性与肠干菌科、弧菌属、邻单胞菌属较为相似，没有先进设备的基层单位，可利用氧化酶试验、粘丝试验、鸟氨酸脱羧酶和甘露醇、肌醇发酵等反应来鉴别。腹泻病原感染因子的研究在临床治疗上具有重要意义，不同细菌的感染因子所需的首选药物不尽相同，我们做的药敏试验，筛选出敏感、中度敏感、耐药三类药敏谱，对指导部队和地方今后治疗Ah的感染具有重要的指导意义。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    工作环境中的霉菌超标及污染来源与防治方法！ 食品生产车间霉菌超标怎么处理？ 食品加工过程中“微污染源”很多，如何防止食品被污染乃是一重要课题。霉菌作为为微污染源中的一种，如果不加以控制势必会影响到食品保质期的长短。 那又如何控制霉菌污染食品呢？ 杀菌消毒专家认为：控制霉菌污染，首先要了解霉菌的生长环境、污染食品的条件。在此基础上，方可以提出合理的防控措施，提高食品卫生质量。 一、常见霉菌 1、曲霉 在自然界中分布广泛, 它以土壤或空气为媒介, 而污染至食品原料。该霉在原料贮藏期间几乎不会死亡。因其对干燥抗性强, 故常在一些干燥食品中被分离出来, 而糖类和壳类处理工厂, 也常被此类霉菌污染。曲霉会产生黄曲毒素, 为天然致癌物质中致癌性最强的霉菌毒素。 2、青霉 与曲霉一样在自然界中广泛分布, 而且具同样的生态, 但曲霉生长于中温至高温, 而青霉以中温性为主, 青霉也是以土壤和空气为媒介, 而污染至食品原料中, 是干燥性壳物产品处理工厂的主要霉菌。其有害性是造成食品腐败和产生霉菌毒素以及诱发过敏。 3、毛霉  毛霉在土壤、粪便、禾草及空气等环境中存在。在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。在工厂湿度高的环境、通风不良的环境与气温差异显著的地方(如湿的地板和天花板) , 常有此霉菌存在。  4、交链孢霉  属中温性和好湿性霉菌。其有害性是造成腐朽、腐败和过敏。在高湿度的工厂环境(如鱼肉、水产加工与肉食加工环境) 的天花板、墙与地板、配水管的黑色霉菌, 几乎为该菌或枝孢霉。 5、镰刀菌 是一类世界性分布的真菌，它不仅可以在土壤中越冬越夏，还可侵染多种植物(粮食作物、 经济作物、药用植物及观赏植物)，引起植物的根腐、茎腐、茎基腐、花腐和穗腐等多种病害，寄主植物达100余种。食用霉变的粮食可导致人患病和死亡。某些菌种可诱发人皮肤和角膜溃疡。恶性肿瘤的发生可能与有的菌种有关。 6、根霉 黑根霉也称匐枝根霉，分布广泛，常出现于生霉的食品上，瓜果蔬菜等在运输和贮藏中的腐烂及甘薯的软腐都与其有关。黑根霉(ATCC6227b)是目前发酵工业上常使用的微生物菌种。黑根霉的最适生长温度约为2~8℃，超过32℃不再生长。 二、霉菌生长习性 与霉菌的生长繁殖关系密切的有水份、温度、基质、通风等条件，为此，只有充分的了解霉菌的生长习性，才能为下一步控制霉菌提供理论依据。 1、水分    霉菌生长繁殖主要条件之一是必须保持一定的水分，大部分霉菌于湿度90 %以上, 水含量18 %的高湿度环境下以上容易生长。当食品中的水分活性值为0.98时，霉菌最易生长繁殖。 2、温度     温度对霉菌的繁殖及产毒影响同样重要。大多数霉菌繁殖最适宜的温度为25～30℃，在0℃以下或30℃以上，不能产毒或产毒力减弱。如黄曲霉的最适生长温度37℃左右，最适产毒温度为28-32℃。 3、氧    霉菌为绝对好气性微生物, 于通气良好环境下生长较好, 故厌氧下其生长可被抑制。  4、食品基质    与其它微生物生长繁殖的条件一样，不同的食品基质霉菌生长的情况是不同的，一般而言，霉菌则在以碳水化合物为主要成分的植物性食品原料中繁殖。 三、食品工厂中霉菌污染的来源   不同的食品工厂由于产品种类不同, 故污染的霉菌种类也有所差异。共同的污染源可能来自于水、通风良否、操作人员与食品原料。   1、高湿度和水汽引起的霉菌污染 高湿度场所的霉菌污染，湿度高于85-90%的环境，霉菌会生长很快。食品加工过程中常产生大量水汽，易造成墙壁潮湿及冷凝水形成的情况。木质及混凝土结构的建材也会附着霉菌，故食品工厂内，宜少用木质的物体。 2、空气流动传播的霉菌污染 霉菌通过空气流动传播，生产车间空气净化效果不理想导致外界霉菌入侵。在建筑物的构造中, 应保持通风才不易产生霉菌。在一些通风不良的地方, 由于原料附着以及使用易吸湿的混凝土、木材及纤维等材质时, 一旦有霉菌生长时, 霉菌孢子会四散飞扬，其蔓延速度非常快速, 直接或间接的污染成品、输送带、机械与操作人员手指等处。当工厂旁为果园, 果实成熟开始腐烂长霉时, 空气中的霉菌也特别多, 此时也易造成工厂内空气的污染。在湿度高及通风不良的场所, 可看见枝孢霉、交链孢霉等霉菌生长。   3、水环境中的霉菌污染 一些水槽、水桶、水管、自来水的水龙头、自来水管、地板与底板等处, 由于长期贮水, 所以污染情形特别常见。如，车间地面、明沟、气帽有积水潮湿；冷凝水的管路、墙壁、天花板、空调口等；生产过程产生的液体废弃物未及时清理出车间；离墙离地近的设备表面、潮湿墙面、冷风机容易产生冷凝水滋生霉菌。 这些水环境中的霉菌, 属好湿性霉菌(孢子在Aw0. 9 以上萌发, 在Aw1 时为其最适生长Aw) , 在自然环境中孢子形成粘块状, 当接触水的瞬间即四散飞去,孢子粘块也会借空中浮游, 造成污染。   4、人员、物料不洁的霉菌污染 操作人员和物料也是霉菌的污染源。包材的污染，如瓦楞纸箱，包装或罐装食品的包装袋、包装瓶、瓶盖等；生产过程防护不当造成的霉菌污染；进入车间的人员手部消毒不彻底、不洁净衣物；物料不洁净带入霉菌。 5、食品原料的霉菌污染   食品原料中一些壳粉原料、畜肉、糖质原料、蔬菜与水果等所含的霉菌，在工厂内的加工过程中四处飞散，往往造成工厂内的霉菌污染。在肉品加工厂内的瓷砖上污染的霉菌，主要为PhomaAureobasidium(为空气中的霉菌) 。在面包制造厂的搅拌机的外壁上，可发现黑色斑点状的霉菌，此类霉菌为壳粉原料中的主要霉菌———曲霉。 四、霉菌污染的防治措施 1、温湿度控制  控制车间的温度和湿度，温度在24度以下，湿度在55％以下，因为过高的温湿度会促进霉菌的生长。必要时应装设有效的换气设施,班中每2小时用风机及时将含有大量水分的空气排出车间， 以防止室内温度过高、蒸汽凝结或异味等发生。 2、化学处理 酒精喷雾消毒是制造食品时防止霉菌与细菌污染常用的方法, 每天班前、班后对车间内部墙壁、风机、下水道、案面、手部、围裙套袖、墙壁、下水道实施75%的酒精或消毒剂喷洒，杀灭霉菌。 对于制造环境的天花板、壁面与地板等, 为防止霉菌污染, 应采用防腐蚀、抗霉菌与防止结露的施工及材料。 3、紫外线照射或臭氧处理 人员的工作服、更衣室等，必须保持卫生清洁，定期清洗和进行紫外线或臭氧杀菌30分钟以上，防止人为造成霉菌的交叉污染（不可在有人情况下杀菌）。紫外线对霉菌孢子的杀菌效果有限时，可适当配合酒精喷雾等方法进行处理。 4、洁净室 在食品工厂内的加热后放冷至包装阶段 , 为最需防止外部浮游菌侵入和落菌的污染，设置洁净室，利用空气导入设施，将可达到空气洁净化，减少污染的目的。 5、车间卫生控制 首先要保持生产车间的内部工具的清洁和卫生，注意对一些卫生死角进行严格的卫生清理和保持（每半月实施一次深度清洁）。即管理者与操作人员应具有卫生观念, 随时注意操作的卫生与减少污染的可能性 , 必须从加强员工卫生教育着手。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                食品实验室常见仪器设备的使用与管理及操作规程！ 一、目的 规定实验室内仪器设备使用及管理，保证检测工作的正常进行。 二、职责 实验室负责人负责实验室仪器设备的综合管理工作，各仪器设备的使用与管理由化验员负责实施。 三、适用范围 本制度适用于实验室内所有仪器设备的购置使用、维护、故障处理、报废与管理工作。 四、仪器设备使用及管理制度 (一) 超净工作台操作规程 （1）标准： A、根据环境的洁净程度，可定期（一般2-3个月）将粗滤布拆下清洗予以更换； B、定期（一般为一周）对超净工作台环境进行灭菌，同时经常用纱布沾上酒精或丙酮有机溶剂将紫外杀菌灯外表面揩擦干净，保持表面清洁，否则会影响杀菌效果； C、当加大风机电压不能使操作风速达到0.32M/S时，必须更换高效空气过滤器； D、更换高效空气过滤器时可打开顶盖，更换时应注意过滤器上的箭头标志，箭头指向即为层气流流向； E、更换高效空气过滤气后，应用尘埃粒子计数器检查四周边框密封是否良好，调节风机电压，使操作平均风速保持在0.32-0.48M/S范围内，再有用Y09-4型尘埃粒子计数器检查洁净度。 （2）操作规程： A、使用工作台时，应提前1小时开机，同时开启紫外灭菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，三十分钟后关闭杀菌灯； B、新安装的或长期未使用的工作台，使用前必须对工作台和周围环境先用超净真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作台，再采用药物灭菌法和紫外线灭菌法进行灭菌处理； C、操作区内不允许存放不必要的物品，以保持操作区的洁净气流流型不受干扰； D、操作区内应尽量避免作明显扰乱气流流型的动作； E、操作区内的使用温度不得大于60℃。 （二） 冰箱操作规程 （1）使用标准： A、在冰箱接入电源之前，请仔细核对冰箱的电压范围和电源电压是否相等； B、冰箱必须有干燥的接地，如果电气线路没有接地，那么必须请电工将冰箱单独接地； C、不可将汽油、酒精、胶粘剂等易燃、易爆品放入冰箱内，以免引起爆炸； D、冰箱不能在有可燃性气体的环境中使用，如发现可燃气体泄漏，千万不可拔去电源插头，关闭温控器或灯开关，否则会产生电火花，引起爆炸； E、切勿用水喷洒冰箱顶部，以免使电气零件受损，发生危险； F、清洁保养及搬动冰箱时必须切断电源，并小心操作，不让电气元件受损； G、冰箱应放置在平坦、坚实的地面上，如放置不平，可调节箱底平脚； H、冰箱应放置在通风干燥，远离热源的地方，并避免阳光直射； I、冰箱在一般使用时，会结霜，当结霜特别严重时，可关机或关掉电源进行人工化霜，必要时可打开柜门加速霜层融化； J、当冰箱搁置不用时或长时间使用箱内出现异味时，必须进行清理； K、不可用酸、化学稀释剂，汽油、苯之类物品清洗冰箱任何部件； L、箱内不要放熟的食品，热的仪器必须冷却至室温后，再放入箱内； （2）操作规程： A、首次通电或长时间不用重新通电时，由于箱内外温度接近，为迅速进入冷藏状态，可把温度调至最冷处，待冰箱连续运行2-3小时，箱温降低后，再将温度调至适当位置； B、在使用中，不要经常调动温度控制器。 （三） 电子天平操作规程 （1）操作规程： A、将电子天平置于稳固、平整的台面上； B、插上电源，打开开关； C、开机时，秤托盘上不能有重物，待显示稳定后，将空容器放在秤盘上，但其重量不能超出最大称量，按去皮键回零； D、加入所需样品后，显示数值即为样品重； E、称量完毕，将天平先置零，再关闭开关，拔掉电源； F、用干布或干刷子将天平打扫干净，放归原位（避免与水接触）； G、天平要经常用配备的砝码进行校准； H、天平内应放置适量的干燥剂（如硅胶等）。 （四） 手提式高压蒸汽灭菌器操作规程 （1）操作规程 A、堆放：将要消毒的物品包扎好后顺序地放置在消毒桶内的筛板上，并在包与包之间留有适当的空隙，以利于空气的逸去和蒸汽的穿透 ； B、加水：在消毒器身内加水量超出发热圈3-5cm高，水在消毒过程中会逐渐蒸发，水面随之相应降低，以致每次消毒完毕后，若继续使用，应将水重新加足，避免器身底无水开裂而报废； C、密封：将消毒桶放入器身内，此时水应不倒流入消毒桶内，盖上消毒器盖,注意将软管插入消毒桶槽内，盖上螺柱紧固槽应与主体的螺柱槽对正，然后顺序的将相应方位的翼形螺母均匀的旋紧，使盖与器身密合； D、加热：将消毒器放在热源上加热，开始时将放气阀摘子放在垂直方位处于放汽状态，消毒器内冷空气会随着加热由阀孔逸去。当水煮沸后有一股较急的蒸气冲击，此时将放气阀摘子处于关闭状态。消毒器内压力随着加热而上升，并在压力表上指示出来； E、消毒：当消毒器内压力达到所需范围时，适当调整热源，使它维持恒压，并开始计算消毒时间，按不同的物品和包装维持所需的消毒时间； F、干燥：敷料、器械和器皿等消毒后需要干燥的，可在消毒终了时，立即将消毒器内的蒸汽由放气阀(或于安全阀)排去，当压力表指针回复至零位后，稍待一分钟，将其打开，并继续加热5分钟，这样能使物品达到干燥； G、冷却：溶液和培养基等若在消毒终了时立即放汽，会因压力突然降低而剧烈沸腾发生瓶子爆破或溶液溢出等严重事故，所以在消毒终了时不应立即放汽，应首先将热源熄灭，或从热源上移开，使它自然冷却，一般20━30分钟后就使锅内压力因冷却而下降至零位，等压力表回到零位，数分钟后将放汽阀门开放和打开盖子。 （2）注意事项 A、始终应保证消毒器内有足够的水量，每次消毒后应将消毒桶筛板下面积聚的冷凝水倒出； B、待灭菌的溶液或培养基应装在耐热或硬质玻璃瓶内，不要装得太满,一般装到容器的1/2～3/4容积，瓶口用棉花塞、牛皮纸线绳包扎好； C、使用时，操作人员应经常观察压力表指针值，一旦发现压力表指针超过0.165MPa，安全阀仍不能自动排气时，应立即切断电源，协调工程科相关人员对安全阀进行修理； D、若压力表回复至零位，桶内仍不能开启，可能是因内部真空原因所致，此时可以开启放气阀，使外界空气入内，消除真空，即能将盖开启； E、压力表使用日久后会使读数不正确，应加检修，检修后应与标准压力表对照，若仍不正常，应更换新表； F、平时应保持消毒器清洁干燥，可以延长使用寿命。 （五） 电热恒温水浴锅操作规程 （1）操作规程： A、锅内加适量水，以浸没电热管3─5cm； B、接通电源，温度旋钮调到所需温度的指示处，开启电源,注意检查指示灯是否正常工作(即灯亮表示加热),当加热到所需温度时(以锅上的温度计所指示的温度为准),红灯灭绿灯亮,进行恒温加热； C、温度调节旋钮所指示的数值，并非为实际温度值，实际温度值以温度表所指示数值为准，因此在加热过程中应根据温度表的指示，反复调节温度旋钮的数值,直到恒温为止。 D、经常观察锅内的水量，若水量接近电热管平面时，应及时补充水量，以防水位低于电热管，形成干烧损坏设备； E、使用日久后，要对形成的水垢进行清除。 （六） 电热蒸馏水器操作规程 （1）操作规程： A、开启水源，使冷却水器内有水流入杯内，并调整水流大小（水流过大,要溢出；过小则起不到冷却与补充蒸馏水器中所需的水量）。当锅内水位到观察口时，即可开启电源，进行制水； B、制水过程中应有专人照看，随时注意冷却水流量的大小,防止因水过大而溢出,水流过小或断水会烧坏蒸馏水器； C、停止制水时要先关闭电源，冷却水源30min(冷却至桶体不烫后即可关闭冷却水源)后再关闭.(每次用后将蒸馏水器中的水从排水口放出,减少水垢的生成)； D、蒸馏水器在使用一定时间后,要对加热锅内壁及加热管进行检查,及时清除水垢,以保证制水能力； E、贮水箱内如有铁锈，应及时打扫清除。 （七） 双目生物显微镜操作规程 （1）操作规程： A、电源，将灯源插头插入插座内，开启光源开关； B、将标本放置于移动台上，用标本夹板夹紧，扳动辅助镜手柄，打开孔径光阑； C、并在标本上滴入香柏油一滴，并将油镜头旋转至固定卡口进行观察； D、慢慢旋转粗调手轮，使移动台上升，在适当接近标本时，一方面用眼观察视场，另一方面利用粗调手轮缓慢向下或向上调焦，直到视场中出现模糊细菌图像后再用微调手轮直至把细菌形状调节清晰，然后停止微调； E、观察结束后，切断电源，抬起物镜。