液相色谱(LC)

处理岛津液相色谱工作站提示“未认证许可协议”的问题 前段时间使用岛津液相色谱仪的时候，不小心把电脑时间修改了，当天发现问题后就把电脑时间修改回了正常时间，但是过了两天发现岛津液相色谱仪的工作站无法打开了。如下图 提示“[12d4]未认证许可协议” 咨询工程师，工程师说要上门解决这个问题。 在等待工程师上面的期间，我猜测是电子加密狗出问题了，去电脑usb插口上面查找电子加密狗，结果没有找到电子加密狗。 这时候我猜测应该是使用电子授权，因为我修改时间，和他的电子授权冲突了，也可以说是他的电子授权算法有bug，导致无法打开工作站。 既然电子授权和时间有关系，我考虑是不是可以把时间再改到上次失误修改的时间试试，改完后，我发现工作站可以正常打开了。 时间不可能一直是错误的时间，否则会导致检验检测的日期错误，这是不被允许的。我又把时间修改为了当前日期的后一天，发现工作站可以正常打开，然后我又把时间修改为当前的准确日期，我发现工作站还可以正常打开。由此可以得出结论，如果电脑时间出现变化，软件就无法打开，岛津的工作站电子授权的算法存在严重的问题，也可以说是bug。如果电脑的cmos电池没有电了，每次开机时间都会出错，这种情况下岛津液相色谱的工作站要每次都打不开怎么办？不知道岛津有没有想到这个问题？

【仪器心得】岛津液相 使用心得 岛津液相色谱仪检测应用广泛，和大家分享一下LC20。 1.关于仪器的使用经验：LC-20A组成，仪器由LC-20AT溶液输送单元、SIL-20AC自动进样器、检测器、DGU-20A3R脱气机、CTO-20AC柱温箱组成。安装色谱柱：将色谱柱的入口连接到自动进样器入口端，色谱柱出口接入检测器的入口端（蓝色标记）。注意色谱柱的方向。参数设置，点击打开“LabSolutions”主项目图标，在LabSolutions主项目窗口中单击“仪器”图标再点击“选择项目”从中选择项目或单击“管理工具”>“项目管理”>“添加”项目名称后再重复上述操作。点击“仪器类型”图标选择“LC”,双击图标打开工作站的操作页面。 2.仪器的优点和不足在这说说液相的排气吧，如果输液泵没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开排液阀，使泵在大流速下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针管在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因可能是密封环磨损，需更换。在反相条件下，若检测样品的流动相是含有盐的流动相，则先用含有大量水的甲醇进行冲洗，再用纯甲醇冲洗并进行饱和。在正相条件下，若检测样品的流动相是含有少量水的流动相，则先用异丙醇过渡，再用正己烷冲洗并饱和。 3.总结关于检测器的寿命，检测本身没有问题，也要注意上面的耗材，比如紫外检测器中氘灯有使用寿命，自检通不过时应及时更换。在说说压力和流量不稳，原因可能是有气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入异丙醇内超声清洗，再用水超声清洗。

【仪器心得】液相色谱仪 安捷伦1260 使用心得 安捷伦液相色谱仪检测行业的小伙伴家喻户晓的，从1200到1260再到1290整体上区别不大，且模块可以灵活安装，今天和大家分享一下，也请液相的专家老师批评指正。 1.关于仪器的使用经验：每台设备的配制不一样，和大家介绍一下使用的这台主要部分，四元泵、自动进样器、紫外检测器、脱气机、柱温箱、工作站、电脑等组成。检测器部分型号和种类很多，以紫外的为例和大家介绍吧。打开计算机进入工作站的操作页面。把流动相放入溶剂瓶中，打开Purge（冲洗）阀（逆时针旋由紧至松即可）。右键单击泵，出现参数设定菜单，单击设置方法选项，进入编辑。设流速：1-5ml/min，单击确定；单击泵，出现参数设定菜单，单击控制泵选项，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，直到管线内无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有通道无气泡影响为止。 2.仪器的优点和不足溶剂入口过滤芯为消耗品，不可以使用超声清洗，可以使用40%硝酸浸泡过夜或用铬酸洗液淋洗，然后用水充分冲洗至中性，以重复使用，不错的选择。安捷伦的售后是一个优势，回复及时并且能联系上的客服都是行业的专家老师。 3.总结对于溶剂入口过滤芯堵塞，可能造成系统压力过低或压力波动，这个建议半个月清洗一次；其他季节，整体上近几年没有更换过太多的备件，这台用的是DAD的两个，维生素AE可以同时双波长检测，避免了重复二次前处理的问题。

【仪器心得】液相色谱仪waters 2695使用心得液相色谱仪两大品牌，安捷伦和沃特世占据了实验室的大半壁江山。刚接触沃特世时，因为之前用的安捷伦，所以在操作上总有些不适应。今天和大家分享一下。 1.关于仪器的使用经验：打开开机自检，打开电源开关，仪器开始自检（4-5min），待屏幕上方出现“Idle”自检完成。脱气和安捷伦的操作完全不一样呀，按“Menu/Status”键进入“Status”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。这个必要的时候还可以借助注射器的抽力来辅助一下。关于清洗柱塞杆按“Menu/Status”键回到“Menu”界面，按下排功能键“Diag”，然后再按下排功能键“Prime Seal Wsh”，“Start”，冲洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。然后就是一样了，没有管路进行操作，也可以同时进行。对于设备的拆解和安捷伦的没啥区别。都能够直观的看到里面的流路。2.仪器的优点和不足其实自己对于液相接触也只有安捷伦和沃特世了。所以个人的观点总是从安捷伦出发进行比较，所以也请大家批评指正不吝赐教呀。2695型号的设备在软件操作上面相对麻烦，尤其是在建立方法的时候需要注意的细节，操作的步骤都会耗时一些。但是从设备的精密度来看，沃特世2695很稳定。尤其基线能够快速稳定。压缩了设备平衡的时间。沃特斯也供应色谱柱，价格有高。有的实验为了迎合设备的使用，我们也不得不花高价购买耗材了。 3.总结检测器在头上总感觉有点不适应，更多的是安捷伦用习惯了。设备单单从价格上面看，进口产品尽然比同配置的安捷伦还要高，这点实验室在购买的时候也要综合评估一下。虽然耗材赠送了一些，但毕竟还是耗材呀。

