【流式】CytoFLEX 流式细胞仪平台投身分辨率reform

CytoFLEX 流式细胞仪平台投身分辨率reform 1.桌面型流式细胞仪-小巧全能，决不妥协！ 2.关注科学 3.利用高灵敏度的力量 4.纳米颗粒检测 5.检测线性与补偿CytExpert 6.数据获取和分析软件

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-紫光-黄绿光-近紫外(B-V-Y-N) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-紫光-黄绿光-近紫外(B-V-Y-N) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-近紫外(B-R-V-N) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-近紫外(B-R-V-N) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光-紫外光-红外光(B-R-V-Y-U-I) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光-紫外光-红外光(B-R-V-Y-U-I) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光-近紫外-红外光(B-R-V-Y-N-I) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光-近紫外-红外光(B-R-V-Y-N-I) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光(B-R-V-Y) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-黄绿光(B-R-V-Y) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-红外(B-R-V-I) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光-红外(B-R-V-I) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光(B-R-V) 系列

CytoFLEX S流式细胞仪蓝光-红光-紫光(B-R-V) 系列 1.光学系统 2.性能 3.电子系统 4.液流 5.数据管理 6.安装

【流式】在CytoFLEX 流式细胞仪上评价红细胞微颗粒

由于人们逐渐认识到微米和纳米微粒对许多重要生物 学反应有介导作用，因此，有必要对这些微粒进行分析。 为证实CytoFLEX 流式细胞仪分辨小微粒的能力，对 来自人外周血的红细胞（RBC）微颗粒进行了分析。 使用膜联蛋白V（AnnV），对在标准血库条件下保存 了三个月之久的人血样本进行染色。前散射和侧散射 分析识别出了RBC 微粒、过渡性阳性细胞以及完整的 红细胞。 这些评价所使用的流式细胞检测平台仅用于研究目的。（作者： Albert Donnenberg，PhD 所属单位： 匹兹堡大学癌症中心）

【流式】用于人外周血淋巴细胞染色的 6 色 Panel

本文在 CytoFLEX* 研究型流式细胞仪上使用 6 色 Panel，通过染色/ 裂解方案对人外周血淋巴细胞进行免 疫表型分析。通常使用表面CD 抗原作为标记物，来量化和表征外周血中的正常和异常淋巴细胞群。 CytoFLEX 是免疫表型研究实验的卓越之选。具有专利的波分复用 (WDM) 检测模块，使用了固态、高效、 低噪的光纤阵列光电二极管探测器 (FAPD)，确保了卓越的分辨率，同时，还能保证数据更加精准、对罕见事 件的检测效果更佳。该方案描述了使用配备红色和蓝色激光配置的 CytoFLEX 进行 6 色免疫表型分析。

【流式】以抑制细胞生长的不同浓度的阿糖胞苷（Ara-C） 处理细胞，通过羧基荧光素琥珀酰亚胺酯 (CFSE) 测定白血病细胞系的增殖情况

对急性髓系白血病进行化疗是基于标准剂量柔红霉素 联合阿糖胞苷 (Ara-C) 的治疗方案。此外，Ara-C 还应用于对非霍奇金淋巴瘤的治疗之中。Ara-C 通 过联合胞嘧啶库和阿拉伯糖发挥作用，因而可以紊乱 DNA 合成。 标准的化疗药物带有不同的细胞毒性水平，但其一般 会在 24 小时内从体内清除掉。在浓度较低时，这些 药物可能具有抑制细胞生长的作用，其将促进治疗方 案发挥效力。 本文旨在通过 CFSE 细胞增殖实验来确定亚毒性浓度 Ara-C 对大量白血病细胞系的抑制作用。（作者： John F. Woolley 1,2，PhD Leonardo Salmena 1,2，PhD 所属单位： 1. 加拿大• 多伦多• 多伦多大学• 药理学与毒理学系 2. 加拿大• 多伦多• 大学健康网络• 玛嘉烈公主癌症中心）

【流式】嗜中性粒细胞氧化爆发检测实验： 使用CytoFLEX 流式细胞仪对基于二氢罗丹明 (DHR) 的慢性肉芽肿 (CGD) 的诊断检测

慢性肉芽肿性疾病（CGD）是一种遗传性疾病，可 导致反复出现危及生命的感染，并导致组织中广泛 存在肉芽肿性炎症。这种遗传性疾病是由于嗜中性 粒细胞氧化爆发功能缺陷导致的。具有该种情况的个 体，嗜中性粒细胞无法合成黄素腺嘌呤二核苷酸磷酸 （NADPH）氧化酶复合体，从而导致难以形成超氧 阴离子（O2-）和活性氧分子（ROS），如过氧化氢 （H2O2）等。无法正确产生ROS 产物可导致消除 病原菌和个体组织炎性损伤的吞噬能力缺陷。氮蓝四唑（NBT）是最常用于诊断该病的原始方法。 但是，基于二氢罗丹明（DHR）的CGD 流式细胞术 检测是一种更为灵敏且简单易行的方法选择。DHR 的流式细胞检测实验可间接检测ROS 的还原程度， 尤其是过氧化氢的还原程度。（作者： Candace Golightly 1, Melis McHenry 2 Peter Racanelli 2 Marc Golightly 3 所属单位： 1. Stony Brook 健康技术和管理学院，Stony Brook，NY 2. Beckman Coulter Inc., Miami, FL 3. Stony Brook 大学医学院，Stony Brook，NY）