先用擦纸擦去镜头上的香柏油，再用沾有二甲苯的擦镜纸擦一遍，最后再取干净的擦镜纸擦净； F、旋转粗调手轮，将移动台降至最低固定位置，将镜头旋转至“八”字形固定卡口位置； G、用塑料套将其罩没，轻轻放回箱中。 （2）注意事项 A、标本表面滴上的香柏油不可太多，否则影响观察效果； B、在旋转粗调手轮，移动台上升或镜头下降接近标本时，必须小心调节，仔细观察，以免碰坏镜头，造成损失； C、显微镜使用或存放，必须避免灰尘、潮湿、过冷、过热及有酸有碱的蒸气，存放的箱中应有硅胶干燥剂防潮； D、透镜表面有垢时，可用清洁擦镜纸沾少量二甲苯揩拭，切忌用酒精，否则，透镜下的胶将被溶解； E、显微镜结构精密，零件决不能随意拆卸。 （八） 电热恒温培养箱操作规程 （1）操作规程： A、使用前开启箱门，将感温探头头部的保护帽去掉，放置好试件，关闭箱门； B、接通电源，检查仪器是否通电、漏电、温控仪是否正常； C、使用时，将仪器控温器调节至所需的温度，并拧开箱顶的气阀，并将经过校准的温度计插入气顶内，以此对照电热恒温培养箱的温控仪是否完好； D、将物品放入，注意不要将温度计和温控仪的探头弄坏； F、使用完毕后，应将仪器进行打扫干净； G、若长时间不用，请将箱顶气阀关闭，并将保护帽套好。 （九） 电热恒温干燥箱操作规程 （1）操作规程： A、使用前开启箱门，将感温探头头部的保护帽去掉，放置好试件，关闭箱门； B、接通电源，检查仪器是否通电、漏电、温控仪是否正常； C、使用时，将仪器控温器调节至所需的温度，并拧开箱顶的气阀，并将经过校准的温度计插入气顶内，以此对照电热恒温培养箱的温控仪是否完好； D、将物品放入，注意不要将温度计和温控仪的探头弄坏，同时需要打开鼓风装置； E、当温度升到规定温度时，开始计时； F、当物品达到所需时间时，切断电源，让其自然冷却； G、用毕后，取出仪器并将仪器进行打扫干净； I、若长时间不用，请将箱顶气阀关闭，并将保护帽套好。 （十） 离心机操作规程 （1）操作规程： A、将仪器放在坚固的平整的台面上，以免运转时产生不必要的麻烦； B、不能在盖门放置任何物品，以免出现凹凸不平，影响仪器的使用效果； C、使用前必须经常检查离心管是否有裂纹，老化现象，如有应及时更换； D、将物品和离心管一起两两进行平衡，并对称放入离心机中，以免损坏仪器，并盖好安全盖； E、调节好离心时间，并先从低转速调起，至所需的转速为止，并让其自然停止； F、小心取出物品，不可剧烈摇晃，否则需重新离心。 G、实验完毕后，将调速旋钮调为零，并将转头和仪器擦干净，以防止试液沾污而产生腐蚀和损坏。 （十一） 马弗炉（高温炉）操作规程 （1）操作规程： A、接通电源，将马沸炉在相对低的温度（100℃）下进行预热十分钟； B、将所需高温的物品放入相应的坩埚中； C、调节温度按钮至所需温度，达到温度后，将装有物品的坩埚用专用钳送入炉堂内，并迅速关闭炉门；注意手不得进入炉堂以免烫伤，必要时需戴好防护手套； D、如需要中途调温，应小心调节，手不得接触炉体，以免烫伤； E、如需中途将物品取出时，需用专用钳取出，同时面部应避于一旁，以免高温灼伤脸部。 （2）注意事项： A、使用中，周围不得放有易燃易爆物品，更不得将易爆物品放入炉中； B、马弗炉必须放在通风较好的地方，以免产生的灰尘污染其它仪器； C、在使用时，需有人在旁观察，以免发生异常情况。 （十二）分光光度计操作规程 （1）操作规程： A、将分光光度计接通电源预热二十分钟； B、将温度旋钮调至当时室内所示温度的刻度； C、通过打开和关闭吸光室的盖子，进行调节“零”和“满度”旋钮； D、重复调节，直至两个旋钮不再调动为止； E、将标准液/样液分别加入已用相应的标准液/样液洗过的比色皿中，并将比色皿外部的液体用吸水纸吸干，尤其是光滑面需用吸水纸擦拭干净； F、将比色皿放入吸光室内，并盖好盖子，进行读数； G、读数完毕，将仪器擦拭干净，并将比色皿用蒸馏水进行清洗。 （十三）pH计操作规程 （1）操作规程： A、电源线插入电源插座，按下电源开关，预热30min； B、把选择开关旋钮调到PH档，并调节温度补偿旋钮，使旋钮指示线对准溶液温度值； C、在测量电极插座处拨去短路插座； D、用蒸馏水清洗电极，清洗后用滤纸吸干； E、在测量电极插座处插上复合电极； F、标定：一般来说，仪器在连续使用时，每天要标定一次； 1）把斜率调节旋钮顺时针旋到底（即调到100%位置）； 2）把清洗过并吸干的电极插入pH＝6.86的缓冲溶液中； 3）调节定位调节旋，使仪器显示读数与该缓冲溶液当时温定下降时的PH值相一致（如用混合磷酸定位温度为10℃时，pH=6.92）; 4）用蒸馏水清洗过的电极，再插入pH＝4.00（或pH＝9.18）的标准溶液中，调节斜率旋钮使仪器显示读数与该缓冲溶液中当时温度下的pH值一致； 5）重复如上1--4直至不用再调节定位或斜率两调节旋钮为止。 G、测量：将电极插入样液内，待显示屏上的数字不再跳动为止； H、读数； I、测量完毕，关闭电源。 （十四）酶联免疫检测仪操作规程 （1）操作规程： A、机器开启后，自检后，根据提示，输入密码（原始密码为000000）后按输入键进入机器的操作界面； B、按编辑菜单里面的程序设置，进行新的试验程序的编辑； C、阈值设置； D、报告种类设置； E、标准品设置； F、试验模式的设定； G、试验名称的设置； H、时间设置：在此界面可设置年，月，日，以及具体的时间，小时，分钟，秒等。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

               一起来探寻巨大芽孢杆菌在现代农业中的崭新蓝图！ 巨大芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，被认为是一种重要的植物生长促进剂。在农业生产中，巨大芽孢杆菌作为一种生物农药和生物肥料的应用越来越受到重视。 一、生物肥料成分 巨大芽孢杆菌作为一种生物肥料，含有丰富的氮、磷、钾等植物营养元素，同时还能产生生长激素和有机酸等植物生长促进物质，对作物的生长发育具有积极影响。 二、促进根系发育 巨大芽孢杆菌能够分解土壤中的有机物质，释放出植物生长所需的营养元素，同时分泌生长激素，促进作物根系的发育和生长。强健的根系系统能够增加作物吸收水分和营养的能力，提高作物的抗逆性和生长速度。 三、抑制土壤病原微生物 巨大芽孢杆菌具有较强的抗菌作用，能够产生一系列抗生素和抗菌物质，对土壤中的病原微生物如真菌、细菌等具有一定的抑制作用。通过抑制土壤病原微生物的生长，可以减少作物的病害发生率，保证作物的健康生长。 四、提高作物产量和品质 应用巨大芽孢杆菌可以显著提高作物的产量和品质。其促进作物生长的作用可以使作物生长周期缩短，增加产量；同时，作物生长过程中吸收的营养更加充足，作物品质更加优良，有利于提高作物的市场竞争力。 五、生态友好 与化学肥料和农药相比，巨大芽孢杆菌作为一种生物农药和生物肥料，对环境的影响更小，不会造成土壤和水体的污染，有利于保护生态环境，促进农业的可持续发展。 六、应用方法 1、土壤施用 将巨大芽孢杆菌制剂通过土壤施用的方式添加到作物根际或整体土壤中，促进土壤微生物的多样性，改善土壤环境。 2、种子处理 将种子浸泡或喷洒巨大芽孢杆菌制剂，增加种子表面的有益微生物群落，提高种子萌发率和生长势。 3、叶面喷施 将巨大芽孢杆菌制剂稀释后喷施在作物叶面，促进作物的叶绿素合成和光合作用，增强作物的光合效率。 综上所述，巨大芽孢杆菌作为一种重要的生物农药和生物肥料，在作物增产中发挥着重要作用。其促进作物生长、抑制土壤病原微生物、提高作物产量和品质等优点，使其成为现代农业生产中不可或缺的生物利器。同时，巨大芽孢杆菌的深入研究和应用也将促进农业生产方式的转变，推动农业生产向生态友好型和可持续发展的方向发展。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

              NCI-H1435人非小细胞肺癌细胞的处理方法与培养步骤！ 一、产品信息平台编号：Bio-133639 规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶 细胞信息：NCI-H1435 细胞名称：人非小细胞肺癌细胞生长特性：贴壁生长，松散培养体系：ACL-4medium（serum-free）传代方法：1：2传代冻存条件：无血清细胞冻存液用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞描述本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。 三、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 四、细胞培养步骤1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3、细胞冻存：（1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；（2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；（3）用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；（4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2、加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。3、轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4、按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 五、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                食品微生物检验技术之微生物能力验证能力考核要点！ 一、要树立科学必须真实的观念，实验态度要端正。 要怀着一颗为了出具真实、准确，可信数据而敬畏的心去申请能力验证。 实验要求科学严谨,实验要预先充分练习和实践。能力验证是对实验室综合实验水平（人员，设备，环境等多因素）的评价。 首先要选好实验项目，找到与之配套的方法，进行充分的方法验证，从检测员能力，仪器设备性能，校检结果是否能满足实验需要，实验检测多次实验，检测环境是否进行了充分的考虑，实验确认好实验项目，认真学习标准，理解标准，并做到标准所规范的步骤，并对自己实验有了一定的信心后再去申请能力验证为宜。 举例：某实验室未经过充分实验方法确认，实验平时做的也少，直接申请了能力验证。实验过程生疏，照方抓药，手忙脚乱，造成稀释梯度不够，平板干燥，菌落蔓延，无法出具具体数值，实验失败。 二、实验室收到盲样菌株标本后，首先应做的事情。 1、检查标本的性状和确认包装情况，然后按照要求去能力验证网站提交收到样品情况。 2、仔细阅读参指导书，包括标本如何保存的信息，进行实验室内部工作分配，明确工作任务和要求。 3、实验前应严格按照作业指导书的要求制订检验流程，认真做好准备工作，包括实验中需要使用的器皿，须提前做好清洁灭菌。 三、能力验证样品处理。 1、定量项目，西林瓶内样品不可分割，应全部用于检测。一般参考书指导的是加40mL稀释液制成40mL样品。 2、定量项目样品稀释。指导书标明了稀释范围的，在稀释范围左右各加1个稀释度进行；书上没有稀释范围的，多做稀释倍数，选择合适的稀释倍数计数（一般可稀释至10-8）。 3、定量项目，除了要多做稀释倍数外，同时同一稀释度要多倒几皿，从原理上来讲，检测过程属于随机抽样检查，平板越多，数据越接近真值。考虑性价比，又不可能一直疯狂一个稀释度很多平板，所以能力验证时候多倒几皿，求好结果。 4、定性项目有一些重要步骤。 a、增菌及分离步骤尤其重要。选择合适的增菌液和分离用培养基对目标菌的检出非常关键，选择两种以上的增菌液和分离用培养基对菌株作直接分离和增菌后分离。 b、划线分离十分重要，要把增菌液中的目标菌尽量多的表达出来，要分出单个菌落并尽可能多挑取可疑菌落，确保分离到目标菌。 c、生化试验和血清学试验以营养琼脂平板上的纯培养细菌为好。 四、实验过程一定要做阴阳对照，全程空白对照。 再厉害的高手也有失手和看走眼的时候，所以阴阳对照就是一面镜子。对于一些荧光染色后进行判读的实验显得尤为重要。 这里扫盲一个误区，定量计数测菌数时，我们会认为空白就是直接取1mL无菌水然后加入到平板里，然后混菌倒皿，这是错误的。因为这样做的话，只能模拟证明稀释后倒平板这一步有没有污染。而无法证明从样品称取-样品稀释时候的污染质控情况。所以要做全程空白对照。 全程空白的含义就是把无菌液当成样品，然后走一遍实验过程。如果严格这么做的话，又会走向另一个极端，所以全程空白只从取样开始至稀释10-1做了简化，而不做后续稀释空白样的混菌实验。 在有些其他实验时候，会有样品空白以及稀释液空白，比如大气环境NOx和SO2的检测，有兴趣的可以去看看，对于全程空白的意义理解有更好的帮助。 五、培养基方面需要注意的地方。 1、培养基配制充分混匀后再灭菌。 正确做法是用一部分水搅拌均匀后，再加入剩余水量，混匀后灭菌或分装。 2、混菌法倒皿要充分混匀。 培养基倒完要左5圈右5圈（混匀速度一定要慢，目的是——避免培养基波动到二皿接触的缝隙部分造成后续污染），找较水平位置冷却凝固。 3、培养基要不要覆盖问题。 覆盖的目的是为了阻止活菌在培养基表层通过鞭毛移动，造成片状生长，无法计数这一不利现象的发生。这里可以发挥主观能动性-对于不运动的菌，可以不覆盖，对于运动的菌覆盖。 总结一下： a.长期检测同一种样品，不覆盖并无蔓延现象，不覆盖；长期检测蔓延选择了覆盖，一直覆盖。 b.未知样品，进行覆盖和不覆盖的比对实验，然后决定以后同样的样品是否需要覆盖。养成经验。 c.能力验证实验，覆盖和不覆盖的都做，不要吝惜那么一点点培养基或耗材，毕竟能力验证实验做的漂亮才是实验室（是室而不是人！）能力的综合体现。 4、培养过程防止平皿干燥。 培养过程中培养基可以倒的适当厚一些，比如25mL。培养箱底部接一个不锈钢盆，装上足量无菌水（没有就去买几瓶哇哈哈怡宝什么的水倒里面）。 5、培养完成要保留实验平皿和其他相关材料。 作为能力验证，原始记录及实验报告还没出具完成，各种材料还是保留至数据出具后较好，便于出现问题现查原因，马上补救。 题外话：很多检测员等结果出了问题然后到网络上来求救，结果一问平皿已经洗掉了，那就不知道是什么状况了。有时候你问她她还会振振有词的讲：10-1，10-2都蔓延了，不洗掉干嘛，10-5，10-6没长菌，不洗掉干嘛？我当时真的无语，也不想多说话就没继续讲了。现在我回答一下这个问题：我要你一套完整梯度浓度的平皿，可以看出你10倍稀释梯度是不是稳定，还有蔓延是个什么状况，到底有多少，是一片还是局部还是很小一部分，然后根据整体数据估算结果（当然实验做成这样也基本算失败了，因为实验没有做到你可控的范围），是补救的一种（并不可取，属于垂死挣扎）。定量实验时，当天做完的稀释样品也要放冰箱里，虽然实验要求不能复检或重复检测，但作为微生物专业你是知道菌放在2-8℃下并不会长多少，如果第二天一看数据有蔓延或疑问，马上再做一次，这样也应该在误差范围内出数。 6、实验培养过程勤观察。 微生物培养过程一般需要几小时到几十小时，要利用这段时间观察培养箱及菌生长情况，比如温度是否稳定，培养室内湿度如何等等，多思多看，准备预案。方有可能得到与盲样一致的实验结果。 原始记录应有条理、思路清晰,完整准确地记录菌株鉴定检验的全过程,原始记录要包含时间、试验现象、试验结果三个要素，方便试验出现问题的查找。