上海伍丰EX1600高效液相色谱仪使用心得      个人认为伍丰的高效液相色谱仪在国产仪器中算是比较好的，单说性能指标，有的可能算不上什么，比如检出限指标就不算高，但它皮实、故障率少等优点在国产仪器中应该是比较突出的。      EX1600高效液相色谱仪刚上市没多久我们实验室就买了两套。一开始还是出现了点问题，泵上液不太好，流速不是太稳定，后来换了一组单向阀，用了很长时间该问题再没出现。仪器其它问题也较少，总体感觉比较皮实，使用感觉较好。      它的软件也有一些优点，比如它在界面中能实时看到氘灯能量，看到氘灯使用了多长时间。开机后氘灯不是马上点亮，是有一定时间间隔号才点亮。氘灯点亮或关闭可以在界面上手动操作也可以设定一个点亮或关闭时间，在规定时间内氘灯会自动点亮或关闭，操作起来也是比较简单，一学就会。这样关于氘灯的使用情况和实时状况一目了然，对使用、维修、维护、故障诊断等大有帮助。点亮或关闭功能也很灵活，比如平衡系统温度、冲洗系统、系统待机等不做检测的时候能尽量减少氘灯的使用，延长氘灯的使用寿命。这个氘灯使用或叫控制或叫状况功能总感觉很人性化，很实用，给人感觉很好。      另外像泵定时启动，定时停止工作等功能也是非常实用的，给检测、维护、平衡仪器、冲洗仪器等都是会带来很多方便的。      其实，仪器厂家更多的应该考虑使用者的使用状况，了解使用者的需求，尽可能给使用者使用带来一些更方便更实用的东西，帮使用者解决一些实际问题，让使用者使用起来舒心、放心。

氘灯使用达寿命时，会经常出现噪声变大，基线漂移大，需要很长的时间才能达到基线平稳等现象。参比池氘灯能量与样品池能量之间差异大，排除了流通池污染后，很可能是氘灯使用寿命到了。还有一个最直观的现象是仪器自检不过，氘灯反复点灯，却始终点不亮，这标志着氘灯使用寿命到了，直接更换氘灯即可。下面简述一下岛津2010CHT液相氘灯更换过程。按［VP］键，进入［VP］界面，按下［F2］键，进入［Parts Replacement］界面，输入［9］，按enter键，根据提示关闭仪器电源，拔掉电源线插头，关闭后待氘灯冷却30min后方可进行氘灯更换。（只有按照此步骤更换氘灯，氘灯使用时长才会归零）2.      打开面板，拆下白色连接头，用十字螺丝刀松开2颗螺丝，取下旧氘灯。3.      将新D2灯的缺口（红色圈起来的位置）对准定位针，使用十字螺丝刀交替拧紧2个D2灯固定螺丝。安装上白色连接头，关闭面板，氘灯更换完成。开启电源，重置氘灯使用时长即可。u  更换氘灯注意事项①关闭仪器电源，并拔下电源线插头，防止电击事故的发生和损坏仪器。②必须至少等待30min，使灯充分冷却，防止灼伤伤害。③氘灯暴露在灯罩外时，不要接通电源，避免眼睛受到紫外线伤害。④戴好护目镜，并在操作时穿戴好实验服。⑤不能用手直接接触氘灯石英罩，取新氘灯时需要戴上手套或使用软布，避免裸手操作。

浅谈岛津液相氘灯更换自2016年毕业，一直从事的都是药品检验工作，从最开始的理化分析，到后来慢慢接触到的仪器分析，接触了光谱及色谱相关仪器，但是只有液相色谱使用时间最长，用过岛津、安捷伦、waters及日立等液相。岛津的液相使用时间最长，用过手动进样的10Avp及自动进样的2010CHT，到现在使用的2030C，也算见证了岛津液相的更新迭代。今天我来谈一谈岛津2030C液相的氘灯更换。先谈一谈什么时候需要更换氘灯，氘灯的使用时长一般是2000h，但是有时候到了2000h后，氘灯能量仍然符合要求，还是可以继续使用的。我们规定每半年测试一次氘灯能量，符合要求就继续使用，不符合就更换氘灯。出现以下几种情况就需要考虑更换氘灯了：①氘灯不能一次点亮，需要反复点灯②在仪器其他状况正常情况下基线漂移严重③排除了其他原因后，正常进样不出峰④石英灯罩变黑(灯关毕及冷却后进行检查)⑤之前分析方法中从未出现过的非线形现象（光的吸收率不为线形）⑥查看氘灯的使用累计时间，如果使用时间过长，又出现不正常现象  下面谈谈更换氘灯的步骤：1.      在［Replacement Parts Selection］窗口中按下［D2 Lamp］，按下［Power OFF］。按下［OK］后将关闭仪器电源，关闭后待氘灯冷却30min后方可进行氘灯更换。（只有按照此步骤更换氘灯，使用时长才会归零）2.      打开控制器面板。拧松灯罩安装螺丝（A），拆下灯罩（B）。3.      拆下连接器（A）。使用十字螺丝刀拧松D2灯固定螺丝（B、2个），拆下D2灯（C）。4.      将新D2灯（C）的缺口（a）对准定位针（b），使用十字螺丝刀交替拧紧D2灯固定螺丝（B、2个）。5.      安装连接器（A）。将灯罩插入框架的狭缝（a）。拧紧灯罩安装螺丝（A），安装灯罩（B）。关闭控制器面板。6.      打开 （电源按钮）。仪器启动，输入登录通行ID Number并按下［OK］后，将显示［D2 lamp replacement］窗口。7.      选择［Next］。显示下一窗口，使用值将复位。将在维护日志中记录更换信息。确认使用值已复位后，按下［Finish］。8.      经过以上步骤，氘灯就更换完成了。这就是岛津2030C液相氘灯更换的过程，希望对各位网友有所帮助。