【流式】使用流式细胞仪在海洋海绵生物Clathria prolifera中发现了自发荧光细胞

众所周知，海绵生物具有明显的聚集和重构能力。在 一项经典试验中，已经证实了这钟现象，首先使用细 网将海绵组织分离，并随着时间推移，这些分散的 组织可以重新聚集起来，在某些情况下，形成的小 型海绵体具有一定的功能。近期一项研究比较了 七种不同的海绵生物及其重构能力，结果发现仅有几 种海绵生物具有将分散的组织重新形成具有功能性的 海绵体，并发现其重构过程中的检查点。已对在 美国东海岸发现的一种普通海绵生物?Clathria prolifera（以前称为Microciona prolifera）通过分 散组织进行重新聚集并形成小型海绵体的能力进行了 详细研究。C. prolifera 细胞富含类胡萝卜素，使其呈现亮橙色， 并在波长为543nm 的激光激发下，产生自发荧光 。但是，我们的初步观察结果发现了一个新的、 可通过405nm 激光激发出荧光的细胞子集。使用 CytoFLEX 流式细胞仪，对能够被405nm 激光激发 出荧光的新型C. prolifera 细胞群进行进一步的表征 分析，并分析细胞的大小、微粒性和细胞群百分比。（作者：Shunsuke Sogabe | The University of Queensland (AUS), Brisbane, Australia）

【流式】使用CytoFLEX 研究型流式细胞仪检测和计数细菌II：多种革兰氏阳性细菌的表征分析

微生物检测和计数已应用于多种研究领域，如环境监控等。流式细胞术为鉴定和计数不同基质中各种不同种属 细菌提供了可能。通过合适的染色将背景区别开，以低上样次数并以极快的速度进行计数。现有测定法也可快 速进行检测，但准确度较低（例如比浊法），或通过比较法以很慢的速度进行检测（CFU―菌落形成单位，通 常情况下，通过培养并测定菌落数需要花费48 个小时），并可能需要进行连续稀释，以覆盖广泛的潜在浓度。 相比之下，FCM（流式细胞术）能够在1 分钟以内即可得出结果。（作者：Andrew Lister, DPhil 所属单位：贝克曼库尔特）

【流式】使用CytoFLEX 研究型流式细胞仪检测和计数细菌：多种I 型- 革兰氏阴性细菌的表征分析

细菌检测和计数已用于多种研究场合，如环境和过程监控等。流式细胞术为鉴定和计数多种基质中多种不同种 属细菌提供了可能。通过合适染色以与背景相区别，本检测法能以极快的速度计数甚至很低频次的细菌载量。 现有的测定法或实现快速检测，但准确度较低（例如比浊法），或通过比较法以很慢的速度进行检测（CFU― 菌落形成单位，典型情况下，通过培养测定菌落数需要花费48 个小时），并需要进行连续稀释，以覆盖广泛 的潜在浓度，相比之下，FCM（流式细胞术）在1 分钟以内即可得出结果。（作者：Andrew Lister, DPhil 所属单位：贝克曼库尔特）

【流式】使用CytoFLEX 研究型流式细胞仪对大肠杆菌进行计数

在进行细菌计数时我们需要找到一种快速的计数方 法，比通过计算菌落形成单位（CFU）的方法来的快。 本文描述了一种快速计数的方法，利用 CytoFLEX 流式细胞仪对样品中的细菌进行计数。分辨率的提高 可满足通过前向和侧向散射参数进行细菌鉴定而无需 使用荧光染料或计数微球来进行检测和计数。

【流式】使用CytoFLEX 流式细胞仪利用13 色DuraClone干粉试剂对人类T细胞亚群进行高级分析

多色流式细胞术是一项强有力工具，可用于分析存在高度异质性的人类 T 细胞分型。通过 10 色 DuraClone IM T 细胞亚群干粉试剂盒（CD45RA-FITC、CD197-PE、CD28-ECD、CD279-PC5.5、CD27-PC7、 CD4-APC、CD8-Alexa-Fluor 700、CD3-APC-Alexa-Fluor 750、CD57-Pacific Blue、 CD45-Krome Orange），和 3 个紫色激光激发的液态抗体（Brilliant Violet 605 抗人 CD95、Brilliant Violet 650 抗人 CD25，以及 Brilliant Violet 785 抗人 Cd127），我们使用此 13 色试剂，依据传统和最新 的表征标准对外周血 T 细胞亚群进行鉴定，同时，还能够最大程度降低样品制备的工作量。（作者： Nicole Weit1 Michael Kapinsky2 Andreas Böhmler1 所属单位： 1. Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Germany 2. Beckman Coulter Immunotech S.A.S, Marseille, France）

