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SPE/HPLC方法法测定奶粉中香兰素

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分享： 2012/07/27 13:53:48

张景然，岳中花，乔艳芬（博纳艾杰尔应用部）

1. 前言

香兰素亦称香草素、香草醛等，学名为3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，根据欧盟专家委员会2000年2月24日报道，大剂量可导致头痛，恶心，呕吐，呼吸困难，甚至损伤肝肾功能。

样品组分	结构式
香兰素

中华人民共和国国家标准《食品添加剂使用标准》（GB2760-2011）规定，较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为5mg/100mL，其中100mL以即食食品计，生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量；婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素，最大使用量为7mg/100g，其中100g以即食食品计；凡使用范围涵盖0至6个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。

国家标准中只规定了限值，未有检测方法。本实验使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的Cleanert^® PAX固相萃取小柱和Venusil^®XBP C18（L）液相色谱柱，建立了一种奶粉中香兰素的检测方法，经实验验证，该方法简单、快速、准确度高。

2. 实验方法

2.1实验试剂和耗材

l 水 (pH=4.5)；取100mL水，用乙酸调节pH至4.5；

l 2%乙酸铅溶液：称取乙酸铅2g，加水稀释并定容至100mL；

l 5%氨水溶液：取氨水溶液5mL，加水稀释并定容至100mL；

l 5%酸化甲醇：取甲酸5mL，加甲醇95mL混匀；

l 香兰素储备液 (1mg/mL)：准确称取香兰素标准品10mg，加水稀释并定容至10mL；

l SPE柱：Cleanert^® PAX (60mg/3mL)，使用前分别用3mL甲醇和3mL水活化；

l HPLC柱：Venusil^®XBP C18 (L) (5μm 150Å 4.6*150mm)；

l 针式过滤器：亲水型 PTFE (0.45μm，13mm)。

2.2 仪器及设备

l LC-10F高效液相色谱系统；

l Qdaura^®卓睿全自动固相萃取仪；

l 高速离心机 (转子50mL*6)；

l 氮吹仪；

l 12位固相萃取装置。

2.3试样处理

准确称取奶粉试样1g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入pH=4.5的水溶液5mL，混匀超声提取5min，加2%乙酸铅溶液2mL，混匀后静置2min，8000r/min离心10min；取上清液用5%氨水溶液调节pH至中性；将上清液全部加样至活化好的Cleanert^® PAX小柱，然后分别用3mL 5%氨水溶液和3mL甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液；用3mL 5%酸化甲醇洗脱（以上固相萃取操作通过Qdaura^®卓睿全自动固相萃取仪完成），收集洗脱液于30℃下氮气吹干，用1mL流动相重新溶解，过滤，待测。

2.4液相色谱条件

色谱柱：Venusil^®XBP-C18（L），5um 150Å 4.6*150mm；

流动相：A（0.02mol/L的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节pH=4.0）：B（乙腈）= 90：10；

流速：1.0mL/min；进样量：20μL；波长：276nm；柱温：30℃。

3. 实验结果

3.1线性关系和检出限

量取一定量香兰素标准储备液，分别用水稀释至1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL和50μg/mL，按照3.3检测条件依次进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合标准曲线方程，结果见表1：

表1 香兰素标准曲线和检出限

标准曲线方程	相关系数	检出限（S/N>3）
Y=86.443X+36.907	0.9998	1μg/g

3.2准确度

表2. 5μg/g添加回收实验结果

	平行1	平行2	平行3	平均回收率	RSD
回收率	89.03%	94.30%	90.67%	91.33%	2.70%

表3. 25μg/g添加回收实验结果

	平行1	平行2	平行3	平均回收率	RSD
回收率	85.08%	87.85%	83.59%	85.51%	2.16%

4. 实验结论

实验表明，Cleanert^® PAX和Venusil^®XBP C18（L）可以用于奶粉中香兰素的检测，本方法简单、快速、准确度高。

5. 实验图谱

图1 奶粉空白谱图

图2. 5μg/g添加谱图

图3. 1μg/g标准溶液谱图

6. 订货信息

名称	规格	订货号
分析型高效液相色谱仪	10ml/min，等度系统，200-400nm双波长检测器	FL-LC010
分析型色谱柱温箱	室温+5-50℃，箱内两对夹套	CC-100-T
Qdaura^®卓睿全自动固相萃取系统	4通道	SPE-40
甲醇	色谱纯，4*4L/箱	AH230-4
乙腈	色谱纯，4*4L/箱	AH015-4
Cleanert^® PAX SPE柱	60mg/3ml，50支/盒	AX0603
Venusil^®XBP C18（L）HPLC柱	5μm 150Å 4.6*150mm	VX952505-L
保护柱芯	4.6*10mm，4/包	VX950105-L
保护柱套	适用于4.6*10mm的保护柱芯	CH-100
亲水PTFE针式过滤器	0.45μm，13mm，100/包	AS081345
一次性注射器	2ml无针头，100支/包	LZSQ-2ML
溶剂过滤器	1L	AM3100
1.5mL样品瓶	短螺纹透明带书写处，100/PK	1109-0519
1.5mL样品瓶盖	100/PK	0915-1819
12样品瓶	螺纹透明，100/PK	1509-1657
12mL样品瓶盖	100/PK	1515-1748
微孔滤膜（MCM）	50mm，0.45μm，100片/包	AM015045
微孔滤膜（Nylon）	50mm，0.45μm，100片/包	AM025045
离心机	最大转速10000r/min	TGL-10B
氮吹仪	15位	NV15-G
真空固相萃取缸	12位	VM12
流速调节阀	12个/包	A81213
穿板导流针	12个/包	A80100
无油隔膜真空泵	1台	A01003