1、液相色谱常见问题－压力异常(1)压力是液相色谱中最重要的指标，要关注压力及变化。(2)保留时间的变化经常是由于压力不稳引起的。(3)不同流动相在相同流速和温度的情况下压力是不同的（粘度有关）。(4)记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的压力值。1.1压力异常问题－压力高Ⅰ、LC-20A压力高的标准是什么？  a：LC-20A 新仪器系统压力是多少？  b：流动相是什么？流速是多少？  c: 参考标准：水 1、0 MP 以下（1 ml/min）（注：进样器和检测器之间接双通）。注意柱子的压差（真实压力值）Ⅱ、怎么推断压力高的部件在哪儿？（首先排除柱子或保护柱压力高）  a：顺推法。  b：反推法。(注意检测器双通的堵塞或者管路被憋紧堵塞）Ⅰ、首先确认是保护柱或色谱柱堵塞还是系统堵塞(不能超声保护柱芯） Ⅱ、色谱柱堵时，选择合适的冲洗液，不建议反冲。特殊柱子以说明书为准。Ⅲ、系统堵塞，应确认是哪一部份堵塞，由前向后或由后向前逐部件进行排除。容易发生堵塞的部件(1)保护柱 。(2)泵的管路过滤器和泵头管路（LC-10ATvp出口单向阀到右泵头）。(3)混合器预混合室过滤器。（主混合器和预混合室建议不要拆洗）(4)某些细内径的系统管路。(5)自动进样器高压阀和细内径的出口管路（UFLC)。(6)自动进样器的进样口到高压阀管路（LC2010)(7)手动进样阀的定子堵塞。(8)检测器流通池半微量池的入口管和背压管。(9)自动进样针堵塞，（劣质进样垫）1.建议用户使用保护柱来延长分析柱的寿命。柱压高或者分析问题80％原因在保护柱，首先应该排除保护柱。不建议自己为用户填补柱子。柱子没有保修。泵的管路过滤器堵塞 更换周期 半年∽1年混合器预混合室过滤片 更换周期：半年－1年自动进样器堵塞高压阀转子：更换周期2年 转子槽磨损掉屑造成堵塞和吸样不准。 转子10万次不漏液（PEEK制，含盐流动相缩短次数）LC-2010 的进样口到高压阀的PEEK管1.2液相色谱常见问题-压力零Ⅰ、如果压力为零：(1)泵头中没有液体，充满气泡。(2)单向阀完全堵死。(3)吸滤头完全堵死。(4)排液阀没关上。(5)管路漏液。(6)主板或者压力传感器。(7)泵体锈蚀，柱塞杆不动或折断。(8)低压梯度阀滤网堵塞。Ⅱ、如果有压力但是压力比正常时低：(1)泵头有气泡。(2)柱塞密封垫漏液 。(3)管路漏液。(4)单向阀轻度堵塞。(5)单向阀磨损。(6)吸滤头堵塞(7)排液阀没关紧。(8)排液阀锣纹磨损或O圈磨损漏液(9)传感器故障1.3液相色谱常见问题－压力波动Ⅰ、压力波动主要原因：(1)泵头中有气泡。（建议甲醇赶气泡）(2)单向阀脏、堵塞、磨损。(3)单向阀非耐乙腈型(4)柱塞密封垫漏液。(5)柱塞杆磨损漏液(6)流动相有气泡。(7)吸滤头脏。(8)脱气机脱气不良。(9)泵参数值、原点位置不合适不准。(10)泵轴承磨损。（更换压力传感器及泵体要更改参数）。(11)LPGE不良。Ⅱ、各型号的泵压力允许波动范围（流动相为纯水）。1、0ml/min  日常运行标准(非安装标准):LC-20AD : 0.2 MPaLC-20AT : 0.3 MPaLC-20AB : 0.2 MPaLC-10ATvp : 0.5 MPaLC-10ADvp: 0.2 MPaLC-2010AHT: 0.5 MPa超声清洗零部件步骤：(1)纯水  15 min(2)纯异丙醇 15 min（低极性溶剂清洗）(3)特别脏的用5％硝酸15 min或者25％的磷酸（洗锈），再重复前面1、2 步骤。系统管路清洗步骤-管路脏或者堵的冲洗注意：不能接柱子！流速：  1 ml/min步骤时间(1)纯水  15 min(2)5％ 硝酸或 25％磷酸 60 min(3)纯水  15 min(4)纯异丙醇 60 min(5)甲醇 或 50％ 水/ 甲醇30 min建议定期清洗（1∽2月一次）2、液相色谱常见问题-漏液问题经常漏液的部件：(1)泵：柱塞密封垫（漏流动相）      排液阀      清洗垫（漏清洗液）(2)手动进样器：转子密封垫  自动进样器：进样垫              样品环(3)检测器：流通池堵塞（垫片损坏、透镜破碎）(4)柱子接头处：（接头松动，接头磨损，接头不匹配）3、液相色谱常见问题-基线问题3.1基线噪音大-毛刺基线噪音标准：SPD-10Avp/20A  20 uv    流动相  纯水 250nmSPD-M20A  50 uv   流动相  纯水  250nm 600nm原因：(1)流动相污染，使用低纯度溶剂。(2)流动相、检测器流通池内有气泡。(3)通过检测池的能量不够 (光路脏、氘灯老化、流动相、池子脏）。(4)没接好地线。(5)波长设定短（220nm以下）。(6)电源电压波动几十伏。(7)电路板故障。(8)仪器振动。3.2基线漂移－起伏和单向基线漂移标准：SPD-10Avp/20A:  600 uv /hour 纯水  250nmSPD-M20A: 2mv  /hour 纯水  250nm 600nm原因：(1)流动相污染，使用低纯度溶剂。(2)检测器的温度受到环境波动（风口，空调口）。(3)冲洗平衡柱子时间不够（半小时），柱子没恒温。(4)柱子或管路太脏。(5)波长设定短（220nm以下）。(6)特殊流动相温控影响。（离子对试剂需要恒温较稳定）(7)检测器要预热30min以上。4、液相色谱常见问题-进样精度问题 4.1手动进样阀 7725i  CV：10ul  6针  面积  RSD  1％(1)进样量不合适（10ul）。(2)进样针定量不准。（不熟练）(3)进样针有气泡。（慢提快打）(4)进样口转子针密封松动（用橡皮顶紧）。(5)进样针太细，插不紧。(6)转子密封垫脏、磨损、漏液。(7)定量环堵塞。(8)废液管堵塞或者位置不对。(9)进样的方法不正确。进样针用完以后要及时清洗，否则针会粘住。4.2自动进样器                    10ul  6针  面积  RSDSIL-10ADvp  SIL-20A    0.3  %  SIL-10AF        模式 A      0.5 %    模式 F    1 %SIL-10AP                        1.0  %(1)清洗液干了。（瓶子或管路）(2)没有排气（purge）或排气时间（25min)不够。(3)清洗液没脱气。（没有在线脱气机情况）(4)高压阀转子密封垫堵塞或磨损。(5)进样垫堵塞或磨损漏液。(6)非岛津的瓶及瓶垫。(7)针或定量环漏液或堵塞。(8)计量泵轴承螺杆磨损。(9)进样瓶拧得太紧。(10)死体积。（后面有介绍）  (11)吸样速度不合适。(12)样品稳定性（待审）(13)DIP TIME改变了，峰形不好，积分不准确。（周建华提）5、液相色谱常见问题-保留时间精度保留时间重现性标准： 10ul  6针  保留时间  RSD （连接色谱柱） 7725i 和自动进样器：  0.5 ％                                        (1)泵输液送液不正常（压力波动、气泡）。(2)柱温的变化（室温变化小于2℃）。(3)流动相组分挥发变化（封口膜）。(4)流动相的PH值不同，缓冲能力不够（样品影响）（低波长用磷酸盐，普通波长用醋酸盐。）(5)色谱柱平衡时间不够（C18,15cm 30min-60min）。(6)梯度洗脱未回初始流动相浓度比例或时间不够。(7)纯有机试剂与高盐流动相混合。(8)柱子问题。(9)低压梯度阀不良。(10)密封垫漏液，排液阀没拧紧。