【流式】使用 CytoFLEX 对细胞培养物进行活性评估

CytoFLEX* 台式流式细胞仪为确定增殖细胞中死/ 活细胞的百分比提供了简单、准确的测定方法，其主要手 段为向样品中加入活性染料。取一等分样品，直接放在 CytoFLEX 上运行 ，从而为活性染料设定阴性门，并 确定细胞浓度。已知细胞浓度后，即可将适当数量的染料加入样品中，并上机检测，以测定细胞群的活性。

【流式】如何在CytoFLEX 流式细胞仪上使用紫光侧向角散射光检测纳米微粒

通过流式细胞术检测亚微米级微粒变得越来越困难，因为微粒的粒径大小越来越小于检测微粒所使用的波长。通过前向角散射光检测亚微米级微粒的标准方法存在问题，因为这些微粒具有较低的散射特性（由于较小的断面面积所致），且随着微粒粒径的减 小，正交偏振光的各向同性折射作用存在增高的趋势 （Hielscher et al., 1997）。尽管这些特性可通过前向散射光而影响到亚微米级微粒与噪声的分辨率，但是，其实际上可通过侧散射光来改善其检测能力和分辨率。当利用侧散射光来检测小微粒时，有多种因素可影响其检测能力，如微粒及其周围介质的折射指数之间存在差异，以及所检测微粒的内部复杂性等。通常，折射指数的差异越大，微粒所散射的光越多；同时，微粒（即，细胞内囊泡、蛋白聚集体、金属离子等）的构成越呈粒状，亚微粒组分散射的光越多。此外，微粒散射的光量与微粒的直径成正比，并与用于检测微粒的光波长成反比。这种关系可见于米氏散射理论和Raleigh 光散射方程，这两个方程式可分别用于计算粒径与光波长（用于检测微粒的）相似的或小得多的 微粒导致的理论光散射值。（Bohren 和Huffmann，2010）。由于该原因，因此，对于任何给定的粒径，与蓝光（488nm）波长相比，较小的紫光（405 nm）波长可导致各向同性更强的光散射，并将增加较小微粒的分辨率范围，高于标准侧散射法检测的结果。而且，当输入具有不同折射指数的介质时，新介质可折射光波，折射指数与光的波长成反比，因此，较小的波长的折射指数高于较大的波长。该效应在Isaac Newton 使用棱镜将白光拆分为七色光时首先被发现，红光的折射指数最低，而紫光的折射指数最高（图1）（Newton,1704）。根据该物理特性，使用紫光将有助于放大微粒及其周围介质之间的折射指数差异，并进而提高检测具有较低折射指数的微粒（如外泌体、微囊泡和二氧化硅纳米微粒等）的能力。本文旨在说明如何设置CytoFLEX 流式细胞仪、使用紫光侧向角散射光（V-SSC）来检测小微粒。（作者：George C. Brittain, Ph.D.Sergei Gulnik, Ph.D. 所属单位：Beckman Coulter Life Sciences, Miami, FL 33196）

【流式】如何设置贝克曼库尔特CytoFLEX 流式细胞仪来检测胞外囊泡

医学和科学团体对于细胞来源的亚微米级微粒?即 所谓的胞外囊泡（EV）有很大的研究兴趣。但是，该 领域存在的困难在于如何对测定这些小微粒的技术进 行优化和标准化。尽管已经开发出了竞争性的技术， 但是，对于生命科学研究者而言，流式细胞术是一种 很方便的研究方法。分析中需要解决的问题是如何能 准确测定小微粒的大小特征；尤其是在仅考虑散射特 性时。传统上，流式细胞分析仪旨在执行全血分析， 因此，测定的细胞大小在 3μm 以上。被检出的低于 3μm“临界值”的微粒被视为细胞碎片。由于显微镜 技术进步以及识别和表征分析低于1μm 细胞微粒的 能力，虽然已经开发出了可提高流式细胞分析仪散射 参数的硬件，可用于检测粒径在<200nm-1μm 之间 的微米级微粒群，但是，由于可重复性不够，因此这 些测定值的准确度以及检测结果的有效性通常会受到 质疑。在本研究中，将在贝克曼库尔特公司开发的全 新 CytoFLEX 流式细胞仪检测平台上，考察以往定 义EV 检测范围所使用的方法。（作者：Vasilis Toxavidis、Virginia Camacho、 John Tigges；所属单位：BIDMC, CLS 932 – Flow Cytometry Core Facility, 3 Blackfan Circle, Boston, MA 021 5）

