饲料中氨基酸的测定-柱后衍生法 （教您把液相变成氨基酸分析仪来用）

教您把液相变成氨基酸分析仪来用

背景

氨基酸是一类含有碱性氨基和酸性羧基的物质，是羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。饲料中氨基酸主要有以下作用：1.促进动物生长2.提高饲料的营养价值3.改善肉质品质4.促进钙的吸收5.抵抗应激症6.提高抗病能力7.防止动物腹泻8作恶日调味剂等。目前氨基酸检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、近红外法、氨基酸分析仪法和液相色谱法等，其中氨基酸分析仪法和液相色谱法灵敏度高且应用范围广泛，但前者仪器成本较高，并不是最佳选择；后者又分为手动衍生和柱后衍生。手动衍生操作复杂，稳定性差。为此，华派科仪特开发出一种简洁高效经济的氨基酸测定方法-柱后衍生法。

二 . 原理简介

饲料中的氨基酸经过提取后，采用氨基酸专用色谱柱进行分离，在柱后衍生中完成衍生化反应，紫外检测器检测，外标法定量。

三 . 方案详情

1.实验步骤

称取饲料50-100mg（含蛋白质约7.5-25mg，精确至0.1mg）于20mL水解管中，准确加入10mL6mol/L的盐酸溶液。充氮气1min后旋紧管盖。110℃水解22-24h。冷却至室温，混匀，过滤。取适量的滤液于60℃蒸干，3-5mL柠檬酸钠缓冲溶液复溶，过膜，待测定。

2.仪器方法

2.1液相方法

泵：四元低压梯度泵

色谱柱：氨基酸专用色谱柱

紫外检测器双波长：570nm和440nm

梯度及柱温条件：请向华派科仪索取

进样体积：10uL

2.2衍生方法

流速：0.3mL/min

衍生梯度方案：请向华派科仪索取

2.3衍生原理简介

一级氨基酸和茚三酮反应生成蓝紫色衍生产物，称为罗曼紫，紫外吸收为570nm；二级氨基酸与茚三酮反应生成黄色衍生产物，紫外吸收为440nm

3.方法对比

4.结果展示

图一：一级氨基酸光谱图

图二：甘氨酸色谱图

图三：蛋白质水解产生的20种氨基酸谱图

四．方案配置

配置一--------仪器

配置二-------耗材

五．注意事项

氨基酸前处理水解时需要去氧，氮吹需要控制气流

水解需要110℃22小时，冷却后定容。

去酸（此步骤很重要）

液相方法和衍生方法需要搭配使用

柱后衍生还可用于扩展于抗生素、甲醛、六价铬和生物毒素等多种项目检测（请与我司联系）

联系方式

单位名称：华派科仪（青岛）仪器有限公司

地址：青岛市崂山区科苑纬一路千山大厦