层浪流式笔记的开篇，由《细胞周期的制备和检测》拉开序幕。不忘初心，方得始终。栏目全新启航，我们选择依然续写流式与细胞周期的故事。本期为大家带来的是：细胞周期的数据质量评估和常见应用场景。周期数据质量分析工欲善其事，必先利其器。漂亮的细胞周期数据离不开性能优异的仪器，因此，首先需要通过《中华人民共和国医药行业标准YY/T 0588-2017》[1]来评估流式细胞仪的性能。本文中使用BD的DNA质量控制试剂盒，对层浪流式细胞仪检测到的DNA数据进行质量评估。DNA质量控制试剂盒内容：🔶 小鸡红细胞核（CEN）：用于建立测试条件。CEN试剂经过特殊处理，内含单个核、双联体核、三联体核和更大的聚集体，用来检测仪器的线性度和分辨率。经PI染色后，由于细胞核聚集程度的不同，在PI的直方图中会出现至少4个峰，前4个峰分别代表单个核、双联体核、三联体核和四联体核。若染色正常，仪器线性度良好，则四个峰所在道数的平均比值接近1:2:3:4。🔶 小牛胸腺细胞核（CTN）：具有一个完整的细胞周期，且具有细胞周期的各个时期，大部分核处于G0/G1期，小部分处于S期和G2/M期。还可作为细胞周期统计分析的质控。🔶 2μm的荧光微球：作为一种稳定的非生物标准品来确认仪器的CV（细胞离散度），要求仪器CV＜2.3%。🔶核酸染料碘化丙啶（PI）图1：DNA QC试剂盒数据数据评估结果：01出现明显7峰，且检测CEN结果为（图1A）PK1:PK2:PK3:PK4:PK5:PK6:PK7 = 1.00:2.00:2.99:3.97:4.94:5.93:6.87 (≈1:2:3:4:5:6:7)。【行业要求CEN结果满足至少出现4个峰，且前四个峰的比值接近1:2:3:4】02CTN检测结果为周期拟合G2/G1=2.01（图1B）。【行业要求G2/M与G0/G1的平均荧光强度比值在1.95-2.05之间】032μm微球结果CV=1.75%（图1C）。【行业要求CV＜2.3%】综上可得，层浪流式细胞仪在DNA检测中表现良好，QC数据均远超行业标准，满足临床/科研实验需求，是流式分析细胞周期的卓越选择。细胞周期应用场景1、细胞系细胞系是周期实验研究常用的样本，如图2分别依次为A图：MCF-7乳腺癌细胞系、B图：MDA-MB-231乳腺癌细胞系、C图：HL-7702[L-02;LO2]肝细胞系。不同细胞系周期检测及拟合结果如下图所示：图2：常见细胞系自动周期拟合数据分析与解读1三种细胞系检测到的CVG1值分别为：MCF7-1.63%、231-2.09%、LO2-2.93%。【正常二倍体的CVG1应＜8%】注G0/G1峰的CV（CVG1）显著影响S期计算的准确性，然而在实际应用中，由于肿瘤样本会存在多个亚群，其CVG1值可能会偏高，影响结果。建议将CVG1＜8%的肿瘤样本用于有用的S期测定。2检测到的RCS（限制性立方样条回归，用来反映样本的拟合程度）分别为：3.55、2.78、3.70。【RCS＜3.0，表示拟合良好；RCS在3.0-5.0，被认为是基本拟合；RCS＞5.0，表明拟合匹配度差】2、生殖细胞在生殖相关研究中，生殖细胞不同时期百分比的变化一直是研究的重点。以C57BL/6小鼠精囊为例，可以检测到不同时期的细胞数量百分比：亚倍体（sub1N）细长精子细胞；单倍体（1N）圆形精子细胞；二倍体（2N）精原细胞；四倍体（4N）精原细胞G2M期。使用层浪流式细胞仪PI检测精细胞周期结果如图3所示：图3：C57BL/6小鼠精囊周期检测数据分析与解读亚倍体（sub1N）和单倍体（1N）百分比为64.66%、二倍体（2N）百分比为7.52%、四倍体（4N）的百分比为20.84%，与文献报道中正常C57BL/6生殖细胞占比一致。[2]3、植物细胞植物细胞的多倍化对于研究个体生长发育具有重要的生物学意义。流式细胞仪检测植物倍体具有简单、快速、准确、直观等优点，在植物学中有着越来越广泛的应用价值。模式生物拟南芥是植物倍体研究的经典角色，用层浪流式细胞仪对其叶片倍体进行检测和分析，得到图4结果：图4：拟南芥叶片周期检测数据分析与解读1PK1:PK2=1:1.9，接近1:2。注植物周期检测一般不用周期拟合软件拟合，根据标准品确定样本有单倍体、二倍体、四倍体，或者多倍体。植物可以检测的样本有：根、茎、叶、种子、花等。 总结：一键拟合功能示意层浪流式细胞仪对DNA QC试剂盒（CEN/CTN/微球）的各项检测结果均表现优异，表明仪器的性能不仅满足各类样本细胞周期检测的需求，其检测结果更是远优于行业检测标准的要求，特别是CEN检测，可以检测出多个峰值，且符合倍比关系。除此之外，层浪流式细胞仪分析软件ModelFlower内置细胞周期分析功能，可以对周期数据进行一键拟合，并有批量分析与批量数据导出的功能。注意事项Q:周期数据对于细胞收集量有什么要求？A:除去碎片之外，建议可供分析的目的细胞在1万以上，虽然细胞数据过大会影响到分析的速度，但不会对细胞各个时期的百分比检测产生影响，拟合效果反而更好，因此在条件允许的情况下，收集量多多益善。Q:周期拟合不准确可以自行调整吗？A:可以的。且自动拟合之后如不满意结果，也可以通过手动调整的方式，改变G1和G2门的位置，还可以批量应用到其他样本中以保持一致性。Q:周期检测可能会受到哪些因素的影响？A:首先，不同细胞系的拟合效果存在差异。其次，影响周期拟合效果的因素还有：试剂盒差异、细胞固定方式的影响、收集细胞量的差异、人为操作影响等。因此，为了尽量减少差异，操作标准要规范，最大程度上避免操作误差。参考文献[1]中华人民共和国医药行业标准YY/T 0588-2017,流式细胞仪.国家食品药品监督管理局.2017.[2]R.B. Struijk,1 C.M. De Winter-Korver,1 S, Simultaneous Purifification of Round and Elongated Spermatids from Testis Tissue Using a FACS-Based DNA Ploidy Assay，International Society for Advancement of Cytometry.

2024年5月4日至8日，第37届国际流式年会CYTO2024在英国爱丁堡盛大召开。现场涌现着科技创新的热情，充分彰显了流式细胞领域的蓬勃活力。层浪生物携自研产品和最新技术亮相07号展台。关于CYTO在全球细胞学研究领域，CYTO以其权威性和专业性，成为了连接科研创新和实践应用的桥梁。作为国际流式协会（International Society for Advancement of Cytometry）主办的年度盛会，CYTO2024以“研究、创新和发现”为主题，聚焦流式分析、分选、成像、纳米、单细胞分析、AI分析等技术最新突破和前沿研究。还汇聚了全球顶尖的科学家、研究机构和各大生物技术公司，共同探讨流式细胞学研究的最新进展和未来趋势。初次惊艳亮相，共话行业未来在这场流式技术盛宴中，层浪生物携自研产品FongCyte™3激光14色初次登场CYTO。在现场众多国际品牌中，层浪产品凭借其优异的产品性能、卓越技术和精致小巧的外观设计，不断吸引海内外流式业内专家和大咖的驻足关注，展位前人流络绎不绝。层浪团队人员与来自世界各地的业内专家、学者及企业代表等进行了一系列热烈而深入的交流。他们借鉴国际经验，讨论技术革新、研发动态及行业发展趋势。此次参会不仅提升了层浪生物的品牌影响力，加深了与全球同行的联系，更为其提供了一个深化全球化战略布局的国际平台。未来，层浪生物将持续探索流式细胞技术的创新，携手国际同行，共同推动生物技术领域的进步，开启生命科学新纪元。  浪花朵朵，点亮星辰大海！！     

  速报    ✚      ●○CGCS 2024（第五届）国际细胞与基因治疗中国峰会暨展览会，将于2024年5月22-24日，在南京扬子江国际会议中心召开。01展会介绍作为细胞基因治疗、核酸药以及类器官领域规格最高的年度会议，CGCS2024涵盖细胞基因治疗法规解读、细胞治疗临床&；研发&；生产、CAR-T商业化、新型细胞治疗开发（CAR-NK，TCR-T，TIL……）、AAV基因治疗、干细胞药物开发、类器官与3D细胞培养、溶瘤病毒开发、mRNA疗法、小核酸药物开发、肿瘤新抗原疫苗等最新最全内容。展会时间5月23日-24日展会地点南京扬子江国际会议中心02诚挚邀请层浪生物聚焦流式细胞领域，专注于IVD诊断仪器、试剂以及生物医疗科研仪器的研发、生产和销售，为全球近500家客户提供临床诊断、生物治疗、生物医药基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性检测等解决方案。届时，层浪也将携产品、技术及各种精美礼品，在会场的B3-04展位恭候各位专家与学者的光临，我们南京见。——END——