【流式】全血试验中单核细胞和粒细胞对FITC标记调理和非调理大肠杆菌的吞噬作用

吞噬作用是细胞摄入或吞食颗粒或其他细胞的过程。 它是先天性免疫应答的重要组成部分，因此为身体防 御外来抗原入侵所必需。嗜中性粒细胞是抵御微生物 入侵的第一道防线。它们吞食细菌的能力很强，并通 过生成氧自由基等胞内机制摧毁这些颗粒。循环单核 细胞也可以吞食细菌和其他颗粒。除了嗜中性粒细胞， 单核细胞可以在其表面展示被消化颗粒的小肽以及主 要组织相容性复合体（MHC）的产物。嗜中性粒细胞和单核细胞在其表面表达受体，这些受 体可使免疫球蛋白和/ 或补体包覆颗粒更容易识别和 吞食。但是，吞噬活性的变化会引起吞噬能力减弱， 从而导致临床表现突然改变。比如，粒细胞和/ 或巨 噬细胞上补体受体的表达缺失会导致吞噬活性下降， 进而引起患者出现复发性感染。长期感染患者体内 的单核细胞可能会被耗尽，这同样会导致吞噬活性降低。据报道，新生儿的单核细胞吞噬能力与妊娠期 衰老负相关，败血症的出现与单核细胞吞噬能力的大 幅度减弱相关。另一方面，在感染初期，可以不 时观察到吞噬作用增强现象。因此，对循环单核细 胞和嗜中性粒细胞的吞噬能力进行测定，可深刻了解 先天免疫系统的功能。（作者：Andreas Spittler，医学博士， 病理生理学副教授。所属单位：维也纳医科大学 外科流式细胞平台 转化医学研究中心 Lazarettgasse 14 1090 Vienna, AUSTRIA）

【流式】流式细胞仪定量评估细胞内吞作用

纤维化过程胶原蛋白的堆积由过度生成和降解减弱造 成。为了测试成纤维细胞吸收和消化胶原蛋白的能力， 我们采用流式细胞术对不同纤维化细胞培养模型中包 裹I 型胶原蛋白的微球摄取情况进行研究。（作者：Jessica MacLean, Alice Green, Monika Lodyga, Boris Hinz 所属单位：加拿大·多伦多大学·牙医学院组织修复 与再生实验室矩阵动力学组）

【流式】流式细胞术用于益生菌细胞的计数和分析

在历史上，益生菌一直被定义为一种分泌物能促进其他微生物生长的微生物。益生菌的历史与人类进化史齐头 并进，而益生菌的历史甚至可以追溯到近一万年前的上古时期 。近年来，对益生菌的广泛研究，促使我们对 与健康和疾病相关的、寄生于肠道中的 100 万亿微生物细胞有了更深的了解 。的确，随着时间的推移，逐 渐诞生了一些企业，他们致力于平衡有益微生物，以恢复肠道菌群的平衡，而且这些企业正处于不断蓬勃发展 之中。 VitaQuest International 就是其中一家，它是美国最大的保健品定制合同制造商之一。这家公司大规模生产 一系列益生菌保健品。这些不同产品的配方中含有超过 20 种不同的乳酸菌和双歧杆菌菌株。生产过程的复杂 化和日益增长的需求量，以及 FDA 对产品质量、药力以及安全方面的严格规定，迫使各大生产企业不断地改 善生产过程，以期达到提高产能与效率的目的。 确保产品质量的关键方法就是对产品中所含的益生菌进行计数。传统的计数方法是平板计数法，这是一种基于 细菌培养的计数方法，用于确定样品中活菌的数量，参见图 1。这种方法实施起来非常费力，需要专业设备进 行厌氧培养，此外，还需要等待数天才能获得结果。在大规模生产环境下，如果需要作出实时决策，那么，这 种传统计数方法发挥的作用将非常有限，甚至可以说是微乎其微的。

【流式】流式细胞术检测白血病细胞系中形成的自噬泡

早期研究显示，自噬受损与肿瘤的发生有关，这就证 实了自噬是癌症发生过程中的一种重要过程。问题 在于，为何已知对细胞存活至关重要的细胞过程也具 有肿瘤抑制作用。一种可能的解释就是，细胞自噬可 防止凋亡缺陷型细胞因为坏死而死亡。同时，自 噬作用受损的细胞会积累损坏的线粒体、活性氧分子 （ROS）和蛋白多聚体，这些物质均可能导致 DNA 损伤、原癌基因被激活和肿瘤发生。 因此，人们希望了解自噬的调控作用及其在疾病过程 中对细胞内平衡的影响。在个别癌症中，自噬的作用 可能会极度依赖于肿瘤发生的背景。因此，在单个细 胞基础上检测自噬作用，能够以较大的精度阐述该过 程在细胞中信号传导的动力学过程。自噬分析的检测 染料?单磺酰-5- 戊二胺已用于需配置365 nm 激 光的荧光显微镜。由于Cyto-ID 能与装配有蓝色激光 （488nm）的流式细胞仪兼容，因此Cyto-ID 染料 更为方便。目前已有研究已发现Cyto-ID 用于自噬小 体染色具有极好的特异性，溶酶体仅有很弱的染色。（作者：John F. Woolley1,2, PhD Leonardo Salmena1,2, PhD 所属单位： 1. 多伦多大学药理学和毒理学系，多伦多，加拿大 2. 玛格丽特公主癌症中心，大学健康网络，多伦多， 加拿大 ）

