Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖检测试剂盒

Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞增殖试剂盒

储存条件：4℃避光保存，长期储存置于-20℃，有效期见外包装。

产品介绍：

Cell Counting Kit-8简称CCK8（或WST-8）试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）显色反应的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 

WST-8 工作原理：在电子耦合试剂存在的条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物 （formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在 450 nm 波长处测定 OD 值，间接反映 活细胞数量。 

WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。首先，MTT 被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而 WST-8、XTT 和 MTS 产生的甲臜 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8 产生的甲臜比 XTT 和 MTS 产生的甲臜更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8 与 MTT、XTT 相比线性范围更宽，灵敏度更高。 

CCK 法广泛应用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等方面。

使用方法：

1. 细胞活性检测

（1）在 96 孔板中接种细胞悬液（100 μL/孔），建议可以设置 8 个细胞浓度梯度，每个浓度设置 6 个重复进行细胞铺板， 例如按照细胞个数 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板进行铺板。将培养板放在培养箱中培养过夜（37℃, 5% CO2）。

（2）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。 注：如产品有析出，可 37℃水浴处理，不影响使用。 

（3）将培养板在培养箱内孵育 0.5 - 4 h。 注：初次实验可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。 

（4）用酶标仪测定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干扰）处的吸光度。 （5）若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并将培养板在室温条件下避 光保存。24 h 内测定，吸光度不会发生变化。

示例：

图 1. CCK 8 检测 HeLa 细胞活性

2. 细胞增殖-毒性检测

（1）在 96 孔板中接种 100 μL 的细胞悬液，建议可以设置 8 个细胞浓度梯度，每个浓度设置 6 个重复进行细胞铺板，例如 按照细胞个数 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板进行铺板。将培养板放在培养箱中培养过夜（37℃, 5% CO2）

（2）向培养板加入 1 - 10 μL 特定的药物刺激。 

（3）于培养箱中孵育一段时间（例如：6、12、24 或 48 h）。

（4）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数）。 注：如产品有析出，可 37℃水浴处理，不影响使用。

（5）将培养板在培养箱内孵育 0.5 – 4 h。 注：初次实验可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

（6）用酶标仪测定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干扰）处的吸光度。

（7）若暂时不测定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室 温条件下。24 h 内测定，吸光度不会发生变化。

注：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加 CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然 后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的 空白吸收即可。

3. 计算公式

细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率 =[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测药物)的吸光度 Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测药物)的吸光度 Ab:空白孔(不含细胞和待测药物的培养基、CCK-8)的吸光度

注意事项

1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2. 使用96孔进行细胞铺板，如果培养时间较长， 一定要注意蒸发问题。建议采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、 水或者培养液。 

3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 

4. 本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。