普析通用L600高效液相色谱仪使用心得      说起普析通用，大家可能会想到该公司的原子吸收和紫外分光光度计，这两款仪器说起来在国内厂家中也算是不错的仪器。他们家仪器挺多，气相色谱、液相色谱也都有生产，其中L600高效液相色谱仪他们家也做了挺多年，下面就说说我使用他们这款仪器的一点小小心得。      这款仪器从外观看也算是挺漂亮的，还可以配置一款进口的自动进样器。下面我主要说说这款仪器的操作软件。该仪器的操作软件和国外那些厂家的有点像，每个功能都是分开做的。这种方式应该是属于多模块集成式的吧，主要模块分为仪器配置、控制采集、数据分析、诊断维护、报告编辑、日志查看、用户管理、信息备份等8部分。       这款仪器软件结构设计的挺花哨、看起来不错。它的优点是满足药典GMP认证、管理要求，各模块独立设计，功能很强大，该有的功能基本都有，使用起来比较方便。像数据分析、报告编辑、日志查看、用户管理、信息备份等模块可以脱机操作；数据分析、报告编辑和数据采集可以同时使用，没干扰不冲突。优点很明显，当然缺点也是有的，缺点（个人观点）是该软件界面多，功能强大，对使用者的要求也较高，使用者得有一定软件操作能力，对软件也得熟悉一些，否则很容易弄乱套，操作不下去或操作错误。另外该软件可能存在bug，或是与电脑能设备不太兼容，因为它有时会死机或不按设定参数执行，比如梯度洗脱有时就执行梯度的第一步设置，执行的是等度洗脱。      总之这款软件的模式和国外的较接近，算是比较超前的设计，也还算好用，算是好的方面吧。软件中存在一些问题可能也和技术水平有关，希望该公司加大技术投入，攻克难关，争取早日做出一款功能强大、使用方便、实用性强、操作简单、好用的软件。

高效液相色谱仪作为一种可同时实现分离检测的科学仪器，是目前实验室必备仪器之一，应用领域广，使用频率也很高，但是在使用过程中也避免不了遇到一些问题。近日我实验室ACQUITY Arc液相检测器也遇到了一些问题，从发现问题到解决问题也学到了很多知识，现分享给大家。实验室ACQUITY Arc液相系统配的是W2475荧光检测器，但是现在荧光检测器使用较少，已经很长时间没有开机使用。此次开机发现不能通讯，软件不能连接到仪器。起初以为是检测器流通池干了导致自检不通过无法正常启动，但是在多次冲洗流通池、反复开机重置检测器模块后问题依然存在。而且在软件界面色谱系统属性中显示检测器不正常，也没有了检测器的系列号，这显然不是检测器流通池的问题了。随后咨询了waters售后，售后确认是检测器主板纽扣电池没电了，需要更换纽扣电池，建议售后工程师上门，因为更换完电池还需要对检测器进行校正。检测器主板上纽扣电池是给主板储存序列号及检测器校正数据供电的，长时间不通电的话纽扣电池持续放电储存数据，如果没电了检测器上存储的数据就会丢失，导致开机自检不通过软件也不辨识，相当于忘了自己是谁，而且自检不通过检测器是不工作的也不通讯。考虑到上门维护的话周期可能会长决定自己动手。将仪器断电后，用螺丝刀先将仪器四周四个螺丝拿下，另外打开仪器前面还有两个螺丝，将这六个螺丝都取下来后抬起仪器上盖可以将上盖取下来。在主板上可以看到有一个纽扣电池，与电脑主板上的相似。开始想直接戴手套把电池扣下来，但是试了一下发现不安全，因为电池底座只有上下两个焊脚在主板上固定，直接扣电池的话有可能会把焊脚弄断，这样问题就更复杂了。之后决定用一个小的一字螺丝刀先将电池翘起来一点再拿电池，这样安全很多，也顺利拿下来了。又买了一个相同型号的电池安装上去，将上盖再重新放回去固定。本以为这就结束但没想到才开始，仪器上电后发现问题还是跟之前一样并没有什么改变，而且软件也没有自动识别检测器序列号，我们猜测测序列号可能需要自己输入，在检测器面板小键盘也找到了SN界面，开始不会输入，试了好几次才发现怎么输入。序列号输入后在软件色谱系统属性可以看到多了一个正常的带序列号的检测器，重新建了一个色谱系统，但是依然无法通讯，那就只剩检测器没有校正了。在网上找到2475检测器的使用手册，结合仪器面板提示没有归一化单位，就在检测器上进行归一化，当时并不知道有没有算操作成功。但是重新加载模块后竟然正常了，虽然正常了但心里还是没有底自己做的到底对不对，包括仪器性能到底如何也不知道，就重新咨询了售后，经过售后确认操作是对的，也检查了灯光能量，检测器性能也没问题，这才放心。此次维护检测器，事后觉得简单就是拆机、换电池、输入序列号、校正归一化，但是不熟悉的话就觉得无从下手。经过此次之后对检测器也有了更深一步的理解，也丰富了见识，而不是一有问题就让工程师来解决。