【流式】流式细胞检测法分析在细菌表达外源蛋白过程中的蛋白聚集作用

随着重组DNA 技术的发展，经常将细菌用于表达外 源蛋白。细菌表达的可溶性蛋白可表达在胞质中， 或将其分泌至胞质周围或细胞外。通常，表达在胞质 中的蛋白表达水平要高于其分泌的表达水平。许多 疏水性蛋白和高表达的蛋白在胞质可形成难以溶解 的、并聚集而成包含体。胞质周围或细胞外的目标 蛋白通常无法实现全部分泌，并形成不溶性的聚集体 。表达菌的不同生长和诱导条件有时可以使不溶性 的蛋白得到可溶性表达。检测菌体内蛋白聚集体最常使用的方法包括分离细 胞、超声破碎细胞、通过离心从不溶性蛋白中分离 可溶性成分，最后，使用聚丙烯凝胶电泳，鉴定 目标蛋白所处的位置。目前，一种新的染料—— Proteostat®（ENZO Life Sciences ENZ-51035） 能特异性地对淀粉样蛋白类型的聚集体进行染色，所 以可以通过Proteostat 对菌体内过表达蛋白形成的 聚集体进行染色鉴定。在本应用说明中，描述一种 使用CytoFLEX 流式细胞仪简单而快速鉴定细菌内 表达的蛋白聚集体的方法。（作者：Jack Coleman 1 Melis McHenry 2 所属单位： 1 ENZO Life Sciences, Farmingdale NY 2 Beckman Coulter Inc, Miami FL）

【流式】对子痫前期大鼠胎盘模型中的自然杀伤细胞进行鉴定

多年来，大鼠已经成为了学术界和产业界广泛采用的 重要临床前动物模型系统。使用大鼠进行研究的一个 重要方面就是生殖。子痫前期是一种会对大多数怀孕 造成影响的疾病，它是一种因孕妇出现高血压而引起 的并发症。子痫前期通常与慢性炎症相关，而且还会 危及孕妇和胎儿的生命。选用妊娠大鼠模型来研究胎 盘的免疫反应，有助于我们了解子痫前期，而我们研 究的最终目的是研发出一种治疗方法，以完善这种严 重疾病的发病机制。在本文中，我们对大鼠胎盘中存 在的自然杀伤细胞进行了表征。（作者：Denise Cornelius，PhD 所属单位：University of Mississippi Medical Center, Jackson, MS 39216）

【流式】对小鼠中的 NK 子集进行鉴定

人自然杀伤细胞 (NK) 通常可以基于其 CD56 和 CD16 表达予以分裂，这通常与它们的活化状态相 关。外周组织中富含 CD56brightCD16neg NK 细胞； 它们会通过产生大量免疫调节细胞因子的方式，对 可溶性因子做出反应，但经长时间激活后会产生细 胞毒性。相比之下，大多数循环人体 NK 细胞为 CD56dimCD16pos，且被认为处于活化状态；对靶细 胞进行识别时，它们会通过杀死靶细胞或产生细胞因 子的方式做出反应。由于小鼠 NK 细胞缺乏 CD56 表达，因此，很难区分人体 NK 细胞与小鼠 NK 细 胞在功能方面相对应的部分。但通常可以基于 CD11b 和 CD27 表达对小鼠 NK 进行鉴定，但这些标记物更 注重小鼠 NK 细胞未成熟与成熟状态的对比。据若干 报告显示，小鼠 NK 细胞表达 CD127 (IL-7R)，并与 CD56brightCD16neg 人体 NK 细胞相似，二者的相似 之处在于，它们都产生大量的细胞因子，并经长时间 激活后产生细胞毒性。在人体和小鼠 NK 细胞中，我 们通常能够找到一种常见的表面标记物，即 NKp46 (CD335) 激活受体。该激活受体与 CD122 (IL-2Rb chain) 一起被用于鉴定 CD45brightCD3neg 细胞中的 NK 细胞。这些有关自身免疫模型中 NK 细胞的报告 相互矛盾，这种现象可能是由于对小鼠中功能 NK 细 胞子集的了解不足所导致的。（作者：Allison Bayer，Ph.D.； 所属单位：University of Miami - Miami，Florida）