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  实验室中玻璃仪器的洗涤及各种洗液的配制方法！ 百欧博伟生物：实验中所使用的玻璃仪器清洁与否，直接影响实验结果，往往由于仪器的不清洁或被污染而造成较大的实验误差，甚至会出现相反的实验结果。因此，玻璃仪器的洗涤清洁工作是非常重要的。 1、初用玻璃仪器的清洗 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用洗涤灵稀释液、肥皂水或去污粉等洗刷再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不少于4 小时），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3 次，在80～100℃烘箱内烤干备用。 2、使用过的玻璃仪器的清洗 （1）一般玻璃仪器：如试管、烧杯、锥形瓶等（包括量筒），先用自来水洗刷至无污物；再选用大小合适的毛刷沾取洗涤灵稀释液或浸入洗涤灵稀释液内，将器皿内外（特别是内壁）细心刷洗，用自来水冲洗干净后，蒸馏水冲洗2～3 次，烤干或倒置在清洁处，干后备用。凡洗净的玻璃器皿，不应在器壁上带有水珠，否则表示尚未洗干净，应再按上述方法重新洗涤。若发现内壁有难以去掉的污迹，应分别试用下述各种洗涤剂予以清除，再重新冲洗。 （2）量器：如移液管、滴定管、量瓶等。使用后应立即浸泡于凉水中，勿使物质干涸。工作完毕后用流水冲洗，去附着的试剂、蛋白质等物质，晾干后浸泡在铬酸洗液中4～6 小时（或过夜），再用自来水充分冲洗、最后用水冲洗2～4 次，风干备用。 （3）其他：具有传染性样品的容器，如病毒、传染病患者的血清等沾污过的容器，应先进行高压（或其他方法）消毒后再进行清洗。盛过各种有毒药品，特别是剧毒药品和放射性同位素等物质的容器，必须经过专门处理，确知没有残余毒物存在方可进行清洗。 3、洗涤液的种类和配制方法 （1）铬酸洗液（重铬酸钾-硫酸洗液，简称为洗液）广泛用于玻璃仪器的洗涤。常用的配制方法有下述四种： ①取100mL 工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后小心慢慢加入5g 重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解后冷却，贮于具玻璃塞的细口瓶内。 ②称取5g 重铬酸钾粉末置于250mL 烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解。慢慢加入浓硫酸100mL，随加随搅拌。冷却后贮存备用。 ③称取80g 重铬酸钾，溶于1000mL 自来水中，慢慢加入工业硫酸100mL（边加边用玻璃棒搅动）。 ④称取200g 重铬酸钾，溶于500mL 自来水中，慢慢加入工业硫酸500mL（边加边搅拌）。 （2）浓盐酸（工业用）：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。 （3）5％草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高猛酸钾的痕迹。 （4）5％～10％磷酸三钠（Na3PO4·12H2O）溶液：可洗涤油污物。 （5）30％硝酸溶液：洗涤CO2 测定仪器及微量滴管。 （6）5％～10％乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Na2）溶液：加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。 （7）尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛蛋白质制剂及血样的容器。 （8）酒精与浓硝酸混合液：最适合于洗净滴定管，在滴定管中加入3mL 酒精，然后沿管壁慢慢加入4mL 浓硝酸（比重1.4），盖住滴定管管口，利用所产生的氧化氮洗净滴定管。 （9）有机溶剂：如丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗去油脂、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脱油漆的污垢。 （10）氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液：是两种强碱性的洗涤液，对玻璃仪器的侵蚀性很强，清除容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长。使用时应小心慎重。上述洗涤液可多次使用，但是使用前必须将待洗涤的玻璃仪器先用水冲洗多次，除去肥皂、去污粉或各种废液。若仪器上有凡士林或羊毛脂时，应先用纸擦去，然后用乙醇或乙醚擦净后才能使用洗液，否则会使洗涤液迅速失效。例如：肥皂水，有机溶剂（乙醇、甲醛等）及少量油污都会使重铬酸钾-硫酸洗液变成绿色，减低洗涤能力。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  酵母基因组DNA提取试剂盒的纯度检测与操作方法！ 一、背景 酵母基因组DNA提取试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。 酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 二、原理 采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合破壁酶特异消化酵母细胞壁，能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。 三、产品特点 1、离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2、不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 3、快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。 4、多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。 四、操作方法 酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 五、保存条件 室温保存，12个月内有效。ProteinaseK与Lyticase-20℃保存。 六、纯度检测 基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时，OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。 七、注意事项 1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的片段较小且提取量下降。 2、若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65度水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。 3、洗脱缓冲液的体积好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右可用NaOH将水的pH值调至此范围值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防降解。 八、应用 酵母基因组DNA提取试剂盒可用于酵母基因组DNA提取： 在光滑球拟酵母基因组规模生物模型的构建与应用研究中以丙酮酸工业生产菌株Candida glabrata CCTCC M202019为研究模型,在完成全基因组测序、基因组功能注释和比较基因组学研究的基础上,构建了基因组规模代谢网络模型(Genome-scale metabolic model,GSMM)、转录调控网络模型(Transcriptional regulatory network,TRN)和工业微生物辅因子代谢网络模型(Genome-scale cofactor metabolic model,GSCMM)。 结合上述基因组规模生物模型,运用基于约束的优化算法,从基因、代谢、转录、辅因子等层面上解析了C.glabrata的生理特征(如丙酮酸的高产、低致病性相关的生物安全性等),并发展了优化其生产性能(如丙酮酸、富马酸等丙酮酸去路中代谢物)的方法。 主要研究结果如下:1.运用二代高通量测序技术,对C.glabrata CCTCC M202019进行全基因组测序,其基因组特征包括:12.1 Mbp基因组大小、38.47%GC含量、5345个基因、191个t RNA、6个r RNA和1.15%的重复序列等。与C.glabrata CBS138进行比较基因组分析,发现虽然两菌基因组具有高度相似性,但也存在差异如:中心碳代谢(营养物质和二羧酸的转运、氧化磷酸化和丙酮酸分解代谢)和黏附性代谢(凝集素蛋白的低复杂度重复区和功能结构域的缺失和变化)。 在此基础上,借助在四种培养基上的丙酮酸发酵实验、哥伦比亚血平板上生长实验、96孔微孔板内壁和内皮细胞的黏附实验,证明了C.glabrata CCTCC M202019比CBS138菌株具有更强的丙酮酸生产能力和更弱的黏附性和细胞毒性。2.根据C.glabrata氨基酸序列、文献挖掘和专业数据库,构建了C.glabrata的GSMM i NX804。模型i NX804包括804个基因、1025个代谢物和1287个生化反应,分布于细胞质、线粒体、过氧化物酶体、高尔基体、液泡和胞外区间。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得最优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                  芦笋状肠道梭状菌的培养方法与实验内容及操作步骤！ 一、菌种简介平台编号：Bio-099448 规格：平板 拉丁属名：Enterocloster Asparagiformis 菌株名称：芦笋状肠道梭状菌培养基：哥伦比亚平板 特殊蛋白胨：23.0，可溶性淀粉：1.0，氯化钠：5.0，琼脂：10.0，pH：7.3±0.2（25℃）生长条件：37℃；48-72h；厌氧存储条件：2-8℃安全等级：1形态：菌落直径为0.5-1mm，圆形，边缘不规则，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌。分离基物：human faeces模式菌株：yes用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、操作步骤①准备上述平板 1-2 块；②平板表面消毒后在安全柜中打开；③吸取 1-3ml 无菌水（置于厌氧环境平衡24h）打入平板中，用无菌涂布棒在平板表层来回刮取菌苔，制成菌悬液；④用巴氏吸管吸取菌悬液，打入到新鲜的平板上，涂布均匀；⑤将平板置于上述培养条件下培养即可。 五、注意事项1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取 0.3ml 的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过 2 支平板或者斜面）；2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间； 若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。7）如若有菌种复苏不活或者污染等情况，请在收到菌钟后 2 个月内联系，逾期不予受理；8）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。9）安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。10）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                MCF-12F人乳腺上皮细胞的知识与应用及相关研究！ 一、背景 MCF-12F人乳腺上皮细胞系，英文名称是MCF-12F cell line。以下是其相关信息的简介： MCF-12F人乳腺上皮细胞系的保存条件为低温避光，纯度规格为1×10(6)viable cells/ml，产品类别是有机化学品。MCF-12F细胞系来自女性乳腺上皮细胞，其细胞形态为上皮细胞样。体外细胞培养实验证明，该细胞系可以持续进行贴壁生长。在实验操作中，为预防细胞污染，需要进行无菌操作，如实验前对超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。 MCF-12F细胞系的主要特点是表达高水平的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)，同时缺乏人类表皮生长因子受体2(HER2)的表达。这些特性使得该细胞系成为研究乳腺癌内分泌治疗的重要工具之一。此外，MCF-12F细胞系还可以用于研究乳腺癌的发生机制、药物筛选、肿瘤生物学等方面的问题。 二、MCF-12F人乳腺上皮细胞系培养操作 1)复苏MCF-12F人乳腺上皮细胞系：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)MCF-12F人乳腺上皮细胞系传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)MCF-12F人乳腺上皮细胞系冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 MCF-12F人乳腺上皮细胞系可以用于Caveolin-1单倍不足对人乳腺上皮细胞周期蛋白调控的影响： 利用基因捕获技术得到稳定传代的Cav-1单倍不足(haploinsufficiency)乳腺细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3),Cav-1的mRNA和蛋白质表达均明显降低,并且也已经证实Cav-1的单倍不足足以诱导人乳腺上皮细胞发生部分转化。但是,其细胞机制尚不完全清楚。乳腺癌细胞的生长受多种因素调控,如细胞周期失调,细胞增殖过度以及内分泌失衡等。近来的研究表明,CyclinD1过表达是乳腺癌细胞恶性转化的重要事件。在乳腺癌发生过程中,CyclinD1的聚集持续存在于乳腺癌进展的各个方面阶段,它作为细胞周期调节因子之一,在乳腺癌发生过程中起着关键性作用。 本实验以正常人乳腺上皮细胞株(MCF10A)、MCF-12F人乳腺上皮细胞系、Cav-1单倍不足乳腺上皮细胞株(MCF10A-ST1,MCF10A-ST3)以及乳腺癌细胞系(MCF7)和MCF-12F人乳腺上皮细胞系为研究对象,应用流式细胞仪检测细胞周期时相,Westernblot方法检测了细胞周期相关蛋白及转录因子的表达以及RT-PCR的方法观察CyclinD1mRNA水平的变化,探讨了Caveolin-1的表达水平与乳腺细胞周期调控的关系及其可能的分子机制。阐明Caveolin-1在人正常乳腺细胞早期转化中的部分作用机制,为进一步揭示乳腺癌发病机理提供直接的科学依据。 