东西分析LC5510高效液相色谱仪使用心得      东西分析有LC5500、LC5510、LC5520几款高效液相色谱仪，LC5510算是一款新式仪器，性能指标也比LC5500好一些，外观感觉也挺漂亮的。下面主要从仪器性能指标和使用软件说说多年以前使用过挺长时间的这一款仪器的使用心得。      LC5510高效液相色谱仪性能指标和进口仪器比显得略低了点，和国产液相色谱比应该是中等水平吧。其中噪声、检出限、漂移指标一般，尤其是漂移，受温度变化影响较大，经常会漂移。泵流速不够稳定，系统压力高的情况下更为明显，有时也会漏液。这款仪器有一个好用之处就是使用时可以在软件控制、查看数据，也可以在仪器面板是操作控制和查看一部分数据，而且操作比较简单、方便，对于新使用者更容易上手。      LC5510的工作软件比较传统，就一个主界面，大多的操作如控制设置、采样、谱图积分、分析、出报告等设置、查看、分析计算等都是在这一个主界面完成，集成度很高，操作也较简单，像有的地方，比如标准曲线建立，数据还可以手动输入，对于初学者或是不熟练的实验员操作简单倒是比较使用。采样时也可以同时进行其他的操作，比如谱图积分、计算等，不受任何影响。这个也好也不好，好的地方是操作简单，甚至可以手动录入，已学，不熟练也能操作，操作省时间等，比较适合一些像饲料厂、小食品厂、学校等单位使用。不好的地方，登录没密码，所有操作都在一个界面有时操作会比较乱，不符合药典GMP认证，管理等体系要求，销售、使用会受一定影响。      这个有好的地方也有局限的地方，看客户需求吧，适合客户的对于客户来说就是最好的。

新手小白使用液相的心得体会在读研期间由于研究手性化合物，我开始经常接触安捷伦1260s系列的液相色谱仪，该色谱仪装配有各式各样的液相色谱谱柱（Chiralpak AD-H column, Chiralcel OJ-H column or Chiralcel OD-H column）。在使用过程中有一些注意事项，可以提高我们的工作效率。首先为了仪器的正常合理运转及其保养，应该将仪器放置在平稳固定的台面上，要求台面无振动，周围无辐射和磁场要保持干净无灰尘，仪器工作的温度大致范围要求是在25-40℃,因为流动相大多数是有机溶剂，我们还要保持室内有一些通风换气的设施设备。之后检查使用的流动相以及色谱柱是否准确无误，流动相我们一般选用正己烷和异丙醇，保持流动相的比例（正己烷：异丙醇=90：10）冲洗仪器，同时保证仪器使用时里面没有气泡才能进行后续的检测使用。由于检测时的样品多为复杂的混合物，色谱柱的材质又比较特殊，空隙较小，所以样品进样前要用有机溶剂溶解，之后用有机滤膜过滤，用来保证检测物质能顺利通过的同时也不堵塞色谱柱。检测时也要保持稳定压强，平衡好基线方便后续的数据处理。实验完成后，要把色谱柱冲洗干净，进样器也要进行大约十遍的冲洗，以便于下次使用时不会影响样品数据的准确度。在使用过程中我们也经常会出现一些问题，第一是因为打液相时压力一直上不去，后来发现流动相从手性柱里面流出来了，随即我们就关闭了机器重装手性柱，装的时候要要把两边的旋塞弄紧，导管要对准手性柱的孔；第二是打出来液相发现峰太大或者太小，我们一般控制峰高在200－1000之间，所以用量一般进5微升；第三是打液相发现峰连在一起这时候就要调整流动相比例，或者换手性柱。在解决问题的过程中我们对仪器的结构以及化合物的性质有了更多的了解，通过总结使用的经验技巧，也大大提升了我们的工作效率。一年前，通过疾控中心的考试招聘我有幸进入了理化检验科，对我而言是新实验的开始。科室的一些研究所涉及的仪器与我之前的工作有些相似之处，同时老师们对仪器的使用有着更深层次的见解，也向我们传授了许多经验技巧，实验操作的细节，使我在工作中受益良多。我相信，在以后的工作和实践过程中，我能对液相色谱仪的使用能有更加深入和全面的了解，进一步提升自己的能力！