    ——"浪花虽小，层层堆叠，亦能掀起滔天巨浪"于2016年开启层浪流式的正式研发，于2022年相继发布了国内首台三激光流式LongCyteTM（临床型）和FongCyteTM（科研型）。截止到2024年4月，近十年的技术沉淀搭载新兴企业平台，层浪流式细胞仪共助推了8篇国际期刊文章的发表，其中4篇IF值≥10，最高达15.82，展现出层浪流式受到非同凡响的国际权威认可，以及其如阪上走丸般的学术论文转化率。 论文集锦IF=15.82引用产品：FongCyteTM标题：Hepatic-Accumulated Obeticholic Acid and Atorvastatin Self-Assembled Nanocrystals Potentiate Ameliorative Effects in TreaUnravelling Immune-Inflammatory Responses and Lysosomal Adaptation: Insights from Two-Photon Excited Delayed Fluorescence Imagingtment of Metabolic-Associated Fatty Liver Disease期刊：Advanced Science时间：2024年3月11日领域：医学/消化系统疾病单位：吉林农业大学中药材学院；吉林大学医学院；华南理工大学生物医学科学与工程学院摘要：奥贝胆酸(OCA)是一种选择性法内甾体X受体激动剂，可改善多种肝脏疾病的损伤和炎症。但其临床应用仍然受溶解度差、生物利用度低和潜在副作用的限制。这篇文章创造了一种由OCA和降胆固醇的阿托伐他汀(AHT)组成的肝靶向纳米药物，其活性药物成分(API)含量理想，用于口服MAFLD的联合治疗。这种无载体纳米晶体(OCAHTs)是自组装的，不仅提高了胃肠道环境中的稳定性，而且通过胆汁酸转运蛋白介导的肠肝循环过程实现了肝脏蓄积。口服OCAHT在改善对乙酰氨基酚挑战小鼠和高脂肪诱导的MAFLD小鼠的肝损伤和炎症方面优于OCA和AHT的简单组合，且系统毒性较小。重要的是，OCAHT对MAFLD相关的分子通路具有深远的反向作用，包括损害脂质代谢、减少炎症和增强抗氧化反应。这项工作不仅为肝脏靶向药物递送提供了一种基于胆汁酸转运体的便捷策略，而且还提供了一种高效、安全的全API纳米晶体，从而促进了纳米药物针对MAFLD的实际转化。IF=14引用产品：FongCyteTM标题：Bioactive mesoporous silica nanoparticle-functionalized titanium implants with controllable antimicrobial peptide release potentiate the regulation of inflammation and osseointegration期刊：Biomaterials时间：2024年3月5日领域：生物医学工程单位：华南理工大学组织修复与重建国家工程研究中心；华南理工大广东省生物医学工程国家重点实验室摘要：细菌感染和骨整合延迟是钛基骨科植入物的两大挑战。在本研究中，我们通过将抗菌肽(AMP)负载的二硒化物桥接介孔二氧化硅纳米颗粒(MSNs)固定在表面，开发了一种功能化的钛植入物Ti-M@A,显示出良好的长期和机械稳定性。功能化植入物对4种临床细菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌和MRSA)的抑菌活性超过95.71%，这是由于其具有破坏细菌膜的能力。此外，Ti-M@A可以有效抑制细菌的生物膜形成。由于骨髓间充质干细胞(mBMSCs)中硒的存在，功能化的植入物还能显著促进小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的成骨分化。值得注意的是，它可以通过清除LPS激活的巨噬细胞中的ROS，在体外触发巨噬细胞走向M2极化。因此，感染和非感染骨缺损模型的体内试验表明，这种生物活性植入物不仅可以杀死超过98.82%的金黄色葡萄球菌，还可以促进骨整合，为解决钛植入物细菌感染和延迟骨整合提供了一种联合策略。IF=10.2引用产品：FongCyteTM标题：Self-polymerized platinum (II)-Polydopamine nanomedicines for photo-chemotherapy of bladder Cancer favoring antitumor immune responses期刊：Journal of Nanobiotechnolog时间：2023年7月22日领域：医学/肿瘤学单位：内蒙古人民医院泌尿外科；广东省生物医学工程重点实验室教育部生物医学材料与工程重点实验室华南理工大学摘要：由于铂类药物在晚期膀胱癌(BC)的肿瘤蓄积较低，且化疗药物释放不受控制，因此全身给药具有明显的局限性。迫切需要先进的策略来克服目前铂类药物化疗的局限性，以达到最大的治疗效果和减少副作用。在这项研究中，自聚合铂(Ⅱ)聚多巴胺纳米复合物(PtPDs)被专门用于BC的有效化学光免疫治疗。高Pt负载含量(11.3%)的PtPDs在还原性肿瘤微环境和近红外(NIR)光照射的联合作用下可降解，从而控制Pt离子的释放，实现高效化疗。此外，聚多巴胺促进了更强的光热效应，以补充铂类化疗。因此，PtPDs在体外和体内为MB49 BC提供了有效的化学光热治疗，增强了免疫原性细胞死亡(ICD)效应和强大的抗肿瘤免疫应答。当与PD-1检查点阻断联合使用时，基于PtPDs的光化学疗法引起全身免疫反应，完全抑制原发和远处肿瘤的生长，且不会诱导全身毒性。本篇文章为金属-多巴胺自聚合提供了一种高度通用的方法，用于金属基化疗药物的精确递送，并可能作为一种有前途的纳米药物，用于有效和安全的铂类BC化疗。标题：Unravelling Immune-Inflammatory Responses and Lysosomal Adaptation: Insights from Two-Photon Excited Delayed Fluorescence Imaging期刊：Advanced Healthcare Material时间：2024年2月26日领域：生物化学IF=10引用产品：LongCyteTM单位：生物活性物质与天然药物作用国家重点实验室；中国医学科学院药物研究所北京活性物质发现与可药用性评价重点实验室摘要：具有近红外(NIR)发射的双光子激发(TPE)显微镜已成为一种很有前途的深部组织光学成像技术。近年来，长寿命发射探针荧光寿命成像技术的发展进一步提高了荧光成像的空间分辨率和精度，特别是在具有短寿命背景信号的复杂系统中。在这项研究中，介绍了两种创新的溶酶体靶向探针，Cz-NA和tCz-NA。这些探针具有多种优势，包括TPE (λex =880 nm)，近红外发射(λem=650 nm)。热激活延迟荧光(TADF)寿命长(分别为1.05 μs和1.71 μs)。这些特点显著提高了深组织成像的分辨率和信噪比。通过将声光调制器(AOM)装置与TPE显微镜相结合，作者成功地将Cz-NA应用于双光子激发延迟荧光(TPEDF)成像中，以跟踪小鼠对炎症的溶酶体适应和免疫反应。这项研究揭示了溶酶体微管、先天免疫反应和体内炎症之间的关系，为未来开发无自发荧光的分子探针提供了有价值的见解。IF=9.7引用产品：FongCyteTM标题：Engineering a biomimetic system for hepatocyte-specific RNAi treatment of non-alcoholic fatty liver disease期刊：Acta Biomaterialia时间：2024年1月15日领域：医学/生物医学工程单位：南方医科大学第三附属医院广东省骨关节退行性疾病重点实验室骨科；华南理工大学组织修复与重建国家工程研究中心；华南理工大学医学院摘要：RNA干扰(RNAi)对难治性肝病具有巨大的潜力。然而，建立针对肝细胞的特异性、高效和安全的递送系统仍然是一个巨大的挑战。文章描述了一种很有前途的肝细胞靶向系统，通过将三触角N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)工程细胞膜与可生物降解的介孔二氧化硅纳米颗粒相结合，高效、安全地将siRNA递送至肝细胞并沉默靶PCSK9基因表达，用于治疗非酒精性脂肪性肝病。在优化了GalNA工程策略、插入顺序和细胞膜来源后，我们获得了性能最佳的alNAc制剂，与基于阳离子脂质的GalNAc制剂相比，具有强大的肝细胞特异性内化，减少了Kupffer细胞捕获，从而实现了强大的基因沉默和更低的肝毒性。因此，通过在高脂肪饮食喂养的小鼠中全身施用靶向PCSK9的siRNA,实现了脂质积累和损伤的持久减少，同时显示出理想的安全性。总而言之，这种GalNAc工程仿生物代表了肝细胞特异性基因治疗和预防代谢疾病的多功能、高效和安全的载体。IF=5.5引用产品：LongCyteTM标题：Synthesis and Biological Evaluation of Benzo [4,5]- and Naphtho[2′,1′:4,5]imidazo[1,2-c]pyrimidinone Derivatives期刊：Biomolecules时间：2023年11月20日领域：化学单位：俄罗斯科学院生物有机化学研究所摘要：氮杂咔唑因其抗致病性和抗肿瘤活性等特性而受到广泛关注。本研究合成了一系列结构相关的三环苯并[4,5]-和三环萘[2'，1':4,5]咪唑[1,2-c]嘧啶酮衍生物，并对其具有一个或两个带正电的系链进行了抗增殖活性评价。带两个带氨基臂的铅四环衍生物5b对A549肺腺癌细胞的代谢活性有抑制作用，CC50值为3.6 μM，对VA13永生化成纤维细胞具有显著的选择性(SI =17.3)。细胞周期测定显示5b触发G2/M阻滞，无凋亡迹象。一项对其与多种DNA G4s和双链相互作用的研究，以及随后的双荧光素酶和插入物置换试验表明，插入物而不是G4调节的癌基因表达，可能有助于观察到的活性。最后，在浓度高达20mg /kg的72小时后，5b的水溶性盐被证明不会引起急性毒性作用、小鼠行为的改变、或体重的任何减少。因此，5b在体内研究中是潜力候选者；然而，还需要进一步的研究来阐明其分子靶点。IF=4.6引用产品：FongCyteTM标题：Imidazolium-Based Main-Chain Copolymers With Alternating Sequences for Broad-Spectrum Bactericidal Activity and Eradication of Bacterial Biofilms期刊：Macromolecular Bioscience时间：2024年1月23日领域：基础医学单位：中山大学深圳校区生物医学工程学院；广东省传感器技术与生物医学仪器重点实验室摘要：为了应对不断升级的细菌耐药性挑战，对抗浮游细胞增殖和消除根深蒂固的生物膜的必要性强调了阳离子聚合物抗菌剂的必要性。然而，有限的疗效和细胞毒性对其实际应用提出了挑战。本文介绍了以咪唑(Plm+)为阳离子组分的新型咪唑基主链共聚物。通过调节前体分子，对每个单元的疏水性和阳离子密度进行微调，从而对临床相关病原体产生广谱杀菌活性。Plm+1因其强大的抗菌性能而脱颖而出，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的最小抑菌浓度为32ug mL-1，显著减少金黄色葡萄球菌(S.aureus)和大肠杆菌(E.coli)的生物膜。杀菌机制包括破坏外膜和细胞质膜，使细胞质膜去极化，并触发细胞内活性氧(ROS)的产生。总的来说，这项研究假设了基于咪唑的主链共聚物的潜力，系统地定制了它们的序列，可以作为对抗耐药细菌感染的潜力候选者。IF=2.899引用产品：MateCyteTM标题：Study on the correlation between IL-12p70, IL-17A and migraine in children期刊：Frontiers in Neurology时间：2024年1月31日领域：医学/神经单位：河北省石家庄市儿童医院小儿神经内科摘要：头痛是儿童最常见的神经系统症状之一，偏头痛是最常见的原发性头痛，是一种发病率高且呈逐年上升趋势的脑功能障碍。然而，目前这种疾病复杂的病理生理机制尚未得到充分解释，在诊断和治疗方面存在局限性。既往研究表明，炎症反应在成人偏头痛或动物模型的发生发展中起一定作用，其中最主要的是促炎反应，如细胞因子IL-1ß、IL-6、TNF-α、CGRP等展开。随着科学技术的进步，细胞因子检测在临床诊断和治疗中得到了广泛的应用，但其在儿童偏头痛诊断中的应用价值还有待进一步探索。本研究基于目前临床应用的IL-12P70、IL-17A等12种细胞因子检测方法，主要探讨与儿童偏头痛存在相关的细胞因子及其水平。