结果如下：(1)Cav-1在单倍不足细胞株MCF10A-ST3和MCF10A-ST1的表达分别为MCF10A的50%和30%,而在乳腺癌细胞系MCF7和MCF-12F人乳腺上皮细胞系中几乎没有检测到Cav-1的表达;(2)Cav-1单倍不足细胞时相发生改变,MCF10A-ST3细胞株G1期和S期细胞数分别为35.4%和56.4%;(3)Cav-1单倍不足乳腺细胞株中,随着Cav-1的下调,CyclinD1的蛋白和mRNA水平均增加,P21的表达下调,而P16的表达水平没有受到影响;(4)Cav-1单倍不足可以激活c-Jun、ER-α的表达,从而促进细胞增殖,肿瘤发生。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  无害李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌打管说明书！ 无害李斯特氏菌英诺克李斯特氏菌，是Listeria属的微生物，原产地为中国。革兰阳性，有鞭毛，无芽孢，可产生荚膜。营养要求不高，在室温中动力活泼，但在37时动力缓慢，能发酵多种糖类、与多种革兰阳性菌有共同抗原。主要用途为研究，教学，具体用途为用于科研。 一、菌种简介平台编号：Bio-56577 提供形式：冻干物拉丁属名：Listeria Innocua 中文名称：无害李斯特氏菌(英诺克李斯特氏菌)拉丁名称：Listeria innocua其它保藏中心编号：=ATCC 33090来源历史：←美国ATCC收藏时间：2005-10-21资源归类编码：15131320102模式菌株：模式菌株主要用途：分类；研究；分析检测具体用途：API验证用菌（检测李斯特菌）。生物危害程度：四类培养基编号：CM0217培养基名称：脑心琼脂培养基成分：心提取物 5.0g，脑提取物 12.5g，月示 胨10.0g，葡萄糖 2.0g，NaCl 5.0g，Na2HPO4 2.5g，琼脂15.0g，蒸馏水1.0L，pH7.4。推荐使用商品化成品培养基。培养温度：37℃需氧类型：好氧保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：分类；研究；分析检测；API验证用菌（检测李斯特菌）。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基（血平板琼脂培养基） 三、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。  四、注意事项1) 首次活化，干粉粉要全部用完，不能预留，用 0.1-0.2ml 的培养液或无菌水溶解，接种在1-2 个平板上，因冻干粉处于休眠状态，请勿接种多支斜面或平板，以避免因接种量不足而导致复苏不成功；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年；5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 五、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                   胶孢炭疽菌的特点与优势及微生物培养方法！ 胶孢炭疽菌为炭疽菌属的一种。引起植株炭疽病。病害症状主要为害叶片。多从叶尖、叶缘发病，或于叶片表面着生近圆形的病斑。病斑圆形或不规则形，边缘黑褐色，内部凹陷，灰褐色或灰黑色；后期着生小黑点，病健交界明显。  一、菌种简介平台编号：Bio-15401 提供形式：斜面培养物英文名称：Colletotrichum gloeosporioides Penz.中文名称：胶孢炭疽菌属名：Colletotrichum种名加词：gloeosporioides Penz.来源历史：←中国农业科学院农业资源与农业区划研究所←中国热带农业科学院环境与植物保护研究所收藏时间：2007-12-31原始编号：CATAS EPPI2061, Z20070061原产国：中国 CN资源归类编码：15151911101模式菌株：非模式菌株主要用途：a:4:{i:0;s:4:分类;i:1;s:4:研究;i:2;s:4:教学;i:3;s:4:生产;}特征特性：菌丝初期无色，后期变为浅褐色。圆筒形，有隔膜和分枝，直径2～7um。在培养基中产生黑色素。分生孢子盘多在叶面散生或不规则排列，浅褐色，圆形或卵圆形，扁平或隆起，直径100～250um。分生孢子盘内密生短小的分生孢子梗，梗上有分生孢子。孢盘上有时长有硬而长、直或弯的深褐色刚毛。刚毛有1～2个隔膜，大小为500～1000um×4～7um；有时缺少这种刚毛。分生孢子单胞，无色，椭圆形或圆筒形，有油点或无；孢子大小因培养基种类或寄生部位不同而有差异，一般大小为12.2～15.8um×4.0～5.4um。叶片受害后，多在叶尖或叶缘出现，初为水渍状褐色的小斑，后向下，向内扩展成椭圆形或梭形至不规则形褐斑，斑面有明显或不明显的云纹。数个病斑连合成斑块，叶片变褐干枯。潮湿时斑面出现小黑点，即病菌分生孢子盘。具体用途：教学科研，分类生物危害程度：四类致病对象：植物致病名称：闭鞘姜炭疽病传播途径：以菌丝体和分孢盘在病部或随病残体遗落在土中越冬。以分生孢子作为初侵与再侵接种体，借助雨水溅射等传播，从伤口或孔口侵入致病。在南方特别是在广东，病菌可在田间多种寄主作物间辗转传播危害，并无明显越冬期。分离基物：闭鞘姜叶片采集地：海南省儋州市培养基编号1：0014培养温度：N19.30′资源保藏类型：a:1:{i:0;s:6:培养物;}保存方法：a:3:{i:0;s:15:-80℃冰箱冻结法;i:1;s:8:矿物油法;i:2;s:4:其他;}共享方式：a:1:{i:0;s:10:公益性共享;}用途：教学科研，分类 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用；2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压；3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境；4、复活迅速,可在短期内成为优势种群；5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境；6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和生产提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。 五、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 六、保藏方法1、传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃冰箱内保存。2、液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法,能够适当延长保藏时间,它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡,一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡,另一方面可阻止氧气进入,以减弱代谢作用。3、载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体,如土壤、沙子、硅胶、滤纸上,而后进行干燥的保藏法,例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。4、寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代,此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。5、冷冻保藏法可分低温冰箱(-20-30℃,-50-80℃)、干冰酒精快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等保藏法。6、冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度(-70℃左右)下快速冷冻,然后在减压下利用升华现象除去水分(真空干燥)。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                   微生物菌种的代码与复苏及保藏方法与注意事项！ 一、菌种代码的意义 国内常见微生物检验所用的菌种代号是： CMCC（F）或 CMCC（B） CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 B —— 代表细菌 F ——代表真菌 大肠杆菌：CMCC (B) 44102； 乙型副伤寒沙门杆菌：CMCC (B) 50094； 铜绿假单胞菌：CMCC (B)10104； 金黄色葡萄球菌：CMCC (B)26003； 生孢梭菌：CMCC(B)64941； 白色念珠菌：CMCC(F)98001。 二、菌种的复苏 按照菌种的使用说明将复苏液在超净工作台或生物安全柜内进行复苏。 三、常用菌种保藏方法 1、琼脂斜面低温保存法 （1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸包好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月传代一次。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年至一年。 （2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。 （3）特点：优点是简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用；缺点是保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。 （4）注意事项： a.保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。 b.保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。 c.每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。 d.保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于 2 %为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。 e.铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。 2、液体石蜡保存法 （1）方法：将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器内除去液体石蜡中的水分。 将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端1cm为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。 （2）适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。 （3）特点：本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。 （4）注意事项：  a.保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏。 b.使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上即可使用。 c.将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染. d.液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1cm为宜。 e.制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多，否则分装到菌种培养基中易造成污染。 3、磁珠保存法 将菌液浸入素烧磁珠(或多孔玻璃珠)后再进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入1/2管高的硅胶(或无水CaSO4)，上铺玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。 本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。 磁珠保存时间更长，使用方便，大大减轻操作人员的工作。 四、常用菌种保藏方法 方法一：斜面传代 冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入超净工作台或生物安全柜。 点燃酒精灯（灭菌器），用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住试管塞，拨开试管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。 堵上试管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开试管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。 取出接种棒，在火焰旁将试管塞堵上，然后将接种棒在火焰上烧灼灭菌。 将已接种完的斜面置35~37℃培养22~24小时，霉菌管一般置20~25℃霉菌培养箱内培养7日。取出后放人冰箱保存，一般 3个月转种一次。  方法二：斜面-营养肉汤-分离平板-斜面 用接种环取上述斜面菌苔少许接种置营养肉汤中(5ml/支，已灭菌)，置35~37℃培养18~24小时后，再用接种环取培养好的营养肉汤菌悬液，接种于分离平板，置35~37℃培养18~24小时，用接种针选典型菌落划线于营养琼脂斜面，置35~37℃培养18~24小时。一般同时接种几支管，其中一支用于以后菌种传代或接种到半固体琼脂培养基中，其它用做工作菌种。 常用分离平板： 大肠埃希菌——EMB琼脂平板； 铜绿假单胞菌——溴化十六烷三甲铵琼脂培养基； 金黄色葡萄球菌——甘露醇氯化钠琼脂培养基。 五、菌种保管 菌种保管应有专人负责，双人双锁，确保菌种安全。 菌种领用、传代、保存都要有记录，包括名称、入库、领用、传代日期、鉴定者、主要鉴定性能及灭活或销毁情况。 微生物菌种查询网隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，成立于二〇一四年十月份，是一家专业提供中国微生物菌种，标准菌种，质控菌株,ATCC菌种,细胞系以及培养基等产品的查询网站！自成立至今，已提供各类微生物菌种、细胞、培养基数量达四万余份，接待咨询客户数量5万余人次，成交合同数量2万余份！是国内微生物菌种及细胞信息Z全的网站！ 我们拥有自主研发能力，提供的ATCC菌种达15000余份,ATCC各类细胞系达3000余份,保藏中心涵盖菌种资源更达数十万余份！ 