安捷伦液相色谱（1100）+柱后衍生系统（PickeringPCX 5200）仪器使用心得安捷伦1100液相色谱仪购置于2005年前后，后来搭载一套Pickering的柱后衍生系统，主要应用于NY/T 761 中氨基甲酸酯的分析。虽然现在氨基甲酸酯分析主要用液相色谱串联质谱测定，但之前在大多地市级单位都还没配备液质质时，NY/T 761柱后衍生分析氨基甲酸酯是首选方法，也是目前农业系统监督抽查和风险监测的推荐方法，现在该方法已升级到国标GB 23200.112。安捷伦1100液相色谱仪在目前的实验室配置中应该属于老爷爷级，现在还能正常使用，足见当时仪器制造的扎实性。该款仪器最大的优点是操作简单，工作站界面图形化、人性化、趣味化，便于理解和上手，这是我们国产仪器应该借鉴的理念。该款仪器还有很多功能模块，能有多种组合方式，不断适应着新的工作挑战。我实验室的操作人员目前可能仅仅掌握了该仪器10%的功能，还有很多功能没能学习和掌握，这是遗憾的地方。该仪器的不足之处是我们当时配备的四元泵（比例阀），在流动相平衡时需要的时间很长，特别是甲醇和水的体系，容易混合产生小气泡。在仪器长时间运行时，保留时间会有轻微偏移（这也可能与我们的柱子的控温精度有关）。Pickering PCX 5200柱后衍生系统从接手到现在也10年了，这个系统的出错概率比较高，主要是长时间运行时，偶尔会停泵，或者是氢氧化钠那一路，或者是巯基乙醇那一路，我们的经验是该系统在运行之后尽量要用热水冲洗，热水冲洗后再用甲醇和水混合溶液冲洗，这样停泵的概率会减少很多。再一个是该系统在安装时有时会出现管路弯折或挤压，时间长了会导致泵的压力及整个液相系统的压力增高，柱后衍生系统运行时也会因为压力过高而停泵，需检查并重新布置管线。虽然现在柱后衍生系统在氨基甲酸酯分析中使用的越来越少，但我们认为柱后衍生系统在科研领域不可或缺，它与柱前衍生相比有着很多天然优势，如反应充分、稳定性高、重复性好、无基质效应等。另外在液质质、气质质对某个物质都没办法测定时，可以考虑柱后衍生，或者可以打开一扇新窗户，获得意想不到的效果。以上是抛砖引玉，如有不妥，欢迎拍砖。

Waters Acquity UPLC使用心得Waters Acquity UPLC是单位于2009年购置的，第一次使用超高效液相色谱，被超快速的分析时间震撼了。例如原来牛奶中糠氨酸检测一直用Waters 2695，糠氨酸极性强，10min左右就出峰了，但梯度程序却要运行时间40 min，因为要把牛奶中保留性强的基质洗脱干净不然会影响下一针样品，还要加上几分钟平衡时间；而UPLC 8 min梯度程序就可以搞定，分离度比2695还要好一些，大大提高了工作效率，节省流动相试剂，特别适合大批量样品检测。与传统HPLC相比，UPLC最大的优点就是快速、分离度好，以前建立、优化一个液相方法可能需要几天（多组分单针运行时间一般都需要几十分钟），UPLC多数半天就可以搞定（多组分梯度程序一般10 min都可以搞定），这主要得益于整个液相耐高压系统（该仪器可耐受15000 PSI）和亚2 um粒径填料色谱柱的高塔板数。但随之带来的问题是这种色谱柱特别容易堵，特别是像含蛋白、脂肪、磷脂等基质多的样品，有次接到几百批次大豆中大豆异黄酮检测任务，尽管前处理时样品已经经过C18 SPE小柱净化，然而进样不到一百次就发现系统压力超过15000 PSI，打开色谱柱前端发现筛板上存在明显油脂痕迹，应该是导致系统超压的主要原因，换新筛板后压力明显下降，但分离效果也出现一定程度下降，基本做完这几百个样品柱子就不能使用了，可见亚2 um色谱柱抗污染能力确实比普通5 um柱子差一些，而且UPLC单根色谱柱价格也要比HPLC贵不少。所以对于预算充足、样品量很大的单位UPLC可以大幅提高工作效率，但从成本-效益角度考虑，普通HPLC更适合像企业内部实验室等需要严格核算投入-产出比例的实验室，因为UPLC能分析的组分普通HPLC也完全能够胜任，只不过需要的分析检测时间长一些、流动相消耗多一些。