近日，北京层浪生物科技有限公司（以下简称“层浪生物”）完成了由荷塘创投领投、毅达资本跟投、跃为资本担任独家融资顾问的近亿元B轮融资。此轮融资将为公司的发展注入强大动力，促进层浪生物在流式技术高端化、常规化方向上大踏步迈进，取得更加丰硕的成果。‍‍‍‍专业深耕，聚焦流式层浪生物起步于2016年，总部位于北京市中关村大兴生物医药产业基地，在北京海淀区留学人员创业园设有研发基地。公司核心团队在流式领域有近20年经验，以研发创新为驱动，以产品质量为保障，以客户服务为中心，专注于实现流式技术系统化、自动化、智能化，为客户提供值得信赖的流式产品和服务。凭借其卓越的技术实力和优良的产品质量，公司获得了国内一线行业伙伴、试剂公司、以及全球一线流式厂家的青睐，形成战略合作，服务广大医疗客户。公司2022年完成由IDG资本投资的A轮融资，助力公司产品研发和市场拓展进度，在科研、工业领域，持续扩大品牌影响力，赢得了众多科学家和研究者的认可。自主创新，追求卓越‍‍‍‍层浪创始人刘铁夫2007年硕士毕业于清华大学，在校期间即从事检测技术领域研究课题。2008年加入国内最大的生物医疗技术公司之一，开始研究流式检测技术，参与主导了中国最早的“中高端荧光五分类”血液分析仪、中国第一台“临床型流式细胞仪”，是中国最早的流式技术领域系统工程师之一。创办层浪以后，近十年专业深耕，不断引领国内流式技术领域的前沿发展，先后推出了国产品牌首台“2光8色”流式细胞仪MateCyte（2023年成为全球知名厂商的贴牌产品）、国产品牌首台“3光14色”流式细胞仪LongCyte™（临床型） 和FongCyte™（科研型） 系列。2023年，公司率先推出配置561nm激光器的国产3激光流式，为众多工业客户提供了研发利器。2024年，层浪将继续推出一系列重量级产品。面向科研市场，将推出4激光配置的流式细胞仪。面向临床领域，将推出淋巴亚群样本制备仪、流式荧光检测仪等新产品。为行业发展注入新的活力。多元模式，互利共赢层浪还创新商业模式，赋能行业伙伴，在行业内开创了“以客户为中心、深度技术服务”的商业模式，通过“核心部件提供、技术服务指导”等方式，帮助行业伙伴促进业务发展、实现商业理想。促成了如今流式技术的星火燎原之势，为行业发展、技术落地贡献了绵薄之力。目前层浪生物产品的质量口碑和出货数量，都处于行业前列。以“战略合作+定制化服务+渠道营销”的多元化商业模式为基石，层浪不断拓宽业务领域，实现持续稳健的发展赢得了市场。层浪始终坚持开放共赢的理念，积极寻求行业战略合作，已与多家企业建立了稳固的合作关系，实现资源共享，互利共赢。层浪深知仪器与试剂犹如腾飞之鸟的双翼，缺一不可，相辅相成。我们高度重视与业内试剂企业的深度合作，与多家业界伙伴建立了稳固的合作关系。通过深度挖掘客户需求，我们提供个性化的解决方案，不仅满足了客户的实际需求，更实现了与客户的共赢，共同推动了流式技术的蓬勃发展。‍‍‍展望未来，乘浪起航‍‍‍本轮融资的领投方荷塘创投表示：荷塘创投对层浪生物在流式细胞技术领域的发展潜力充满信心。国产高端生命科学工具一直是我们重点关注的投资领域之一，其中流式技术是生命科学领域的必备刚需产品。层浪生物在流式技术方面的深厚积累、卓越创新能力和优秀业绩，不但让我们看到了国产流式技术在临床市场日益主导的地位，也让我们看到了国产流式技术进军高端平台尤其是高端科研蓝海市场的希望与潜力。我们期待层浪生物成为流式技术领域的“国货之光”和“创新引擎”，也期待以投资为纽带，为层浪生物注入更多元化资源，实现共赢，共同推动国产生命科学工具行业的发展壮大。跟投方毅达资本表示：流式细胞技术是现代生命科学研究中不可或缺的工具，随着生物学和医学研究的进展，其应用领域在不断拓宽。层浪的创业团队专注在流式细胞领域深耕细作，凭借着优秀的产品品质，迅速打开临床和科研市场，国际化战略也初见成效。生命科学领域一直是毅达资本重点投资方向，我们期待携手层浪并肩前行，在高端流式国产之路上“激起千层浪”。层浪生物创始人刘铁夫表示：此次融资将为公司加速在流式细胞技术领域的研发和市场推广提供有力支持，进一步推动层浪推出更多、更好的产品和服务。层浪生物将继续坚持以客户为中心，不断提升产品质量和服务水平，为中国流式技术事业的繁荣做出更多贡献。

展会介绍：展会介绍：2024年5月4日-8日，在国际上享誉盛名的“流式盛宴“——CYTO 2024（The International Social for the Advancement of Cytometry, CYTO 2024），将于英国爱丁堡召开。过去36届以来，CYTO年会始终聚焦基础细胞计量学的前沿性研究。以“研究、创新和发现”为主题的CYTO2024，不仅将给大家带来最先进的细胞计量学技术，以及成像和单细胞分析等生物应用的新进展；更有来自分子和细胞生物学、生物物理学和光子学领域领导者的世界级演讲。展会时间：2024年5月4日-8日展会地点：苏格兰 · 爱丁堡国家会议中心展位号：07号诚挚邀请：躬逢其盛，与有荣焉。层浪作为流式领域的积极推动者，以FongCyteTM S 4激光13色开启国产流式新篇章，也有幸受邀参加此次会议。在此，层浪也诚挚欢迎各位专家与学者莅临07号展台进行交流，共述流式产品、技术和应用的新发展。

近日，北京层浪生物科技有限公司（以下简称“层浪生物”）完成了由荷塘创投领投、毅达资本跟投、跃为资本担任独家融资顾问的近亿元B轮融资。此轮融资将促进层浪生物在流式技术高端化、常规化方向上大踏步迈进。回顾层浪生物的重要时刻：2023年10月，层浪生物荣获北京“专精特新”企业认证。2023年7月，层浪生物与流式头部企业碧迪医疗就MateCyte双激光流式细胞仪签订中国独家代理销售合作！2023年2月，三激光流式细胞仪LongCyte获得二类医疗器械注册证（京械注准20222220495）2022年11月，层浪生物获得北京高新技术企业认定。2022年7月，层浪生物就完成了A轮融资，由IDG资本投资。2021年1月，2激光8色流式细胞仪 MateCyte 获得二类医疗注册证（湘械注准20212220172）。......据相关市场研究机构统计，2023年全球流式细胞仪市场收入为47亿美元，预计到2028年将达到70亿美元。2023年至2028年复合增长率为8.3%。公司创始人兼总经理刘铁夫本科与硕士均就读于清华大学机械工程学院，2007年毕业后加入迈瑞北京研究院，作为迈瑞流式BriCyte E6的系统工程师，从立项开始全程参与了中国第一台临床流式细胞仪的诞生，并见证了中国流式细胞仪从无到有，从萌芽到火热的全过程。公司核心团队均在流式技术有10余年经验，‘十年如一日’专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。2激光8色流式细胞仪已在市场上广有应用，仪器稳定性获得客户的高度认可，未来销量可观，最新研发的3激光14色流式细胞仪已在科研市场有一定的销量，其优异的性能和智能化的表现得到了客户的一致好评，这给我们很大的信心，也让我们对其在临床上的表现充满了希望。在市场表现和技术领先性上，层浪生物都走在了前列。关于北京层浪生物科技有限公司北京层浪生物科技有限公司成立于 2020 年 3 月，注册地址位于北京市大兴区生物医药产业基地，在大兴和昌平均有研发办公场地，另外在湖南成立了全资子公司。公司主要从事 IVD 诊断仪器试剂以及生物医疗科研仪器的研发生产销售，层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的进一步普及，在科研领域助力国产流式产品迈向国际前沿行列。目前产品主要涵盖LongCyte™ 和FongCyte™ 两大流式产品系列及配套诊断试剂和全自动流式样本前处理仪，已通过ISO9001及ISO13485体系认证；临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™ 26种型号均获得CE认证。层浪正在为全球近500家客户，提供临床诊断、生物治疗、生物医学基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性监测等解决方案。公司核心团队均在流式技术领域拥有10余年技术研究经验，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的流式产品。层浪未来将推出更多产品，为中国流式技术发展尽绵薄之力，争做流式技术的行业普及者和值得客户信赖的合作伙伴，助飞中国流式技术临床和科研事业发展。

 会议介绍BIOCHINA2024（EBC）第九届易贸生物产业展览再次刷新高度，以“展览-大会-活动”三大体系为核心，汇聚了30,000名专业人士和550家展商。在多方合作机构和内容伙伴的联合策划推动下，我们将致力于深耕创新技术与产品开发，积极寻求海内外项目合作与业务拓展，以期推动中国生物医药企业与全球伙伴之间的深入交流与合作。在政策的鼓励下，创新成为我们坚定不移的发展方向。而在市场驱动的迭代发展中，合作则是我们不可或缺的选择。届时，层浪生物将携带层浪高品质流式产品亮相展会。层浪生物诚挚地邀请您莅临F3馆-SF014展台参观交流。我们热切期待与您相聚，共同交流和探讨行业问题，携手助力生物医药领域的快速发展。苏州之约，期待您的光临！诚挚邀请 