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到Z终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在中国微生物菌种查询网中获得Z优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   牛原代小肠黏膜上皮细胞的使用方法与注意事项！ 一、细胞简介平台编号：Bio-77296 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞信息：原代细胞 细胞名称：牛原代小肠黏膜上皮细胞用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述小肠位于腹中，上端接幽门与胃相通，下端通过阑门与大肠相连。小肠与心互为表里。是食物消化吸收的主要场所，盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，全长约5－6米，张开有半个篮球大，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。其管壁由黏膜，黏膜下层，肌层和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，黏膜有许多绒毛，绒毛根部的上皮下陷至固有层，形成管状的肠腺，其开口位于绒毛根部之间。绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系密切。 三、细胞特性1）组织来源于实验动物的正常小肠组织。2）细胞鉴定：细胞角蛋白-19（CK-19）免疫荧光染色为阳性。3）经鉴定细胞纯度高于90%。4）不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5）细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  嗜热脂肪芽孢杆菌抑制法检测鲜乳中抗生素残留！ 一、检验原理 培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢，并含有 pH 指示剂（溴甲酚紫）。加入样品并温浴后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽孢将在培养基中生长并利用糖产酸，pH 指示剂的紫色变为黄色。相反，如果样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽孢不会生长，pH 指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。 二、检验程序 1、芽孢悬液： 将嗜热脂肪芽孢杆菌菌种划线移种于营养琼脂平板表面，56 ℃培养 24 h 后挑取乳白色半透明圆形特征菌落，在营养琼脂平板上再次划线培养，56 ℃培养24 h 后转入 36 ℃培养 3 d～4 d，镜检芽孢产率达到 95%以上时进行芽孢悬液的制备。每 块平板用 1 mL～3 mL无菌磷酸盐缓冲液洗脱培养基表面的菌苔（如果使用克氏瓶，每瓶使用无菌磷酸盐缓冲液 10 mL～20 mL）。将洗脱液 5 000 r/min离心 15 min。取沉淀物加无菌0.03 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.2）制成 10 ９ cfu/mL 芽孢悬液，置 80 ℃恒温水浴中 10 min 后，密封防止水分蒸发，置冰箱保存备用。 2、测试培养基： 在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基中加入适量芽孢悬液，混合均匀，使最终的芽孢浓度为 8×10 ５ ～2×10 ６ cfu/mL。混合芽孢悬液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培养基分装小试管，每管 200 μL，密封防止水分蒸发。这样配制好的测试培养基可以在冰箱保存 6 个月。 3、培养操作： 吸取样品100 μL加入含有芽孢的测试培养基中，轻 轻旋转试管混匀。每 份检样作二份，另外再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管为 100 μL 青霉素 G 参照溶液，阴性对照管为 100 μL 无抗生素的脱脂乳。于 65℃水浴培养 2.5 h，观察培养基颜色的变化。如果颜色没有变化，须再于水浴中培养 30 min 作最终观察 4、判断方法： 在白色背景前从侧面和底部观察小试管内培养基颜色。保持培养基原有的紫色为阳性结果，培养基变成黄色或黄绿色为阴性结果，颜色处于二者之间，为可疑结果。对于可疑结果应继续培养30 min 再进行最终观察。如果培养基颜色仍然处于黄色－紫色之间，表示抗生素浓度接近方法的最低检出限，此时建议重新检测一次。 5、报告: 最终观察时，培养基依然保持原有的紫色，可以报告为抗生素残留阳性。 培养基变为呈黄色或黄绿色时，可以报告为抗生素残留阴性。 本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素3 μg/L，链霉素 50 μg/L，庆大霉素 30 μg/L，卡那霉素 50 μg/L。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                      微生物培养基的概念与分类及储存与制备！ 1、培养基的制备    培养基是指人们根据微生物生长繁殖所需的各类营养物质，按一定的浓度由人工方法混合配合而成的用于培育微生物生长的一类营养基质而称之。培养基是微生物生长的物质基础，是微生物检测工作的重要基础工作。按使用时的不同物理状态，培养基可分为：液体培养基、半固体培养基、固体培养基3种。根据不同用途（使用目的），培养基又可分为：基础培养基、富集培养基（营养或增殖培养基）、选择性培养基、鉴别培养基、厌氧培养基5类 。另外按其营养成分和浓度是否已知可分为：合成培养基（营养成分和浓度已知）、天然培养基（营养成分和浓度未知）2种。有关培养基的基础知识可参考有关专著和其他有关微生物学教科书。  2、培养基的储存     一般来说，未开封的脱水培养基应避光储存于25℃下阴凉干燥处，开过封的脱水培养基应盖紧瓶盖注意密封储存。已配制好的培养基、缓冲液一般可储存于2—25℃阴凉干燥处，有条件置冰箱冷藏储存更好，否则必须在2d内使用完毕。USP中有明确规定：置2—25℃阴凉干燥处如果培养基分装并储存于非密闭性容器内（如试管、三角烧瓶），则其使用期限为1个月，但该培养基 的灵敏度试验和其他 的相关质量检查务必在距使用时的前2周内完成；如果培养基储存于密闭性容器（如螺旋盖瓶）内，则其使用期限为1年，但该培养基的灵敏度试验和其他的相关质量检查须在距使用前3个月内完成：如果实验室购买的成品型培养基储存于密闭容器内，实验室可抽取部分代表性样品进行无菌检查试验和灵敏度试验。并根据自己的储存条件来制定合理的培养基储存期，对培养基的存储环境条件进行监控和记录，并且要对相应的储存期和储存条件进行确认。     灭菌后的培养基等物品应置适当条件下保存至规定的有效期，并对保存条件进行确证。 表  无菌物品的存储条件 类型                        存放条件              无菌保效期（年、月、d） 输液瓶密封装培养基          2—8℃                1年 输液瓶密封装淋洗液、缓冲液  室温                  2年 螺旋盖瓶装培养基            2—8℃                3个月螺旋盖瓶装淋洗液、缓冲液    室温                  3个月 试管装无菌培养基（固液）    2—8℃                14d                试管装有其他的无菌试剂      室温                  14d 平皿琼脂培养                25—35℃下培养3d后，存于2—8℃   14d 取样用螺旋盖瓶              室温                  7d过滤器等无菌操作用物品      室温，洁净室 内或层流台内   7d                      表  培养基 2—8℃条件 保存期限 培养基种类        保存条件     保存时间 平板培养基        不袋装        2周                   袋装          6—8周 试管培养基        不袋装        2—4周 （棉塞）          袋装          8—10周 试管培养基        不袋装        8周 （软木塞或蜡封）  袋装          16—18周     有效期已过的培养基、缓冲液、稀释液、淋洗液和试剂必须立即丢弃，不得再用于检测中。实验室应建立简易的库存控制系统，有专人保管和建立台账，包括品名、规格、批号、数量、有效期、进货日期、使用日期和数量、以及领用人等信息，以随时掌握有关信息。   北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   微生物实验室冷冻干燥的原理与过程及操作步骤！ 冷冻真空干燥（以下简称冻干）是一个稳定化的物质干燥过程。是将含水的物质，先冻结成固态，而后使其中的水分从固态直接升华变成气态排除，以除去水分而保存物质的方法。溶液状态的产品经冷冻处理后，先后经过升华和解吸作用，使产品中的溶剂减少到一定程度，从而阻止微生物的生成或溶质与溶剂间的化学反应，使产品得以长时间保存并保持原有的性质。 真空冷冻干燥法是液态→固态→气态的过程。在冻干过程中，溶质颗粒之间的“液态桥”已被冻成“固态桥”，两颗粒间的相对位置已经被固定下来，并且两颗粒之间不存在气液界面的表面张力。随着溶剂的不断升华，“固桥”不断减少，但两颗粒之间的相对位置已不再发生变化，直至“固态桥”完全消失。 水和溶液的性质 水有三态，固态、液态、气态。三种状态可以相互转化。对应 0 ℃ 、 610Pa 以下所有过程，只要符合一定的条件都可成为升华过程 。物质有固、液、汽三态。物质的状态与其温度和压力有关。水 (H2O ）的状态。三条曲线分别表示冰和水、水和水蒸汽、冰和水蒸汽两相共存时其压力和温度之间的关系。分别称为溶化线、沸腾线、升华线。此三条曲线分成 I 、 II 、 III 三个区域，分别称为固相区、液相区和气相区。箭头 1 、 2 、 3 分别表示冰溶化成水，水汽化成水蒸汽和冰升华成水蒸汽的过程。曲线 OB 的顶端有一点 K ，其温度为 374 ℃ ，称为临界点。若水蒸汽的温度高于其临界温度 374 ℃ 时，无论怎样加大压力，水蒸汽也不能变成水。三曲线的交点 为固、液、 汽三相共存的状态，称为三相点，其温度为 0.01 ℃ ，压力为 610Pa 。在三相点以下，不存在液相。若将冰面的压力保持低于 610Pa ，且给冰加热，冰就会不经液相直接变成气相，这一过程称为升华。 溶液的冷冻干燥过程 冻干溶液一般都是配置成含固体物质4%-25%的稀溶液。溶液里水的组成： 1、大部分水是以水分子的形式存在于溶液中的自由水。 2、少部分是吸附于固体物质晶格间隙中或以氢键方式结合在一些极性基因团上的结合水。 3、固定于生物体和细胞中的水，大部分也是可以冻结和升华的自由水。也含有一些不能冻结、很难去除的结合水。 冻干的目的就是在低温、真空环境中除去物质中的自由水和一部分吸附于固体晶格间隙中的吸附水。 冻干过程及操作步骤 预冻结：预冻是将溶液中的自由水固化，赋予干后产品与干燥前有相同的形态，防止抽空干燥时起泡、浓缩、收缩和溶质移动等不可逆变化发生。 溶液在冻结过程中，需过冷到冰点以下，其内产生晶核以后，自由水才开始以纯冰的形式结晶，同时放出结晶热，使其温度上升到冰点，随着晶体的生长，溶液浓度增加，当浓度到达共晶浓度，温度下降到共晶点以下时，溶液就全部冻结。 冷却速度愈快，过冷温度越低，所形成的晶核数量越多，晶体来不及生长就被冻结，形成的晶粒数量越多，晶粒也细。冷却速度慢，形成的晶粒数量越少，晶粒也粗大。冻干制品升华前，必须冻结到一定的温度，这个温度应设在制品的共熔点以下10至20℃左右，如不经过预冻直接抽真空，当压力降到一定程度时，液体就会被抽去。这种情况也叫蒸发，这种蒸汽叫做不饱和蒸汽，如果制品冻结不实而抽真空，液体中的气体迅速逸出而引起“沸腾”的现象。制品如在“沸腾”中冻结，有部分可能逸出瓶外，引起药物损失或使制品表面凹凸不平。由此可见，共熔点的温度是保证产品正常干燥的最安全的温度，只能比它低，不能高于共溶点温度。 升华干燥（一次干燥） 将冻结后的产品置于一闭的真空容器中加热，其冰晶就会升华成水蒸气逸出而使产品脱水干燥。干燥是从外表面开始逐步向内推移的，冰晶升华后残留的空隙变成尔后升华水蒸气的逸出通道。升华所需的热量由以下几种途径得到：固体的传导，辐射，气体的对流。 产品升华时受以下几个温度限制：产品冻结部分的温度应低于产品共溶点的温度。产品干燥部分的温度要低于其崩解温度或容许的最高温度（不烧焦或性变）。最高搁板温度。 解析干燥（二次干燥） 第一阶段干燥是将水以冰晶的形式除去，因此其温度和压力都必须控制在产品共溶点以下，才不使冰晶溶化。对于吸附水，由于其吸附能量高，如果不提供足够的能量，水就不可能从吸附中解析出来。为了使解析出来的水蒸气有足够的推动力逸出产品，必须使产品内外形成较大的蒸汽压差，所以箱体内要保持高真空。第二阶段干燥后，产品残余水分的含量一般可以控制在0.4%-4%之间。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                   小鼠心脏微血管周细胞的分离方法与质量检测！ 一、产品信息平台编号：Bio-132624 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶细胞信息：原代细胞 细胞名称：小鼠心脏微血管周细胞组织来源：心脏组织用途：研究产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞简介小鼠心脏微血管周细胞分离自心脏组织；心脏是脊椎动物身体中最重要的一个器官，主要功能是为血液流动提供压力，把血液运行至身体各个部分。心脏由心肌构成，左心房、左心室、右心房、右心室四个腔组成。左右心房之间和左右心室之间均由间隔隔开，故互不相通，心房与心室之间有瓣膜（房室瓣），这些瓣膜使血液只能由心房流入心室，而不能倒流。心脏的作用是推动血液流动，向器官、组织提供充足的血流量，以供应氧和各种营养物质，并带走代谢的终产物（如二氧化碳、无机盐、尿素和尿酸等），使细胞维持正常的代谢和功能。心脏微血管内皮细胞是组成心脏微血管腔面单层扁平上皮样细胞，它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在心脏血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。近年来大量研究表明，心肌微血管周细胞的功能和病理改变直接影响心肌细胞功能，也是诸多毒素、炎症因子及病毒等重要靶位，其作为体外研究的细胞模型在心肌缺血-再灌注发病机制和细胞间旁分泌细胞生长因子研究中起着重要作用。 三、方法简介小鼠心脏微血管周细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。 