HALO-2.7 PFP色谱柱技术特性

　　●通用的UHPLC色谱柱既可用于UHPLC也可以用于传统的HPLC设备

　　●选择不一样的键合相可以实现其他种类的键合相不能完成的分离

　　●特别适用于分析碱性化合物和卤代物

　　●在高含水流动相条件下实现使极性化合物的保留和分离

　　●稳定的键合相提供优异的耐用性、长的柱寿命加之极低的流失适用于LC/MS

　　●碱性去活使其分离碱性化合物时具有良好峰形

　　●温和的反压给UHPLC设备施加很小的压力，并且允许此类UHPLC色谱柱用于传统HPLC仪器

　　●2 μm筛板的使用减少很多由于筛板堵塞导致压力升高带来的不便，并且使HALO色谱柱比亚2 μm颗粒填充的色谱柱更容易使用

　　HALO Fused-Core®颗粒技术使在传统HPLC或者UHPLC设备上实现超高速、高分辨的UHPLC分离变得很容易。目前，用五氟苯基(PFP)填充的HALO色谱柱为达到最高要求的分离提供了一个广泛而又强有力的选择性。HALO PFP特别适合卤化物、硝基芳香族化合物和极性化合物的分离。当C18 或者C8 没能得到满意的分离效果时，则可以考虑HALO PFP。HALO PFP色谱柱也适用于需要高比例水相流动相的高水溶性化合物的分离，而且对于强碱性物质比C18相的保留更强。

　　HALO PFP运用专有的化学键合方法达到极好的柱稳定性和很长的柱寿命。HALO PFP超低流失的性质非常适合用于LC/MS。正如所有HALO柱的固定相一样，超纯试剂、“B型”硅胶、密集。键合技术和完全封端的组合产生出一种对碱性化合物能够产生极好峰形的碱基去活固定相。

　　分离机理

　　使用HALO PFP色谱柱的反相保留机理主要是受氢键和偶极作用影响。然而，π–π作用和弱疏水作用经常对色谱柱的保留和选择性有影响。此外，极性五氟苯基基团使HALO PFP适合用于亲水色谱的。

图1  HALO PFP键合相示意图

图2  HALO PFP 产生和C18 不同的选择性

　　色谱条件：

　　色谱柱：4.6×50 mm

　　流动相：30/70 water/MeOH

　　温度：40 ℃

　　流速：2.0 mL/min

　　压力：215 bar

　　检测：UV at 254 nm (VWD)

　　样品：

　　1. 丁基苯

　　2.苊

　　3.1-苯基萘

　　4.芘

　　图2 表明HALO PFP与HALO C18选择性不同。在HALO PFP 上，1-苯基萘和芘的分离效果更好是由于π–π相互作用。在HALO C18上，较强疏水键相互作用导致丁基苯的保留时间较长。这种相互作用导致的选择性的差异是通过丁基苯和苊在HALO C18与HALO PFP上的洗脱顺序的改变表现出来的。

　　中性芳香族化合物的分离表明HALO C18与HALO PFP选择性的差异。由于PFP提供的π-π作用和C18相较强疏水作用导致在两相中峰宽和出峰顺序的显著差异。HALO PFP具有与HALO C18的不一样的选择性，使其可以用于建立分析方法。

图3  HALO PFP 的多功能性，可以用于HILIC模式下碱性药物的分离

　　色谱条件：

　　色谱柱：4.6×50 mm

　　流动相：12/88 0.01 甲酸铵缓冲盐，pH=3/乙腈

　　温度：30 ℃

　　流速：1.5 mL/min

　　压力：75 bar

　　检测：UV at 254 nm (VWD)

　　样品：

　　1. 苯肾上腺素

　　2. 曲唑酮

　　3. 普鲁卡因

　　4.阿莫沙平

　　5.心得安

　　6.去郁敏

　　在反相模式下弱保留的高极性化合物在HALO PFP的亲水模式下能被强保留。对于LC-MS应用而言，亲水色谱经常具有较高的灵敏性，归因于流动相中较高浓度的有机组分。

　　图3 说明了HALO PFP多功能性，用亲水模式分离碱性药物。对于在反相模式下弱保留的极性化合物而言，这种模式特别适用。此外，通常亲水模式流动相中具有比反相模式更高比例的有机组分，因此，增强了LC/MS的灵敏度。

　　HALO色谱柱技术咨询：

　　通微苏州分公司-苏州环球色谱有限责任公司 李静博士

　　江苏省苏州高新区滨河路1326号125 邮编: 215011

　　电话：0512-68054587、68312081-8022

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　　附录：HALO色谱柱及熔融核(核-壳)技术简介

　　熔融核技术是由杰克柯克兰(J.J.Kirkland)所发明的。柯克兰教授被公认为是HPLC的创建者之一，并且他的研究和贡献是被色谱界人士广泛认同的。他发表了超过150份主要研究文献和6本书籍。柯克兰博士还拥有30项专利，并且在色谱领域已经获得了很多著名奖项。

　　HALO柱填料不是按照常规方式制作的。相反，HALO UHPLC所填充的填料是利用Fused-core(熔融核/核壳)技术制备出来的，可以实现超快速色谱分离，同时避免了UHPLC的一些不足之处。

HALO 熔融核颗粒

　　Fused-core 填料技术是由 Jack Kirkland 发明的，该类填料最初是为了使得UHPLC色谱柱比常规2μm填料UHPLC色谱柱更坚固可靠。正如它的名字一样，Fused-core 即是将多孔硅胶壳熔融到实心硅胶颗粒表面。

　　HALO色谱柱所产生的反压明显低于UHPLC色谱柱。这样的低反压可以使仪器承受压力降低，使操作起来更为方便。正是HALO柱适度的反压使得他们能用于常规的HPLC仪器却实现近似UHPLC的性能。此外，HALO色谱柱所用的筛板的孔径要远远大于UHPLC色谱柱(2 μm vs 0.5 μm)。这个更大的孔隙柱入口筛板减少了UHPLC柱入口筛板的堵塞问题。事实上,HALO柱的入口筛板不会比常规的填充5μm颗粒的柱子上的筛板小，不可思议吧。

　　“熔融核硅胶柱能减少扩散质路径，允许使用更短的柱子和较高的流速以达到明显的快速高分辨率分离。”

　　——Analytical chemistry，2007年8月