人卵巢癌细胞带荧光素酶的性质与用途及生产工艺！

               人卵巢癌细胞带荧光素酶的性质与用途及生产工艺！

一、细胞介绍

SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到。 此细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。

二、产品信息

平台编号：Bio-132995

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：SKOV3/LUC

中文名称：人卵巢癌细胞带荧光素酶；SKOV3/LUC

规格：T25

特征特性：SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到此细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。SKOV3/LUC 是SKOV3的稳转株！

培养条件：McCoy's 5A+10%FBS

传代方法：1：2传代

冻存条件：无血清细胞冻存液

备注：本库的细胞系（株）仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的。使用者不得将本库细胞系（株）转让给第三者。

用途：荧光标记细胞

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、细胞特性

1）来源：卵巢腺癌，腹水转移

2）形态：上皮细胞样  贴壁生长

3）含量：>1x106  细胞数

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5) 用途：仅供科研使用。

四、细胞的运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

五、细胞接收后的处理方法

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。

六、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备：

1）准备McCoy's 5A培养基；优质胎牛血清，10%；双抗1%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入 4mL 培养基混合均匀。在 800-1000RPM 条件下离心 4-5 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入 T25 培养瓶中培养，补加培养基至 6ml。24-48h 后换液。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加 1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，加 1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按 1：3 到 1:4 比例分到新的含 6ml 培养基的新皿中或者瓶中。

注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

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