四、质量检测小鼠心脏微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 五、培养信息包被条件 PLL（0.1mg/ml） 培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 换液频率 每2-3天换液一次 生长特性 贴壁 细胞形态 成纤维细胞样 传代特性 可传1-3代左右 消化液 0.25%胰蛋白酶 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 小鼠心脏微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                    嗜酸乳杆菌：益生菌类保健食品的生产和研究 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，杆的末端呈圆形，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素，但是抑菌作用比较弱。嗜酸乳杆菌不仅在胃中，它还是人体小肠内的主要益生菌。 一、菌种简介平台编号：Bio-67162 提供形式：冻干物拉丁属名：Lactobacillus Acidophilus 中文名称：嗜酸乳杆菌属名：Lactobacillus种名加词：acidophilus其它中心编号：=JCM 11047来源历史：←JCM←T．Itoh LA67收藏时间：2007.01.00资源归类编码：15131319101模式菌株：非模式菌株主要用途：研究；生产具体用途：用于益生菌类保健食品的生产。生物危害程度：四类致病对象：无分离基物：人的排泄物培养基：酪蛋白胨(胰酶消化) 10g，肉汤提取物 10g，酵母粉 5g，葡萄糖 20g，吐温80 1g，K2HPO4 2g，醋酸钠 5g，柠檬酸二铵 2g，MgSO4·7H2O 0.2g，MnSO4·H2O 0.05g，pH6.2～6.5。培养温度：37℃资源保藏类型：培养物保存方法：-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法实物状态：有实物共享方式：公益性共享；资源纯交易性共享；合作研究共享；资源交换性共享用途：研究；生产；用于益生菌类保健食品的生产。 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养基MRS 培养基酪蛋白胨 10 克 牛肉浸取物 10 克酵母提取液 5.0 克 葡萄糖 20 克乙酸钠 5.0 克 柠檬酸二胺 2.0 克吐温 80 1.0 克 磷酸氢二钾 2.0 克七水硫酸镁 0.2 克 七水硫酸锰 0.05 克碳酸钙 20.0 克 琼脂 20.0 克蒸馏水 1.0 升 PH 6.8如果要配制液体培养基，则不用加入碳酸钙和琼脂 三、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 四、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、保藏条件斜面菌种和冻干菌种应在 2-8°C 保存。西林瓶菌种请置于-20℃冷冻。  六、注意事项1）乳酸菌需要在比较厌氧的环境下培养首次活化，干粉要全部用完，不能保留，干粉用尽量少的腹水液溶解，接种在 5ml 的液体培养基中，静止培养；因冻干菌种处于休眠状态，请勿接种多支液体培养基，以免因接种量不足而导致复苏不成功。如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；2）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；3）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；4）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为 2-25 年5）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降，应及时和微生物菌种查询网联系。 七、单层冻干管打管说明书1、安瓿瓶开封：用浸过 75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。2、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在 4-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥并抽真空保存的，开启后必须一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作为保护剂，里面菌体为少数，复苏时要全部菌悬液接在新鲜培养基上，否则可能造成复苏不成功；3、冻干菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，有时延滞期较长，如在说明书建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成；有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种稳定后才能用于您的后续实验。4、暂不启开的安瓿管应于 4℃中保藏（特殊除外）。5、冻干管打开后需一次用完，不能留存。6、打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                    小鼠结肠癌细胞的背景与应用及培养操作规程！ 一、背景 小鼠结肠癌细胞是一种常用于结肠癌研究的实验模型。这些细胞来源于小鼠的结肠癌组织，具有肿瘤细胞的特性，如快速增殖、侵袭和转移等。 小鼠结肠癌细胞可以用于研究结肠癌的发生、发展机制，以及探索新的治疗手段。通过研究这些细胞在体外和体内的行为，可以帮助科学家们更好地理解结肠癌的生物学特征，以及开发更有效的治疗策略。 此外，小鼠结肠癌细胞系也常被用于制作肿瘤模型，以模拟人类结肠癌的生长和转移。这些模型对于研究肿瘤的生物学、测试药物疗效以及研究肿瘤与宿主之间的相互作用都具有重要的意义。 二、小鼠结肠癌细胞培养步骤 1、小鼠结肠癌细胞培养基及培养冻存条件准备： 1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸钠0.11g/L)，90%；优质胎牛血清，10%。 2）小鼠结肠癌细胞培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）小鼠结肠癌细胞冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。 2、小鼠结肠癌细胞处理： 1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）小鼠结肠癌细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 3）小鼠结肠癌细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。 三、应用 小鼠结肠癌细胞可以用于胡桃醌对小鼠结肠癌CT-26体内抑制作用及机制研究： 研究胡桃醌对结肠癌CT-26细胞在小鼠体内增殖、凋亡及转移的影响,以及胡桃醌促进CT-26肿瘤细胞凋亡和抑制其转移的相关可能作用机制。同时,探究了胡桃醌治疗结肠癌期间对荷瘤小鼠的机体免疫功能的影响。 选取健康的Balb/c小鼠皮下荷瘤,随机分为6组,分别为模型组(2%乙醇生理盐水溶液)、阳性对照组(20mg/kg 5-FU)、胡桃醌高剂量组(2.5mg/kg)、胡桃醌中剂量组(1.25mg/kg)、胡桃醌低剂量组(0.625mg/kg)、联合用药组(胡桃醌2.5mg/kg+5-FU20mg/kg),按体重每日腹腔注射给药一次,连续给药10天。末次给药结束24h后,称重记录并准备收集血液、胸腺、脾脏、肿瘤组织样本。血液静置离心分离得血清,应用Elisa方法检测ICAM-1、VEGF、GSH、IL-8在小鼠血清中的含量;胸腺和脾脏称重计算胸腺指数与脾脏指数;肿瘤组织测量长径与短径计算瘤体积,称重记录瘤重;将肿瘤组织切割为两部分,一部分置于生理盐水用于流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡,另一部分固定于4%甲醛溶液,用于HE染色病理观察以及免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、MMP-2、MMP-9、β-链蛋白的表达水平。 实验结果表明,胡桃醌高剂量2.5mg/kg和中剂量1.25mg/kg均可有效抑制结肠癌CT-26细胞在小鼠体内的生长,抑瘤率分别为46.2%和42.4%;胡桃醌与5-FU联合应用抑瘤率为74.8%,比胡桃醌与5-FU单独应用的抑瘤效果好;5-FU治疗肿瘤时,小鼠的胸腺指数、脾脏指数、体重与模型组相比均显著性下降,而胡桃醌治疗后,小鼠的胸腺指数、脾脏指数、体重均无显著性下降,胡桃醌可使CT-26肿瘤细胞阻滞于G2/M期,并下调肿瘤细胞中Bcl-2蛋白、β-链蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白表达,上调Bax与Caspase-3蛋白表达;胡桃醌高剂量2.5mg/kg可显著降低荷瘤小鼠血清中ICAM-1、VEGF和GSH的含量。 根据结果可知胡桃醌在抗肿瘤过程中,与5-FU相比可维持机体的体重和免疫功能;胡桃醌的抗肿瘤作用机制可能是阻滞CT-26肿瘤细胞周期于G2/M期影响其增殖,介导线粒体依赖的Caspase-3凋亡途径促进肿瘤细胞凋亡,下调血管生成因子、β-链蛋白、MMP-2蛋白、MMP-9蛋白的表达抑制肿瘤细胞浸润与转移。本研究为胡桃醌成为可能的抗结肠癌药物提供新的理论和实验依据。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                 小鼠原代视网膜色素上皮细胞的运输和保存及使用！ 一、细胞简介平台编号：Bio-137129 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 产品信息：原代细胞细胞信息：小鼠原代视网膜色素上皮细胞 用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述视网膜色素上皮位于脉络膜和光感受器细胞外节之间，是视网膜下腔和脉络膜血管之间的离子、水、营养物质和代谢终产物转运通道。视网膜色素上皮参与视黄醇循环，吞噬脱落的光感受器细胞外节以维持光感受器细胞兴奋性，并分泌多种生长因子，帮助维持脉络膜血管内皮细胞和光感受器细胞的结构完整性。 三、细胞特性1)组织来源于实验动物的正常眼组织。2)细胞鉴定：细胞角蛋白-8(CK-8)免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞培养1、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3、冻存及复苏（可参阅后面有关章节）为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。 七、原代细胞分离凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1、悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。2、实体组织材料的分离方法对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  小鼠肺微血管周细胞的培养操作及应用研究！  一、背景 小鼠肺微血管周细胞是一种在肺部微血管周围分布的细胞，也称为肺微血管平滑肌细胞。它们的主要功能是调节肺部微血管的张力和通透性，以维持正常的肺功能。 肺微血管周细胞是一种围绕在肺微血管内皮细胞周围的细胞，具有收缩功能。这种细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。在中枢神经系统中，周细胞包围着内皮细胞。 肺微血管周细胞在肺部疾病中也扮演着重要的角色。例如，在慢性阻塞性肺疾病(COPD)中，肺微血管周细胞会发生增殖和迁移，导致肺部微血管收缩和通透性增加，从而加重疾病的进展。 此外，肺微血管周细胞还参与了肺部炎症和免疫反应的调节。它们可以释放多种细胞因子和趋化因子，吸引和激活其他免疫细胞，参与炎症反应的发生和发展。 二、小鼠肺微血管周细胞培养操作 1)复苏小鼠肺微血管周细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2)小鼠肺微血管周细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3)小鼠肺微血管周细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例； a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 三、应用 小鼠肺微血管周细胞可以用于周细胞凋亡在肝肺综合征肺微血管扩张中的作用研究： 通过培养肺周细胞，观察CBDL大鼠血清对肺周细胞及小鼠肺微血管周细胞凋亡和caspase-3表达的影响；观察CBDL大鼠肺细胞及小鼠肺微血管周细胞凋亡、caspase-3表达情况和周细胞的主要标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA)、神经元胶质抗原2(neuron-glial antigen2,NG2)、desmin的蛋白水平及其阳性细胞率的变化；抑制caspase-3后检测肺细胞凋亡，α-SMA、desmin、NG2的蛋白水平及其阳性细胞率的变化，以及肺微血管扩张和血氧交换情况，证明如下假设：CBDL产生的血清因子变化，通过血液循环作用于肺微血管，致caspase-3激活，肺周细胞凋亡，进而引起肺微血管扩张、血氧交换异常和低氧血症，最终揭示肺周细胞凋亡在HPS实验模型肺微血管扩张中的重要作用。 方法： 1、CBDL大鼠血清对肺周细胞及小鼠肺微血管周细胞凋亡的作用研究1.1肺周细胞的培养和鉴定。1.2采用CBDL法构建HPS大鼠模型，收集CBDL1wk血清。1.3CBDL大鼠血清培养肺周细胞后，分别用TUNEL和western blot检测其凋亡和caspase-3表达情况。 2、CBDL大鼠中肺周细胞的变化研究2.1采用CBDL法构建HPS大鼠模型。2.2分别用TUNEL和western blot检测CBDL大鼠肺细胞的凋亡和caspase-3的表达。2.3分别用western blot和免疫组化法检测CBDL大鼠肺α-SMA、desmin、NG2的蛋白水平及其阳性细胞率的变化。 3、抑制caspase-3对CBDL大鼠肺周细胞的影响及HPS的作用研究3.1采用CBDL法构建HPS大鼠模型，手术后第一天起每天给模型大鼠腹腔注射caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK，连续2wk。3.2用TUNEL法检测抑制caspase-3后CBDL大鼠肺细胞的凋亡情况。3.3分别用western blot和免疫组化法检测抑制caspase-3后CBDL大鼠肺α-SMA、desmin、NG2的蛋白水平及其阳性细胞率的变化。3.4分别用血气分析和HE染色法观察抑制caspase-3后CBDL大鼠血氧交换和肺微血管扩张情况。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

