CTLL-2小鼠T细胞的处理方法与培养步骤！

                       CTLL-2小鼠T细胞的处理方法与培养步骤！

一、知识概述

T淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞（胚胎期则来源于卵黄囊和肝）。在人体胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干细胞或前T细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。T细胞是相当复杂的不均一体、可将T细胞分成若干亚群，其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4。通过与MHCⅡ递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。

二、产品信息

平台编号：Bio-73272

规格：1×10⁶Cells/T25培养瓶

细胞信息：CTLL-2

细胞名称：CTLL-2小鼠T淋巴细胞

规格：T25瓶或者2ml冻存管

生长特性：悬浮生长传代比例：持细胞浓度在1×105~2×106/ml

培养条件：90%RPMI-1640，10%胎牛血清(优质)，100U/ml rmIL-2，100U/ml双抗，37℃,5%CO2

冻存条件：70%基础培养基+20%FBS+10%DMSO

细胞用途：仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗

用途：种属鉴定报告

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、冻存细胞接收后的处理

1）干冰运输，收到细胞后推荐直接复苏1管，另一管放入-80度冰箱保存过夜后转入液氮，细胞直接转入液氮暂存可能导致细胞复苏率降低。

2）收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

四、复苏细胞接收后的处理

1）收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2）在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片2~3组以及培养瓶外观照留存。

3）75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，镜检观察细胞密度未达到80-90%时，将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1000rpm离心5min，离心后弃去上清，用新鲜完全培养基重悬后加入T25培养瓶或60mm皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基。

4）如您收到细胞7天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

注：发货用培养基不可再次用来培养细胞

五、细胞培养方法

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

①收集所有细胞悬液，1000rpm离心5min，小心弃去上清；

②加1-2ml新鲜完全培养基吹匀重悬后按照1:2比例加入2个T25培养瓶或60mm皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基；

注：第一次传代推荐1:2传代，后续可根据细胞生长以及客户需求自行确定。

2、细胞复苏：

①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml新鲜完全培养基吹匀，将细胞悬液加入T25培养瓶或者60mm培养皿中，补加适量培养基，T25培养瓶加6-8ml培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存

①收集所有细胞悬液，可细胞计数，1000rpm离心5min，弃上清；

②加入配制好的冻存培养液重悬细胞，冻存液的添加量按细胞最终浓度为1~10×106/ml添加。

③将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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