【流式】对小鼠脾细胞和外周血细胞进行表面染色

利用流式细胞术测定蛋白质表达，无论在临床还是在研究领域，都拥有众多优势，原因是，流式细胞术可以实 现多参数测定，减少所需的样品量。 这对于通常难以取样（例如，抽血或者骨髓）的临床监测或诊断来说，尤其重要。此外，通过流式细胞术还可 以借助特异性标记物来分离复杂/ 混合样品，随后对重要特征进行测定。这对于使用动物模型的研究领域来说， 尤其重要。这种免疫表型实验对于快速、准确表征小鼠模型来说，是必不可少的。使用动物模型时，监测血液 中的细胞群也是极其重要的，因为它可以对动物生命周期内的健康状况和表型改变进行快速评估。在本文中， 我们研究脾脏和外周血中的 CD3ε 和 CD19。CD3ε 属于 T 细胞受体复合物的成员，是抗原识别和信号转导 不可或缺的成分，它通常被用作 T 细胞标记物。CD19 是一种表面标记物，它能够结合 B 淋巴细胞的抗原受体， 并降低抗原受体依赖性刺激的阈值，它通常被用作 B 细胞标记物。通过上述两种标记物，我们提供一种简单、 快速的方法，用于鉴定小鼠脾细胞和血液中的两种不同细胞群。 （作者： John F. Woolley，PhD 1.2. Leonardo Salmena，PhD 1.2. 所属单位： 1. 加拿大• 多伦多• 多伦多大学• 药理学与毒理学系 2. 加拿大• 多伦多• 大学健康网络• 玛嘉烈公主癌症中心）

【流式】对外周血中人自然杀伤 (NK) 细胞群的表型表征分析

NK 细胞属于固有免疫系统的一部分，并与肿瘤监测 和病毒感染细胞的杀伤相关。最近，有研究表明， NK 细胞在自身免疫病方面也发挥着作用，其方式为 调节适应性免疫反应，即 T 细胞，或与巨噬细胞和树 突细胞等其他调节细胞相互作用。我们着重对 1 型糖 尿病患者与健康人体的 NK 细胞区室进行了表型和功 能方面的对比。此外，我们还对比了 CD56hi/CD16lo 和 CD56lo/CD16+ NK 细胞比例，并监测了细胞表 面受体的差异表达，包括 CD8、CD11c、CD38、 CD57 和 CD117，及其表达水平。（作者：Christopher A Fraker，Ph.D.， 所属单位：University of Miami - Miami，Florida）

【流式】对缺失 NLRP3 小鼠的循环髓样细胞群进行鉴定技术

表面标记物通常用于区分循环血中的细胞群。通过表 面标记物 Ly6C（造血细胞）、Ly6G（粒细胞/ 嗜 中性白细胞）以及 CD115（MCSF 受体），我们就能 够检测取自 C57BL/6J 野生型对照组小鼠和 NLRP3 缺失小鼠新鲜血液样品中的循环细胞群了。由于 NLRP3 与炎症小体的构成相关，因此，我们推测单 核细胞与粒细胞的比例存在差异。此外，我们还重点 观察了对照组和缺失组之间 CD115（MCSF 受体）的 表达。 CytoFLEX 流式细胞仪是检测血液中不同细胞群的 卓越之选。具有专利的波分复用 (WDM) 检测模块使 用了固态、高效、低噪的光纤阵列光电二极管探测器 (FAPD)，确保了卓越的分辨率，同时，还能保证数 据更加精准、对罕见事件的检测效果更佳。该方案描 述了使用配备红色和蓝色激光配置的 CytoFLEX 进 行分析。（作者：Matthew Peloquin 所属单位： Sanford-Burnham Medical Research Institute, Orlando, Florida, USA）

【流式】成功将CytoFLEX CytExpert 软件数据导入到第三方软件程序中

作为CytoFLEX 研究型流式细胞仪的数据采集与分 析软件包，CytExpert 具有工作界面和流程直观、 工具新颖的特征，适用于复杂的多色流式细胞应用。 CytExpert 软件提供了广泛而多样的灵活分析模板和 绘图工具，以实现简单、高效的数据分析，确保每个 初级使用者，也可对CytoFLEX获取的数据进行分析。（作者：James Tung 所属单位：Beckman Coulter, Inc. Miami, FL, USA）

【流式】采用流式细胞术实现全自动细胞分析

直接将 CytoFLEX 流式细胞仪整合到 Biomek i-Series 自动化工作站中，即可实现样品处理和数据采集的完全自动化。CytoFLEX 系一台精巧紧凑的台式分析仪，能够以高灵敏度收集多达 15 个参数。实现孔板进样、药物处理、胰蛋白酶化的自动化，以及对细胞进行染色实现细胞凋亡和细胞毒性的自动化分析。精挑细选的移液枪头，能够实现连续稀释，并对部分孔板进行处理，从而节省研究耗时。测定悬浮和贴壁细胞系对多种化合物剂量以及时间的响应。

【流式】采用 CytoFLEX 流式细胞仪对比细胞系的活性测定结果

不论是对于准确进行流式细胞分析，还是确定细胞毒 性药物的药效来说，鉴定死/ 活细胞都是非常重要 的。鉴定死/ 活细胞的传统方法（7-AAD 和 PI）是 与 DNA 相结合，而且，这些传统的鉴定方法与固定 和透化步骤并不兼容。区分死细胞与细胞膜完整的活 细胞时，Zombie 染料通过结合死细胞的细胞质中的 胺基起作用。Zombie 染料有多种颜色，并可与大多 数透化实验方案兼容。CytoFlex 拥有四根激光和 13 种颜色，可与所有 Zombie 染料配合使用，从而实现 死/ 活细胞鉴定以及表面和细胞内染色。