展会介绍2024年3月16日至18日，第二十一届中国国际检验医学暨输血仪器试剂博览会（CACLP）和第四届中国国际IVD上游原材料制造暨流通供应链博览会（CISCE）将在重庆国际博览中心盛大开幕。展会将展出包括血液、体液、免疫、生化、微生物、分子、病理、输血检验以及上游原材料和供应链等方面的新技术和产品，为业内人士提供一个交流、学习和合作的平台。层浪生物此次将携层浪流式产品亮相本次展会，诚邀您共襄盛举，共话体外诊断行业的未来发展！展会信息01 展会时间：2024 年 3 月 16 日（星期六）08:30 - 17:00 2024 年 3 月 17 日（星期日）08:30 - 17:00 2024 年 3 月 18 日（星期一）08:30 - 13:3002 展会地址：重庆国际博览中心03 展位号：N1-191204 现场活动：《国产流式的进阶之路--层浪生物产品介绍》时间：3月16日 15：00-17：00LongCyte™系列临床流式细胞仪，灵活的配置适用于多种应用场景。FongCyte™系列流式细胞仪的黄绿激光器全新问世，将国产流式技术推向新高峰。开创国内定制化流式细胞仪的先行，支持特殊激光器及光学模块定制。请各位莅临层浪生物展台，让我们一起从流式的发展现状浅谈国产流式发展趋势，从产品角度浅谈应用开发。

01 关于 MedlabMedlab展会自1984年创立以来，已逐渐跻身全球最大的实验室专项展会之列，不仅在中东地区具有广泛影响力，更受到了美国科学仪器设备与实验室家具国际协会(SEFA)的全球推荐。作为中东地区的医疗健康先锋，阿联酋携手迪拜这一“一带一路”上的璀璨明珠，于2024年2月5日在迪拜世贸中心隆重举办了Medlab Middle East 2024阿拉伯国际医疗实验室仪器及设备展览会。此次展览汇聚了全球的创新领袖和医疗健康专业人士，共同探索医学实验室和检测设备领域的新发展，各种前沿的医疗设备和技术在此亮相，不同区域的专业领域理念在此碰撞，为参会者提供了交流与学习的机会。02  层浪扬帆，展科技锋芒层浪生物携其高品质的流式细胞仪LongCyteTM，首次亮相此次Medlab展会，以其闪耀的科技蓝为展会增添了一抹璀璨的大国科技之光。在展会期间，层浪生物的参展团队热情接待了来自世界各地的众多潜在客户，深入细致地展示了我们的产品特性。对于每位客户提出的疑问，我们都给予了详尽的解答，得到了客户的广泛认可和高度赞赏。不仅如此，我们还成功吸引了众多参观者表达了对我们产品的采购意愿和合作意向。03  展望未来2024年海外首展圆满落幕，标志着层浪生物全球商业化布局的重要一步。展望未来，我们将继续深化在全球关键区域的战略布局，并依托前沿科技创新，为世界健康事业贡献更多力量。 

2024年1月，北京层浪生物科技有限公司在仪器信息网发布层浪生物FongCyte™流式细胞仪搭载561nm激光器新品。查看报价参数主要创新点如下：1.检测光通过光纤传导至三个独立的树杈形检测器阵列，降低了模块之间的耦合，提高光路系统稳定性。专利的检测器及激光器双恒温控制（准确控温在25℃±0.3），光路系统，无惧环境温度波动，输出结果稳定可靠。 2．两种进样模式，定量吸入模式，高精度柱塞泵正压进样非蠕动泵驱动或者负压上样，可免微球绝对计数；持续上吸模式，负压持续吸样，适用于稀有细胞检测。 3.每台仪器内嵌自动进样器，单管及高通量模式可选。高通量模式包括孔板进样模式及管式进样模式，兼容96孔板，40孔流式管，40孔EP管，软件一键式切换，无需等待。具有软件一键式通道排堵功能。智能自动清洗系统携带污染率＜0.05%。 4．AI智能数据分析：有周期拟合，淋巴亚群等AI算法。561 nm 激光应用意义RFP红色荧光蛋白及水果系列荧光蛋白的最佳激发波长，488 nm不可取代；PE及PE耦合染料的最佳激发波长，带来更好的信噪比；空间独立激发，使用561 nm激发PE及其耦合染料，与488 nm激发的FITC染料配合，大大减少补偿值，甚至可以实现免调。如下图所示:488 nm激光，mCherry激发效率为0.8%，PE激发效率为53%。561nm激光，mCherry激发效率为64%，PE激发效率为95%。搭载561 nm激光器的流式细胞仪可提高 PE、PE家族染料及mCherry 等水果系列荧光蛋白的检测灵敏度和分辨率，扩展了荧光染料选择范围，满足特殊应用的需求。488 nm激光器PE/mCherry激发效率561 nm激光器PE/mCherry激发效率(图源:https://www.fpbase.org/spectra/) 日常新品申报入口 ↓↓↓https://www.instrument.com.cn/Members/NewProduct/NewProduct

火树银花迎新岁，笑语欢声映月圆。龙腾四海迎新春，凤舞九天展宏图。1. 总结过去，展望未来时光如梭，一年的工作转瞬已成为历史。新的一年意味着新的起点、新的机遇和挑战。2024年1月12日下午14:00层浪生物全体员工大会正式开始，首先总经理刘铁夫对公司2023年的发展情况进行了全面、客观的评价，也提出了当前存在的一些问题与不足，并对2024年工作计划进行部署。希望在新的一年里，大家能以今天的总结为鞭策，发扬优势，改进不足，不断进取，在各自的岗位上贡献应有的力量!2. 细节决定成败，态度决定高度工作可以平凡，但工作态度不能平庸。平淡的工作在你们的担当下，变得丰富与生动。层浪生物秉承“卓越、奋斗、协作、共赢”的价值观，对评选出的工作态度表现优异的员工进行表彰，他们勇于担当积极向上，面对困难毫不退缩，敢于出手，用优异的表现为公司交上满意的答卷。公司领导为获奖者颁发荣誉证书及奖杯，并请获奖者发表获奖感言。3. 树立目标，再创佳绩目标是我们前进的方向，激励我们勇往直前。各业务部门上台签署目标责任状，有了目标才有了奋斗的方向，希望2024年层浪生物在目标责任的指引下能够乘风破浪，再创佳绩！4. 推杯换盏，精彩不断荧光灿烂，是新年绚丽的色彩；歌声嘹亮，是新年动人的旋律！唱歌、小品、演奏、舞蹈，层浪的舞台上，这里一个不少。各部门的小伙伴们各施其能，各尽所长，为大家带来了精彩的节目。极大的调动了员工们的热情，将晚会的气氛推向又一个高潮。大家携手共进、把酒言欢、回首2023奋斗路、展望未来新征程！5. 花落谁家，幸运传递晚宴必备的抽奖环节也是大家最期待的时刻。同时也将整个年会晚宴氛围推向了高潮。在紧张刺激的抽奖环节中，获奖者号码陆续揭晓，福利与幸运纷纷降临，让层浪的家人们倍感温暖，收获了开年的惊喜。6. 团结一心，其利断金伴随着大家的欢呼，层浪生物年终运动会拉开序幕，本次运动会的项目有：拔河、袋鼠跳、一圈到底等，不仅考验我们的身体素质和反应速度，也考验着大家的团队协作能力。绘成锦绣展旧岁,揄扬风雅待新年！2023年，层浪生物已交出了一张完美的答卷，但逐梦的脚步从未停歇。新的一年我们将乘梦飞翔开拓未来，砥砺奋进筑梦前行！

层浪秉承着自主创新、自主研发精神，在逆境中成长，持续为我国高端生命科学仪器研发贡献力量；FongCyte™流式细胞仪，搭载561 nm激光器全新上市，揭示着层浪人经过不懈努力，开拓国产品牌自主创新之路，开启了我司定制化科研型高端流式细胞仪产品新篇章。从老产品的品质改良到新产品的开发，我们拥有的不只是20余项自主知识产权，更是那不服输的仪器人精神。我们的研发团队用坚韧和毅力攻克了一个个技术难关；我们的销售团队用无比的耐心和专注的精神持续开拓国内外仪器市场；我们的生产及质量团队用高质量体系严于律己保证客户收到稳定优良的产品。坚信在未来的岁月长河中，我司会更加努力、推陈出新、致力于成为全球领军的流式细胞技术单细胞整体解决方案供应商，让科研工作者用上品质优良、配置充分的好产品！“山高水远脚下路，岁月光阴掌中磨！长风破浪会有时，直挂云帆济沧海！”层浪生物生产研发基地作为全国定制化流式细胞仪的领军企业，我司持续使用前沿技术设计解决客户实际需求。FongCyte™ 561流式细胞仪以高通量流式细胞仪为载体，结合GMP-磁吸进样罩的封闭设计，为细胞治疗领域，药物靶点筛选和类器官鉴定等提供了下一代GMP级别的多参数分析系统，结果稳定可靠，效率提升。Model Flower分析系统具有简单的操作体验，配合审计追踪功能，助力新型疗法的开发，为生命健康贡献力量。下面就来看看我司根据某做抗体药物开发客户需求反馈、快速响应立项研发而全新上市的这一款流式产品：What’s New in it？561 nm 激光器 inside图1定制化高功率固体激光器，自由空间输出，光斑呈椭圆形，高斯分布，亮度均匀。图2室温测试8小时，光功率变化0.1%，输出功率稳定。更灵活的机器配置更灵活的机器配置华丽升级的FongCyte™系列流式细胞仪，可根据科研需求实现561 nm激光器与蓝、红、紫三种激光器的自由灵活选配，从1激光5色到3激光14色多达19种配置可选，并接受整机定制，亦可根据实验需求定制激光器(如 532 nm，355 nm，375 nm 激光器）及光学模块（滤光片带宽，OD值等）。※具体参数规格请询问当地销售代表更优异的检测性能561 nm激光器通道，八峰测试结果分群明显，灵敏度更高。CV测试结果更强大的分析软件搭载ModelFlower For RUO 全新的周期拟合模块，无需第三方软件繁冗的操作，一键式周期拟合分析，拟合结果包括 RCS、Mean、CV等，G2/G1比值结果清晰直观，方便查看拟合效果及调整圈门，导出方式方便快捷，轻松助力肿瘤药物研究。用户管理模式，保证不同实验需求的保密性及级别。全面的审计追踪功能，符合21CFRPart 11，保障开发过程可溯源性，确保电子数据的有效性和可靠性。更多样的上样方式支持两种上样模式定量吸入模式:高精度柱塞泵，不易堵塞，免微球绝对计数。持续上吸式:适用稀有细胞检测，做到一滴不留。内嵌自动进样器支持单管、 40 孔流式管/EP管以及96 孔板(U 及 V底，深孔等)上样，方式多样，可软件一键式切换，智能识别，无需等待。更强大的染料兼容性561 nm 激光应用意义1. RFP红色荧光蛋白及水果系列荧光蛋白的最佳激发波长，488 nm不可取代；2. PE及PE耦合染料的最佳激发波长，带来更好的信噪比；3. 空间独立激发，使用561 nm激发PE及其耦合染料，与488 nm激发的FITC染料配合，大大减少补偿值，甚至可以实现免调。如下图所示:488 nm激光，mCherry激发效率为0.8%，PE激发效率为53%。561nm激光，mCherry激发效率为64%，PE激发效率为95%。搭载561 nm激光器的流式细胞仪可提高 PE、PE家族染料及mCherry 等水果系列荧光蛋白的检测灵敏度和分辨率，扩展了荧光染料选择范围，满足特殊应用的需求。488 nm激光器PE/mCherry激发效率561 nm激光器PE/mCherry激发效率(图源:https://www.fpbase.org/spectra/)A New Modle Flow Cytometer, for more new trys!2023年Q3季度至今，我司561产品在科研及工业领域多面开花结果，收到客户的一致好评，如您有561机型的实验需求，可填写二维码表单，申请试用，我司将按填表顺序优先安排试用! 

