Nature|国产新一代CAR-T技术治疗肿瘤获完全缓解

近年来，嵌合抗原受体T细胞疗法发展迅速，在癌症治疗中显示出巨大潜力，FDA也先后批准了数个CAR-T疗法上市。

然而，CAR-T的局限性也非常突出，生产过程复杂、成本高昂、制备周期较长，而且还存在潜在安全性问题。目前的CAR-T制备过程中使用的病毒载体尤其值得关注，慢病毒载体的随机插入可能会导致潜在的致癌风险。此外，机体对病毒递送的DNA的特异性反应会阻碍CAR的表达，而且，病毒的制备本身会产生高成本。

目前，有研究采用转座子系统和mRNA转导的策略，来构建非病毒载体的CAR-T细胞，但依然存在随机整合和CAR表达低效的问题。

因此，如果能使用非病毒载体实现高效的、定点插入的CAR-T细胞制备，将是CAR-T细胞疗法的重大突破。

2022年8月31日，邦耀生物与华东师范大学、浙江大学医学院附属第一医院合作，在国际顶尖学术期刊Nature上发表了题为：Non-viral, specifically targeted CAR-T cells achieve high safety and efficacy in B-NHL 的研究论文。

该研究通过 CRISPR-Cas9 基因编辑技术开发出了非病毒、基因特异性靶向的 CAR-T 细胞，并在人体临床试验中证实该 CAR-T 细胞在治疗复发/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤（r/r B-NHL）中的安全性和有效性。

该研究中使用了邦耀生物搭建的具有自主知识产权的非病毒定点整合CAR-T平台——Quikin CART®。该平台可在不使用病毒载体的情况下，通过一步制备获得基因组定点整合的CAR-T细胞产品，具有成本低、制备时间短、工艺简单、安全性和有效性高等优点。

据悉，这也是国内首个在 Nature 期刊发表的CAR-T研究成果，既代表邦耀生物在CAR-T领域取得了巨大的突破，也意味着邦耀生物已成功迈向基因和细胞治疗的国际第一梯队。

2020年5月，在浙江大学医学院附属第一医院开展了全球首个“PD-1敲除非病毒定点整合CD19-CAR-T细胞治疗复发/难治性非霍奇金淋巴瘤的临床试验”中，该产品体现出了出色的临床安全性和有效性，首例接受治疗的患者至今已疾病完全缓解（CR）超过2年。

Quikin CART^®全新升级，更加快速高效

传统CAR-T产品的制备主要通过病毒载体来实现，这会带来如下几个问题：

一、由于病毒采用随机插入的方式将CAR序列整合到细胞基因组中，可能会改变正常基因的表达，因此存在潜在的致瘤风险，并且通过这种方式制备获得的CAR-T产品均一性很低；

二、从生产工艺来看，传统CAR-T产品的制备时间都比较长，目前上市的几款CAR-T产品制备时间约为15-28天，这极大增加了患者等待用药的时间，也意味着这样的CAR-T产品无法用于肿瘤进展非常快的患者；

三、极大增加了生产成本，从目前在美国上市的几款CAR-T产品来看，均定价在37.3-47.5万美元之间，折合人民币为256-326万元。2021年在中国批准的首款CAR-T产品奕凯达顶尖120万元人民币，创造了国产药的定价纪录。

相较而言，Quikin CART®可以有效解决使用病毒载体带来的这几大难题，展现出了巨大的优势。定点整合可以让每个CAR序列都精确地插入到基因组的特定位点，能避免随机插入导致的致瘤风险，最大程度保证了CAR-T产品的安全性和有效性。只需一步制备，即可同时实现CAR的持续性表达和T细胞内源基因的调控，大大缩短了整个CAR-T产品的制备时间，得以让更多患者受益。另外，使用非病毒生产工艺还可以极大减少因使用病毒载体带来的高昂成本。

打破复发难治枷锁，为更多患者点燃希望

非霍奇金淋巴瘤是一种原发于淋巴组织的血液系统恶性肿瘤，占所有淋巴瘤80%-90%，虽然患者在初次治疗后疾病得到缓解，但之后往往出现复发。尽管已有CAR-T产品获批用于复发难治性非霍奇金淋巴瘤的临床治疗，可是总体疗效依然有限。PD-1/PD-L1信号通路是抑制T细胞功能的重要免疫检查点，有不少研究报道了PD-1敲除可有效增强CAR-T细胞的功能。

因此，邦耀生物利用Quikin CART®平台开发了靶向CD19的非病毒PD-1定点整合CAR-T产品（BRL-201）。研究团队构建了包含4-1BB和CD3ζ的抗CD19 CAR序列（命名为19bbz）。然后将其选择性靶向基因组中的安全位点AAVS1，检测结果显示CAR序列在AAVS1位点的平均整合效率为10%，最高达19.8%。

在临床前研究中，相比于慢病毒感染和结合基因编辑技术敲除PD-1的CAR-T细胞，BRL-201无论在PD-L1高表达还是低表达的肿瘤细胞中，都显现出更强、更持久的杀伤效果，小鼠生存率得到显著提高。

机制研究表明，Quikin CART®技术本身能显著提高记忆性T细胞的比例，且PD-1表达下调可以有效增强T细胞的抗肿瘤免疫功能。在开展的BRL-201治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤临床试验中，8例患者接受治疗后，未观察到CAR-T相关的神经毒性和2级以上细胞因子风暴，证明了BRL-201具有出色的临床安全性。

根据检测结果显示，CAR-T细胞回输后能在患者体内快速扩增并持续较长时间，接受治疗后87.5%的患者获得了完全缓解（CR）的效果，所有患者均对治疗响应，客观缓解率（ORR）为100%。迄今，接受该CAR-T疗法的患者无癌生存期最长已超过2年，目前仍处于疾病完全缓解的状态。值得一提的是，无论是针对PD-L1高表达肿瘤患者的治疗，还是在CAR-T细胞回输剂量和阳性率较低的条件下，BRL-201均显示出了良好的疗效，证明了其具有强大的肿瘤杀伤能力。

BRL-201在临床上体现了出色的安全性和有效性

值得一提的是，加州大学洛杉矶分校的 Justin Eyquem 教授和 Nature 资深编辑 Victoria Aranda 高度评价了这项研究成果：全面系统的临床前研究，成功开发了非病毒定点整合CAR-T疗法，并报道了首个PD-1下调定点整合型CAR-T细胞的临床试验结果。研究人员在临床治疗中观察到了高比例的肿瘤完全缓解率，且未发现严重的毒副作用，这一令人鼓舞的结果显示出这种CAR-T疗法具有出色的临床安全性和有效性。研究人员同时也证明了非病毒定点整合T细胞治疗在临床应用的可行性。这一技术创新为未来更多基因靶向修饰CAR-T疗法的发展奠定了坚实的基础，对领域发展具有重要的推动作用。

论文链接：

https://www.nature.com/articles/s41586-022-05140-y