【流式】采用 CytoFLEX对PBMC的T 细胞受体进行表征分析

T 细胞在免疫系统的功能与调控中扮演着重要角色。 成熟的 T 细胞可以同时表达 CD3 和 T 细胞受体 (TCR)。基于 TCR: 有 αβ T（T 细胞库的 95%）和 γδ T（T 细胞库的 5%）两种类型，它们能够进一步 分裂成两个亚群。又因TCR αβ T 细胞分别与 MHC II 类或 MHC I 类抗原相结合的亲和力，其可以随即 区分为 CD4 T 细胞或 CD8 T 细胞。γδ T 细胞的最 大子集可以表达 Vδ2 TCR 复合物。γδ T 细胞的较小 子集可以表达 Vδ1 TCR 复合物。研究 TCR γδ Vδ2 T 细胞和 TCR γδ Vδ1 T 细胞，对于母胎1 和同种移 植耐受2 是非常重要的，而了解众多 T 细胞亚群，对 于各种常规和病理学研究也是相当重要的。 DuraClone IM Panel，这是一种在室温下状态稳定 的干粉试剂混合物。根据 ONE Study 以及专业的流 式细胞术实验室提供的设计建议，进行试管配制，用 于临床研究领域。本文将介绍在 CytoFLEX 上运行 装有正常 PBMC 的 DuraClone IM TCR 试管的情 况。（作者：Michael McPherson，Karen Carr，Si-Han Hai。所属单位：贝克曼库尔特）

【流式】贝克曼库尔特 CytoFLEX 紫光侧向角散射光：替代 PMT 前向散射光检测或利用荧光通道进行细胞外囊泡检测的备选方案

在过去的十年中，对于分泌型膜囊泡的研究呈现快 速增长趋势，这些分泌型膜囊泡统称为“细胞外囊 泡”(EV)。在癌症病理学、神经病学、心血管 、自身免疫和风湿性疾病 ，以及疟疾等病毒性感 染的研究中，均发现涉及 EV 的释放。出于临床和 治疗上存在的可能性，对 EV 的研究越来越受到医学 和科学机构的重视。但实际上，对于 EV 的鉴定与分 类却困难重重。尽管显微镜等各个领域都在不断进步， 解决了不少初期研究面临的障碍，但流式细胞技术仍 然是对亚微米级细胞衍生颗粒进行表征检测的主要手 段。目前，分析亚微米级颗粒的主要障碍在于：散射 光是否准确准确反应了微颗粒的粒径分布。最初，人 们用全血作为标准品对仪器阈值进行设定，然而，这 种方式无法对小于 3um 的细胞进行测定。最近，流 式细胞仪技术进一步发展，已经能够区分 <400nm 至 1um 范围内的细胞群了。此次独立研究将对一些 技术进行评估和比较。通过对大多数硬件的调整，以 实现对FSC 参数的加强和优化，此次研究还对贝克 曼库尔特的CytoFLEX 紫光 SSC 检测小颗粒这种新 颖方法的检测效果进行评估。根据米氏散射理论，用 较短波长可以实现对较小颗粒的检测，研究人员认为 紫光 SSC 能够提供相似的检测结果。（作者：Vasilis Toxavidis、Virginia Camacho 和 John Tigges；所属单位：BIDMC, CLS 932 – Flow Cytometry Core Facility, 3 Blackfan Circle, Boston, MA 02115）

【流式】CytoFLEX 研究型流式细胞仪的事件率设置

数字化流式细胞仪采用光学传感器收集光信号，并将其转化成电子 信号，以检测通过流动室的颗粒被激光激发而产生的光信号。通过 光学信号转换成电子信号，可实现对信号事件的数字量和统计。

【流式】CytoFLEX流式细胞仪配备CytExpert 2.0数据获取和分析软件

“《联邦法规 21 章》第 11 款”是指《美国联邦法规》(CFR) 中，美国食品药品监督管理局 (FDA) 对电子记 录和电子签名方面的规定和条例。《联邦法规 21 章》涵盖了有关 GCP（药物临床试验管理规范）、GLP（药 物非临床研究质量管理规范）、GMP（药品生产质量管理规范），以及制药和医疗卫生行业的所有条例，而 第 11 部分则包含了 FDA 对电子记录和电子签名方面的所有条例及规定。 如果计算机系统将存储用于作出质量决策或上报至 FDA 的数据，那么，这些计算机系统均必须符合 21 CFR 11。本条款规定了相关标准，如果符合这些标准，则 FDA 将认为电子记录和电子签名是可信赖的、可靠的并 且等同于纸制记录。 本条款要求相关机构必须具备三个层面的控制：管理控制，例如，针对电子记录的策略；程序控制，例如，针 对使用系统的 SOP；技术控制，或内置于软件中的功能，确保电子记录和签名的可靠性和真实性。软件必须 满足 21 CFR 11 技术控制要求，而用户负责提供策略和程序，确保系统完全符合条例的规定。 CytExpert 2.0 具备能够确保用户满足 21 CFR 11 要求的功能，安装时，请使用“电子记录管理”选项。该软 件的先前版本不提供这些功能。下表引用了条款的特定部分，并介绍了 CytExpert 2.0 是如何满足该部分要 求的。