引言：随着2023年的落幕，回望这一年，那些挑战与机遇、汗水与笑容都化作成长的足迹，我们以不屈的精神和坚定的信念，书写了一段又一段辉煌的篇章。在这份总结报告中，让我们一同回顾2023年这一年里层浪生物在各个方面的成绩与进步，让我们共同见证层浪生物的成长之路！ 一  荣誉与资质——驱动未来的双翼自2020年成立以来，公司始终坚定地追求卓越，不断探索创新。在充满挑战与机遇的2023年，层浪生物凭借其卓越的技术实力和不懈的努力，荣获了一系列令人瞩目的荣誉和奖项，为公司的发展历程书写了辉煌的一页。这些荣誉不仅是对层浪人一年来辛勤付出的肯定，更是对未来发展的鼓舞和激励。1. LongcyteTM系列流式细胞仪从1激光4色至3激光14色26个型号配置均获得二类医疗器械注册证2. 荣获北京市2023年度“专精特新”中小企业称号 3. 荣获2023年度北京市新技术新产品(服务)证书 4. 获得质量体系认证：ISO9001；ISO13485二  与碧迪医疗（BD）达成战略合作加入BD质量体系三  提升市场占有率过去一年，我们公司在激烈的市场竞争中，积极开拓新业务领域，不断扩大市场份额。我们以优质的产品和服务为基础，不仅在临床医疗领域取得显著成就，更在科研和工业市场创造了新的销售记录。在国际市场上，我们成功地建立了销售渠道，为公司的全球化战略注入了新的活力。通过全体员工的共同努力，我们实现了业绩的稳步增长，市场占有率也得到了进一步提升。这充分展现了我们的竞争优势和未来的发展潜力。1. 9场国内临床/科研/工业展会第十五届全国免疫学学术大会第十一届陆道培医疗流式细胞术临床应用及新进展学习班CACLP等国内行业权威展会 2. 多场国际展会与讲座四  产品创新与技术突破层浪生物坚信创新是企业发展的核心动力，因此始终保持对研发的高投入，不断推动产品和技术的革新。层浪成功研发了具有独特专利的两种进样模式的流式细胞仪。此外，还推出了新机型，配备了4激光选配561nm激光器，进一步提升了公司的技术实力和市场竞争力。 1. 独特专利的两种进样模式 2. FongCyteTM系列流式细胞仪搭载561激光器全新问世配有488nm，638nm，405nm，561nm 4种激光器可选，可以为研究者配置3激光，提供多达14色参数分析，支持原机升级配置，支持特殊激光器定制，作为具有创新性的流式技术平台，将国产流式技术推向新高峰。搭载561nm激光器可提高PE、PE家族染料及mCherry等水果系列荧光蛋白的检测灵敏度和分辨率。3. 客户应用之声层浪生物收集装机后客户端的应用实例，如淋巴亚群检测、精子检测、植物倍体检测、凋亡检测、细菌检测等多篇来自客户的案例分享，为新用户的使用提供详细的参考。 4. 现场培训/装机更多现场培训/装机 五  团队建设与人才培养——以人为本，共创未来层浪生物始终秉持人文关怀的理念，致力于为员工打造一个既舒适又充满活力的环境。不仅关注办公设施的完善，更重视团队文化的建设；通过组织各类团队活动，加强内部沟通与合作，形成了一个富有凝聚力与创造力的团队。同时，我们重视人才培养与发展，为员工提供广阔的学习与晋升空间。在新的一年里，我们将迎接新的挑战，拥抱无限的可能。我们将以创新的精神继续奋进，用实际行动书写属于层浪生物的辉煌篇章。在2024年的征途上，让我们携手共进，共创美好未来！

  在微生物研究，尤其是细菌学中，对菌体计数是一项最基本的需求。常规的计数方法主要是国家标准推荐的平板计数法和显微镜计数法，但它们耗时长、误差大，且平板法只能计数活菌。近年来，随着荧光染料、结构光学和流式细胞仪技术的不断发展，流式细胞术检测细菌等微生物成为可能。与传统检测方法相比，其具有灵敏、快速、高效、精确的优势，流式细胞术已经成为微生物研究中的一个重要工具，在单细胞层面对细菌结构和功能的多项参数进行更深层的分析，以研究细菌的异质性和鉴定细菌种属。本方案以大肠杆菌为例，介绍层浪流式细胞仪如何评估活菌比例和计数。——实验背景——膜的完整性评估是细菌活力的重要评价手段，通常使用膜渗透性和非渗透性荧光染料来进行活力测试，目前比较常见的染料是SYTO 9/PI。SYTO 9 作为一种可渗透的绿色荧光核酸染料，被动扩散进入细胞内，既可以进入细胞膜完整的细菌中，也可以进入细胞膜受损的细菌中，与核酸染料结合。而红色荧光核酸染料PI只能进入不完整细胞膜的细菌中。当SYTO 9和PI同时加的时候，PI染料进入膜内，会导致SYTO 9荧光染料的降低。因此，具有完整细胞膜的细菌呈现绿色，而膜不完整的细菌呈现红色。图1：SYTO 9/PI细菌活力测定法原理示意图——样本处理——1. 收集对数生长期的大肠杆菌，10000g，5min，离心洗涤，取细胞沉淀重悬于0.22um过滤的无菌PBS中；2.进行细菌计数，为后续染色做准备；3. 取4个流式管，标记为空白组，SYTO 9和PI单染组，样本组。每个试管加100ul细菌悬液，保证细菌数在106-107左右。——样本染色——1. 根据厂家试剂盒建议，单染组分别加1ul SYTO 9或1ul PI，样本组加1ul SYTO 9和1ul PI，加PBS至988ul。涡旋，室温避光孵育15min；2. 充分涡旋微球，每管分别加10ul，每份样本中体系为1000ul；3. 设置参数，用层浪FongCyte流式细胞仪采集信号，SYTO 9（Max Ex/Em=485/498nm）用FITC通道检测，PI（Max Ex/Em=535/617nm）用PerCP通道检测，两个通道光谱重叠小，补偿易调节。——数据分析——1. 细菌比较小，选择对数模式分析。设置合适的电压，使细菌群信号在流式图中间清晰地呈现。设置合适的阈值，很大程度减少背景噪音。此实验中，设置的是FSC和FITC双阈值；2. 根据FSC和SSC，圈出主细菌，右上角的一群是微球（图2）；3. 从主细菌中，选择SYTO 9和PI，红光区域的代表死菌，绿光区域的代表活菌（图3）。——总结——1. 原核生物平均直径在1um左右，需要挑选合适的流式细胞仪。层浪的流式细胞仪检测直径在0.1-50um，除大肠杆菌外，还可以检测葡萄球菌、酵母、浮游生物、益生菌等；2. 层浪流式细胞仪可以获得体积法绝对计数，跟微球法结果有较高的一致性，节约实验经费；3. 细菌活力染色实验对管路的洁净度要求高，层浪流式细胞仪每管样本间采样针自动清洗，携带污染率为0.05%，能够获得更加准确的结果。数据来源 : 广州某实验室层浪：  您好，可以采访下您近期使用层浪流式细胞仪的感受吗？客户：  可以的。层浪：  在层浪的仪器上，您们日常都做哪些样本？客户：  我们实验室开展多种流式实验，在微生物方面，除了细菌，还做酵母、益生菌检测等。层浪：  您对于层浪的仪器，有哪些使用感受和反馈吗？客户：  我们之前用平板法培养细菌进行计数，这种方式只能培养活菌，通常耗时3天左右，而流式细胞术对活菌和死菌都可以计数，比平板法的计数结果会高一些，更准确一些，而且灵敏、检测速度快、时间短，极大地提高了我们出数据的效率，我们现在逐渐用流式替代平板法了。层浪：  确实，现在流式细胞仪在微生物研究中的作用越来越广泛了。客户：  我们实验室之前有一款进口的流式细胞仪，现在使用贵司的仪器，非常喜欢您们的软件！中文的界面，功能键直观，而且操作简单。细菌实验对仪器的清洁度要求高，还要避免管路之间的交叉污染，之前我们是上完一个样本，再上一管水，进行反冲。而您们的仪器每个样本之间能够进行采样针清洗，免去了我们每管样本手动清洗的麻烦。做普通清洗和深度清洗也很方便，使用的清洗液用量也不大。层浪：  非常感谢您的反馈。层浪会继续努力，用心服务每一位客户。图4：层浪生物FongCyte™3光14色流式细胞仪参考文献：1、刘新星,霍转转.流式细胞术在细菌快速检测中的应用；微生物学通报。DOI:10.13344/j.microbiol.China.130041.2、邓颖,基于流式细胞术的SYTO 9/PI细菌活性判定方法优化及其机理;暨南大学硕士学位论文.3、Philipp Stiefel, Sabrina Schmidt-Emrich,Critical aspects of using bacterial cell viability assays with the fluorophores SYTO9 and propidium iodide.DOI 10.1186/s12866-015-0376-x.4、S M Stocks,Mechanism and use of the commercially available viability stain, BacLight.doi: 10.1002/cyto.a.20069.5、Martin G. Wilkinson,Flow cytometry as a potential method of measuring bacterial viability in probiotic products: A review.//doi.org/10.1016/j.tifs.2018.05.006.