安捷伦液相色谱仪使用分享

Agilent 1260 Infinity LC -- 无限信心1.    简介        安捷伦科技公司是惠普公司的子公司，于 1999 年 11 月 18 日打破了硅谷历史上规模最大的首次公开募股 (IPO) 的记录。从 IPO 中筹集的 21 亿美元与创始人 Bill Hewlett 和 Dave Packard 于 1938 年开始的 538 美元营运资金形成鲜明对比。从加利福尼亚州帕洛阿尔托的一个小车库，到为全球 110 个国家/地区的客户提供服务的员工, 安捷伦在通信、电子、半导体、测试和测量、生命科学和化学分析行业拥有悠久的创新和领导地位。        安捷伦1260 Infinity系列新品于2010年7月发布。1260 Infinity LC 提供更好的快速高分离度的分离能力，将 RRLC 的性能推向新的水平。1260 Infinity 单元泵和四元泵系统最高耐压 600 bar ，可轻松使用亚二微米填料或表面多孔层填料（新型 Poroshell 色谱柱填料）的 3.0 和 4.6 mm 内径色谱柱。 1260 Infinity 二元液相色谱采用高压溶剂混合，在 600 bar 的压力和最高 5 mL/min 的流速下仍可具有卓越的梯度精度，由于系统延迟体积更低，因此非常适合使用窄径柱。    此外，全新的 1260 Infinity 二极管阵列检测器将 UV 灵敏度提高了 10 倍，从而使色谱峰的检测和积分更加准确。    1260 Infinity LC 可使 HPLC 和 RRLC 方法完全兼容，既可运行现有方法，同时系统随时又可以在需要时换用现代色谱柱技术。 1260 Infinity 四元液相色谱还包括一款具有 100% 生物惰性的液相色谱系统，可在 pH 1-14 的最宽 pH 范围内使用。    1260 Infinity LC 将让常规液相色谱的用户充分感受 UHPLC 技术的高性能。图1 1260 G1311C+G7129A+G1316A+G1314B+FLD2.    背景    第一次接触1260是在2014年4月11日，因为我还保留着当时安装时的验收报告。之前只用过岛津的20A和10A，手动进样+N2000工作站。用了1260+Chemstation后才知道原来还能这么干。    安捷伦对1200 Infinity系列 LC提供了很全面的应用手册，用户可以很方便的查询很多信息图2 丰富的手册图3 手册中的信息3. 硬件    G1311C四元泵可是在线混合流动相，不用再手动配制也免去配制好的剩余流动相的贮存问题。G1329B可以实现不同体积进样，而且可以实现很好的平行性。且推杆速度可调，可以针对不同粘度的样品设置不同的进样速度。图4 进样速度G1329B 还可以实现程序进样，可以用于添加内标（液相用内标法少），一次进多个样品，也可用来做柱前衍生。安捷伦官方提供的氨基酸分析包既是用自动进样器做柱前衍生。图5 进样程序G1314F检测器同样可以实现时间程序。比如有两个化合物，先出峰的一个最佳波长为210nm，另一个为330nm。如果想同时测定这两个化合物，就可以设置初始波长为210nm，等第一个峰出来后，再切换只330nm来实现。另外G1314F同样可以做波长扫描，早目标峰刚出来时停泵，然目标化合物刚好在流通池内，此时使用时间程序的波长扫描功能对化合物做扫描。然后提取光谱图来判断最佳检测波长。同时可以实现关灯冲洗系统，只需设置一方法，在方法中设置取消选中“采集期间需要开启灯”。4. 维护液相最怕的就是堵和漏，所以常做的维护也是针对这两方面的。安捷伦也有全面的维护手册，维护视频。图6 维护视频Labadvisor可以很方便的对系统做EMF计数检测，硬件测试，固件更新等操作图7 固件更新图8 EMF计数器图9 各种测试另外，1260不少部件和1100通用，我曾经用1100的电源替换了1260的电源。可以参见安捷伦1260 G1316A柱温箱“心脏骤停，那就更换一颗老心脏”https://bbs.instrument.com.cn/topic/7890124。不管是DAD还是VWD，也都支持第三方的灯，只需要取消选中“仅使用有标记的灯”即可。1260搭配Chemstation真是液相分析的利器。再加上第三方公司提供的硬件，可以在手机上实时监测仪器状态。图10 状态监控5. 不足    1260的柱温箱G1316A柱温箱如果装250mm的柱子，再加上保护柱的话，会有点小，不好装进去。当然安捷伦提供的保护柱是带一根细管子的，可以弯起来。    Chemstation 只能提供流动相预警，不能估算运行当前序列流动相是否充足，也不能估算废液瓶剩余体积。    G1311C四元泵的密封垫清洗组件为选配，如果不选配都不能手动清洗。好吧，这些都是小问题，用了1260后再也不想用手动的20A和自动的16A了。

安捷伦1260InfinityⅡ使用心得    当时是中药材第三方检测实验室刚成立，样品量比较多，一次买了两台安捷伦1260InfinityⅡ，配了三个不同的检测器（示差检测器、紫外检测器和二极管阵列检测器）。最早用的是岛津液相，可能顺手的习惯问题，老是觉得安捷伦的这款不是老好用。下面就我使用过程中的一些心得跟大家交流：使用过程觉得1260InfinityⅡ属于普通液相和超高效液相中间的一款仪器。使用过程中要注意以下问题：1. 泵的维护：    ①关机前务必冲洗所有通道 ②更换排液阀虑芯 ③超声清洗或更换主动阀阀芯2. 检查溶剂过滤器：①拧开脱气机入口管线，此时溶剂会因为重力流出，溶剂过滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出；② 查看过滤器是否变色；③ 临时取下过滤器，检查柱前压力是否正常。 注：溶剂过滤器清洗方式？将堵塞的溶剂过滤器从瓶头组件中拿下。将堵塞的过滤器放在装有30%硝酸的烧杯里浸一小时再用二次蒸馏水彻底冲洗过滤器。将过滤器重新装好。 注意：不要使用没有安装溶剂过滤器的系统，容易堵塞系统。3. 排气阀内的过滤白头更换维护   使用纯水作流动相，打开Purge阀，流速5mL/min，观察系统压力 ，如果压力过高，应该更换。4. 柱温箱使用注意事项：    连接的管路尽量短，防止热扩散及峰增宽。 5. 示差检测器使用注意事项：    示差检测器是比较不容易稳定的使用时①正确放置溶剂瓶和废液瓶（废液瓶高于检测器）；②保证环境温度稳定，无气流干扰；③保证检测器的温度恒定； ④流动相要使用预混好流动相，单通道使用。    用了几年发现越来越顺手，再解析软件比较好用，比较智能化，总之仪器的使用重在维护。为了避免系统可能导致鬼峰， 杂峰保留时间变化等各种问题，建议定期使用“水-异丙醇-水”冲洗维护系统。

Waters Alliance 2695使用心得Waters Alliance 2695是单位在2003年左右购买的，当时也是Waters最先进的液相型号之一，这里要说一下我们单位是 Waters液相色谱系列忠实的簇拥者，从上世纪80年代的手动进样液相就是Waters的，到后来购置的TQ MS、TQ-S液质系列，清一色Waters家族的，不得不说Waters一直都是液相色谱领域的开拓者和行业领军者，如现在广泛应用的超高效液相色谱（UPLC）最早就是Waters提出并商用的。我们单位这台Alliance 2695配备的检测器是二极管阵（PDA），可以通过全波长扫描查看三维谱图，在没买液质前对于阳性/假阳性判定有很大帮助。我印象比较深的一次是客户送检的酱油产品，样品中苯甲酸的保留时间和标样重合的非常好，但产品标签上并未标识添加了苯甲酸钠，按理说国家有明确规定使用的食品添加剂一定要在标签上有明确标识，否则会遭到严厉处罚，而且苯甲酸钠属于允许添加的范畴，企业没必要承担这类风险，所以初步判断应该是“假阳性”。分别打开样品和标样的“3D”全波长图谱，果然发现标样是在230 nm波长处有最大吸收，而样品的最大吸收波长显示是在254 nm附近，再通过把标准品加入到该样品中，发现“苯甲酸”位置处的峰出现小分叉，后来换长的色谱柱该“分叉”有变大的趋势，说明样品中确实存在干扰苯甲酸的基质，导致出现“假阳性”，所以在没有质谱的情况下对于“阳性”判定一定要慎之又慎。这台液相已经服役马上就20年了，非常皮实耐用，只不过后来购买了UPLC，一些新物质分析方法开发基本都转到速度更快、分离效果更好的UPLC了，但对于一些基质较脏，进UPLC容易堵的样品还是用2695分析更省心，前提时真不能着急。我想像2695这样的普通液相将来仍然会有很大的市场，毕竟从成本、性价比等方面考虑，HPLC仍有很大的优势。