【流式】CytoFLEX 分析仪的独特蠕动性样品传输系统能最适测定激动剂活化后细胞中出现 的胞内钙离子浓度瞬时变化

制备鉴定激素和神经递质受体活性的荧光抗体或遗传 标记物不仅困难重重，而且非常耗时。本文介绍了一 种有用的替代方法，其可用于记录激动剂与其同源受 体（其中的许多受体为G 蛋白偶联的受体）结合所 产生的生理反应变化。当激动剂与G 蛋白偶联的受 体结合时，可触发一系列快速级联反应，通常会导致 胞内储存部位瞬间释放出钙离子。以往在流式细胞 术中，已将胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）的瞬时变化 用于鉴定细胞亚群中的功能性受体表达[2]，在此， 我们发现，新的CytoFLEX 分析仪的蠕动样品传输 系统特别适用于基于激动剂的钙离子研究。使用基 于酯类的绿色荧光钙指示剂? Fluo-4 AM（Life Technologies），可测定HEK-293 细胞在ATP 刺 激反应中出现的 [Ca2+]i 变化。简单改进CytoFLEX 分析仪的管路，能更容易进入应用激动剂的样品管； 而对其作出的进一步改进，则可以实施 “停止时间” 检测法。通过将激动剂反应用作我们试验的生理学判 定标准，我们基本能够进行受体鉴定，并结论性地证 明其功能性。【作者：Ira Schieren（Howard Hughes医学研究所，哥伦比亚大学医 学中心）Peter Racanelli（Beckman Coulter Inc., Miami, United States）Damian Williams（病理学和细胞生物学系，哥伦比亚大学医学中心）】

【流式】CD62P 血小板激活作用的流式细胞术测定法

本试验使用了流式细胞术来测定体外激活前后全血中 人血小板细胞表面上表达的P- 血清素（CD62P） 水平。作为激活信号的应答反应，来自细胞内颗粒的 CD62P 分子能被快速转移至细胞表面；对于本检测 试验，刺激信号为ADP。可将本方法得出的CD62P 测定值用于评估血小板完整性和活化状态，或用于简 单鉴定混合型血细胞群内的血小板，或用于监控特定 试验方法引入的血小板的非特异性活化作用。 （Dr Kelly Brown, Jessica Tang, Stephanie Hughes | University of British Columbia, Child and Family Research Institute, Pediatrics Division of Rheumatology Salima Janmohamed | Beckman Coulter Life Science, Inc.）

【流式】C57/BL6 小鼠中的竞争性骨髓移植

造血干细胞 (HSC) 能够分化形成血液系统的全部细胞，是维持血液系统所必需的细胞。造血干细胞是一种多能干细胞，具有自我更新的能力，并能够通过层次过程生成各种血细胞系统的中期细胞，从而再生成机体血细胞。 为研究干细胞龛，研究人员必须能够确定在受控条件下细胞群生成成体细胞系统的能力。实验中采用的典型策略是将富含 HSC 的骨髓移植到受体小鼠血液系统之中，而受体小鼠的血液系统经亚致死剂量照射后人为清除。在这些小鼠中，成体血细胞以及干细胞、前体细胞均将在 照射 2 周后死亡。经过移植的细胞可以分化新的血液系统，从而解救小鼠。 HSC 可基于其短期 (ST- HSC)、长期 (LT-HSC) 以及中期 (IT- HSC) 重建能力实现再次分裂 。在大多数报告中，研究人员确定 LT-HSC 的方式是：在移植术后 16-44 周的不同时间点，对其生成循环单核细胞、粒细胞和淋巴细胞的能力进行测定。对移植后细胞进行的第一次竞争性分析应在移植术后 4-6 周予以完成。 在移植研究中，通常采用野生型近交 C57/BL6 小鼠，但前提是：这些小鼠携带Ptprcb 白细胞标记(CD45.2/Ly5.2) 等位基因。Sloan Kettering 研究所通过回交 SJL 小鼠与野生型 C57/BL6 小鼠的方式，培养出了一种被称为 C57BL/6-Ly5.1 的同类品 系小鼠。这些小鼠携带 Ptprcb 白细胞标记 (CD45.1/Ly5.1) 等位基因。使用常用的抗 CD45.1 和 CD45.2抗体，研究人员可以轻松鉴定宿主和移植细胞，并确定 HSC 在竞争性实验中发挥的作用。 在本文中，我们概括性地描述了一项简单的实验，这项实验的具体内容是：对经照射小鼠进行移植后，对其外周血中Cd45.2- 供体与 CD45.1- 宿主白细胞进行测定。 （作者：John F. Woolley，PhD；Leonardo Salmena，PhD 所属单位：1. 加拿大• 多伦多• 多伦多大学• 药理学与毒理学系 2. 加拿大• 多伦多• 大学健康网络• 玛嘉烈公主癌症中心）