 2023层浪SCI论文奖励计划邀您参加为致敬广大科研工作者的辛勤付出和卓越贡献，层浪生物推出“你来发文，我来奖励”主题活动，凡是发表SCI期刊关键词包含本公司流式细胞仪产品且符合活动参评标准的论文都可以获得丰厚奖励！层浪希望为科研事业贡献自己的绵薄之力，携手更多行业有识之士共同创建多彩世界，守护美丽生命！申请标准：1. 一篇文章只可以一名申请人申请一次；2. 申请人为第一作者或通讯作者；3. 发表领域不限，文章可是已见刊或 “Published online ahead of print ”文章，SCI期刊需提供DOI；4. 文章标注公司名称：“Challenbio” 或 “Beijing Challen Biotechnology Co., Ltd.” 以及产品名称：“FongCyteTM” 或 “LongCyteTM” 字样；5. 接收论文奖励即表示作者已默认授权本公司使用该论文用于产品宣传和品牌推广 ；6. 最终解释权归层浪所有。奖励额度：奖励以官方最近公布的 SCI 期刊影响因子（IF）数据为准。申请通道：STEP1. 提交申请：扫描二维码提交信息STEP2. 信息审核:自提交后十个工作日内审核完成，层浪公众号每月底统一公布名单；STEP3. 礼品发放：市场部按申请人提供的联系方式发放奖品。申请时间：本征文长期有效。  

“值得信赖的流式伙伴”，是层浪生物一直致力追求的目标。因此近期我们对层浪客户的回访做一个分析和总结，我们也期待您主动反馈给我们您的使用评价。下面是来自国内知名第三方检测机构采购了层浪LongCyteTM 流式细胞仪的使用反馈。下面给大家介绍来自此用户的项目——精子碎片化检测2023年，世界卫生组织（WHO）的一份报告显示，全球约有17.5%的适龄生育夫妇受不孕不育的困扰。根据国家统计局数据，我国不孕不育率约为12%-18%，其中男方原因占40%-50%左右，精子原因居首位。精子DNA碎片（Sperm DNA fragmentation, SDF）在男性不孕症中发生率较高，SDF常伴发少弱精子症，也可发生于常规精液指标正常的不育症患者。其发生机制包括精子成熟障碍、凋亡异常和氧化应激过高等。精子碎片化检测是精子检测中最重要的评估指标之一。精子SDF的检测有很多方法，分为直接法和间接法，直接法有TUNEL、Coment、ISNT;间接法有SCSA、SCD、DBD-FISH。流式常用方法是SCSA（精子染色质结构分析）检测，与其他检测方法相比，流式细胞术可以在相对较短的时间内分析数千、数万个细胞，显著提高了SDF试验的可靠性。在SCSA检测中重要指标是精子DNA完整性(DFI)，即精子DNA碎片率。DFI是指精子在形成过程中受到某些有害因素(如吸烟、高温、药物等)影响，发生DNA链断裂的精子占全部精子的百分比，使精子DNA完整性被破坏而产生断裂，DFI值越高则生育能力越低。检测原理：SCSA 被认为是检测精子 DNA 损伤的金标准。其原理是：受损的精子DNA 在酸的作用下变性形成单链，而正常精子DNA维持双链结构。吖啶橙( AO) 与双链 DNA结合发出绿色荧光，而与单链DNA结合发出红色荧光。发绿色荧光表示精子DNA完整，发红色荧光代表精子DNA呈碎片化。样本准备（来自客户）：1. 样本在室温液化30-60min；2. 将4℃保存试剂A液、B液、C1液和C2液取出，C2离心后，将C2全部转移至C1内配成染色液；3. 检测管内加入精子样本10μL,加入 A液90μL，充分吹打混匀；4. 加入B液200μL，计时30s；5. 30s后时加入染色液600μL；6. 染色完成1min后上机检测，建议检测在染色后40min之内完成。（注：实验步骤不同试剂厂家有差异）检测报告：图1. 精子检测报告（LongCyteTM）图示：Plot1，前散FSC和侧散SSC圈中主群；Plot2，去除碎片信号，圈精子细胞；Plot3，Green门为绿色荧光信号的精子细胞，Red门为已去除碎片的红色荧光信号的精子细胞，即Red门为DNA碎片化的精子细胞，高绿色荧光信号群（HDS）为MFI高于正常精子的信号。（注：Red检测通道ECD，620/30；Green检测通道FITC，530/30）临床上除了精子碎片化检测以外；精子相关其他检测项目还有质膜完整性检测，线粒体膜染色、凋亡检测、活性氧检测、精子Ca2+ 水平检测、白细胞检测、顶体反应等。层浪流式细胞仪助力更多精子检测相关的研究和临床项目。层浪期望与更多生殖机构联手助力生殖检测发展。参考资料：[1] 倪吴花，AshokAgarwal，孙莹璞等，精子DNA 碎片检测的临床专家共识, 生殖医学杂志2023年2月第32卷第2期, 1004-3845.2023.02.002[2] 精子碎片实验室检测与临床应用专家共识编写组，精子碎片实验室检测与临床应用专家共识———基于流式细胞精子染色质结构分析，中华男科学杂志 2022 年 2 月 第 28 卷 第 2 期。[3] Flow cytometry and microscopic acridine orange test: relationship with standard semen analysis [J]. Reproductive BioMedicine Online, 2004, 8(4): 398-407.

 细胞外囊泡（EVs）是指在生理和病理状态下，机体内细胞通过细胞吞咽形成作用多泡小体后，通过细胞膜融合到细胞外环境中的微小囊泡，根据囊泡尺寸大小，可将EVs分为三类：凋亡小体（>1000 nm）、微囊泡（100~1000 nm）、外泌体（30~100 nm）。大量研究表明细胞死亡的EVs也出现异常；其内部的多种分子显著改变。与传统的疾病诊断标志物相比，EVs可在体液中稳定存在且半期衰长，加之碱双分子层的保护作用，EVs可定量输送RNA和蛋白质等生物信息分子至吸取细胞，且EVs广泛分布于体液中，取材方便，创伤小，因此EVs有可能成为一种新型的疾病诊断标志物。EVs仍属于一个较新的领域，Vs形态学常用的检测方法有头部电子显微镜、动态光散射、纳米颗粒跟踪分析仪（Nanosight）、Western blot、流式分析技术等。其中头部电子显微镜技术可直接观察EVs形态，但对样品质量要求较高、实验前处理复杂且实验中较难洞察EVs和精度颗粒。动态光掩模和Nanosight可反映EVs的大小分布，Nanosight可直接检测EVs的浓度，但要求样本采样高，无法区分大小不同聚集体、批量溶液及EVs。Western blot实验只能对EVs进行定性；无法避免细胞蛋白的污染，直至蛋白找到EVs特有的蛋白质标志物。流式技术能够实现，高蛋白、单颗粒、同时检测多个参数的分析，是目前最具潜力评价临床的外泌体分析技术。传统的流式细胞仪检测下限为500纳米，外泌体多被当成噪音而忽略。近年来不断开发新技术来满足外泌体分析要求，将检测提高到20纳米，最大限度提升了流式技术分析外泌体的能力，确认和解决将不会再成为流式技术分析外泌体的瓶颈。目前，困扰流式技术分析外泌体的问题同样如此集中，样品的前处理、流式方法的标准化、外泌体标志物的寻找。广州焕彩流式实验室在囊泡检测方法学通过传统流式进行了大量的实验测试和方法学改进，不断完善方法学。所用仪器型号3激光14色流式细胞仪LongCyteTM关于层浪流式细胞仪一、灵敏度高微小粒子可以检测二、省钱多能手——自动进样无需单独配备三、具有计数功能，精准高效，无需辅助耗材四、小巧可爱又高配多能

会议介绍：由北京医学检验学会、中国中西医结合学会检验医学专业委员会、中国非公立医疗机构协会血液病专业委员会、陆道培医疗（北京陆道培生物技术有限公司、信纳克（北京）生化标志物检测医学研究有限责任公司）、厦门弘爱医院联合举办的2023年度“第五届北京医学检验学会暨第五届中国中西医结合学会检验医学专业委员会流式细胞分析诊断专家委员会学术年会暨第十一届陆道培医疗集团流式细胞术临床应用及新进展学习班”将于2023年11月24日-11月26日在厦门国际会议中心酒店召开。本学习班旨在为广大从事血液病诊疗的临床医生和实验室技术人员等提供一个更加开放和深入的学术交流平台。层浪生物欢迎各位新老朋友莅临展台四区参观指导。会议时间：2023年11月24-26日会议地点：厦门国际会议中心酒店（厦门市思明区环岛东路1697-2号）主办单位：北京医学检验学会、中国中西医结合学会检验医学专业委员会、中国非公立医疗机构协会血液病专业委员会、北京陆道培生物技术有限公司、信纳克（北京）生化标志物检测医学研究有限责任公司；承办单位：厦门弘爱医院。关于层浪：层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的标准化，在科研领域推进国产流式常规化。目前产品主要涵盖LongCyte™ 和FongCyte™ 两大流式产品系列及配套诊断试剂及自动化样本制备仪，临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。全球用户近500家，为临床诊断、生物治疗、生物医学基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性监测等提供解决方案。目前公司通过了ISO9001及ISO13485体系认证，核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品，公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。

众所期待的层浪生物第一期高手约稿之光谱流式获奖名单来了！感谢各位专家学者提交的文章，看到了各位对光谱的贡献，以及对光谱未来的美好期待。经过层浪流式技术专家评审，评选出以下获奖名单。恭喜各位获奖者！小编会在十个工作日内联系各位获奖者并寄出奖品。层浪一直致力于高端流式细胞仪的研究和发展，我们坚信国产高端流式细胞仪是行业未来的趋势和方向。作为一家国内领先的流式细胞仪研发企业，我们一直在积极探索和引领国产流式细胞仪的新高度。请持续关注我们的公众号，期待下一期的高手约稿有您的参与！