单位的液相安捷伦1260使用了近6年了，一直是单位最累的机器，最近终于扛不住了，出了点小问题。废话不多直接上报错图按照提示重启，还是这个问题，自检过不了，进样泵地方机器嗡嗡异响没办法只好打电话找400的售后工程师，按照工程师的指导又是冷启动，又是擦这洗那的都没法解决。工程师最后说建议我们找他们的售后报价吧，需要上门维修！！周一报价单发过来了！总计1.2w！！啊 ！上门维修费，配件费8000多what？！作为一个资深液相爱国使用者，这钱怎么也不能让漂亮国赚走啊于是乎自己试着拆下来，多方打听，又打听，终于问到了一个很厉害的维修工程师，指导我说这个东西一般很难坏掉，你自己修一下 我给你说着。于是小编鼓起勇气开始拆卸，先找到维修工具包，安捷伦这点还是挺人性的，几乎所有用得到的工具都给配齐了。然后准备拆卸先把这个白色管线的连接螺丝拧下来， 再把下面的那个小的金属的连接螺丝拧下来（专业名字叫啥？定量环？还是啥？）然后就是这个泵头左右的两个螺丝拧下来 !划重点了！切记！一定要左边拧一下 右边拧一下，这个螺丝拧的很紧，最好是男同志来拧，快拧出来的时候按住泵头，因为是弹簧的所以很容易蹦出来，当然也不用太担心弹簧压得不太紧，顶多螺丝掉落一地。不过这个地方还是注意为好。  取下泵头，反面往里用力按压，看能不能按进去，我们这个就是这里出了问题 按不动，所以泵卡住了 就一直报错（也是后来才知道的）。这个地方忘了拍照，泵头取下来的反面有两个螺丝，拧下来，就能取下柱塞杆， 密封垫的位置有三个螺丝都很好拧，工具也在工具包里，（光顾着维修了，这也忘了拍照，小伙伴这里有问题可以私信我）轻轻取出柱塞杆，甲醇超声清洗，密封垫超声清洗，然后按照原来的步骤安回去。 这里就又有学问了，其实为了防止弹簧压缩，可以先打开lab advisor软件就是桌面上一个烧杯一个扳手的那个图案。  打开后连接仪器上图连接以后打开做下栏的仪器维护，然后点击维护位置点开进样器模块就会出现上图，然后把更换针座和活塞点成是！ 那个活塞就会自己弹回机器里。 然后把泵头安装好，这个地方一定要左拧一下 右再拧一下！切记！一定要拧的特别紧，然后点这个lab 软件的下一步 ，等稳定了 返回，然后再把白色的螺丝和下面那个螺丝拧紧，就安装完毕。 然后重启！自检通过！完美！省下1.2个w。总结：仪器用久了因为样品和使用环境等多方面原因总有这样那样的问题，局部发生黏连或者被污染了，甚至卡主了什么地方都会出现问题，遇到问题不要慌，先拍个图，再问问工程师，然后再打听打听别的同行！实在没办法了再去找售后吧！

刚踏入工作岗位，小白一枚，接触了液相色谱。在校期间学习了液相色谱的工作原理和注意事项，实验课上进行了标准曲线制作，仅此而已。工作后，通过实际检测项目的开展，和细心指导的单位老师的培养，对于液相色谱的了解更加深入了。通过工作多年的实践积累，正好有仪器信息网的本次线上活动，在工作之余，总结凝练了一些经验心得，在这里分享给大家，希望对大家的工作有一定的帮助：一、液相色谱仪器发展简介液相色谱仪根据所要分析的化合物性质的不同，可以选择不同类型的检测器进行检测。同时因检验检测效率要求的不断提高，该类仪器已逐渐向超高效液相色谱发展。    二、使用心得1理论联系实际：使用液相色谱仪器之前，要做好理论知识的学习和积累，如它的工作原理、仪器结构、关键部件、色谱柱、流动相等方面；之后如有相关检验检测项目，建议开展一两项，检测的样品量可以由少至多，通过实际操作实践，进一步理解理论知识；在此基础上，如有相关仪器公司、网络培训、单位内部培训等，建议再进行专业系统的知识培训，对自己以往掌握的知识进行查缺补漏，进一步丰富知识树。2遇到问题多思考，多与工程师交流：在实践操作过程中，难免会出现各种状况，包括压力过高、压力过低、不进样、进样器堵塞等情况，遇到问题建议第一时间回忆仪器经历了什么，与本次出现的这种状况是否有关系，找到可能的问题所在，通过自己动手、查找资料（一些仪器公司有专门的维修维护操作模块，或者一些相关视频）、咨询工程师等，对怀疑的问题所在进行检查或维修等操作，使得仪器恢复正常。因每家仪器的具体结构，易出状况等各不相同，所以建议出现问题自己不能解决时，及时联系工程师，他们处理的状况比较多，经验也更为丰富，可以更好的进行指导。3要把液相色谱仪看做是有生命的个体，待测成分在仪器中要以流动的状态进行思考：尽管我们工作中所使用的仪器是没有生命的，但还是建议大家把它内部的相关工作想象为动态的过程，比如说进样的过程想象为一个生命体吃饭的过程，流动相载着样品经过色谱柱、检测器等，想象为生命体摄入的食物经过体内相关器官，当出现柱压过高情况，想象为脑梗等，这样对于一些故障等就更容易理解，也有助于我们快速的解决。