              人原代膀胱癌相关成纤维细胞的处理方法与培养步骤！ 一、细胞简介平台编号：Bio-135574 产品信息：原代细胞规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶 细胞名称：人原代膀胱癌相关成纤维细胞用途：原代细胞 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、细胞详述膀胱癌是一种泌尿生殖系统肿瘤，发病率和死亡率较高，膀胱癌分为非肌浸润性膀胱癌与肌肉浸润性膀胱癌。肿瘤微环境理论认为，肿瘤微环境与细胞外基质是肿瘤对化疗反应的重要决定因素。肿瘤微环境包括免疫和非免疫细胞，以及细胞外成分，在肿瘤复发和转移中起着重要的作用。其中，非免疫细胞主要由肿瘤相关成纤维细胞构成。成纤维细胞是实体瘤中最主要的细胞，它们结合结缔组织的细胞外基质，是组织结构完整性的基础。已有研究表明，肿瘤相关成纤维细胞是肿瘤演进的重要促进剂，它们可通过分泌一种或多种可溶性因子如细胞因子、生长因子、趋化因子和基质降解酶等，肿瘤细胞响应这些可溶性因子作用，进而改变肿瘤细胞的生长方式机器发展演进过程。 三、细胞特性1)细胞来源于手术切除的膀胱癌组织。2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。3)经鉴定细胞纯度高于90%。4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。 四、产品的运输和保存视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。 五、产品使用1)本产品仅能用于科研2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核3)本产品未通过用于活体诊断的审核 六、细胞收到后处理方法细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松） 七、细胞培养步骤1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入血清及DMSO，冻存比例为90%FBS+10%DMSO 对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。 下面T25瓶为例；1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 八、注意事项1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。 北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！

                  KACC 11589 土壤伯克氏菌的菌株培养及打管说明！ 一、菌种简介平台编号：Bio-52842 规格：冻干物拉丁属名：Burkholderia Soli 菌株名称：土壤伯克氏菌其他编号：KACC11589、DSMZ18235培养基编号：33,88培养温度：30-37℃用途：研究注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌种的培养1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 五、培养及打管说明1、安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端。2、菌株恢复培养：用无菌吸管吸取0.3--0.5ml适宜的液体培养基，滴入安瓿管内，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状。吸取全部菌体悬浮液，移植于1-2支建议的培养基试管中，并在建议的条件下培养。3、注意事项：菌种活化前，请将安瓿管保存在6-10℃的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，需要连续两次继代培养才能正常生长4、复苏后的菌种在传1-2代后使用。5、暂不启开的安瓿及复苏后需保藏的斜面应于4℃中保藏。 六、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     鼠伤寒沙门氏菌（带红色荧光）百欧博伟生物 鼠伤寒沙门菌（S.typhimurium）属多价O抗血清的B群，也是一种临床较常见的沙门菌。鼠伤寒沙门菌是一种重要的人畜共患病原菌，其感染发病率居沙门菌感染的首位，约占人源沙门菌感染的40%～80%。多见于婴幼儿，可导致医院感染和暴发性食物中毒，病死率较高。 一、产品信息平台编号：Bio-108998 规格：2ml甘油管 基因型：未知，请查阅相关文献菌株名称：鼠伤寒沙门氏菌SL1344-mCherry抗性：卡那培养基：LB 菌株类别：鼠伤寒沙门氏菌培养条件：30℃，有氧，LB保存方式：20%甘油，-20℃可冻存1年，1年后取出重新活化保种注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、菌株简介 鼠伤寒沙门氏菌SL1344-mCherry应带有质粒使其对Kan产生抗性，因此，在活化培养过程中应加入抗性防止染菌和因传代造成的质粒丢失（通常情况下不加抗性质粒也不容易丢失），在进行菌株荧光验证时，挑取单菌落至10mL LB培养基中，置于30℃，200rpm培养24小时（无需诱导），可见菌液变色，离心后肉眼可见。 三、形态与染色革兰阴性细长杆菌  四、生化特征发酵葡萄糖，不发酵乳糖，TSI为K/A,动力阳性，H2S试验强阳性，脲酶试验阴性。 五、病理病因鼠伤寒沙门菌经胃入肠，在肠道内增殖，粘附于肠黏膜上皮细胞，进而侵入固有层，释放毒素，导致其充血、水肿、点状出血等急性炎症反应。病理特点主要是消化道呈现不同程度的充血、水肿、出血及灶性坏死，甚至形成较为广泛的浅表性溃疡，炎性细胞浸润。 六、治疗及预防鼠伤寒沙门菌感染的患儿一般都需要住院治疗。对胃肠炎型者，液体疗法是治疗的关键，并加强对症支持治疗。对呕吐、腹泻频繁的患儿要给予禁食，及时静脉补液以纠正脱水、酸中毒和电解质紊乱，可试用肠道微生态制剂，调节肠道正常菌群，一般无需抗菌治疗。但对于全身中毒症状较重，有持续高热及粘液血便的患者，可酌情给予抗菌药物。对败血症型及内脏损害型的患者，应在对症治疗的基础上，加强抗感染治疗。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                生物安全柜的操作步骤与使用注意事项及维护与保养！ 生物安全柜是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。是实验室生物安全中一级防护屏障中最基本的安全防护设备。 为规范生物安全柜的操作，本文从人员、使用环境、设备操作流程及注意事项等几个方面进行阐述，使操作人员能够正确使用生物安全柜。 一、使用人员与环境 1、首先，微生物检测人员需进行生物安全柜的使用培训才能进行操作，未经正规培训人员不能使用。 2、其次，使用环境条件建议安置在10,000洁净度以上环境安置，环境在温度0～40℃、相对湿度不超过80％、无腐蚀性气体和通风良好的室内，远离高速尘源和震源。安全柜附近不得有超过安全柜正面吸入风速（>0.5m/s）的气流。禁止在有人员频繁进出的场所、门和通道口处及空调送风口附近安装使用安全柜，以免空气干扰操作口及排气口气流。在安全柜周围应留有保养检修空间（至少应在两侧留出25cm，背面留出30cm）。 二、使用注意事项 1、生物安全柜前窗玻璃手拉式开启，可任意定位，以保证断电时能及时关门防护。正常工作时玻璃门的开启高度到红点标注位置，如果超出或低于高度时，声光报警系统启动，提醒用户玻璃门异常。（注：当玻璃门开启时，紫外灯无法开启。）生物安全柜电源为220V、50Hz，接通电源后，通电进入待命状态。 2、在实验开始前要用70%酒精擦拭生物安全柜内表面，进行消毒除去污染，再用无菌水擦拭一遍清除残余的氯，减少实验时的交叉感染。然后将这次需要用到的所有物品移入生物安全柜内，避免双手频繁的穿过气幕破坏气流，污染样品，导致实验失败等等。 3、打开风机5分钟，等柜内空气净化并且气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止1分钟，使柜内气流稳定后再进行操作。 4、安全柜内不放和实验无关的物品，生物安全柜内部物品排放要做到物品取用方便，物品尽量靠后放置，不能挡住气道口，以免干扰气流正常流动。 5、生物安全柜操作期间，严禁使用酒精灯等明火，避免产生的热量产生气流，干扰生物安全柜内的气流稳定。 6、在实验操作时，不可打开玻璃视窗，保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作要轻柔、舒缓，防止影响生物安全柜内部气流。 三、操作步骤 1、首次使用按下[紫外灯控制键]，开启紫外灯消毒30分钟后将紫外灯关闭。（注：此时玻璃门应是关闭状态） 2、打开玻璃门到标识处。（小红标） 3、按下[风机启动键]，开启风机约5分钟左右，使操作区达到规定的洁净度。 4、按下[照明控制键]，开启照明灯，操作人员方可进行作业。 5、作业结束关机 当操作人员作业结束后，首先将实验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。维持气流循环一段时间，然后关闭前窗玻璃门、风机，打开紫外灯消毒，以杀灭残留在安全柜内部的病菌。 生物安全柜特点：设备采用高效空气过滤装置，通过过滤器过滤及吸附方式将各种颗粒吸附住，其目的是保护操作者、环境和样品。同时由于其集多种专利技术于一体，使用更为安全可靠，细致入微的设计极具人性化。 控制软件系统自主研发，获得国家软件著作权证书，LCD液晶屏显示可显示工作区温度、气流流速、可调节各项参数设定，蓝屏数字指示各项参数示值，密码修改程序设置，防止误操作。 紫外灯预约功能：可预约紫外灯灭菌（a实验后灭菌机器自动关闭，人员无需等待。b人员可预约下次使用时间，下次使用时不需再次灭菌可直接实验） 前窗设计：前窗玻璃手拉式开启，可任意定位，以保证断电时能及时关门防护。 连锁保护设计：对误操作均设置联锁保护，即使误操作，也不会造成伤害； 安全柜风机与玻璃门互锁：当安全柜玻璃门完全关闭时，安全柜风机自动关闭进入待机模式，保护安全柜的使用，增加安全柜的使用寿命； 玻璃门与紫外灯互锁，玻璃门开启状态时无法打开紫外灯，保护人员安全。 四、维护与保养 1、日常维护： 运行安全柜，检查安全柜各部分功能是否正常运行。 用70%酒精擦拭设备表面和操作区表面； 用玻璃专用清洁剂清洁生物安全柜玻璃； 对操作室进行消毒灭菌处理。 2、定期维护： 每三个月对设备进行全面检查一次，认真维护保养。 全面清洗设备，并消毒灭菌； 检查各部件是否启闭灵活，各部分功能是否正常； 3、现场检测： 生物安全柜的现场检测有下列情况之一时，应对生物安全柜进行现场检测； 生物安全柜安装完毕，即将使用前； 生物安全柜被移动位置后； 对生物安全柜检修后； 对生物安全柜更换高效过滤器后； 生物安全柜一年一度的常规检测。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。 除此之外，我们还拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                微生态活菌制品的基本要求与生产工艺及制备方法！ 微生态活菌制品系由人体正常菌群成员或具有促进正常菌群生长和活性作用的无害外籍细菌，经培养、收集菌体、干燥成菌粉后，加入适宜辅料混合制成。用于预防和治疗因菌群失调引起的相关症状和疾病。 微生态活菌制品必须由非致病的活菌组成，无论在生产过程、制品贮存和使用期间均应保持稳定的活菌状态。它可由一株、多株或几种细菌制成单价或多价联合制剂。根据其不同的使用途径和方法可制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂或散剂等多种剂型。 一、基本要求 微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证成品含有足够的活菌数量，保持其稳定性，同时应防止外源因子的污染。 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 二、制造 （一）生产用菌种 生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规定”的有关规定。 1、名称及来源 选用的生产用菌种应来自人体内正常菌群，或对人体无毒无害、具有促进正常菌群生长和活性作用的外籍细菌。细菌的分离过程和传代背景应清晰，应具备稳定的生物学和遗传学特性，并能保持稳定的活菌状态，经实验室和临床试验证明安全、有效。 2、种子批的建立 菌种的属、种型分类鉴定，应依据最新版伯杰氏细菌系统鉴定手册（Bergry’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏细菌命名手册（Bergry’s Manual of Determinative Bacteriology）的有关规定进行，包括形态、生长代谢特性检查。原始种子或主种子还应做遗传特性和抗生素敏感性等检查。 三级种子批常规检查包括以下3项： （1）培养特性及染色镜检     将菌种接种于适宜培养基，置有氧或厌氧环境中培养，观察其生长情况，确定菌种为需氧性细菌或厌氧性细菌；以划线法观察在琼脂平皿上生长的单个菌落的形状、大小、表面、边缘、透明度、色泽等特征；也可观察菌种在不同温度、pH或不同浓度的氯化钠溶液等条件下的生长特性等。 取菌种的新鲜培养物涂片做革兰氏染色，在显微镜下观察菌体的染色反应、形态、大小和排列等，有芽孢的细菌应同时观察芽孢的形状、大小和位置（也可增做芽孢染色）。检查结果均应符合原始菌种的特性。 （2）生化反应     按附录ⅪⅤ“细菌生化反应培养基”选择相应的培养基或其他适宜的方法进行，结果应符合原始菌种的特性。 （3）毒性试验     毒性试验是通过动物试验检查菌种是否存在不安全因素，以保证人体使用安全。 用体重18～22g小鼠5只，每只腹腔注射0.3ml新鲜菌液（不少于1.0×109CFU/0.3ml）,连续观察3天，小鼠均应健康存活、体重增加；或每只小鼠经口灌胃0.5ml新鲜菌液（不少于1.0×109CFU/0.5ml），每天1次，连续3天，从第1天灌胃起连续观察至第7天，小鼠均应健康存活、体重增加。 除另有规定外，原始种子或主种子批还需进行以下检查： （1）细菌代谢产物——脂肪酸测定     照气相色谱法（附录Ⅲ Ｃ）或其他适宜的方法进行，应符合该菌种的特性。 （2）遗传特性分析     可采用细菌DNA的G+Cmol%的含量测定或其他适宜方法进行，应符合该菌种的遗传特性。 （3）抗生素敏感性试验    采用琼脂扩散纸片法或其他适宜方法进行菌株的抗生素敏感性检查，应符合该菌种的特性。 （4）稳定性试验     菌种在适宜培养基中，连续传代30代次后，将第30代培养物作种子批检定，全部检查结果应与原始菌种的特性一致。 4、种子批的保存 原始种子和主种子应冻干保存于8℃以下，工作种子应置于适宜温度保存。 （二）菌粉制造 应包括种子液制备、大罐培养、收获菌体（或芽孢）和菌体干燥制成菌粉。如生产多价制品时，应每种菌分别培养，制备单价菌粉。 1、生产用种子 启开工作种子批菌种，接种于适宜培养基进行多级种子扩增，应涂片做革兰氏染色，在显微镜下观察5～10个视野，细菌的染色反应、形态应一致并符合原始菌种的特征。制备过程应防止污染，菌种传代次数应符合规定。 2、生产用培养基 采用经批准的培养基用于生产。 3、培养 采用液体培养。将种子液置适宜条件下培养（包括厌氧或需氧、温度、时间等），培养过程中取样涂片做革兰氏染色镜检、pH值检测等，芽孢菌需进行芽孢形成率的检测，均应符合规定。培养结束后取样做纯菌检查，如发现污染应予废弃。 生产多价制品的单价菌粉时，应分别培养。 4、收获菌体和制成菌粉 培养结束后离心收获湿菌体，与适宜的分散剂、稳定剂混合。采用真空冷冻干燥法干燥菌体，芽孢菌可采用加热干燥方法，再经粉碎、过筛制成粉末状菌粉。 5、菌粉的保存及有效期 应通过活菌稳定性试验确定保存温度和有效期。 6、菌粉检定 按“菌粉检定”项进行，符合规定后方可进行半成品配制。 （三）半成品 1、配制 同一工作种子批菌种生产的最多2批单价菌粉可按批准的比例与辅料混合均匀后制成半成品。配制多价制品时，应将各单价菌粉、辅料按配方比例和配制程序混合均匀，配制过程应防止污染。 2、半成品检定 按“半成品检定”项进行，应符合规定。 （四）成品 1、剂型制备 根据制品的用途、使用对象和用药途径等因素确定剂型。制备过程应符合附录Ⅰ“制剂通则”项下相关剂型的规定。 2、分批 成品批号应在半成品配制后确定，配制日期即为生产日期。同一批号的制品，应来源一致、质量均一，按规定要求抽样检验后，能对整批制品作出评定。应根据验证结果，规定半成品的分装时间，如超过24小时，应分为不同的亚批。 3、分装、规格和包装 制品的分装应符合附录Ⅰ“制剂通则”的有关规定。包装应符合“生物制品包装规程”的有关规定。规格应符合批准的规格要求。 三、检定 微生态活菌制品质量检定应包括菌粉检定、半成品检定和成品检定。 （一）菌粉检定 1、外观 应为白色、灰白色或灰黄色粉末。 2、目的菌检查 取少量菌粉加入适量，灭菌生理氯化钠溶液或其他适宜稀释液后，涂布在适宜琼脂平皿上，在适宜条件下培养，其培养物的生长特性和染色镜检的特征应符合生产用菌种特征。 3、杂菌检查 方法和结果判断见本总论附录3。如不符合规定应废弃。 4、干燥失重 菌粉中残余水分的含量会直接影响活菌的生存，须进行菌粉干燥失重的检查。应按附录Ⅶ Ｌ或仪器方法测定。 5、活菌数测定 测定每克菌粉中含有的活菌数量。方法见本总论附录2。 （二）半成品检定 半成品须做杂菌检查，根据用药途径确定杂菌检查的质控指标。方法和结果判断见本总论附录3。 （三）成品检定 1、鉴别试验 检查成品中所含的目的菌是否符合生产用菌种的特性。即按上述“种子批的检定”方法进行生长特性、染色镜检和生化反应检查，应符合规定。对于多价制品，则须逐一检查单价菌特性。 2、理化检查 （1）外观   根据剂型，观察制品的外观、色泽。 片剂外观应完整、光洁，呈白色或类白色，间有菌粉色斑；颗粒剂、散剂和胶囊剂内粉末的粒子大小、色泽应均匀，间有菌粉色斑。 （2）干燥失重   按附录Ⅶ Ｌ或仪器方法测定，减失重量应不得超过5.0%，芽孢菌制品应不得超过7.0%。 （3）粒度   散剂和颗粒剂应进行粒度检查。 按附录ⅤＧ第二法，采用单筛分法或双筛分法检查，应符合规定。 （4）装量（重量）差异   各剂型按附录Ⅰ“制剂通则”的相应规定进行，应符合规定。 （5）崩解时限   胶囊剂、片剂按附录ⅤＣ进行，应符合规定。 3、活菌数测定 按本总论附录2方法测定每克制品中的活菌数，应符合规定。多价制品应分别测定各单价活菌数。 4、杂菌检查 目的是检查成品中外源微生物的污染情况，以保证人体使用安全。 方法和结果判断与半成品的“杂菌检查”项相同。 5、安全试验 安全试验是通过动物试验进行的非特异性毒性检查，应根据制品的使用途径和人用剂量确定试验方法。 （1）肠道微生态活菌制品检查  称取2g制品，加入8ml生理氯化钠溶液中，混合均匀。用5只体重18～22g小鼠，每只小鼠经口灌胃0.5ml，每天1次，连续3天。自第1天灌胃起，连续观察7天，小鼠应健康存活、体重增加，判为合格。如不合格，可另选10只小鼠复试1次，判定标准同前。 （2）阴道微生态活菌制品检查  用24～26g雌性小鼠5只，，每只小鼠阴道内置入10mg制品，每天1次，连续3天。自给药第一天起，连续观察7天，小鼠应健康存活、体重增加，阴道局部无红肿、分泌物等症状，判为合格。 四、保存、运输及有效期 按批准的温度保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。 北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！

                    用于生产软骨素裂解酶的：解肝磷脂土地杆菌 一、菌种简介平台编号：Bio-53090 规格：冻干物拉丁属名：Pedobacter Heparinus＝Flavobacterium Heparinum 菌株名称：解肝磷脂土地杆菌其他编号：DSM2366=ATCC13125 =NBRC12017 =NCIB9290培养基编号：2培养温度：30用途：模式菌株，降低肝素，生产软骨素裂解酶，抑癌用途：模式菌株，降低肝素，生产软骨素裂解酶，抑癌注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、培养方法1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级。工业发酵的有用菌种，其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。2、挑选具有某种能力的有用菌种，也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备菌种制备。4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天（或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子（对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基）。5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。6、如果有些生产菌种不产孢子，如赤霉素产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米浆），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。 三、实验内容1、称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2、干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3、高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4、过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 四、使用范围（1）合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。 （2）天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，培养效果好，所以常被采用。 （3）半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。  五、注意事项1、菌种常规培养时间：细菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。2、菌种恢复培养前，建议将收到的菌种安瓿保存在 6-10°C 的环境下，某些菌种经过冷冻干燥保存后处于休眠状态，延迟期较长，如在说明建议的培养时间还未长起来，请继续在相应的环境下多培养 24 小时或者更长时间，直至菌种培养完成，有的菌种需要连续两次继代培养才能正常生长，一般来说菌种培养稳定后才能用于您的后续实验。3、初次使用时请严格按照本说明书推荐条件和操作步骤进行复活培养，如使用其它类型培养基或培养条件造成菌种不活等损失，我单位不负责任。4、恢复培养厌氧菌时，在操作过程中应严格控制厌氧条件：制作培养基时，应使用厌氧螺口试管，并利用高纯氮气去除试管和培养基中的氧气，使用者应保证菌种的安全存储和操作，带菌废弃物应高压灭菌处理后丢弃。5、与菌种相关的其它信息请参阅微生物菌种查询网网站(www.biobw.org）。 欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！

                     哈尔滨产乙酸菌的特点与优势及培养与保存！ 哈尔滨产乙酸菌是Ethanoligenens属的微生物，原产地为中国。梭菌纲，厌氧菌。主要用途为分类学研究，具体用途为模式菌株。  一、菌种简介平台编号：Bio-04032 提供形式：冻干物拉丁属名：Ethanoligenens Harbinense 中文译名：哈尔滨产乙酸菌拉丁学名：Ethanoligenens harbinense原始编号：YUAN-3菌株来源：←哈尔滨工业大学保藏人：邢德峰直接来源国家：中国保藏时间：7/11/2005其他保藏编号：=JCM 12961生物危害：四类模式菌株：模式菌株菌株用途：模式菌株培养温度：35℃培养基：1004    其他培养条件：厌氧分离源：厌氧活性污泥采集地点：黑龙江省哈尔滨市采集国家：中国Genbank（保藏人）：AY 295777用途：模式菌株 注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准） 二、产品特点1、菌种功能明确、品种稳定、应用;2、产品仅限用于科研本品芽孢含量高,稳定性好、耐高温和挤压;3、繁殖能力快、定植能力强、易存活、耐受低pH值环境;4、复活迅速,可在短期内成为优势种群;5、本品安全高效、无抗药性、不污染环境;6、对多数抗生素不敏感,可与低浓度抗革兰氏阴性菌抗生素同时使用。 三、产品优势1、产品质量稳定,是为科研和提供微生物菌种资源共享服务的专业平台。2、国内首创封闭管包装,冻干后的菌株使用时添加配套的复苏培养基后迅速而完全溶解。针对不同的菌株提供八种不同的培养方法,保证菌种的复苏质量。3、严格的质检程序,确保产品质量的稳定性。4、该类产品广泛使用到食品、药品、化妆品、水产品、化工等行业,疾控中心、质检局、出入境、药检局等等,得到广泛好评。 四、微生物菌种培养方法1、孢子制备⑴ 放线菌孢子的制备一般采用琼脂斜面培养基,培养基中含有一些适合产孢子的营养成分,如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。碳源和氮源不要太丰富(碳源约为1%,氮源不超过0.5%),碳源丰富容易造成生理酸性的营养环境,不利于放线菌孢子的形成,氮源丰富则有利于菌丝繁殖而不利于孢子形成。一般情况下,干燥和限制营养可直接或间接诱导孢子形成。放线菌斜面的培养温度大多数为28 ℃,少数为37 ℃,培养时间为5~14天。⑵ 产品仅限用于科研霉菌孢子的制备霉菌的孢子培养,一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。这是由于这些农产品中的营养成分较适合霉菌的孢子繁殖,而且这类培养基的表面积较大,可获得大量的孢子。霉菌的培养一般为25~28 ℃,培养时间为4~14天。2、种子制备⑴ 摇瓶种子制备摇瓶种子进罐,常采用母瓶、子瓶两级培养,有时母瓶种子也可以直接进罐。种子培养基要求比较丰富和完全,并易被菌体分解利用,氮源丰富有利于菌丝生长。原则上各种营养成分不宜过浓,子瓶培养基浓度比母瓶略高,更接近种子罐的培养基配方。⑵ 种子罐种子制备种子罐种子制备的工艺过程,因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级种子的制备。孢子(或摇瓶菌丝)被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量的菌丝,这样的种子称为一级种子,把一级种子转入发酵罐内发酵,称为二级发酵。如果将一级种子接入体积较大的种子罐内,经过培养形成更多的菌丝,这样制备的种子称为二级种子,将二级种子转入发酵罐内发酵,称为三级发酵。同样道理,使用三级种子的发酵,称为四级发酵。 五、保存方法1、传代保存法：培养基的浓度不宜过高,营养成分不宜过于丰富,尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种,则应在培养基中添加少量碳酸钙。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长,适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。3、悬液保存法：①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌,将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。②糖液保存法:适用于酵母菌,如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗处保存,可长达10年。除此之外,也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅胶保存法;④磁珠保存法;⑤麸皮保存法;⑥纸片(滤纸)保存法。5、常用的冷冻保存法：①低温冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃):低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便,也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多,有些可添加保护剂。此外,也可用φ5mm的玻璃珠来吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器内,再放入低温冰箱内进行保存的。②干冰保存法(-70℃左右):即将菌种管插入干冰内,再置于冰箱内进行冷冻保存。③液氮保存法(-196℃):是适用范围最广的微生物保存法。 微生物菌种查询网作为中国微生物菌种中心引航者，单位代为引进美国ATCC微生物菌种保藏中心，德国DSMZ菌种保藏中心，荷兰CBS菌种保藏中心，日本JCM微生物菌种保藏中心，包括其中的ATCC微生物细菌与噬菌体（18382）；细胞系和杂交瘤（4997）；真菌和酵母（58183）；原代细胞（146）；原生动物和藻类（2428）；干细胞（102）；载体，克隆与分子（18006）；病毒（3594）；核酸 - DNA / RNA（1350），引进进口微生物菌种货期短，质量保证，UPS国际快递运输。