近日，北京市经济和信息化局公示了《北京市2023年第二季度专精特新中小企业名单》，其中北京层浪生物科技有限公司凭借其产品稳定、可靠、性能优异的特点和自主创新能力以及值得信赖的售后服务理念脱颖而出，荣获北京市2023年度第二季度的“专精特新”中小企业称号。根据工业和信息化部《优质中小企业梯度培育管理暂行办法》（工信部企业〔2022〕63号）以及《北京市优质中小企业梯度管理实施细则》的规定，北京市经济和信息化局近期进行了2023年第二季度的专精特新中小企业征集和评审工作。专精特新，是「专业化、精细化、特色化、新颖化」“专”指专业化与专项技术，企业专注并深耕于产业链中某个环节或某个产品；“精”指精细化，企业精细化生产、精细化管理和精细化服务；“特”指产品或服务的独特性与特色化，产品或服务具有行业或区域的独特性、独有性、独家生产的特点；“新”指自主创新与模式创新。此次入选北京市“专精特新”企业，是对层浪生物在盈利能力、专业水平、经营理念、创新能力等多个阶段性成就的高度肯定。这一认定充分证明了层浪生物在技术能力、产品及服务等方面的卓越实力。它是层浪不断努力和持续创新的结果，未来层浪将继续努力提升自身的技术能力、积极响应市场需求，并不断推出创新的产品和优质的服务。加强与合作伙伴的交流，不断优化经营管理，以实现更加卓越的业绩和持续的发展。关于层浪生物层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前产品主要涵盖LongCyte™ 和FongCyte™ 两大流式产品系列及配套诊断试剂及自动化样本制备仪，临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。全球用户近500家，为临床诊断、生物治疗、生物医学基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性监测等提供解决方案。目前公司通过了ISO9001及ISO13485体系认证，核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品，公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。

近日，北京市经济和信息化局公示了《北京市2023年第二季度专精特新中小企业名单》，其中北京层浪生物科技有限公司凭借其产品稳定、可靠、性能优异的特点和自主创新能力以及值得信赖的售后服务理念脱颖而出，荣获北京市2023年度第二季度的“专精特新”中小企业称号。根据工业和信息化部《优质中小企业梯度培育管理暂行办法》（工信部企业〔2022〕63号）以及《北京市优质中小企业梯度管理实施细则》的规定，北京市经济和信息化局近期进行了2023年第二季度的专精特新中小企业征集和评审工作。专精特新，是「专业化、精细化、特色化、新颖化」“专”指专业化与专项技术，企业专注并深耕于产业链中某个环节或某个产品；“精”指精细化，企业精细化生产、精细化管理和精细化服务；“特”指产品或服务的独特性与特色化，产品或服务具有行业或区域的独特性、独有性、独家生产的特点；“新”指自主创新与模式创新。此次入选北京市“专精特新”企业，是对层浪生物在盈利能力、专业水平、经营理念、创新能力等多个阶段性成就的高度肯定。这一认定充分证明了层浪生物在技术能力、产品及服务等方面的卓越实力。它是层浪不断努力和持续创新的结果，未来层浪将继续努力提升自身的技术能力、积极响应市场需求，并不断推出创新的产品和优质的服务。加强与合作伙伴的交流，不断优化经营管理，以实现更加卓越的业绩和持续的发展。关于层浪生物层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前产品主要涵盖LongCyte™ 和FongCyte™ 两大流式产品系列及配套诊断试剂及自动化样本制备仪，临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。全球用户近500家，为临床诊断、生物治疗、生物医学基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性监测等提供解决方案。目前公司通过了ISO9001及ISO13485体系认证，核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品，公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。会议推荐：为加强创新微流控分析技术与方法的交流，把最新的微流控分析技术与方法以及热门器官芯片应用推介给广大生命科学科研、临床、医药领域、工业用户，仪器信息网将于2023年11月16日在线举办“微流控技术与器官芯片研究进展与应用”网络研讨会。报名地址：下图扫码或点击链接https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/microfluidics231116.html

免疫学大会概况11月的苏州，秋雨绵绵，为期4天的第十五届全国免疫学学术大会在苏州圆满落幕。作为国内免疫学领域的权威盛会，会议涵盖了免疫学临床、科研等各个领域，本届会议共吸引了来自全国各地和海外约4000名代表参加，大会邀请了国内外著名免疫学家和各领域顶尖免疫学者进行大会报告，各个会场座无虚席。各位专家就免疫学的最新发展趋势、科研成果以及技术难点等前沿热点进行交流，并通过大会报告、分会场报告和壁报交流等方式分享和研讨免疫学领域的最新成果。与此同时，层浪生物携新一代国产高端流式产品亮相本届盛会，受到参会者高度关注，曹雪涛院士等业界专家莅临层浪展位参观指导，共话国产流式技术新发展。层浪以自主创新，自主研发精神，立志将国产流式细胞仪推向世界，“In China，Be Global”。层浪展台风采‍关于层浪层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前产品主要涵盖LongCyte™ 和FongCyte™ 两大流式产品系列及配套诊断试剂及自动化样本制备仪，临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。全球用户近500家，为临床诊断、生物治疗、生物医学基础研究、药物研发、环境材料、食品毒性监测等提供解决方案。目前公司通过了ISO9001及ISO13485体系认证，核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品，公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。‍

全国免疫学学术大会是中国免疫学会的品牌学术年会，是免疫学科技工作者展示学术成果，交流学术思想，创新学术观点的平台。至今已经成功举办了十四届，参会代表人数达到2500-3000人，是国内免疫学领域层次最高、覆盖面最广的学术盛会。大会将围绕天然免疫应答的识别与调控、适应性免疫应答、免疫代谢与免疫调节、新冠病毒感染免疫、肿瘤免疫与肿瘤免疫治疗、自身免疫病等主题，通过大会报告交流、分会场报告交流及壁报交流的形式，充分分享及研讨免疫学最新成果。第十五届全国免疫学学术大会于2023年11月2-5日在苏州金鸡湖国际会议中心召开。届时，层浪生物将携最新流式产品亮相本届盛会，现场抽奖活动更有苹果耳机等精美大奖等您来拿，欢迎新老朋友前来参观交流！诚挚邀请  INVITATION展会信息  INFORMATION01 展会时间 2023年11月2日-5日  02 展会地点苏州金鸡湖国际会议中心   03 展会位置 一层B1馆-B12展位   04 展会活动 关注“层浪生物”公众号 点击链接填写信息 提交后抽取幸运礼品关于层浪生物层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前已推出多款流式产品，临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证及NMPA注册证。科研型产品3激光14色流式细胞仪FongCyte™上市以来，仪器性能获得客户的高度认可。公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。

01 活动背景 层浪一直致力于高端流式细胞仪的研究和发展，我们坚信国产高端流式细胞仪是行业未来的趋势和方向。作为一家国内领先的流式细胞仪研发企业，我们一直在积极探索和引领国产流式细胞仪的新高度。我们非常注重与专家学者的合作，以便更好地推动行业的发展。 为此，我们诚挚地邀请您参与我们的征文活动。本次活动旨在征集光谱/质谱/纳米流式领域的相关文章，其中光谱流式是我们首期重点关注的方向。我们希望通过您的专业知识和经验，为行业发展贡献自己的力量。 我们相信，您的研究成果和经验心得将会为其他专家和学者提供宝贵的参考和启示。同时，您的文章也将有助于推动流式细胞仪技术的发展和应用，为人类健康事业做出更大的贡献。 如果您有相关的研究成果或者经验心得，欢迎积极参与我们的活动，与我们分享。我们将根据文章质量和相关度进行评选，并对获选作者进行奖励和表彰。 02 活动介绍光谱流式的优点在于其高灵敏度和多参数分析能力，能够实现更精细的细胞分析和检测。然而，目前国产光谱流式仍面临一些挑战，如设备稳定性、分辨率和自动化程度等。我们希望通过您的文章，展现光谱流式的发展潜力，为国产光谱流式的进步贡献力量。 03 活动奖品一等奖 华为折叠屏手机 Pocket S（1名）价值5988   二等奖  华为墨水平板MatePad paper Pad（2名）价值2999元  三等奖  华为蓝牙耳机FreeBuds Pro 2（3名）价值1299元  参与奖  华为手环8 NFC版（前15名）价值309元  04 参与方式 活动详情请在微信公众号搜索“层浪生物”，关注公众号并参与高手约稿活动。 05 活动时间征集日期：公元 2023年9月26日-10月31日开奖日期：公元 2023年11月11日公布发放形式：开奖后层浪联系获奖者邮寄奖品 注：最终解释权归层浪所有  关于层浪生物 层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前已推出多款流式产品：2激光8色流式细胞仪于2021年初成功获得NMPA注册证；科研型产品3激光14色流式细胞仪FongCyte™上市一年，仪器性能获得客户的高度认可；临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。   

实验简介PD-1，全称为“程序性死亡受体1”，又称为CD279，是一种重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下调免疫系统对人体细胞的反应、抑制T细胞炎症活动，调节免疫系统并促进自身耐受。PD-1发挥功能可以预防自身免疫性疾病，但也会阻止免疫系统攻击癌细胞，造成肿瘤进展。通过流式细胞技术检测PD-1表达，可以反映肿瘤进展情况。多项研究显示，PD-1在肿瘤患者的外周血CD8+T细胞表面过表达，并与患者的病理变化及临床疗效密切相关。CD8+PD-1+T 细胞在癌患者外周中的比例明显增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T细胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 细胞中的应答水平发生改变,并与患者疾病的进展密切相关。实验材料与方法检测方案：样本制备：1. 消化酶制备单细胞悬液，并过滤；2. 裂解红细胞，1 mL 1X RBC裂解红细胞,室温10 min(根据厂家推荐)；3. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；4. 可重复步骤3；5. 染色：根据厂家推荐用量进行染色，室温避光孵育20 min；6. 清洗：加入1 ml染色缓冲液，350g，离心5 min，弃上清；7. 加入200-300 ul染色缓冲液，重悬后上机检测。实验结果：圈门逻辑：肿瘤组织中先圈出白细胞的信号CD45+（图A），再圈总的CD3+T细胞（图B），再分别看CD4（图C）、CD8（图D）、NK和NKT（图E）在淋巴细胞中的占比，最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T细胞的双阳信号（图F）。肿瘤组织中淋巴细胞的占比会下降，特别是发展到后期，白细胞整体降低，PD-1在CD3+T中信号明显。PD-1在CD8+T细胞中表达水平较低。结果分析总结:肿瘤组织中，淋巴细胞亚群倾向百分比降低、分群不明显，但是此次检测T细胞分群基本明显。

近些年，以干细胞治疗为基础的再生医学逐渐发展起来。间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）作为干细胞的一种，正受到全世界科学家的关注。间充质干细胞（MSC）是一类存在于多种组织（如骨髓、脐带、胎盘、脂肪等），具有自我更新能力和多向分化潜力的成体干细胞。具有易获取、低免疫原性、低致瘤性、良好增殖率等多个特点，因在免疫调节和组织再生上的巨大潜力而受到更多的关注。Duc M Hoang教授2022年发表了一篇综述[1]，对间充质干细胞（MSC）在各系统疾病治疗领域的最新临床研究成果进行了系统性的总结，包括神经系统疾病、肺功能障碍、代谢/内分泌相关疾病、生殖障碍、皮肤烧伤和心血管疾病等。文中提到，在临床试验中，MSC治疗是安全的，不过仍需要进行大规模的临床试验。MSC来源特异性的疾病治疗也是研究者关注的一个方向。截止2023年8月底，我国已有近70种MSC药物获得药物临床试验申请（IND）受理（数据来源于国家药品监督管理局药品评审中心），涉及较多的适应症，包括膝骨关节炎、间质性肺病、移植物抗宿主病及急性呼吸窘迫综合征。图1：MSC来源及分化（来源：DOI:10.1080/17474124.2018.1393332）在间充质干细胞的研究中，细胞的鉴定是很重要的一个环节。自1991年MSC的概念提出后，科学家们使用不同的分离培养方法，用不同的标志物来研究MSC，没有形成统一的鉴定标准，增加了MSC研究的难度。因此，国际细胞治疗协会（ISCT）在2006年定义了MSC的最低标准[2]，是目前被广泛接受的一种鉴定方法， 如Table1所示：接下来小编为您展示下层浪LongCyte™流式细胞仪检测MSC表面标志物的数据。实验方案：图2：MSC表面标志物配色方案染色步骤：Part.1取传代培养的人脐带间充质干细胞（h UCMSCs），胰酶消化收集细胞，加入PBS调整细胞浓度为10 x106 cells/ mL；Part.2取7个流式管，每管分别加100ul细胞悬液，空白管不加抗体，其余的管按照抗体使用说明书分别加入相应荧光抗体CD90-FITC、CD105-PE、CD73-APC、CD45-PE-Cy7、CD34-APC-Cy7、HLA-DR-AF700，混匀，室温避光孵育30 min；Part.3加2mlPBS，1500r，离心5 min，弃上清液，加入300ulPBS重悬细胞；Part.4上流式细胞仪，检测细胞表面标志物的表达。数据展示：图3：MSC表面标志物检测（A：主细胞群；B-G：分别是阳性指标CD73、CD105、CD90和阴性指标HLA-DR、CD34、CD45的百分比）圈门逻辑：01通过FSC-H/SSC-H设门，排除碎片，圈出主细胞;02建立直方图，横坐标分别选择CD73、CD105、CD90、HLA-DR、CD34、CD45；03在仪器软件上选择图层编辑功能，与空白管对应指标的直方图进行叠加，得到每个指标的百分比。总结:1.层浪LongCyte™流式细胞仪软件操作简单，可直接获得峰形叠加图，进行归一化和平滑处理，对流式图进行美化处理；2.有批量操作功能，可批量自动上样，批量分析数据，批量导出流式图，节约整体实验时间。层浪临床型LongCyte™3光14色流式细胞仪可满足多种荧光染料同时使用，欢迎大家使用层浪流式细胞仪，共同探索更多的多色流式检测方案。   图4：层浪生物LongCyte™3光14色流参考文献：（1）Duc M. Hoang , Phuong T. Pham,etal.Stem cell-based therapy for human diseases.Signal Transduct Target Ther.2022 Aug 6;7(1):272.（2）Dominici, M，Le Blanc, K,etal.Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.（3）F Gao 1, S M Chiu,etal.Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects.Cell Death Dis,2016 Jan 21;7(1):e2062.（4）Hajir Ibraheim 1, Chiara Giacomini,etal.Advances in mesenchymal stromal cell therapy in the management of Crohn's disease.Expert Rev Gastroenterol Hepatol,2018 Feb;12(2):141-153.

  关于层浪层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前已推出多款流式产品：2激光8色流式细胞仪于2021年初成功获得NMPA注册证；科研型产品3激光14色流式细胞仪FongCyte™上市一年，仪器性能获得客户的高度认可；临床型产品3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。

绝对计数在流式检测中是我们检测的重要指标之一，定义是单位体积样本（如血液样本）中，含有某种类别细胞的数目。常用的绝对计数的方法有：双平台法和单平台法，单平台法绝对计数主要分为微球法和直接体积法。双平台法操作繁琐和误差大等原因，应用较少，目前市场上绝对计数以单平台法为主。应用领域：淋巴亚群、HIV免疫检测、菌群、藻类等项目的绝对计数。微球法绝对计数：                                                                                                                                                                          微球法是流式细胞术中最早用来开展单平台绝对计数的方法，目前被广泛使用和认可。用绝对计数微球来计算混合复杂的细胞群体中（如血样）目的细胞群的绝对细胞数量的。绝对计数微球是4 - 10 μm的荧光微球，可以被市面上几乎所有的流式常用的激发光激发（具体根据厂家说明书）。层浪开发的ModelFlower流式软件，内置微球法绝对计数算法，无需人工计算可直接得出圈内目的细胞群的绝对计数值。计算公式为：样本准备流程：1. 反吸法取50 μl抗凝全血加入TruCount Tubes内;2. 加入抗体染色，CD45 - PerCp，CD3 - Violet610，CD4 - FITC，根据说明书每个抗体加入5 μl，室温避光孵育20 min（抗体用量和孵育时间根据说明书建议）;3. 直接入加入435 μl红细胞裂红液（总体系500 μl），因抗体量不同有所差异），室温避光孵育15 min（不同厂家可调整孵育时间）；4. 直接上机检测；5. 设置条件，圈Beads门，微球总数，以及样本体积，软件可以自动计算圈出的淋巴亚群的绝对计数值，无需人工计算（单位：个 / μl）。图1. 微球法绝对计数条件设置检测和数据分析结果：图2. 微球法绝对计数结果图示：图A为CD45和SSC圈出淋巴细胞群，右上角为绝对计数微球的信号；绝对计数微球的圈门通常用FITC和PE双参数，如图B所示；从图A中的Lym群，圈CD3的信号，如图C所示；然后再从CD3门中圈出CD3+CD4+的信号，如图D所示；图E展示各个细胞群的颗粒数、百分比（%Parent）和微球法绝对计数（绝对计数-B）的结果。体积法绝对计数：                                                                                                                                                                          体积法绝对计数计算公式为：细胞绝对数量（个/μl）=N（圈内总的细胞数）/V(上样体积）。市面上体积法绝对计数的流式细胞仪有蠕动泵和注射泵两种，其中蠕动泵容易发生形变，可能影响计数的结果，要求时常更换蠕动泵；而注射泵相比蠕动泵，不用考虑形变问题，而且注射泵匀速推动样本上样，上样更稳定，以及对体积的计算更加准确。样本准备流程：1. 反向吸样取50 μl抗凝全血加入流式管内;2. 加入抗体染色，CD45 - PerCp，CD3 - Violet610，CD4 - FITC，根据说明书每个抗体加入5 μl，室温避光孵育20 min（抗体用量和孵育时间根据说明书建议）;3. 直接入加入435 μl红细胞裂红液（总体系500 μl），因抗体量不同有所差异），室温避光孵育15 min（不同厂家可调整孵育时间）；4. 直接上机检测；5. 设置绝对计数条件，设置检测样本稀释倍数（10倍），统计区可直接获得体积法绝对计数的结果。图3. 体积法绝对计数条件设置检测和数据分析结果：图4. 体积法绝对计数结果图示：图A为CD45和SSC圈出淋巴细胞群；从图A中的Lym群，圈CD3的信号，如图B所示；然后再从CD3门中圈出CD3+CD4+的信号，如图C所示；图D展示各个细胞群的颗粒数、百分比（%Parent）和体积法绝对计数（绝对计数-V）的结果。微球法和体积法一致性分析，同时使用体积法和微球法两种方法对淋巴细胞绝对计数的一致性进行分析（n = 10），如图5所示。两种方法检测的相关系数R2为0.9928，接近1，表明两种绝对计数检验方法一致性较好。图5. 体积法和微球法一致性检测总结：层浪流式细胞仪即可以微球法（免计算），又兼容体积法绝对计数。对比微球法和体积法绝对计数结果，Lym、CD3、CD3+CD4+的绝对计数结果基本一致，层浪流式细胞仪支持微球法和体积法对粒子进行绝对计数。层浪体积法绝对计数的优势：结果精确，依赖于精准的柱塞泵吸样模式；节约成本，无需额外购买绝对计数微球；耗材损耗小，无需频繁更换蠕动泵管；针对小颗粒菌群、藻类的检测，有更可靠的准确性。关于层浪生物层浪聚焦流式细胞领域，致力于实现流式技术系统化、自动化、智能化，在临床领域推动流式技术的常规化，在科研领域推进国产流式高端化。目前已推出多款流式产品：2激光8色流式细胞仪MateCyte™于2021年初成功获得NMPA注册证；高端产品科研型3激光14色流式细胞仪FongCyte™上市一年，仪器性能获得客户的高度认可；高端产品临床型3激光14色流式细胞仪LongCyte™26种型号均获CE认证。公司核心团队均在流式技术领域有10余年经验，十年如一日专注流式技术研究，致力于研发生产稳定、可靠、性能优异的产品。层浪未来将陆续推出更多高端流式产品，为中国的流式技术发展尽绵薄之力，做行业中流式技术普及者，做客户信赖的流式伙伴，为中国的临床和科研事业助飞。